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1. Introduccin
2. Partes del microscopio y tipos
3. Propiedades de la luz
4. Conceptos bsicos de microscopia ptica
5. Conceptos y frmulas en microscopia
6. Manejo del microscopio ptico y mantenimiento
1.- INTRODUCCION
La luz es un fenmeno complejo que clsico se explica con un modelo simple basado en rayos y frentes
de onda. La cartilla molecular de la microscopia de las expresiones explora muchos de los aspectos de la
luz visible comenzando con una introduccin a la radiacin electromgnetica y la continuacin a travs a
la visin humana y a la opinin del color. . Un grupo de los cientficos, que suscribieron a lateora de la
onda, centr sus discusiones en los descubrimientos del remiendo Christiaan Huygens.
El campo de oposicin cit experimentos del prisma de sir Isaac Newton's como prueba que la luz viaj
como ducha de partculas, cada procedimiento en una lnea recta hasta que fue refractada, absorbida,
reflejada, difractada o disturbada de una cierta otra manera. Cerca de 200 aos ms tarde, los mecnicos
del quntum nacieron de la investigacin de Einstein, Planck, de Broglie, Neils Bohr, Erwin Schrdinger, y
otros que procuraron explicar cmo la radiacin electromgnetica puede exhibir lo que ahora se ha
llamado dualidad , o ambos partcula como y comportamiento ondulado. La luz se comporta
ocasionalmente como partcula, y en otras veces como onda. Este, o dblese, papel complementario del
comportamiento de la luz se puede emplear para describir todas las caractersticas sabidas que se han
observado experimental, extendindose de la refraccin, de la reflexin, de interferencia, y de la
difraccin, a los resultados con la luz polarizada y el efecto fotoelctrico.
Los microscopios son instrumentos diseados para producir imgenes visuales o fotogrficas
magnificadas de objetos pequeos. El microscopio debe lograr tres tareas: produzca
una imagen magnificada del espcimen, separe los detalles en la imagen, y haga los detalles visibles al
ojo o a la cmara fotogrfica humano. Este grupo de instrumentos incluye no solamente diseos de la
mltiple- lente conobjetivos y condensadores, pero tambin los solos dispositivos muy simples de la lente
que son a menudo hand-held, por ejemplo una lupa.
3.4.- POLARIZACION
El ojo humano carece la capacidad de distinguir entre la luz aleatoriamente orientada y polarizada, y la luz
plano-polarizada se puede detectar solamente con un efecto de la intensidad o del color, por ejemplo, por
fulgor reducido al usar los cristales polarizados del sol. En efecto, los seres humanos no pueden distinguir
entre las imgenes verdaderas del alto contraste observadas en un microscopio ligero polarizado y las
imgenes idnticas de los mismos especmenes capturados digital (o en la pelcula), y despus
proyectados sobre una pantalla con la luz que no se polariza.
3.5.- BIRREFRINGENCIA
La birrefringencia se define formalmente como la refraccin doble de la luz en un material transparente,
molecular pedido, que es una manifestacin de la existencia de diferencias orientacin- dependientes en
el ndice de refraccin. Muchos slidos transparentes son pticamente isotrpicos, significando que ndice
de refraccin es igual en todas las direcciones a travs del enrejado cristalino. Los ejemplos de slidos
isotrpicos son sal de cristal, de la tabla, muchos polmeros, y una variedad amplia de compuestos
orgnicos e inorgnicos.
La correccin de un sistema ptico (tal como un microscopio) para la aberracin esfrica es lograda a
menudo utilizando una combinacin de los elementos positivos y negativos de la lente con diverso grueso,
que se cementan juntos para formar un grupo compuesto de la lente . Las aberraciones esfricas son muy
importantes en los trminos de la resolucin de una lente porque afectan la proyeccin de imagen
coincidente de puntos a lo largo del eje ptico y degradan el funcionamiento de la lente, que afectar
seriamente agudeza y claridad del espcimen. Estos defectos de la lente pueden ser reducidos con
frecuencia limitando los bordes externos de la lente de la exposicin a la luz usando diafragmas, y
tambin utilizando la lente esfrica emerge dentro del sistema ptico.
4.2.2.3.- COMA
Similar a la aberracin esfrica en muchos respectos, coma se encuentra con los rayos ligeros del
apagado-eje y es generalmente el ms severo cuando el microscopio est fuera de alineacin apropiada.
