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220 Manual de la IETS

MANUAL DE LA SOCIEDAD INTERNACIONAL DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

SECCION IV

Manipulacin de embriones recolectados para la transferencia comercial

Prefacio

El factor ms importante en la formacin de la Sociedad Internacional de Transferencia de Embriones


(IETS) fue la necesidad de proveer un foro para el intercambio y divulgacin de nuevas ideas en la
transferencia de embriones y tecnologas afines. Como es obvio que la transferencia embrionaria podra
ser de valor en el comercio internacional, fue establecido el Comit de Importacin y Exportacin. Su
propsito es la divulgacin de informacin tcnica y cientfica para permitir a aquellos interesados en las
regulaciones sanitarias para el comercio internacional, delinear las pautas significativas para el
movimiento de embriones.

Uno de los incentivos para la redaccin del Manual IETS fue la necesidad, por parte de la Sociedad y la
Oficina Internacional de Epizootias (OIE), de contar con una fuente actualizada de informacin en la
manipulacin sanitaria de embriones. El objetivo de esta seccin es describir los procedimientos
necesarios para asegurar que la transferencia de embriones no resulte un medio de transmisin de
agentes patgenos, y evitar la identificacin incorrecta de embriones.

En un estudio de 1.682 nacimientos, resultantes del empleo de la transferencia de embriones (KING


K.K., G.E. SEIDEL, Jr., y R.P. ELSDEN; 1985, Transferencia de embriones bovinos: 1. Porcentaje de
aborto y caractersticas de las cras. J.Anim.Sci. 61: 747-757), la incidencia de anomalas congnitas no
difera de aquellas encontradas en la poblacin normal; demostrando que la transferencia embrionaria
es un auxiliar eficaz y sin riesgos para la diseminacin de gentica superior.

Adems, la investigacin indica que la transferencia de embriones bovinos, empleando tcnicas


sanitarias adecuadas de coleccin, manipuleo y transferencia, puede ser un medio seguro y efectivo
para prevenir la propagacin de agentes patgenos, motivo de preocupacin en el movimiento
internacional de semen y ganado. Estas tcnicas se describen en los Captulos I y II. El Captulo III
pone nfasis en uniformar los procedimientos para la identificacin de embriones y archivo de datos, los
cuales son esenciales para el registro de la descendencia y asegurar que la certificacin sanitaria se
corresponda adecuadamente con los embriones. Si bien se suministra una informacin concisa, se
aportan suficientes detalles a fin de permitir al lector llevar a cabo los procedimientos descriptos. Se
presenta una lista de referencias bibliogrficas al final de cada captulo, pero si se requiere informacin
adicional puede ser obtenida de la IETS o por consulta directa con los autores.

Se agradece la colaboracin del Dr. L. Blajan, Director General del OIE y de los miembros del Cdigo
Zoosanitario y al Comit de Normas de la OIE.

D.A. Stringfellow
Contributing Editors

R.A. CARMICHAEL
Maplehurst Ova Transplants
Rt. 1, Box 124
Keota, IA 52248 USA

W.C.D. HARE
Sanidad de la TE 221

Animal Diseases Research Institute


P.O. Box 11300, Station H
Nepean, Ontario, Canad K2H 8P9

R.J. MAPLETOFT
Western College of Veterinary Medicine
University of Saskatchewan
Canad S7N 0W0

C.A. MEBUS
USDA, ARS, Plum Island Animal Disease Center
Greenport, NY 11944 USA

R.E. NELSON
Holstein Association
1 South Main
Brattleboro, VT 05 301 USA

S.M. SEIDEL
International Embryo Transfer Society
3101 Arrowhead Road
La Porte, CO 80535 USA

E.L. SINGH
Animal Diseases Research Institute
P.O. Box 11300, Station H
Nepean, Ontario, Canad K2H 8P9

D.A. STRINGFELLOW
Auburn University College of Veterinary Medicine
Auburn University, AL26849 USA

M.P. THIEBIER
Laboratoire pour le Controle des Reproducteurs
13 Rue Jout
94703 Maisons-Alfort Cedex
France

Introduccin

La necesidad de mejorar y variar las lneas de sangre en la poblacin de ganado ha sido resuelta
tradicionalmente por medio de la importacin de animales nacidos y ms recientemente a travs del uso
de semen. La habilidad de colectar embriones antes de la implantacin, conservarlos congelados
durante extensos perodos, luego descongelarlos y transferirlos al tracto reproductivo de madres
receptoras, provee una nueva alternativa a los medios convencionales de mejora gentica. La
investigacin hoy en da ha demostrado que este mtodo de movimiento de material gentico puede ser
un procedimiento valioso y seguro para la prevencin de enfermedades infecciosas dentro de las
poblaciones de ganado carentes de infecciones previas. Adems de estos descubrimientos especficos,
la determinacin de factores epidemiolgicos bsicos relacionados con el proceso de transferencia de
embriones conduce a la conclusin que el movimiento de embriones es un procedimiento ms seguro
que el de animales vivos.
El embrin constituye un blanco poco probable para muchos agentes patgenos debido a su resistencia
primaria proporcionada por la zona pelcida y posiblemente el trofectodermo y factores de resistencia

Biotecnologa de la Reproduccin
222 Manual de la IETS

secundarios tales como estadios tempranos de desarrollo, tamao pequeo, y movilidad limitada que
sirven para reducir la exposicin potencial del embrin. El hecho de que muchas bacterias y virus
patgenos han demostrado ser demasiado grandes para penetrar la zona pelcida y que algunos no
sobreviven bien en los medios de cultivo embrionarios, reduce la posibilidad de transmisin de un
agente infeccioso va transferencia embrionaria.

Los factores ambientales implicados en los procedimientos de transferencia embrionaria, son tal vez los
ms importantes de recordar porque estn sujetos a inspeccin y control. De este modo, hay muchos
ensayos especficos y posibilidades tecnolgicas a fin de eliminar la propogacin de la enfermedad. El
medio ambiente de la donante limita la exposicin a agentes infecciosos y proporciona la posibilidad de
realizar pruebas diagnsticas antes, durante y despus de la coleccin de embriones. Los resultados de
estos tests pueden ser evaluados antes que los embriones sean efectivamente transportados y
transferidos a las receptoras.

Factores de dilucin, lavado mecnico, agentes antimicrobianos y tratamientos con enzimas pueden ser
aplicados al embrin en su ambiente in vitro. Adems, el embrin puede ser examinado en su totalidad
bajo el microscopio y la esterilidad del medio puede ser controlada.

El animal receptor prove la defensa final desde que representa un nuevo alojamiento para el embrin
transferido, y puede servir como centinela ante la presencia de cualquier agente infeccioso por el cual
es testado.

Condensado de D.A. STRINGFELLOW "El potencial de la transferencia de embriones bovinos para el


control de enfermedades infecciosas", Mesa Redonda sobre problemas sanitarios relacionados con
transferencia de embriones. Pars, 9 Dic. 1985, 859-866.

