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MANUAL DE PRCTICAS
ANLISIS INSTRUMENTAL
Introduccin
Con la amplia gama de tcnicas instrumentales de anlisis con las que se cuenta en la
de una manera general, que nos permita interpretar y manejar datos obtenidos con
cualquiera de ellas.
existe entre la propiedad (absorbancia, ndice de refraccin, pH, rea de pico, potencial,
ambas funciones.
La propiedad (P) , no es solamente afectada por la composicin del sistema tambin por
medicin, presencia de sustancias qumicas interferentes, etc. es por esta razn en este
necesario ejercer un control efectivo sobre las dems variables que adems de la
composicin afectan la propiedad, todo esto a fin de obtener informacin til desde el
proponer mtodos basados en esta relacin para poder conocer la composicin de cierta
profesional en su rea.
OBJETIVOS
1) Conocer e identificar las partes bsicas del equipo utilizado para su manejo adecuado a
siguientes etapas
5) Contrastar los resultados obtenidos con el diseo propuesto a fin de identificar fuentes
II
No de REVISIN: 00
SEMANA/
ACTIVIDAD FECHA OBSERVACIONES
ETAPA
a)Presentacin
III
Experimental
C. previo 5
Prctica No. 5 Determinacin de etanol por
8
Informe prctica 4
Cromatografa de Gases en enjuague
C. previo 6
Prctica No.6 Determinacin de plata en un
9
Informe prctica 5
desinfectante
Prctica no. 7 Determinacin C. previo 7
10
potenciomtrica de Fe(II) en tabletas. Informe prctica 6
___________________________
Elabor*
IV
No. de REVISIN: 00
13 1/Desarrollo del Realizacin del proyecto Anlisis de los resultados Evaluar avance 3
curso y adecuaciones del proyecto
experimentales
II
SISTEMA DE EVALUACIN
La puntuacin concreta en base 10 para cada punto del informe es:
1) Nombre del experimento, fecha y Datos completos como contenidos (1.0 punto).
equivalencia
contenido
VALOR
Informe de Diseo (ID) (se evalan los mismos puntos que el Informe de (60%)
prctica convencional)
III
Examen destreza y 3* 36
habilidades de
manejo de equipo (dos escritos y uno oral)
y clculos de
contenido
individual
TOTAL 100
IV
1.- En todas las sesiones es obligatorio el uso de bata, lentes de seguridad y zapato
cerrado en el laboratorio.
2.- Se debern conservar limpias las instalaciones (en especial las campanas de extraccin,
3.- Se deber guardar orden y disciplina dentro del laboratorio y durante la sesin
inter-laboratorios.
4.- Queda estrictamente prohibido fumar, consumir alimentos y bebidas dentro del
laboratorio, ya que muchas de las sustancias qumicas que se emplean son inflamables y/o
txicas.
5.- Es importante que antes de trabajar, el estudiante conozca las caractersticas de las
sustancias qumicas que va a utilizar para que pueda manipularlas adecuadamente (se
6.- Para la extraccin de reactivos lquidos, se debern emplear perillas de hule y nunca
7.- Los reactivos qumicos no debern ser manipulados directamente, se debern usar
8.- Despus de manipular sustancias qumicas es necesario lavarse las manos con agua y
jabn.
9.- Si se utilizan mecheros, parrillas o cualquier otro aparato, se deber estar atento en su
10.- En caso de ingestin, derrame o inhalacin de algn reactivo por parte de algn
estudiante, deber ser notificado al asesor del grupo, el cual tomar las acciones
12.- Todas las personas que elaboren disoluciones y/o generen residuos deben etiquetar
correctamente los frascos que se utilicen para este propsito utilizando la etiqueta del
13.- Los residuos de cada experimento debern tratarse y eliminarse adecuadamente por
los alumnos, previa consulta del diagrama ecolgico incluido en el manual de prcticas y
ello.
y equipo necesarios, para ello, una persona responsable del equipo dejar su credencial
En caso de que existiera un defecto en el material o equipo recibido, ste deber ser
anotado en el vale.
16.- Es responsabilidad del alumno revisar el estado en que recibe el material, ya que al
trmino de la sesin experimental lo debe regresar en las mismas condiciones en las que
VI
17.- En caso de extravo o dao del material o equipo de laboratorio, se resguardar el vale
de solicitud de material y la credencial del estudiante responsable del dao o extravo hasta
18.- Los alumnos que adeuden material de laboratorio, debern reponerlo a la mayor
en el siguiente semestre.
19.- El nmero mximo de alumnos que podrn permanecer en el cuarto de balanzas ser
20.- Cuando sea asignada, una gaveta a los alumnos y por razones de olvido o prdida de
la llave, queda prohibido forzarla. En tal situacin los alumnos debern solicitar su apertura,
por escrito, al responsable del laboratorio, previa autorizacin del profesor del grupo.
21.- La gaveta podr usarse hasta la semana 15 del semestre por lo que, el grupo de
VII
PROTECCION PERSONAL
deben utilizar los instrumentos que vayas a usar. Adems, debers saber dnde se
encuentran los extintores, el botiqun, la ducha, los aparatos lavaojos, y las salidas de
emergencia.
que vayas a usar, as como de los productos que se obtienen de la propia reaccin
caso.
AL TERMINAR UNA SESIN: Tendrs que tratar los residuos para eliminar su peligrosidad
DISEO EXPERIMENTAL
Contrastar los resultados con el diseo propuesto a fin de identificar fuentes de error
VIII
experimentos; se debe elaborar un formato que debe considerarse como una gua para
distribucin equitativa del trabajo para cada integrante del equipo de trabajo.