La aberracin se nombra para su semejanza fuerte a la forma de una cola del cometa, y es manifestada
por una raya de la luz que aparece emanar de un punto enfocado en la periferia del campo de vision. La
forma distinta exhibida por las imgenes que sufren de la aberracin del coma es el resultado de las
diferencias de la refraccin por los rayos ligeros que pasan con las varias zonas de la lente pues el ngulo
del incidente llega a ser ms oblicuo (apagado-eje). La severidad de la aberracin cromtica es
una funcin de la forma fina de la lente. En extremo, el coma da lugar a los rayos meridionales que pasan
con la periferia de la lente para llegar el plano de imagen ms cercano al eje que los rayos ligeros que
pasan a travs de la porcin central de la lente
4.2.2.4.- ASTIGMATISMO
La aberracin del astigmatismo es similar al coma; sin embargo, este artefacto no est como sensible al
tamao de la abertura y no depende ms fuertemente del ngulo oblicuo del rayo de luz. La aberracin es
manifestada por la imagen del apagado-eje de un punto del espcimen que aparece como una lnea o
elipse en vez de un punto discreto. Dependiendo del ngulo de los rayos ligeros del apagado-eje que
entran en la lente, la imagen de la lnea se puede orientar en de dos diversas direcciones, tangencial (
meridional ) o sagital ( ecuatorial ). El cociente de la intensidad de la imagen de la unidad disminuir, con
la definicin, el detalle, y el contraste siendo perdido como la distancia del centro se aumenta.
Adems, los objetivos acromticos se corrigen para la aberracin esfrica en el verde del tabla. La
correccin limitada de objetivos acromticos puede conducir a los artefactos substanciales cuando los
especmenes son examinados y reflejados con microscopia y fotomicrografa del color.
Si el foco se elige en la regin verde del espectro, las imgenes tendrn un halo rojizo-magenta (a
menudo llamado color residual).Los objetivos acromticos rinden sus mejores resultados con la luz
pasada con un filtro verde (a menudo un filtro de interferencia ) y usar la pelcula negra y blanca cuando
estos objetivos se emplean para la fotomicrografa. La carencia de la correccin para la llanura del campo
(o de la curvatura del campo ) obstaculiza ms lejos objetivos del achromat.
El nivel ms alto siguiente de la correccin y del coste se encuentra en los objetivos llamados las fluoritas
o los semi- apochromats, nombrado para la fluorita mineral, que fue utilizada originalmente en
su construccin. El cuadro representa las tres clases principales de objetivos: Los achromats con la
menos cantidad de correccin, segn lo discutido arriba; las fluoritas (o semi- apochromats) que tienen
correcciones esfricas adicionales; y, los apochromats que son los objetivos lo ms altamente posible
corregidos disponibles
4.3.1.- ABERTURA NUMRICA Y RESOLUCIN
La abertura numrica de un objetivo del microscopio es una medida de su capacidad de recolectar la luz y
de resolver el detalle fino del espcimen en una distancia fija del objeto. Imagen-formando las ondas
ligeras pasan a travs del espcimen e incorporan el objetivo a un cono invertido. Una rebanada
longitudinal de este cono de la luz demuestra la abertura angular, un valor que sea determinado por la
longitud focal del objetivo.
El ngulo ? es una mitad de la abertura angular (a) y se relaciona con la abertura numrica con la
ecuacin siguiente :
Abertura numrica ( NA ) = n(sin m)
Donde est el ndice de refraccin n del medio de la proyeccin de imagen entre la lente delantera del
objetivo y del cristal de la cubierta del espcimen, un valor que se extiende a partir de 1,00 para el aire a
1,51 para la inmersin especializada engrasa. Muchos autores substituyen la variable a ? para ? ? en la
ecuacin numrica de la abertura. De esta ecuacin es obvio que cuando el medio de la proyeccin de
imagen es aire (con un ndice de refraccin, una n = 1,0), despus la abertura numrica es dependiente
solamente sobre el ngulo ?? que valor mximo es el 90.
Examinando la ecuacin numrica de la abertura, es evidente que el ndice de refraccin es el factor
limitador en las aberturas numricas de realizacin mayor de 1,0. Por lo tanto, para obtener aberturas
numricas de un funcionamiento ms alto, el ndice de refraccin del medio entre la lente delantera del
objetivo y el espcimen deben ser aumentados. Los objetivos del microscopio estn disponibles ahora
que permiten proyeccin de imagen en medios alternativos tales como agua (ndice de refraccin =
1,511,33), glicerina (ndice de refraccin = 1,47), y aceite de la inmersin (ndice de refraccin = 1,51).