Captulo I

Transferencia de embriones en el ganado vacuno:

Procedimientos sanitarios generales1

Introduccin

En este documento no se intenta dictar los procedimientos tcnicos utilizados en la transferencia de


embriones bovinos. Los procedimientos varan ampliamente con la raza del donante, estaciones del
ao, localidades geogrficas, experiencia del staff, y el tipo de organizacin, por ej.: clnica
especializada en transferencia de embriones versus en el campo o granja de origen de la donante (1, 2,
3, 7, 9, 14). De cualquier modo, el propsito de esta seccin es destacar reas de inters general para
la mayora de las operaciones de transferencia de embriones. Las recomendaciones pueden parecer
obvias y demasiado simplificadas especialmente para el profesional experimentado. De todas formas,
estas revisiones sobre las recomendaciones mnimas son importantes para los nuevos profesionales y
para establecer alguna uniformidad en toda la industria.

1
Informacin condensada en parte del programa de certificacin de la Asociacin Amrica de Transferencia de
Embriones (Association Bulding, 9th. Minesota, Hastings, NE 68901).
Sanidad de la TE 223

El xito en la transferencia de embriones bovinos depende de la propia habilidad para desarrollar con
xito una serie de pasos tcnicos y en minimizar la influencia de factores que tienen un efecto negativo
en los resultados finales, esto es, el nacimiento de descendencia viva (14).

El proceso de la transferencia de embriones puede ser dividido en una serie de pasos, los cuales
dependen de si el trabajo es realizado en una granja o en un centro de transferencia. La principal
ventaja de un programa en un centro es que todos los aspectos del procedimiento estn bajo el control
directo del staff tcnico de la compaa. Esto es importante cuando los embriones son obtenidos de
donantes muy jvenes, donantes seniles, o donantes con problemas reproductivos no genticos.

La empresa que opera con programas en clnicas tiene la responsabilidad de otorgar a sus clientes los
medios, control y experiencia necesarios para aumentar la posibilidad de xito de las donantes con
problemas. Debido a los servicios extra que se otorgan, los programas en clnicas, comnmente,
comprenden mayores honorarios que los realizados en establecimientos (3). Estos ltimos tienen las
siguientes ventajas:
1) compromete al propietario ms directamente,
2) permite que las vacas valiosas permanezcan en la granja para promocin y ventas, lo cual es de
particular importancia en el caso de vacas lecheras con respecto al mantenimiento ininterrumpido de los
registros de perodos de lactancia,
3) abarata directamente los gastos va uso de recursos del mismo establecimiento.

Cuando se establecen clnicas o centros de transferencia de embriones, los programas de pruebas


sanitarias y vacunaciones son absolutamente necesarios. Un programa debe tener en cuenta las
enfermedades frecuentes de la localidad. El ganado entrante debe ser aislado del resto del rodeo a su
llegada. Los animales deben ser examinados por va rectal para determinar posibles preeces y
sanidad reproductiva, aun si est garantizado. Un veterinario matriculado debe tomar muestras de
sangre para pruebas serolgicas de determinadas enfermedades infecciosas. El resultado de estos
tests debe ser evaluado de acuerdo con la poltica de la empresa y la establecida por las autoridades
nacionales de salud animal. Adems debern instituirse programas de vacunacin.

El personal implicado en la transferencia de embriones deber estar bien informado y conciente de


llevar a cabo los procedimientos para prevenir la transmisin de enfermedades de un animal a otro o de
un establecimiento ganadero a otro. Todo el equipo, requerido para el manejo de los embriones, debe
esterilizarse y nunca ser utilizado para ms de un animal sin la apropiada re-esterilizacin.

Los medios a utilizar deben ser los adecuados para manejar y mantener a los animales con un mnimo
de esfuerzo y riesgo de lesiones. Estos debern contar al menos con un cepo y manga cubiertos, como
as tambin con varios corrales.

El plan nutricional de donantes y recipientes a utilizar es de extremada importancia para las condiciones
fisiolgicas de todo el ganado, y para el xito del programa de transferencia de embriones. El ganado
debe ser alimentado de acuerdo con los requerimientos de nutricin recomendados por las normas
nacionales.

Cuando la transferencia de embriones se efecta en el establecimiento, el cliente deber asegurarse de


la especial importancia de un buen programa sanitario para el xito del tratamiento de superovulacin,
fecundacin, viabilidad y condicin de los embriones. Tambin de la tasa de preez y nacimiento que
siguen a la transferencia. Se debe insistir en que el cliente establezca con su mdico veterinario local un
buen programa sanitario antes de comenzar un programa de transferencia de los embriones (7).

Seleccin de la donante y superovulacin

Biotecnologa de la Reproduccin
224 Manual de la IETS

A la llegada de una donante a un centro de transferencia o antes de ser incorporada a un programa


transferencia de embriones, el profesional experimentado deber efectuar un amplio examen sanitario y
reproductivo del animal (8). Se debern aplicar las vacunas apropiadas antes de la superovulacin.
Todos los tests sanitarios necesarios para la exportacin de embriones debern realizarse antes de su
recuperacin.

Las donantes debern tener ciclos normales, y verificarse la presencia de un cuerpo lteo normal por
medio de palpacin rectal antes de iniciarse el tratamiento de superovulacin. Los procedimientos de
transferencia no eliminan los problemas de reproduccin, de este modo problemas tales como infeccin
de tero, quistes ovricos, etc., deben ser tratados antes de intentar la recuperacin de embriones.

Cuando la recoleccin de los embriones se efecta en el establecimiento ganadero, es importante que


todas las hormonas a emplear (gonadotrofinas, prostaglandinas, etc.) sean distribuidas de acuerdo con
las normas nacionales. Debern ser controladas las fechas de vencimiento y todas las drogas deben
ser administradas de acuerdo con los procedimientos establecidos. Deben suministrarse un nmero
adecuado de agujas esterilizadas y jeringas. Finalmente se deber suministrar al cliente instrucciones
claras, concisas y fciles de comprender por escrito a fin de poder ser comprendidos sin problemas por
cualquier persona implicada en el programa.

El profesional deber tener cuidado de no recetar una sobredosis de gonadotrofina.


La sobreestimulacin a menudo da por resultado el fracaso en recuperar buena
calidad de embriones y puede retardar el retorno al ciclo normal del estro del
donante.

El profesional deber asumir la responsabilidad de determinar el status nutricional de la donante, la


sincronizacin de las recipientes, los mtodos de deteccin del estro y los planes de servicios de las
donantes (4, 8, 16, 17). El semen utilizado en el programa de transferencia de embriones deber ser
almacenado por separado y evaluado por un laboratorio de semen de buena reputacin antes de
proceder a su uso. Las instrucciones por escrito sobre los servicios, considerando el horario, nmero de
dosis y frecuencia, debern ser incluidas conjuntamente con las instrucciones de superovulacin.

Es esencial inseminar a las vacas donantes (cuando fueron sometidas a un tratamiento superovulatorio)
con adecuadas dosis de semen de alta calidad, a fin de asegurar altos porcentajes de fecundacin. El
profesional no deber confiarse en la experiencia del dueo para la inseminacin artificial,
especialmente de vacas superovuladas.

Recoleccin de embriones

La sujecin de la donante no deber ser estresante o abusiva. Ser necesario un control adecuado para
consolidar la seguridad del staff y minimizar el movimiento excesivo durante la recoleccin de
embriones. Los sedantes o tranquilizantes debern ser suministrados prudentemente y de acuerdo con
los procedimientos permitidos.