Referencias consultadas
correspondiente) debe incluir los puntos anteriores as como el anlisis de resultados y los
Por ltimo, es necesario hacer una recomendacin. La naturaleza misma del diseo
continua y consciente para afinar los aspectos del diseo que se han contemplado. El
hecho de que en esta asignatura se presente una gua para presentarlo a revisin no niega
su dinmica intrnseca, esto es, aunque durante su elaboracin cada estudiante debe
IX
3) En caso de error NO BORRAR NADA solo cruzar con una lnea y escribir lo
Entrega puntual y en tiempo de los productos a evaluar (IT, ID, CP, etc.)
4. Se formarn equipos (4-5 personas) de trabajo entre los alumnos del grupo.
5. Se les solicitar el siguiente material a los estudiantes, el cual estar bajo su propiedad
XI
1 Se recordar el uso y manejo del material y reactivos que se utilizarn durante el curso
semestre, etc.)
XII
PRCTICA No. 1
DETERMINACIN CUANTITATIVA DE AZUL DE TIMOL EN UNA MUESTRA DE
RESIDUOS MEDIANTE UNA CURVA DE CALIBRACIN ESPECTROFOTOMTRICA A
pH ALCALINO.
I. OBJETIVOS
parmetros estadsticos.
II. INTRODUCCIN
tenemos a las curvas de calibracin, adiciones patrn, uso de estndar interno, valoracin,
etc.
primario, con esta solucin patrn se preparan una serie de soluciones estndar que
8, 10 ppm).
constantes.
d) Que la matriz donde se preparan los estndares sea semejante a la del problema.
1
Prctica No. 1. Curva de calibracin espectrofotomtrica
Una vez preparados estos estndares, se procede a medir la propiedad o respuesta de los
sistemas en el instrumento adecuado y se obtienen una serie de valores con los que se
una ecuacin matemtica que relaciona el comportamiento entre las dos variables. En la
mayora de los casos se ajusta a la ecuacin de una recta (y=mX+b) y mediante una
ecuacin.
2.00
1.80
1.60
1.40
1.20
Propiedad
1.00
0.80
0.60
0.40
0.20
0.00
0 0.0002 0.0004 0.0006 0.0008 0.001 0.0012
Cstd
Por ltimo se realiza la lectura directa o de una dilucin apropiada para la cuantificacin del
dispersin de los datos obtenidos, donde una mayor dispersin implica menor precisin.
2
Prctica No. 1. Curva de calibracin espectrofotomtrica
Para evaluar la dispersin y por lo tanto, la calidad del valor que se reportar, se hace uso
entre otros.
3
Prctica No. 1. Curva de calibracin espectrofotomtrica
Sistema 1 2 3 4 5 6
ptima ()
inters (azul de timol) tomar las lecturas del espectrofotmetro de absorbancia (Abs) y
Con los datos obtenidos se anotan en la Tabla 3 y construya la grfica 1. Por ltimo,
indique la longitud de onda ptima que seleccionara para cuantificar el azul de timol.
Una vez calibrado el equipo obtenga las lecturas de todos los sistemas (1-6) inicie
4
Prctica No. 1. Curva de calibracin espectrofotomtrica
Llene la tabla 4 y obtenga los valores promedio del factor de respuesta, la desviacin
V. ANALISIS DE RESULTADOS
5
Prctica No. 1. Curva de calibracin espectrofotomtrica
Tabla 5.- Prueba de adecuabilidad del sistema permite verificar que el sistema de
%RSD un valora bajo (menor al 2%) de este permite afirmar con certeza que el sistema de medicin funciona
apropiadamente a pesar de variaciones ambientales.
6
Prctica No. 1. Curva de calibracin espectrofotomtrica
DE TRABAJO.
de aquellos que participaron en su realizacin, se dar por entendido que los que no
tendrn calificacin de reporte y por ende no se colocar su nombre, a menos que haya
III) OBJETIVOS PARTICULARES. Con base al objetivo general del Manual y a las
actividades realizadas en la prctica redactar 2-3 objetivos particulares recordando que
deben responder el Qu?, Cmo? y Para qu?.
7
Prctica No. 1. Curva de calibracin espectrofotomtrica
2) RESULTADOS. Incluir:
Tabla No. 3.- Datos experimentales del espectro de absorcin, completa.
Grfico del espectro de absorcin indicando nmero y nombre CORRECTO (el
nombre correcto de un espectro de absorcin incluye el nombre del analito, la
composicin de la matriz, as como las condiciones de amortiguamiento impuestas,
pH por ejemplo, y la concentracin del analito, la cual es bien conocida ya que se
emplea un sistema de la curva de calibracin para su realizacin), considerar que
se incluirn 2 grficos, uno en funcin de Absorbancia y otro en % Transmitancia.
Incluir tabla: con nmero y nombre.
No. Sistema Concentracin (unidades) Absorbancia promedio
Grfico de la curva de calibracin indicando nmero y nombre CORRECTO (el
nombre correcto del grfico de una curva de calibracin se puede indicar bajo el
modelo: PROPIEDAD=f[analito]UNIDADES).
Adems, debe incluir forzosamente: Ecuacin de la recta bajo el modelo:
PROPIEDAD = (valor de la pendiente) [analito]UNIDADES +/- (valor de la ordenada al origen)
8
Prctica No. 1. Curva de calibracin espectrofotomtrica
9
Prctica No. 1. Curva de calibracin espectrofotomtrica
4) CONCLUSIONES. Con base al objetivo general del Manual y a los redactados por
ustedes (particulares).
