Efecto de la concentracin de

sustrato sobre la velocidad de

reaccin.

Integrantes: Felipe Alayana

Francisca Urrutia
Gennesis Reyes
Laboratorio Bioqumica.
Fecha de entrega: 08/11/2017.
 Objetivos.

Calcular las constantes cinticas de la enzima fosfatasa cida: km y Vmax. y

Representar los datos obtenidos en un grfico.

Aprendizaje obtenidos.
Los aprendizajes obtenidos en esta experiencia fueron de cmo vara la velocidad
de la reaccin segn la concentracin de sustrato, esta velocidad de reaccin vara
de acuerdo a la concentracin que tenga el sustrato, si se aumenta la concentracin
de sustrato, obviamente aumentar la actividad enzimtica, cuando la reaccin llega
a su velocidad mxima eso quiere decir que la enzima se satura.
Aprendimos a obtener los valores de Km y Vmax los cuales los utilizamos para
analizar los efectos inhibitorios sobre la actividad enzimtica.
Y por ltimo realizamos grficos con todos los resultados.
 Protocolo.
- Se prepar el espectrofotmetro para posterior toma de datos
- Se rotul y prepar 6 tubos blanco enzima y 6 tubos ensayo completo
- Se prepararon los tubos agregando tampn PH 4,8 a todos los tubos 1ml, 3 nM p-
nitrofenilosfato esta cambia dependiendo de lo que nos toc en este caso son
H2O enzima NaOH solo 1 ml en cada tubo
- Se mezcl en vortex por 5 segundos y se pre-incub por 2 minutos a 45C. la
enzima no se mezcla en este momento pero si se pre incub con los dems tubos.
- Finalizada la pre incubacin se administr 1 ml de enzima a todos los EC y se
mezcl e incub por 10 min
- Inmediatamente finalizados los 10 minutos se colocaron 0,4 ml de NaOH, se
homogeniza en el vortex por 5 segundos.
- Se analizaron con el espectrofotmetro, sacando su absorbancia.
- Se anotaron los datos, se aplic la frmula y todos los resultados se graficaron.
 Resultados experimentales

T CONC. DE 1/ [p-NFF] A Cantidad de Velocidad de 1/Vo

U SUSTRATO (Mm) -1 corregida producto reaccin (umol/min)-1
B [p-NFF](Mm) (EN - BE) p-nitrofenol t = 10min
O (umol/tubo) (umol/min)

1 0,15 2 0,181 C = 0,0464 V = 0,0046 217,3

2 0,3 3,3 0,276 C = 0,0707 V = 0,0070 142,8
3 0,45 2,2 0,323 C = 0,0828 V = 0,0082 121,9
4 0,6 1,6 0,340 C = 0,0871 V = 0,0087 114,9
5 0,75 1,3 0,389 C = 0,0997 V = 0,0099 101,0

6 1,5 0,6 0,422 C = 0,1082 V = 0,0108 92,5

Frmulas:

C1V1 = C2V2
C = A / K, donde K = 3,9
V = Cantidad de producto / Unidad de Tiempo
 Conclusin.
De esta experiencia podemos concluir que el sustrato que se agreg a cada tubo fue el que
determin la velocidad de la reaccin enzimtica en este caso la velocidad aument en
forma ascendente.
Mientras ms cantidad de p-nitrofenilfosfato se le agregue a la muestra mayor ser la
concentracin del mismo respectivamente en cada tubo.