La pulcritud ser obligatoria en todas las fases de la transferencia. Ms an, se deber usar el sentido
comn en este aspecto. Por ejemplo, no tiene sentido el pasar un catter esterilizado a travs de las
heces al tero.

Sea prudente con los desinfectantes. La mayora de ellos son mucho ms nocivos
para los embriones, que los microorganismos que eliminan!.
Sanidad de la TE 225

La vulva y la cola debern ser frotadas con un antisptico, y luego enjuagadas adecuadamente. La
anestesia epidural deber administrarse cuidadosamente, con particular atencin de la zona de
aplicacin, anestsico a utilizar, concentracin y dosis del mismo.

Todo equipo de recoleccin de embriones, que est en contacto con la donante o con sus secreciones o
excreciones, deber ser desinfectado o de lo contrario utilizar un nuevo equipo para cada animal. En
particular, los tubos, catteres, placas y envases de recoleccin, etc., que tienen contacto directo con el
medio uterino, no debern usarse para ms de un donante sin ser esterilizacin previa (Ver Cap. III).

Deber tenerse en cuenta la limpieza escrupulosa y la utilizacin de guantes plsticos descartables por
parte del recolector y para cada donante, a fin de asegurar que no se transmita el material infeccioso a
otra donante.

De ms est decir, que se deber ser precavido durante el proceso de recoleccin para no daar los
rganos genitales de la donante. El exceso de inflado o llenado del baln del catter de lavaje puede
llegar a destruir el endometrio o desgarrar la pared del tero (7, 8). Asimismo, la excesiva manipulacin
del tero y/o la traccin sobre el catter puede causar hemorragia uterina (3).

Deber registrarse el volumen del fluido vertido y el recobrado. El dejar de recobrar la mayora del fluido
indicara aplicar una tcnica incompleta y podra causar el fracaso de la recuperacin de embriones. Si
se utiliza la filtracin directa de fluidos de lavaje para la extraccin de embriones, los filtros debern ser
manejados con gran precaucin, siguiendo las instrucciones especficas provistas por el fabricante del
filtro (9).

Aislamiento de embriones y evaluacin

Es esencial, antes de la recoleccin de los embriones, una adecuada preparacin del rea de trabajo
tanto en el caso de un laboratorio fijo, de uno mvil o el de un establecimiento ganadero. Con los
programas en la estacin de transferencia, el laboratorio debe estar diseado y mantenido
adecuadamente para disponer del control sobre la temperatura, saneamiento, circulacin del aire,
iluminacin y circulacin del personal.

En el mbito del establecimiento agropecuario es importante el sentido comn para la seleccin del
local ms adecuado para la manipulacin de los embriones. Ser esencial evitar las reas con polvo o
humo tales como salones de comidas, establos o graneros. Los embriones frescos debern ser
protegidos de las temperaturas extremas. La temperatura ptima para los embriones mantenidos in vitro
entre la recuperacin y la transferencia es de 20 a 30C.

El lavado o limpieza de todos los plsticos y cristalera que tienen contacto con los embriones tambin
es de vital importancia para el xito del programa (Ver Captulo II). Toda la cristalera deber ser
esterilizada. Adems se debe considerar la posible presencia en el material de vidrio de sustancias
inorgnicas peligrosas y txicas para los embriones, tales como los metales pesados (plomo, hierro,
mercurio, etc.). Si hubiera problemas o dudas referentes a los metales pesados que ingresan al
laboratorio por medio del agua o del aire (polvo), debern fomentarse y aumentarse los procedimientos
de lavado destinados a eliminar la contaminacin.

La contaminacin del aire con olores a establo, a desinfectantes, a spray, cloro, cidos, iodo y humo de
cigarrillo (para nombrar unos pocos), puede ser peligroso para los embriones y producir pelculas que
se acumulan sobre el vidrio y permanecen en las superficies. No deber permitirse fumar o circular
excesivamente en el laboratorio de embriones o rea de trabajo. Todos los elementos para manipular
los embriones: placas, jeringas, pipetas, filtros, etc. debern estar esterilizados y apropiadamente

Biotecnologa de la Reproduccin
226 Manual de la IETS

rotulados con la identificacin de la donante antes de su utilizacin. Cada donante debe tener su propio
equipo, a fin de evitar que se mezclen inadvertidamente los embriones de distintas donantes. Todos los
medios a utilizar debern filtrarse con membranas de 0,22 m de de poro, inmediata-mente antes de
su uso (9). Todos los embriones deben ser lavados minuciosamente (Ver Captulo II) antes de la
evaluacin y clasificacin para determinar su evolucin y calidad de acuerdo con los procedimientos
standard (Ver Captulo III y 6.3).

Transferencia de embriones

El primero, y tal vez el ms importante paso en la transferencia de los embriones es la seleccin de la


receptora de alta calidad. Las receptoras deben estar ciclando y ser sanas general- y reproductivamente
(3, 7, 8, 18). Cuando se utilizan vaquillonas como receptoras, deben estar bien desarrolladas (por
ejemplo: 400 kg para una vaquillona Holstein), y ganando peso. Tanto el ganado vacuno para
produccin de carne como para produccin de leche pueden ser usados exitosamente si estn sanos,
ciclando y con un positivo balance energtico. Los problemas de reproduccin y de escasez de leche,
en el ganado bovino para produccin de carne, generalmente producen receptoras de baja calidad.

El momento del estro de las receptoras debe ser sincronizado con el de la donante (18). La mejor
receptora es aquella que est en celo el mismo da que la donante, o no ms de 24 h antes o despus
que la donante. Los porcentajes de preez se reducen si la asincrona es mayor. Los programas en los
establecimientos, el celo de las receptoras es habitualmente sincronizado con el uso de prostaglandinas
o progestgenos (7). Una rigurosa sincronizacin con cuidadosas y frecuentes observaciones del celo
sern decisivas para el xito del programa de transferencia.

Las receptoras debern ser ubicadas de forma que puedan ser manejadas fcil- y tranquilamente el da
de la transferencia. El stress o tensin excesiva en la manipulacin, inmediatamente antes de la
transferencia, ser perjudicial para los porcentajes de preez. Actualmente, la transferencia de un
embrin a la receptora puede hacerse quirrgica- o no quirrgicamente. Hasta el momento las
transferencias quirrgicas han resultado en porcentajes de preez ligeramente ms altos, pero
demandan mucho ms tiempo (3, 7). El uso de la transferencia no quirrgica ha aumentado en un
esfuerzo para reducir el costo y hacer ms adaptable la transferencia a las condiciones de granja.
Ambas tcnicas de transferencia ofrecen ventajas.