DATOS
Peso molecular de Azul de Timol = 466.6 g/mol.
pKa(s) de Azul de Timol = 2.0, 8.7 (rojo, amarillo, azul)
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/b/bc/Thymolblau_skeletal.png
10
Prctica No. 1. Curva de calibracin espectrofotomtrica
11
PRCTICA No. 2
DETERMINACIN CUANTITATIVA DE CIDO ASCRBICO (VITAMINA C) EN
TABLETAS EFERVESCENTES MEDIANTE UNA CURVA DE CALIBRACIN
INDIRECTA ESPECTROFOTOMTRICA BAJO CONDICIONES DE
AMORTIGUAMIENTO.
I.-OBJETIVOS:
Cuantificar cido ascrbico en tabletas efervescentes mediante una curva de
calibracin indirecta bajo condiciones qumicas optimizadas.
Reconocer la sustancia que da la absorbancia al pH de trabajo, as como calcular el
coeficiente de absortividad a la longitud de onda seleccionada.
II.- INTRODUCCIN
Los principios de preparacin y trazo de una curva de calibracin ya fueron estudiados en
prcticas anteriores, donde se considera que la respuesta del instrumento es lineal respecto
a la concentracin de la sustancia a cuantificar, sin embargo debe considerarse que si la
curva es indirecta existe una o varias reacciones efectuadas en los sistemas de
preparacin, dado que la sustancia de inters da seal muy pobre o no da seal, este
reactivo que genera la reaccin debe encontrarse en exceso , considerando el siguiente
estado de equilibrio de manera general:
aX bY cZ Keq > 1
agrega V yC y
P=KY Y
considerando el estado de equilibrio anterior entonces
12
Prctica No. 2. Curva de calibracin indirecta
Donde Vst, Vy, Vaforo, representan los volmenes de estndar, reactivo Y y de aforo
cambia es de X.
Por lo que se puede graficar P=f (Vst Cst / V aforo), obtenindose una funcin de pendiente
Agua destilada
8 tubos de ensaye con gradilla cido ascrbico estndar
6 matraces volumtricos de 10 mL Tabletas efervescentes (leer el marbete y
2 vasos de precipitados de 50 mL anotar el contenido de cido ascrbico)
1 pipeta volumtrica de 0.5 1, 2,3,4,5 mL 2,6 diclorofenol indofenol
3 matraz volumtrico de 25 mL
1 piseta
Buffer cido actico /Acetato 0.01 M pH=4.5
Esptula y mortero con pistilo
1 agitador magntico c/barra
1 embudo con papel filtro
Un espectrofotmetro con celdas.
13
Prctica No. 2. Curva de calibracin indirecta
IV.-PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. Preparacin de soluciones
a) Buffer de acetatos 0.01 M pH = 4.5
b) Solucin estndar de cido ascrbico: Se pesan 50 mg de cido ascrbico en un
vaso de precipitados de 50 mL se disuelven en aproximadamente 10 mL de Buffer
de acetatos pH= 5 y aforan a 25 mL con agua destilada (solucin A), de esta solucin
se toman 2 mL, y mezclan con 10 mL de Buffer pH=5 y se aforan a 25 mL con agua
destilada (solucin B stock 9 x10-4M)
c) Solucin de 2,6 diclorofenolindofenol (DFI) 0.04 M: Pesar 100 mg del reactivo en
un vaso de precipitados, adicionar 5 mL de buffer pH=4.5 agitar y trasvasar a un
matraz de 10 mL y aforar con agua destilada.
d) Solucin problema: Si la tableta contiene 1.0 g de ascrbico, se pesan 50 mg
de polvo de tabletas finamente pulverizadas y se afora a 10 mL con agua destilada.
Si la formulacin es de 2.0 g pesar 25 mg de polvo.
14
Prctica No. 2. Curva de calibracin indirecta
V. RESULTADOS EXPERIMENTALES
% Transmitancia
1.4
1.2
1
Absorbancia
0.8
0.6
0.4
0.2
0
460 470 480 490 500 510 520 530 540 550 560
Longitud onda /nm
Grfica 1.- Espectro de Absorcin A= f( Longitud de onda )
15
Prctica No. 2. Curva de calibracin indirecta
1.4
1.2
1
Absorbancia
0.8
0.6
0.4
0.2
0
[cido Ascrbico]/M
16
Prctica No. 2. Curva de calibracin indirecta
III) OBJETIVOS PARTICULARES. Con base al objetivo general del Manual y a las
actividades realizadas en la prctica redactar 2-3 objetivos particulares recordando que
deben responder el Qu?, Cmo? y Para qu?.
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Prctica No. 2. Curva de calibracin indirecta
2) RESULTADOS. Incluir:
Tabla No. 2.- Datos experimentales del espectro de absorcin, completa.
Grfico del espectro de absorcin indicando nmero y nombre CORRECTO (el
nombre correcto de un espectro de absorcin incluye el nombre del analito, la
composicin de la matriz, as como las condiciones de amortiguamiento
impuestas y la concentracin del analito, la cual es bien conocida ya que se
emplea un sistema de la curva de calibracin para su realizacin), considerar que
se incluirn 2 grficos, uno en funcin de Absorbancia y otro en % Transmitancia.
Tabla No. 3.- Datos experimentales de la Curva de calibracin.
Grfico de la curva de calibracin indicando nmero y nombre CORRECTO (el
nombre correcto del grfico de una curva de calibracin se puede indicar bajo el
modelo: PROPIEDAD=f[analito]UNIDADES).