4.3.2.- FORMACIN DE LA IMAGEN
En el microscopio ptico, cuando la luz de la lmpara del microscopio pasa a travs del condensador y
entonces a travs del espcimen (si se asume que el espcimen es un espcimen absorbente ligero),
algo de la luz pasa alrededor y a travs del espcimen imperturbado en su trayectoria. Tal luz se llama luz
directa o desvio de la luz. Tal luz desviada (a que usted aprender posteriormente, llamada luz difractada)
se rinde una mitad longitud de onda o 180 grados fuera de paso (ms comunmente, fuera de fase). La
longitud de onda fuera de la fase causada por el espcimen s mismo de una mitad permite a esta luz
causar interferencia destructiva con la luz directa cuando ambas llegan el plano de imagen intermedio el
diafragma del ocular. Puesto que nuestros ojos son sensibles a las variaciones en brillo, la imagen
entonces se convierte en reconstitucin ms o menos fiel del espcimen original.
4.3.3.- MEDIOS DE LA INMERSIN
La capacidad de un objetivo del microscopio de capturar rayos ligeros desviados sobre de un espcimen
es dependiente la abertura numrica y el medio con el cual la luz viaja. La abertura numrica se relaciona
con el medio de la proyeccin de imagen con la ecuacin:
Abertura numrica ( NA ) = n(sin m)
El principio de la inmersin del aceite se demuestra en el cuadro 1 donde los rayos ligeros individuales se
remontan a travs del espcimen y pase en el objetivo o se refractan en otras direcciones. El cuadro 1(a)
ilustra el caso de un objetivo seco con cinco rayos (etiquetados 1 a 5) demostrado pasar a travs de una
muestra que se cubre con una tira. Estos rayos se refractan en el interfaz del tira-aire y solamente los dos
rayos ms cercanos al eje ptico (los rayos 1 y 2) del microscopio tienen el ngulo apropiado para entrar
en la lente delantera objetiva. El tercer rayo se refracta en ngulo de cerca de 30 grados a la tira y no
incorpora el objetivo. Los dos rayos pasados (4 y 5) internamente se reflejan detrs a travs de la tira y,
junto con el tercer rayo, contribuyen a las reflexiones internas de la luz en las superficies de cristal que
tienden degradan la resolucin de la imagen.
Cuando el aire es substituido por el aceite del mismo ndice de refraccin que el cristal, demostrado en el
cuadro 1(b), los rayos ligeros ahora pasa derecho a travs del interfaz del cristal-aceite sin la desviacin
debido a la refraccin. La abertura numrica es aumentada as en el factor de n , el ndice de refraccin
del aceite.
La resolucin de un microscopio ptico se define como la distancia ms corta entre dos puntos en un
espcimen que se pueda todava distinguir por el observador o el sistema de la cmara fotogrfica como
entidades separadas. La resolucin es un valor algo subjetivo en microscopia ptica porque en la alta
ampliacin, una imagen se puede aparecer unsharp pero todava resolver a la capacidad mxima
delobjetivo. La abertura numrica determina la energa de resolucin de un objetivo, pero la resolucin
total del tren ptico del microscopio entero es tambin dependiente sobre la abertura numrica del
condensador del substage. Cuanto ms alta es la abertura numrica del sistema total, mejor es la
resolucin.
5.4.- CAMPO VISUAL
El dimetro del campo en un microscopio ptico es expresado por el nmero del campo visual , o
simplemente el nmero del campo, que es el dimetro del campo de la visin en los milmetros medidos
en el plano de imagen intermedio. En la mayora de los casos, el dimetro de la abertura del diafragma
del campo del ocular determina el tamao de campo de la visin. El tamao de campo en el plano del
espcimen entonces se define como el nmero del campo dividido por la ampliacin del objetivo :
Ampliacin objetiva del del tamao de campo = del nmero del campo
(fn) (M o)
Si una lente auxiliar se inserta entre el objetivo y el ocular, el factor de la ampliacin de esta lente se debe
tambin emplear en la ecuacin por la multiplicacin con la ampliacin objetiva (antes de la operacin de
la divisin). Aunque el nmero del campo es limitado generalmente por el tamao del diafragma de la
ampliacin y del campo (parada) del ocular, hay claramente un lmite que tambin es impuestopor
el diseo del sistema objetivo de la lente.