a) Transferencia quirrgica: Una vez que las receptoras han sido palpadas para determinar la
presencia de un cuerpo lteo y la normalidad del aparato reproductor, se aplicar un sedante inyectable
para que se mantengan quietas. Las receptoras debern ser fijadas durante todo el tiempo que demore
el procedimiento, especialmente en el caso particular de la transferencia quirrgica. Las transferencias
por medio de ciruga son mucho menos exitosas cuando la receptora se mueve en forma excesiva. Ser
mucho ms fcil exteriorizar el aparato reproductor si las receptoras no reciben agua ni alimentos 24 h
antes de la transferencia. El rea quirrgica, generalmente la fosa paralumbar, es rasurada y preparada
para la ciruga del mismo lado del cuerpo lteo. La fosa paralumbar es desensibilizada con anestesia
local y se proceder a hacer una incisin de 15 a 20 cm sobre la piel y fascia. Generalmente despus
que los msculos son separados por divulsin, se aproxima el tero hacia el lugar donde se hizo la
incisin y el embrin se transfiere al interior del tero por medio de una pequea puncin en su pared.
La incisin del flanco ser suturada para completar este procedimiento (3, 7). Cuando se efecta bajo
condiciones propicias la va quirrgica requiere aproximadamente 15 minutos para la transferencia. Los
receptoras debern mantenerse tranquilas y sin ser perturbadas por otro ganado, durante varias horas o
durante la noche. Las suturas debern sacarse 10 y 14 das despus.

b) Transferencia no quirrgica: Este tipo de transferencia no deber intentarse comercialmente, si el


tcnico de transferencia no es experto en pasar el catter a travs del crvix (cuello del tero) y
Sanidad de la TE 227

manipular el tero, ya que los porcentajes de preez que siguen a este tipo de transferencia varan
considerablemente con la experiencia y habilidad del tcnico.

Un novato deber practicar hasta que alcance un promedio de preez de al


menos 40% antes de ofrecer un servicio comercial.

Las receptoras debern manejarse con cuidado y debern ser fijadas en un cepo para asegurar una
transferencia suave y prevenir una lesin de tero durante los movimientos sbitos. Ser importante la
anestesia epidural para obtener un resultado uniforme y, a diferencia de la transferencia quirrgica, la
manipulacin ser ms fcil si las receptoras no estn en ayunas. Si las instalaciones son adecuadas al
temperamento de las receptoras, no ser necesario el uso de sedantes. Una vez realizada la palpacin
rectal de la receptora, a fin de determinar el lado de la ovulacin, se deber la limpiar y desinfectar el
rea perineal (vulva y entrada de la vagina) para evitar la contaminacin tanto como sea posible.

El equipo de transferencia deber estar limpio y estril y adems ser manejado en forma estril de
manera de reducir la posibilidad de contaminacin. Antes de introducir el catter de transferencia en la
vagina, el tcnico verificar que las burbujas de aire que mantienen ubicado el embrin en la pajuela,
estn en su lugar para asegurar la descarga del embrin cuando se desplace el mbolo. El aparato de
transferencia deber ser suavemente insertado tan profundamente como sea posible en el cuerno
uterino ipsilateral al cuerpo lteo. Sin embargo, si se encuentra resistencia o dificultad en algn
momento, generalmente se obtienen mejores resultados si el embrin es depositado sin mayores
intentos de avanzar ms profundamente en el cuerno uterino. El embrin deber ser depositado
mientras el aparato es suavemente retirado. Con buenos medios de manipulacin y ayuda adecuada,
un equipo experimentado puede completar una transferencia cada 5 minutos por varias horas, si fuera
necesario (18).

Congelacin y descongelacin

Los procedimientos de congelamiento debern llevarse a cabo en un lugar limpio, bajo temperaturas
controladas y libre de polvo. Existen muchos centros de transferencia de embriones que cuentan con un
laboratorio especial nicamente destinado para el congelamiento de los embriones, sto es alentador.
Cuando se trata de un congelamiento realizado en granjas, y se efecta en un laboratorio mvil o en
instalaciones suministradas por el granjero, dichas condiciones debern ser duplicadas tanto como sea
posible. Si los embriones son destinados a la venta o la exportacin, deber advertirse al cliente acerca
de los tests sanitarios adecuados y el tiempo en que debern ser efectuados. Antes del congelamiento,
los embriones debern ser lavados (Ver Captulo II).

Un nmero de mtodos podrn utilizarse para congelar embriones. Estos estn bien descriptos en la
literatura (5, 10, 11, 15). Sin necesidad de considerar qu mtodo se utiliza, todo el equipo en contacto
con los embriones deber ser esterilizado. El mismo equipo nunca deber usarse para ms de un
donante.

Los embriones destinados a la congelacin pueden envasarse en forma individual o en grupos. El


envase del embrin congelado deber ser identificado de acuerdo con el procedimiento aprobado por el
IETS (Ver Captulo III). El Certificado de congelacin de embriones debe ser completado siempre que
son congelados. Si se dejara de hacer sto ltimo, podra llegar a inhabilitarse la descendencia para su
registro. La informacin concerniente a los formularios de registro podrn obtenerse en las respectivas
oficinas de las asociaciones de criadores.

Las condiciones de laboratorio para la descongelacin son idnticas a aquellas para la congelacin de
los embriones. El rea de descongelacin deber ser limpia, estar libre de polvo y con una temperatura

Biotecnologa de la Reproduccin
228 Manual de la IETS

constante de 20 a 30C. El mtodo de descongelacin deber ser adecuado al mtodo de


congelamiento; las recomendaciones explcitas en el Certificado de Congelacin de Embriones
constituye la mejor gua. Los embriones debern transferirse tan rpido como sea posible luego de su
descongelacin.

Referencias

1. ADAMS, C.E. (ed). 1982. Mammalian Egg Transfer. C.R.C. Press Inc., Boca Raton, FL USA.
2. BETTERIDGE, K.I. (ed). 1977. Embryo Transfer in Farm Animals. Monograph 16, Agriculture Canada, Ottawa,
Ont., Canad.
3. ELSDEN, R.P. 1980. Bovine embryo transfer. Proc. Soc. Therio., Omaha, NE USA. pp 101-133.
4. FOOTE, R.H. and ONUMA, H. 1970. Superovulation, ovum collection, culture and transfer: A Review. J. Dairy
Sci. 53: 1681-1692.
5. LEIBO, S.P. 1983. Field trial of one-step frozen bovine embryos transferred non-surgically. Theriogenology 19:
139.
6. LINDNER, G.M. and WRIGHT, R.W. Jr. 1983. Bovine embryo morphology and evaluation. Theriogenology 20:
407-416.
7. MAPLETOFT, R.J. 1980. Embryo transfer for the practitioner. Proc. 13th Ann. Meet. Am. Assoc. Bovine Pract.
Toronto, Canad, pp. 154-162.
8. MAPLETOFT, R.J. 1982. Superovulation and recovery of ova from the bovine. Proc. Owners and Managers
Workshop - VII Ann. Meet. IETS, Denver, CO USA, pp. 37-47.
9. MAPLETOFT, R.J. 1985. Embryo transfer in the cow: General procedures. Proc. Roundtable Meet. on Sanitary
Problems Related to Embryo Transfer. Paris, 9 Dec. 1985, in press.
10. MAURER, R.R. 1978. Freezing mammalian embryos: A Review of the techniques. Theriogenology 9: 45-68.
11. SCHNEIDER, U. and MAZUR, P. 1984. Osmotic consequences of cryoprot ectan permeability and its
relationship to the survival of frozen-thawed embryos. Theriogenology 21: 68-79.
12. SHEA, B.F. 1981. Evaluating the bovine embryo. Theriogenoloy 15: 31-42.
13. SEIDEL, G.E.Jr. and SEIDEL, S.M. 1981. The embryo transfer industry. En: New Technologies in Animal
Breeding. B.G. Brackett, G.E. Seidel Jr., and S.M. Seidel (eds), Academic Press, New York, pp. 41-80.
14. SEIDEL, G.E.Jr. 1981. Superovulation and embryo transfer in cattle. Science 211: 351-358.
15. SEIDEL, G.E.Jr., ELSDEN, R.R., TAKEDA, T. and FARRAND, G.D. 1983. Field trials with cryopreserved
bovine embryos. En: Fertilization of the Human Egg in Vitro. H.M. Beier and H.R. Lindner (eds), Springer-
Verlag, Berlin, pp. 343-352.
16. UMBAUGH, R.E. 1949. Superovulation and ovum transfer in cattle. Am. J. Vet. Res. 10: 295-305.
17. WILLETT, E.L., BLACK, W.G., CASIDA, L.E., STONE, W.H. and BUCKNER, P.J. 1951. Successful
transplantation of a fertilized bovine ovum. Science 113: 247.
18. WRIGHT, J.M. 1981. Non-surgical embryo transfer in cattle. Theriogenology 15: 43-56.
Sanidad de la TE 229