Adems, debe incluir forzosamente: Ecuacin de la recta bajo el modelo:
PROPIEDAD = (valor de la pendiente) [analito]UNIDADES +/- (valor de la ordenada
al origen)
No indicar la propiedad y la concentracin del analito como X y Y, y tambin
debe incluir Coeficiente de determinacin (r2).
Incluir tabla: con nmero y nombre.
18
Prctica No. 2. Curva de calibracin indirecta
4) CONCLUSIONES. Con base al objetivo general del Manual y a los redactados por
ustedes (particulares).
DATOS
cido ascrbico(C6H8O6) pKas = 4.05, 7.25
2,6 diclorofenolindofenol (C12H7Cl2NO2) pKa= 5.758 (forma cida roja, bsica azul)
C6H7O6- C6H6O6 + H+ + 2e- Eo = 0.13 V (pH=4.5)
C12H7Cl2NO2 C12H7Cl2NO22- Eo = 0.43 V (pH=4.5)
(roja) (Incolora)
19
Prctica No. 2. Curva de calibracin indirecta
2,6-diclorofenolindofenol
(mezclado con ascrbico a
pH cido)
R-3
20
PRCTICA No. 3
DETERMINACIN CUANTITATIVA DE HIERRO Y ZINC EN UN MULTIVITAMNICO
MEDIANTE UNA CURVA DE CALIBRACIN POR ESPECTROFOTOMETRA DE
ABSORCIN ATMICA
I. OBJETIVOS
Conocer el fundamento, las partes bsicas y manejo del espectrofotmetro de
absorcin atmica, para obtener resultados confiables en este tipo de instrumento.
Interpretar y relacionar las variables a utilizar para efectuar el clculo de contenido
de dos analitos (hierro y zinc) en un multivitamnico comercial por una curva de
calibracin directa.
II. INTRODUCCIN
21
Prctica No. 3. Espectrofotometra de Absorcin Atmica
El zinc es un nutriente que nos aporta casi todas las enzimas de la piel, incluyendo aquellas
que se encargan de crear el colgeno y producir nuevas clulas, tanto el zinc como el hierro
son fundamentales en la produccin de clulas en los folculos capilares y en el transporte
de oxgeno, etc.
A continuacin, se presenta un esquema de un espectrofotmetro de absorcin atmica
con flama (EAA-F).
22
Prctica No. 3. Espectrofotometra de Absorcin Atmica
1
No sobrepasar la temperatura y tener paciencia hasta que la solucin quede lo ms transparente posible
23
Prctica No. 3. Espectrofotometra de Absorcin Atmica
c) Medicin de la Absorbancia.
Considerando las indicaciones del programa de trabajo del equipo, primero se emplea agua
destilada y despus el blanco reactivo (sistema blanco) para calibrar la seal a cero.
Despus se solicitan las soluciones estndar y problemas, anotar la lectura promedio de
las mediciones que realiza (Tabla 2) y graficar los resultados que se van obteniendo.
V. RESULTADOS EXPERIMENTALES
1
0.9
0.8
0.7
Absorbancia
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
[Fe]/ppm
24
Prctica No. 3. Espectrofotometra de Absorcin Atmica
1
0.9
0.8
0.7
Absorbancia
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
[Zn]/ppm
25
Prctica No. 3. Espectrofotometra de Absorcin Atmica
III) OBJETIVOS PARTICULARES. Con base al objetivo general del Manual y a las
actividades realizadas en la prctica redactar 2-3 objetivos particulares recordando que
deben responder el Qu?, Cmo? y Para qu?.
26
Prctica No. 3. Espectrofotometra de Absorcin Atmica
2) RESULTADOS. Incluir:
Tabla No. 1.- Datos experimentales de la Curva de calibracin. Adicionando una
columna ms donde coloquen la concentracin molar (M) de cada sistema.
Grfico de la curva de calibracin indicando nmero y nombre CORRECTO (el
nombre correcto del grfico de una curva de calibracin se puede indicar bajo el
modelo: PROPIEDAD=f[analito]UNIDADES).
Adems, debe incluir forzosamente: Ecuacin de la recta bajo el modelo:
PROPIEDAD = (valor de la pendiente) [analito]UNIDADES +/- (valor de la ordenada
al origen)
No indicar la propiedad y la concentracin del analito como x y y, y tambin
debe incluir Coeficiente de determinacin (r2). Recordar que se tienen que incluir 2
grficos, uno con unidades de concentracin Molar y otro con unidades de
concentracin en ppm, cada uno con las especificaciones citadas anteriormente.
27
Prctica No. 3. Espectrofotometra de Absorcin Atmica
28
Prctica No. 3. Espectrofotometra de Absorcin Atmica
4) CONCLUSIONES. Con base al objetivo general del Manual y a los redactados por
ustedes (particulares).
29
Prctica No. 3. Espectrofotometra de Absorcin Atmica
Mezcla de Zn y Fe (II)
en sol. cida
R-4
Agregar aproximadamente
de 100 a 150 mL de agua
30
1 SESION DE EJERCICIOS
31
1 sesin de ejercicios
32
PRCTICA No. 4
DETERMINACIN CUANTITATIVA DE CLORHIDRATO DE FENILEFRINA EN
UN PRODUCTO FARMACUTICO (TABLETAS Y/O GOTAS) MEDIANTE UNA
CURVA DE CALIBRACIN POR CROMATOGRAFA DE LQUIDOS DE ALTA
RESOLUCIN (HPLC).
I. OBJETIVOS
Conocer los componentes bsicos del cromatgrafo de lquidos de alta
resolucin (HPLC, por sus siglas en ingls), as como su manejo y cuidados.