CAPITULO II

Recomendaciones para la manipulacin


Sanitaria de embriones

Introduccin

El presente captulo trata sobre la forma en que los embriones deben manipularse entre la coleccin y la
transferencia, a fin de prevenir la posibilidad de transmisin de agentes patgenos. Durante estos
procedimientos es importante la utilizacin de tcnicas aspticas como el empleo de material y
soluciones estriles. Como una medida de seguridad adicional, podrn usarse antibiticos en las
soluciones que entren en contacto con el embrin.

La membrana pelcida es una barrera muy efectiva para los microorganismos. Las investigaciones han
demostrado que, en la mayora de las enfermedades de los bovinos, el lavado completo de los
embriones incluidos en la zona pelcida intacta eliminar completamente todo rastro de agentes
patgenos (1, 5). En el caso de ciertos experimentos con unas pocas enfermedades virsicas
especficas, en las que los embriones han sido expuestos a muy altos niveles virsicos, ha existido la
tendencia a adherirse a la zona pelcida tan firmemente como para hacer infeccioso el procedimiento
de lavado. El tratamiento con tripsina podra ser necesario para tratar con este tipo de agentes
especficos.

Los embriones debern examinarse utilizando un microscopio, para asegurar que la zona pelcida est
intacta. Esta evaluacin deber tener lugar despus del lavado y antes de la criopreservacin de
embriones. El congelamiento podra provocar lesiones en la zona pelcida, por lo tanto, deber ser
eliminado cualquier agente patgeno antes de la criopreservacin. Una vez que la zona pelcida se ha
roto y un virus ha ingresado a las clulas del embrin, el lavado ulterior no sera de ayuda alguna.

Preparacin del medio

Todo medio, solucin, suero, enzima y agente crioprotector que entre en contacto con el embrin
deber estar libre de contaminantes y microorganismos vivos. A tal fin podrn adquirirse preparaciones
estriles ya elaboradas o esterilizadas en laboratorio.

Garantizar la esterilidad del componente proteico del medio puede presentar un problema. El uso tanto
de albmina de suero bovino (BSA, bovin serum albumin), fraccin V o suero con radiacin gamma
sern suficientes para asegurar la esterilidad, de todas formas ser necesario realizar una tarea
adicional antes de que pueda ser usado confiadamente.

Hasta que un producto universalmente aceptado est disponible, el componente srico utilizado en la
recoleccin, cultivo y medios de lavado de embriones destinados a la exportacin, deber ser aprobado
por el pas importador. La mayora de las soluciones biolgicas activas deben ser esterilizadas por
filtracin a travs de membranas. Si se filtraran grandes cantidades, es a menudo ventajoso prefiltrar la
solucin a travs de una membrana con poros ms grandes para evitar que se atasque el filtro de
esterilizacin de 0,22 m de poro. Se deber usar preferiblemente presin positiva ms que negativa a
fin de prevenir la formacin de espuma de la mayora de las soluciones que contienen protenas y un
aumento excesivo del pH de las soluciones que bufferadas con bicarbonato.

Soluciones salinas bsicas pueden ser esterilizadas por medio de calor hmedo (esterilizacin al
vapor). Debern esterilizarse a una temperatura de 121C y a una presin de 104 kilopascal, por lo
menos 30 minutos (16). Las tapas de rosca en todas las botellas debern dejarse flojas durante la
esterilizacin al vapor, y volmenes mayores de 500 ml no debern ser repartidos en cada botella a

Biotecnologa de la Reproduccin
230 Manual de la IETS

menos que se haya determinado que los volmenes ms grandes sean esterilizados bajo las
condiciones empleadas.

Esterilizacin del equipo

Todos los materiales no descartables que requieran esterilizacin debern, en primer lugar, ser lavados
con un detergente no txico, enjuagados muy bien con agua destilada, secados y posteriormente
envueltos para su esterilizacin. Se dispone de un nmero de mtodos para la esterilizacin, y la
seleccin de stos depende generalmente de la naturaleza del material que ser esterilizado:

1) Calor seco: Los materiales que no son daados por altas temperaturas podrn esterilizarse
dejndolos durante 2 horas a 160C (6). Podrn sealarse con una pintura sensible al calor a fin de que
indique la temperatura deseada.
2) Calor hmedo: (Esterilizacin al vapor). Deber mantenerse una temperatura de 121C y una
presin de 104 kilopascal por lo menos durante 30 minutos (6). A tal efecto pueden conseguirse
indicadores que se colocan en/sobre el envase y que cambian de color cuando la esterilizacin se lleva
a cabo adecuadamente. Los materiales a esterilizar deben ser envueltos en gasa o en otro material que
permita que el vapor penetre y que ms tarde permanezca impermeable a los microorganismos.
3) Vapor de xido de etileno: (Esterilizacin con gas). Para asegurar la esterilizacin, los elementos
debern exponerse a un mnimo de 500 mg de xido de etileno por 1000 cm3 (6). Los elementos a ser
esterilizados deben limpiarse, secarse y ser desmontados a fin de permitir el fcil acceso del gas. El
xido de etileno penetra la mayora de los materiales porosos y se disuelve en algunas sustancias
plsticas y de goma. Despus de la exposicin al gas es esencial la adecuada ventilacin2 de todos los
materiales, para este proceso es de utilidad un aireador calefaccionado. Debe hacerse notar que el
material utilizado para embalar los elementos a ser esterilizados con gas puede llegar a afectar tanto la
absorcin como la eliminacin del gas. nicamente aquellos materiales envueltos, que estn siempre
permeables al xido de etileno podrn ser utilizados.
4) Antispticos: Como por ejemplo el alcohol (70-90%) que es utilizado a menudo para desinfectar las
superficies de los materiales. Ser necesario ventilarlos un tiempo suficiente para permitir la
evaporacin del alcohol.

Procedimientos de lavado de los embriones

Ha sido demostrado que el lavado es efectivo para eliminar altos niveles de contaminacin de la
mayora de los agentes patgenos (7) de los embriones. El procedimiento de lavado recomendado
comprende el trasporte de embriones en grupos de 10 o menos, a travs de 10 gotas con medio. Se
utilizar una micropipeta estril y nueva para a cada lavado, que deber constituir una dilucin 1:100
con respecto al lavado previo. Los embriones debern ser agitados ligeramente en cada lavado y tan
pronto como se haya efectuado esto, se pasar al lavado siguiente. nicamente los embriones del
mismo donante debern lavarse juntos.

Tratamiento con Tripsina

En pruebas experimentales han sido expuestos embriones a elevadas concentraciones de varios virus y
el lavado ha sido efectivo resultando embriones libres de agentes patgenos (1, 4). De todas formas, no
sucede as en el caso en que los embriones son expuestos a otros virus: rinotraquetis infecciosa bovina
(8) y estomatitis vesicular (9). Los embriones expuestos a estos 2 virus requieren de un tratamiento con
enzimas (tripsina) para asegurar que estn libres de infeccin (SINGH y THOMAS, no publicado).

2
Algunos materiales pueden requerir perodos de 30-40 dias (HAGELE y MAPLETOFT, no publicado)
Sanidad de la TE 231

El siguiente mtodo es recomendado para el lavado combinado y el tratamiento con tripsina de


embriones: los embriones son lavados 5 veces en solucin salina, buffer fosfatada (PBS), conteniendo
antibiticos y 0,4% de BSA-V, y despus a travs de 2 gotas que contienen tripsina, pH. 7,6-7,8, por un
tiempo total en la tripsina de 60-90 segundos. La tripsina estril3 en una solucin salina balanceada de
Hanks sin Ca++ y Mg++, se utiliza a una concentracin de 0,25%. Luego del tratamiento con tripsina,
los embriones son sometidos a 5 lavados en una solucin PBS conteniendo antibiticos y 2% de suero.
Es importante reemplazar BSA fraccin V por suero en el lavado, despus del tratamiento con tripsina a
fin de asegurar la inactivacin de la tripsina.

Evaluacin de los embriones para el control de enfermedades

Todos los embriones debern tener una zona pelcida intacta y libre de material adherente. Para
asegurar esto, cada embrin deber examinarse en toda su superficie y a no menos de una ampliacin
de 50x. Los embriones se hacen rodar suavemente en el fondo de la placa de cultivo, de manera que
toda la superficie de la zona pelcida pueda examinarse. Esta evaluacin tendr lugar despus del
lavado y antes de la criopreservacin del embrin.

Examen de las muestras

En este momento la presencia de microorganismos no podr ser examinada directamente en el embrin


antes de la transferencia a la receptora ya que los procedimientos del test destruiran a los embriones.
El estado sanitario de los embriones deber ser deducido del estado del estado sanitario de la donante
y del progenitor, o por anlisis de otras muestras. Las siguientes muestras han sido sugeridas como
indicadoras de la sanidad del embrin: el lquido de recoleccin, el medio de lavado de los embriones, y
todos los huevos sin fertilizar y embriones no transferibles de la misma donante. Si dichas muestras
deben destinarse a un examen, debern prepararse de acuerdo con las siguientes condiciones:

1. Fluidos de recoleccin:

a. Mtodo por gravitacin de recuperacin de embriones: El lquido de recoleccin deber colocarse en


un recipiente esterilizado, como por ejemplo una probeta, la cual deber sedimentar (como mnimo 30
minutos). El material presente en la solucin ser entonces decantado. Despus del aislamiento de los
embriones, el lquido del fondo (100 ml) junto con cualquier desecho acumulado, ser colocado en un
recipiente estril y conservado.

b. Mtodo de filtrado para la recuperacin de embriones. Los medios de recoleccin debern pasarse a
travs de un filtro para embriones a un cilindro estril. El material de la solucin deber decantarse
durante 30 minutos como mnimo. El filtro deber lavarse bien con un nuevo medio para la recuperacin
de embriones. Luego que stos han sido localizados y transferidos al primer envase de lavado, todos
los medios que fueron utilizados para lavar el filtro debern conservarse en un recipiente estril, al cual
debern agregarse 100 ml del lquido de recoleccin (conjuntamente con cualquier resto de sedimentos
extrados del fondo del cilindro). Esos fluidos deben ser conservados.

2. Lavados:

3
Tripsina (1:250) tiene una actividad tal que 1g puede hidrolizar 250g de caseina a 25oC, pH 7,6 en 10 minutos.

Biotecnologa de la Reproduccin
232 Manual de la IETS

El medio utilizado para los ltimos 4 lavados (7, 8, 9, 10) de embriones debern ser agrupados y
conservados.

3. Embriones y ovocitos sin fertilizar:

Todos los embriones degenerados y ovocitos sin fertilizar, recolectados de la donante, debern ser
agrupados, lavados 10 veces y conservados. Antes del ensayo, debern fragmentarse por medio de
ultrasonido. Todas estas muestras (medios de recoleccin, de lavado como as tambin
embriones/ovocitos) debern conservarse a 4o C hasta el anlisis. Si ste no pudiera llevarse al cabo
de 24 horas, las muestras debern que ser almacenadas a -70C.

La razn para examinar el lquido de recoleccin es que ste da un indicio de los agentes patgenos a
los cuales pueden haber estado expuestos los embriones en el tracto reproductivo de la donante (por
ej.: es un indicador del estado de salud de la donante). Es importante que una muestra adecuada de la
recoleccin de fluidos sea examinada a fin de que los resultados sean confiables. Si esto no fuera
posible, entonces la porcin sin examinar deber centrifugarse y el sedimento resuspendido y
analizado.

Los agentes patgenos que se encuentran en el fluido de recoleccin pueden ser removidos por medio
de un lavaje adecuado (4). Adems, el motivo fundamental para el examen de los ltimos lavajes es que
proporciona algunas indicaciones sobre la forma en que la receptora estar expuesta cuando sea
transferido el embrin. Si los lavajes son utilizados como un indicador de la salud del embrin, es
importante que toda la muestra sea examinada. Adems si cada lavado es de 2 ml y las ltimas 4 tienen
que ser examinadas, entonces todo el pool de 8 ml deber examinarse.

El examen de los embriones degenerados y ovocitos sin fertilizar, recolectados de la donante, aporta un
indicio de si los embriones han sido expuestos a un agente patgeno y tambin si se ha llevado a cabo
un lavado apropiado. El objetivo es evaluar la sanidad de los embriones a transferir indirectamente a
travs de las estructuras desechadas. Los experimentos, en la actualidad, con embriones y ovocitos
bovinos sustentan esta hiptesis, por ej.: el virus de la rinotraqueitis bovina infecciosa se adhiere a la
zona pelcida de embriones y ovocitos, sin considerar su estado de desarrollo y/o calidad.

Qu tipo de muestras debern ser examinadas en reemplazo de las pruebas serolgicas u otras de la
donante y progenitor de los embriones, es una decisin de las autoridades veterinarias nacionales.
Sera muy importante, de todas formas, examinar el fluido de recoleccin y/o el medio empleado para
lavar embriones/ ovocitos si la donante fuera seropositiva para una enfermedad en particular.