Conocer un cromatograma y su uso para anlisis cualitativo y cuantitativo.
Interpretar y relacionar variables a utilizar para efectuar para efectuar el clculo
de contenido de clorhidrato de fenilefrina por una curva de calibracin en
productos comerciales.
II. INTRODUCCIN
La Cromatografa de Lquidos de Alta Resolucin (HPLC, por sus siglas en ingls) es la
tcnica de separacin ms ampliamente utilizada en la industria, debido a su sensibilidad.
Su fcil adaptacin a determinaciones cuantitativas es idnea para sustancias no voltiles
o termolbiles de aplicacin en la industria, en muchos campos de la ciencia y para la
sociedad en general.
En la Cromatografa de Lquidos de Alta Resolucin, se ponen en contacto dos fases
inmiscibles, una mvil y la otra estacionaria. Una muestra que se introduce en la fase mvil
es transportada a lo largo de la columna que contiene a la fase estacionaria distribuida. Los
componentes separados emergen en orden creciente de interacciones con la fase
estacionaria. La migracin depende de la solubilidad de los solutos en fase mvil o
estacionaria.
Los mtodos de evaluacin para las determinaciones cuantitativas por medio de HPLC son
variados. Entre ellos tenemos: 1) la calibracin con estndares, 2) utilizacin de un estndar
interno y normalizacin del rea.
Sin lugar a duda, la calibracin con estndares es el mtodo ms utilizado en HPLC .
El xito de la separacin para un compuesto dado depende de las condiciones de operacin
como son: tipo y longitud de columna, proporcin y tipo de fase mvil, velocidad de flujo de
la fase mvil, etc.
33
Prctica No. 4. Cromatografa de Lquidos de Alta Resolucin
34
Prctica No. 4. Cromatografa de Lquidos de Alta Resolucin
2
De acuerdo al marbete: 10g de fenilefrina / 100 mL de solucin
35
Prctica No. 4. Cromatografa de Lquidos de Alta Resolucin
3
Triturar 2 tabletas y pesar la cantidad de polvo equivalente a 1 mg de
fenilefrina.
Disolver el polvo en 5 mL de fase mvil.
Filtrar para eliminar los excipientes que hayan quedado sin disolver
Aforar a 10 mL, con agua desionizada (soln. P2.)
Solucin P2
R-6
3
Calcular la cantidad de polvo a pesar de acuerdo al marbete del medicamento (que no debe
contener paracetamol)
36
Prctica No. 4. Cromatografa de Lquidos de Alta Resolucin
V. RESULTADOS EXPERIMENTALES
Llenar la siguiente tabla con los resultados obtenidos del cromatograma obtenido o en su
caso efectuar el clculo para cada una de las soluciones inyectadas.
Sistema Concentracin Tr (min) Wo rea Altura N AEPT
(ppm) W1/2
(s)
Tr= tiempo de retencin, W= ancho de pico a la base, N= Nmero de platos tericos, AEPT= altura
equivalente de un plato terico, ppm (partes por milln).
37
Prctica No. 4. Cromatografa de Lquidos de Alta Resolucin
III) OBJETIVOS PARTICULARES. Con base al objetivo general del Manual y a las
actividades realizadas en la prctica redactar 2-3 objetivos particulares recordando que
deben responder el Qu?, Cmo? y Para qu?.
38
Prctica No. 4. Cromatografa de Lquidos de Alta Resolucin
2) RESULTADOS. Incluir:
Incluir los cromatogramas con nmero y nombre, tanto de TODOS los sistemas de
la Curva de calibracin como de su(s) muestra(s). Recortar y pegar de forma limpia
y ordenada, no solamente engraparlos, y sombrear con marcatextos los datos del
pico de la fenilefrina.
Tabla No. 1.- Datos experimentales de la Curva de calibracin y parmetros
cromatogrficos. Recuerda que la altura ser medida con una regla ya que es un
39
Prctica No. 4. Cromatografa de Lquidos de Alta Resolucin
dato que no da el cromatograma. Se incluir una columna adicional al final que diga
Intervalo de confianza para cada sistema.
Grfico de la curva de calibracin indicando nmero y nombre CORRECTO (el
nombre correcto del grfico de una curva de calibracin se puede indicar bajo el
modelo: PROPIEDAD=f[analito]UNIDADES).
o Adems, debe incluir forzosamente: Ecuacin de la recta bajo el modelo:
o PROPIEDAD = (valor de la pendiente) [analito]UNIDADES +/- (valor de la
ordenada al origen)
o No indicar la propiedad y la concentracin del analito como x y y, y
tambin debe incluir Coeficiente de determinacin (r2). Recordar que se
tienen que incluir 2 grficos, uno con rea como propiedad y otro con altura,
cada uno con las especificaciones citadas anteriormente.
Incluir tabla: con nmero y nombre. Si emple 2 muestras, sern 2 tablas, uno por
cada muestra.
40
Prctica No. 4. Cromatografa de Lquidos de Alta Resolucin
4) CONCLUSIONES. Con base al objetivo general del Manual y a los redactados por
ustedes (particulares).
41
Prctica No. 4. Cromatografa de Lquidos de Alta Resolucin
Procurar generar y guardar la menor cantidad de residuos. Aquellas soluciones que puedan
ser re-utilizadas deben emplearse o bien ser desechadas adecuadamente.