Referencias

1. BOWEN, R.A.; HOWARD, T.H.; ELSDEN, R.P. and SEIDEL, G.E.Jr. 1983. Embryo transfer from cattle infected
with bluetongue virus. Am. J. Vet. Res. 44: 1625-1628.
2. SINGH, E.L.; EAGLESOME, M.D.; THOMAS, F.C.; PAP-VID, G. and HARE, W.C.D. 1982a. Embryo transfer
as a means of controlling the transmission of viral infections. I. The in vitro exposure of preimplantation bovine
embryos to akabane, bluetongue and bovine viral diarrhea viruses. Theriogenology 17: 437-444.
3. STRINGFELLOW, D.A.; SCANLAN, C.M.; BROWN, R.R.; MEADOWS, G.B.; GRAY, B.W.; YOUNG-WHITE,
R.R. 1984. Culture of bovine embryos after in vitro exposure to Brucella abortus. Theriogenology 21: 1005-
1012.
4. HARE, W.C.D.; MITCHELL, D.; SINGH, E.L.; BOUILLANT, A.M.P.; EAGLESOME, M.D.; RUCKERBAUER,
G.M.; BIELANSKI, A. and RANDALL, G.C.B. 1985. Embryo transfer in relation to bovine leukemia virus (BLV)
control and eradication. Can. Vet. J. 26: 231-234.
Sanidad de la TE 233

5. MALLEK, Z.; GUERIN, B.; NIEBART, M.; PAREZ, M. and THIBIER, M. 1984. Consequences de la
contamination in vitro des embryos de souris et de vaches par Brucella abortus. Bull. Acad. Vet. France 57:
479-490.
6. Sterilization Aids 1977. Prepared by the Education and Research Depts. of the American Sterilizer Co., Erie,
Pennsylvania.
7. SINGH, E.L. 1984. Disease transmission: Embryo-pathogen interactions in cattle. Proc. 10th Int. Congr. Animal
Reproduction and A.I. Urbana-Champaign. Vol. IV: IX-17 to IX-24.
8. SINGH, E.L.; THOMAS, F.C.; EAGLESOME, M.D.; PAP-VID, G. and HARE, W.C.D. 1982c. Embryo transfer
as a means of controlling the transmission of viral infections. II. The in vitro exposure of preimplantation bovine
embryos to infectious bovine rhinotracheitis virus. Theriogenology 18: 133-140.
9. LAUERMAN, L.H.; STRINGFELLOW, D.A.; SPARLING, P.H.; CAUB, L.M. and ROBERTS, C.S. 1985.
Vesicular stomatitis virus attached to zona pellucida-intact bovine embryos. Proc. Conf. Research Workers in
Animal Disease. Chicago, IL USA, 11-12 Nov. 1985 (Abstr.).

CAPITULO III

Identificacin, certificacin y registro

Introduccin

En un esfuerzo para asegurar la identificacin precisa de los embriones, de los hijos de transferencia de
embriones y de los progenitores, para asegurar que los embriones puedan ser relacionados con
precisin con los certificados sanitarios y para evitar un mnimo de confusin cuando los embriones son
trasladados de un profesional a otro, o de un pas a otro, se recomiendan ciertos procedimientos para la
identificacin y certificacin. Las asociaciones de criadores, las agencias nacionales de regulacin, las
organizaciones nacionales de transferencia de embriones y profesionales son instados a seguir las
siguientes pautas:

Algunas asociaciones de criadores pueden requerir la tipificacin sangunea, la certificacin o registro


de las compaas de transferencias embrionarias y la previa autorizacin para reproducir y multiplicar
una madre y un padre dados por transferencia embrionaria. El IETS recomienda que, como mnimo,
sean determinados los grupos sanguneos de los donantes madre y padre(s), antes de la recoleccin de
los embriones. Cuando los embriones tengan que ser recolectados para exportacin, tambin se
recomienda que la empresa o el profesional a cargo de las transferencias, estn registrados por una
agencia de regulacin nacional y sean miembros reconocidos en la organizacin nacional de
transferencia de embriones. Esto es a fin de asegurar que el personal sea profesional, tcnicamente
competente, e ilustrado en los procedimientos necesarios para el control de las enfermedades.

Certificacin y registro de la informacin

Los formularios de registro de transferencias de embriones recomendados por la IETS han sido
adoptados por muchas organizaciones de criadores como sus registros oficiales usados en relacin con
la inscripcin de los nacimientos resultantes en sus respectivos herd books. La IETS estimula a las
asociaciones de criadores as como a los sistemas oficiales a seguir estas formas estandarizadas que
incluyen:

A. Certificado de recoleccin
B. Certificado de transferencia
C. Certificado de congelacin

Biotecnologa de la Reproduccin
234 Manual de la IETS

D. Solicitud para exportacin

Los embriones recolectados deben ser protocolados en el certificado A, que debe ser llenado y firmado
por el Veterinario que los obtuvo. Cuando son transferidos, el formulario B ser completado por la
persona que los transfiere. El formulario C ser llenado y firmado por la persona encargada de la
congelacin. El formulario D, consiste en un formulario A modificado que incluir la firma del vendedor
y el nombre y direccin del comprador. La identificacin de los embriones se har como en el formulario
C. Tambin se incluir la identificacin del exportador. Este formulario ser presentado a la
correspondiente asociacin de criadores del pas exportador de manera tal que ella pueda certificar la
identificacin de los embriones y proveer informacin tal como tipo sanguneo de las donantes para el
herd book u organismo del pas receptor.

Los formularios sern llenados por triplicado quedando en el caso de A, B y C el original para el
propietario, copia al Veterinario y la ltima copia para el comprador.

La forma de llenado de estos certificados est por lo general descripta en la parte posterior de los
mismos. Una copia de los certificados A y B deber acompaar el movimiento de cualquier embrin o
grupo de embriones. En los formularios A y B slo se incluirn embriones de una colecta. La
informacin consignada en los formularios debe coincidir con la identificacin mostrada en la pajuela o
ampolla que contenga cada embrin congelado. Se usan cdigos estandarizados para describir el
estado de desarrollo y calidad de los embriones que se pueden encontrar en el reverso de los
formularios. Tambin el cdigo para calidad es numrico. Los formularios descriptos pueden requerirse
normalmente en las asociaciones de criadores o en los organismos oficiales involucrados.

Identificacin de los embriones

A. Pajuela y ampollas

La IETS recomienda un sistema estandarizado para rotular pajuelas y ampollas. La informacin puede
ser impresa a mano o mquina en la pajuela o ampolla que contiene los embriones. Tambin una
etiqueta engomada puede ser adherida en un extremo o enrollada en una pajuela de 0,25 ml que se
insertar luego dentro de otra de 0,5 ml. La rotulacin estandarizada incluye:

1) Unidad de identificacin bsica


Ej. 515 HO 12468713 en la que

515 Cdigo del Profesional u Organizacin de TE

Antes que un Profesional pueda rotular material congelado para su comercializacin, deber solicitar a
la IETS un N de identificacin. La IETS asignar un nmero y mantendr un registro permanente de
sus declaraciones. El cdigo consta de 3 dgitos que podr expandirse a 4 al incrementarse el nmero
de inscriptos. Una lista actualizada de los cdigos puede ser solicitada a la IETS a travs del pago
correspondiente.