R-6 R-5
42
PRCTICA No. 5
DETERMINACIN CUANTITATIVA DE ALCOHOL ETLICO EN ENJUAGUE BUCAL MEDIANTE
EL MTODO DE ADICIN DE ESTNDAR INTERNO POR CROMATOGRAFA DE GASES
I. OBJETIVOS
Aplicar los conocimientos tericos adquiridos para emplear el mtodo de adicin del
Conocer e identificar las partes bsicas del cromatgrafo de gases para capacitarse
II. INTRODUCCION
columna cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de una fase mvil, un gas inerte
(no interacciona con las molculas del analito) cuya nica funcin es la de transportar el
analito a travs de la columna (fase estacionaria). Al pasar por la columna los solutos son
computadora.
Los estndares internos tienen su mxima utilidad cuando hay prdidas inevitables de la
muestra, por ejemplo durante una inyeccin manual en CG. Si se agrega un estndar
interno a una mezcla antes de cualquier prdida, entonces la fraccin de estndar que se
permanece constante.
Un compuesto para ser utilizado como Estndar Interno (EI), debe reunir los siguientes
requisitos: a) que el pico de respuesta est cercanos pero resuelto de los componentes a
de pureza.
43
Prctica No. 5. Cromatografa de Gases
Los enjuagues bucales llevan la finalidad primordial de corregir el mal aliento de origen
bucal, tornndolo agradable. Para ello, deben controlar el desarrollo bacteriano y dejar la
1piseta flama
44
Prctica No. 5. Cromatografa de Gases
V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. Preparacin de soluciones
Abrir las vlvulas de los tanques de gas (nitrgeno e hidrgeno) y las llaves de paso.
Siguiendo la pantalla y el programa que controla el equipo, revisar que estn las siguientes
condiciones.
45
Prctica No. 5. Cromatografa de Gases
PARMETRO CONDICIONES
Columna DB-wax 30 m Megabore
Gas acarreador Nitrgeno, a 5 psi
Presin de aire 7 psi
Presin de hidrgeno 20 psi
Temperatura del inyector 200C
Temperatura del detector 250C
1.- Inyectar 1.0 L de la Soln 1, esperar a que se registre el pico del alcohol. Hacer la
2.-Inyectar 1.0 L de la Mezcla de estndares, esperar a que se registren los picos. Hacer
3.-Inyectar 1.0 L de la Solucin problema y esperar a que se registren los picos de los
alcoholes.
Una vez obtenidos los cromatogramas, anotar los datos promedio de cada inyeccin en la
Tabla 2.
NOTA:
Al terminar las inyecciones, llevar a cabo el proceso de lavado, que consiste en DEJAR 10
MINUTOS EL FLUJO DEL GAS DE ARRASTRE y luego apagar el equipo y cerrar los
gases.
46
Prctica No. 5. Cromatografa de Gases
V. RESULTADOS EXPERIMENTALES
Tiempo retencin
rea de pico
Ancho de pico
Platos tericos
Resolucin
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Prctica No. 5. Cromatografa de Gases
III) OBJETIVOS PARTICULARES. Con base al objetivo general del Manual y a las
actividades realizadas en la prctica redactar 2-3 objetivos particulares recordando que
deben responder el Qu?, Cmo? y Para qu?.
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Prctica No. 5. Cromatografa de Gases
2) RESULTADOS. Incluir:
Incluir los cromatogramas con nmero y nombre, recordar que se debe incluir el
cromatograma de la mezcla de STDs y TODOS los cromatogramas de las
muestras que se hallan empleado en el grupo, ya que se cuantificarn todas las
muestras por cada equipo. Recortar y pegar de forma limpia y ordenada, no
solamente engraparlos, y sombrear con marcatextos los datos del pico del Etanol
de un color y con otro los datos del pico del n-propanol.
Tabla No. 2.- Datos experimentales y parmetros cromatogrficos. Incluir dos filas
adicionales al final una para escribir la altura de pico y otra para el AEPT. Recuerde
que las unidades del tR es en minutos y W (ancho del pico) es en segundos para
que los considere en los clculos, ya que ambos datos deben estar en las mismas
unidades al aplicar las frmulas. Recordar que la resolucin es el nico parmetro
contemplado en la tabla que es compartido por 2 picos (etanol y n-propanol).
Incluir tabla: con nmero y nombre. El nmero de tablas ser el mismo que de
muestras empleadas en el grupo. Recordar que el Marbete (% de etanol en el
enjuage) hay productos que si lo mencionan y otros no y por ende se tienen que
investigar en la pgina web de la marca comercial.
Muestra empleada (nombre comercial)
Presentacin
Lote y fecha de caducidad (u origen)
Marbete (enfocndose slo al analito que se cuantific experimentalmente)
Resultado experimental (reportado como en el marbete: por cpsula, por
100ml, etc.)
% de principio activo con respecto al marbete
49
Prctica No. 5. Cromatografa de Gases
4) CONCLUSIONES. Con base al objetivo general del Manual y a los redactados por
ustedes (particulares).
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Prctica No. 5. Cromatografa de Gases
Columna DB-WAX
Gases para el Detector de Ionizacin de Flama (FID): Hidrgeno alta pureza - Aire.
ETANOL, J. T. Baker, P.M. 46.0 g/mol, n-PROPANOL, J. T. Baker, P.M. 60.097 g/mol,
99.85 % de Pureza, densidad 0.79 g/ml, 99.0 % de Pureza, densidad 0.80 g/ml, Punto
VI. ORIENTACIONES
Punto de ebullicin: 78.3 o PARA EL TR
C de ebullicin: 97.2 oC
51
Prctica No. 5. Cromatografa de Gases
52
PRCTICA No. 6
DETERMINACIN CUANTITATIVA DE PLATA EN DESINFECTANTES DE VERDURAS
MEDIANTE UNA CURVA DE CALIBRACIN POTENCIOMTRICA EMPLEANDO ELECTRODOS
IN SELECTIVOS.
I. OBJETIVO
A) Conocer el funcionamiento de los Electrodos in-especficos mediante su empleo y
II. INTRODUCCIN
E= Eo - 0.059 pAg+
de plata que no se encuentre como plata, no ser detectada por el electrodo y necesitar
53
Prctica No. 6. Curva de calibracin con electrodos selectivos
hidrulicas y uso mdico aunque su uso es restringido por provocar una condicin llamada
argiria. Tambin evidencia clnica seala su eficacia para erradicar infecciones vaginales
A) LIMPIEZA DE MATERIAL
1.- Lavar perfectamente el material y enjuagar por varios minutos con HNO3 al 10%,
54
Prctica No. 6. Curva de calibracin con electrodos selectivos
Medir 4 mL de KCL 0.01M (patrn primario) con pipeta volumtrica y verter en un frasco
Llenar la bureta con la Solucin de Nitrato de plata aproximada 0.01M (stock) y agregar
poco a poco esta solucin hasta el cambio de amarillo (turbio) a caf rojizo.
No debe ser mayor al 5% en el caso de mtodos volumtricos. Esto ayudar a que los
55
Prctica No. 6. Curva de calibracin con electrodos selectivos
TRATAMIENTO DE LA MUESTRA
Tampn de fuerza inica (nitrato de sodio) 1.0 M y dos gotas de cido ntrico concentrado
con agitacin magntica y calentando a 100 oC, por 5 minutos. Trasvasar a matraz y aforar
SISTEMAS 1 2 3 4 5 6 7
(stock) (mL)
Tampn de fuerza inica (nitrato de 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
NOTA: En caso de registrar una lectura alta, en la muestra problema, preparar otro sistema
con mayor volumen de problema. Por el contrario, en caso de una lectura baja colocar
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Prctica No. 6. Curva de calibracin con electrodos selectivos
E) DETERMINACIN POTENCIOMTRICA
3.-Situar el botn del potencimetro en el modo de milivoltios (mV) y una vez estabilizada
necesario el lavado de los electrodos entre mediciones. Para el caso de las muestras
problema, lavar los electrodos con agua destilada y secar suavemente antes de proceder a
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Prctica No. 6. Curva de calibracin con electrodos selectivos
NO DESECHARLOS.
IV.- RESULTADOS
1 V1 =
2 V2 =
3 V3 =
Promedio =_______________
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Prctica No. 6. Curva de calibracin con electrodos selectivos
Sistemas 1 2 3 4 5 6
(SISTEMA 7 )
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Prctica No. 6. Curva de calibracin con electrodos selectivos
III) OBJETIVOS PARTICULARES. Con base al objetivo general del Manual y a las
actividades realizadas en la prctica redactar 2-3 objetivos particulares recordando que
deben responder el Qu?, Cmo? y Para qu?.
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Prctica No. 6. Curva de calibracin con electrodos selectivos
2) RESULTADOS. Incluir:
Tabla No. 1.- Datos experimentales de la estandarizacin del estndar de Nitrato
de plata. No olvidar colocar en una fila adicional al final de la tabla los datos de
Promedio, STD y %RSD para los 3 volmenes gastados de KCl obtenidos en ste
paso.
Tabla No. 2.- Datos experimentales de la Curva de calibracin. Considere que la
concentracin que debe reportar es de Plata no de Nitrato de plata. Adicionar una
columna ms al final de esta tabla para reportar la lectura de la muestra, si realiz
varias muestras o de una misma hizo varios sistemas coloque una columna para
cada sistema, de esta manera puede omitir colocar la Tabla No. 3. Esta tabla debe
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Prctica No. 6. Curva de calibracin con electrodos selectivos
Presentacin
62
Prctica No. 6. Curva de calibracin con electrodos selectivos
4) CONCLUSIONES. Con base al objetivo general del Manual y a los redactados por
ustedes (particulares).
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Prctica No. 6. Curva de calibracin con electrodos selectivos
DATOS
Ag+/ Ago Eo = 0.79 V Electrodo de Calomel E= 0.245 V
H2CrO4 pKa(s) = 0.8, 6.5 Ag2CrO4 pKs= 11.95 AgCl pKs= 9.75
+ - 2-
Ag AgOH Ag(OH)2 Ag(OH)3
pH
11.7 12.7 12.8
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PRCTICA No. 7
DETERMINACIN CUANTITATIVA DE SULFATO FERROSO EN TABLETAS MEDIANTE UNA
CURVA DE VALORACIN POTENCIOMTRICA BAJO CONDICIONES DE
AMORTIGUAMIENTO.
I. OBJETIVOS
potenciomtrica.