HO Cdigo de la raza

Se usa un sistema de cdigo de dos letras para identificar la raza que ha sido estandarizado en EE.UU.
y que es aceptado por las asociaciones de criadores y por las autoridades gubernamentales. El cdigo
se encuentra en el reverso de los formularios.

12468713 Nmero de registro de la donante


Sanidad de la TE 235

La donante es identificada con su nmero de registro siguiendo el cdigo que identifica la raza el cual a
su vez es seguido por el cdigo que identifica al profesional o empresa.
2) Fecha de congelacin

La fecha de congelacin es indicada con dos numerales para el ao, dos letras para el mes y dos
nmeros para el da en ese orden. El cdigo para los meses se encuentra en el reverso de los
formularios. Esta fecha es esencial para reunir a un embrin con los formularios A, B y C. Esta fecha es
crtica para recuperar embriones recuperados de una misma donante en diferentes fechas.

3) Nmero de embriones

Cada pajuela o ampolla deber tener indicado cuntos embriones contiene. Cuando hay ms de un
embrin se debe tratar de combinar a aquellos de las mismas caractersticas.

4) Informacin adicional de la donante y del toro

La marca, nombre comn, caravana o tatuaje se agrega en el rtulo a continuacin (pero separado) del
nmero de identificacin. Puede ser seguido por la identificacin del toro (nmero, nombre o cdigo de
la cabaa). Esta identificacin es opcional.

5) Nmero propio de la pajuela o ampolla

Cada pajuela/ampolla tendr un nmero propio dentro de su respectiva fecha de colecta y congelacin.
El o los nmeros permitirn distinguir entre ampollas/pajuelas de una misma colecta o congelacin. Este
nmero debe ser mostrado en el formulario D con el nmero de la caa en que est alojado. Esta
identificacin es necesaria para poder seguir sus antecedentes de origen en el momento de ser
transferido o al registrar al animal que nazca posteriormente. Este nmero es colocado en el extremo de
la pajuela de manera que sea lo primero que se ve de ella al ser extrada del nitrgeno lquido. Leyendo
de izquierda a derecha, el rtulo en la pajuela deber observarse como se muestra a continuacin:

Pajuela Cdigo del donante Nombre N o nombre


N Profesional raza N donante del toro
(opcional)

2 515 HO 12468713 Corry 1234567

88 JA 14 1 embrin

Ao Mes Da N embrin envasado


Fecha de congelacin de la pajuela

Se recomienda usar dos lneas para rotular pajuelas y 4 5 para rotular ampollas.

B. Rotulado de gobelets
Cada gobelet deber tener lo siguiente en su rtulo:

1) El N de la caa donde est alojado


2) El N de cdigo de la IETS identificando el Profesional
3) Fecha de congelacin como en la pajuela
4) Nombre y nmero de identificacin de la donante
5) Nombre y nmero de identificacin del toro

C. Rotulado de las caas

Biotecnologa de la Reproduccin
236 Manual de la IETS

1) La cabeza de la caa ser rotulada siempre con un N propio que puede incluir el tatuaje, nombre
comn, etc. de la donante. Cuando es movido de su termo inicial, su N propio deber ser acompaado
del N de identificacin de la IETS. El N propio y la identificacin de la IETS son los nmeros que
deben estar grabados en forma indeleble y que sern exigidos.

2) El costado de la caa ser rotulado como sigue:


a. N propio de la caa
b. Nombre o N de la donante y nombre del toro
c. N de embriones en el gobelet
d. Si es reacondicionado para movimientos, se agregar un sufijo A, B, C, etc. al N de la caa.

Registros a conservar

Si bien los formularios descriptos previamente (si son llenados completos y rpidamente) pueden
constituir los registros mnimos para el propietario de la donante, el propietario de la receptora y el
Veterinario, a continuacin se hace un listado de los registros que se consideran esenciales.

A. Un registro escrito de inseminacin para cada embrin recuperado debe ser conservado. Este
registro incluye el nombre y nmero de inscripcin, cdigo de la cabaa y fecha o cdigo de la colecta.
El Veterinario usar el registro escrito de inseminacin cuando complete los formularios requeridos por
la Asociacin de Criadores.

B. Un registro de todas las donantes de las que se recuperaron embriones detallando:

1. N y nombre de inscripcin de la donante


2. Fecha de colecta
3. Nombre y N de inscripcin y cdigo de la cabaa de cada macho cuyo semen haya sido utilizado. Se
incluir la fecha de congelacin del semen
4. N de embriones transferibles, incluyendo estado y calidad como establece la IETS
5. Identificacin de las receptoras transferidas
6. Registro de los embriones divididos (si los hubiere)

C. Un registro de todos los embriones congelados debe ser llenado en un formulario como es requerido
por la respectiva Asociacin de Criadores o la oficina de registro.

1. Los embriones congelados sern rotulados y clasificados de acuerdo con el procedimiento


estandarizado por la IETS.
2. Un inventario de los embriones congelados y almacenados deber ser conservado.
3. Un registro de los embriones divididos ser conservado de manera tal que los animales que resulten
de estos embriones puedan ser identificados en las solicitudes para su correspondiente inscripcin.
4. La aptitud de todos los embriones recuperados deber ser documentada.

D. Los registros de IA, obtencin de embriones, procesamiento, distribucin, transferencia e inventario


deberan ser conservados como un registro permanente.

E. Las donantes sern identificadas en registros con sus nombres y nmeros completos de inscripcin.
Los embriones no sern recolectados hasta disponer de una correcta identificacin de la donante.

F. Registro de la recoleccin de embriones, la transferencia a las receptoras e identificacin de los


embriones con certificacin como requiera la Asociacin de Criadores o la Agencia de Registros.
Sanidad de la TE 237

G. Los mdicos veterinarios u otros que compren o vendan embriones debern conservar registros
completos de las transacciones de todos los embriones identificados de acuerdo con normas de IETS.
El registro de todas las ventas de embriones deber consignar el nombre y direccin del comprador y la
fecha de venta.

H. Un registro de la identificacin permanente de las receptoras con la identidad del embrin transferido
ser hecho en el momento de la transferencia.

1. La raza ser indicada y se usarn los cdigos para raza cuando sea apropiado
2. Si no estuviera inscripta, la receptora deber ser identificada por uno o ms de los siguientes
mtodos:
a. numeracin de organismo oficial en caravana
b. nmero de una caravana plstica visible. Este nmero es nico dentro del rodeo donde estn las
receptoras
c. tatuaje
d. marca

I. Una organizacin o veterinario que posea un rodeo de receptoras identificar a stas de acuerdo con
el pargrafo anterior y mantendr los siguientes registros:
a. fecha de compra del animal
b. nombre y direccin de la persona o firma a quin se compr
c. registro oficial de salud (por ejemplo nmero de vacunacin contra brucelosis)
d. registro de evaluacin sanitaria, vacunaciones y tratamiento antiparasitario mientras el animal estuvo
en posesin de la organizacin o el Veterinario
e. registro de la fecha en que cada embrin fue transferido y la fecha en que la receptora sali de la
propiedad con el nombre y direccin de persona o firma que recibi dicha receptora. Estos registros
indicarn la identidad del embrin.

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