Identificar las partes bsicas del potencimetro para reconocer su manejo a fin
II. INTRODUCCIN
en solucin. La ventaja de medir potencial es que ste se mide por medio de un electrodo
que es selectivo a la especie o analito que se quiere determinar. Por lo tanto, el voltaje que
alto grado de selectividad (seal analtica que puede mostrar un pequeo grupo de analitos
en una solucin que contiene mltiples especies qumicas) se debe a la propiedad fsica
del electrodo con que se mide el voltaje. La medida del potencial se puede emplear para
Para determinar el punto final se pueden utilizar varios mtodos; el ms directo se basa en
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Prctica No. 7. Curva de valoracin potenciomtrica
En esta prctica el hierro presente se disuelve en cido se valora con dicromato de potasio
y las variaciones del potencial durante el proceso se siguen con un potencimetro, para
El grado en que ocurre la reaccin (y por tanto del cambio de pendiente en el punto de
1 Pipeta graduada de 5 mL
1 probeta de 25 ml combinado)
66
Prctica No. 7. Curva de valoracin potenciomtrica
1.-Preparacin de soluciones
-Solucin problema
previamente. Llenar la bureta con el valorante (dicromato de potasio 0.01 M), comenzar la
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Prctica No. 7. Curva de valoracin potenciomtrica
V. RESULTADOS EXPERIMENTALES
K2Cr2O7 0.01 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0
M (mL)
EECS(mV)
E ECS(mV)
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Prctica No. 7. Curva de valoracin potenciomtrica
1.-DATOS GENERALES
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Prctica No. 7. Curva de valoracin potenciomtrica
III) OBJETIVOS PARTICULARES. Con base al objetivo general del Manual y a las
actividades realizadas en la prctica redactar 2-3 objetivos particulares recordando que
deben responder el Qu?, Cmo? y Para qu?.
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Prctica No. 7. Curva de valoracin potenciomtrica
2) RESULTADOS. Incluir:
Tabla No. 1.- Datos experimentales de la Curva de valoracin.
Grfico de la curva de valoracin indicando nmero y nombre CORRECTO (el
nombre correcto del grfico de una curva de valoracin se puede indicar bajo el
modelo: PROPIEDAD=f(V(ml)VALORANTE). Recordar que tienen que transformar los
valores de EECS a EENH sumndole 0.245 V o 245 mV, segn sea el caso, y con esta
grfica es con la que trabajarn para la cuantificacin y otros datos que se piden
en el anlisis de resultados.
Incluir tabla: con nmero y nombre.
Muestra empleada (nombre comercial)
Presentacin
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Prctica No. 7. Curva de valoracin potenciomtrica
4) CONCLUSIONES. Con base al objetivo general del Manual y a los redactados por
ustedes (particulares).
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Prctica No. 7. Curva de valoracin potenciomtrica
Complejos de Fe(II)
Complejos de Fe(III)
3-n
Fe(OH)n Log 1= 11.0 , Log 2= 21.7
Fe3+ + H2PO4- Fe H2PO42+ log K = 3.47
Fe3+ + HPO42- Fe HPO4+ log K = 8.3
Complejos de Cr(III)
Cr(OH)n3-n Log 1= 10.2, Log 2= 18.3
Cr3+ + H2PO4- Cr H2PO42+ log K = 2.56
Cr(OH)3 pKs = 30.3
pPO
15
Fe(OH) 2+
10
Fe 3+
Fe(OH)2 +
5
0 pH
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
-5
FeH2PO4 FeHPO4 +
2+
-10
-15
-20
73
Prctica No. 7. Curva de valoracin potenciomtrica
PO4'
4
Fe 2+ Fe(OH)+
3
1
FeH2PO4+ FeHPO4
0 pH
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
-1
-2
-3
74
Prctica No. 7. Curva de valoracin potenciomtrica
pCr(III)'
12
Cr(OH)2+
CrH2PO42+
7
Cr(OH)3
2
pH
0 2 4 6 8 10 12 14
-3
-8
-13
75
Prctica No. 7. Curva de valoracin potenciomtrica
76
2 SERIE DE EJERCICIOS
1.- Completar la tabla, calculando los parmetros que se piden y explicar si esta separacin
componente Tr w K N R
A 21.5 0.96
B 22.1 0.95
C 25.3 0.99
planta son triturados y colocados en un solvente apropiado y aforados a 20 mL, con fase
siguientes resultados
77
2a serie de ejercicios
Por otro lado 5 mL de una muestra de orina que contiene anfetamina se mezclan con 2 mL
del estndar de metanfetamina (6 x10-4 M) aforando a 10mL (Sistema B), se obtienen las
78
2a serie de ejercicios
5.- Explique el tipo de sustancias que pueden ser analizadas en Cromatografia de Gases
flama)
79
ANEXOS
Este instrumento se utiliza para medir la radiacin absorbida por las molculas. Cuando una
onda electromagntica de longitud de onda definida incide sobre una sustancia dada, la
espesor de la muestra. Este instrumento solo posee lmpara para el espectro visible, por lo
la lmpara.
en el primer encendido.
80
ANEXOS
cero.
cerrar la cubierta.
81
ANEXOS
instrumento.
la cubierta.
calibracin o verificando
concentracin desconocida.
82
ANEXOS
CUIDADOS GENERALES
CELDAS
Introducirlas verificando que la marca de stas coincida con la muesca del equipo, para que
No utilizar tubos de ensayo como sustitutos de celda, pues no estn hechos del vidrio
adecuado.
SOLUCIONES
Los valores de absorbancia que presentan un error relativo muy pequeo se encuentran
dentro de 0.2 y 0.8 (63 y 16% T, respectivamente), por lo que debe realizarse procedimiento
LAMPARAS
No trabajar a longitudes de onda mayores a 600nm o menores a 400 estn fuera del alcance
de la lmpara de espectro visible que es la que generalmente tiene este tipo de instrumento,
solo utilizar soluciones coloridas. Para trabajar en regin infrarrojo o ultravioleta, se tiene
83
REFERENCIAS.
Espaa, SA. 4 edicin. Madrid, Espaa. P.p. 451, 452, 476 y 477.
Federacin.
Educacin
84
Referencias
85
Referencias
86
Referencias
87