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PROYECTO DE MICROBIOLOGA
TERCER NIVEL A
NOMBRES:
CARLOS TRUJILLO
KATHERINE TUFIO
TUTOR:
DR. CARLOS EDUARDO CHIRIBOGA NOVILLO MSc.
El agroqumico fungicida que tuvo una mejor reaccin ante dicho hongo es el defender
(Sulfato de Cobre Pentahidratado) que lo tenamos marcado como el nmero uno,
mientras que el Novak (Tiofanato Metil) tuvo una menor reaccin contra el que estaba
marcado con el nmero tres.
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INTRODUCCIN
El babaco, aporta nutrientes beneficiosos para mantener una buena salud. Se pueden
consumir en dulces, jugos, mermeladas, licores, pulpas o en fresco. Estas cuatro
variedades de frutas se cultivan en la Costa, Sierra y Oriente. Los rboles se adaptan
fcilmente a los suelos situados entre los 1 600 y 3 200 metros de altitud. Pertenecen a
la familia de las caricceas. Es decir, son plantas con hojas grandes y con produccin
abundante. El tallo tiene una estructura carnosa. El babaco tiene la forma de un
pentgono y es alargado. Alcanza entre 30 y 40 centmetros de largo y cuando est
maduro se tie con un color amarillo claro. La cscara es fina y delicada. En el Ecuador
hay 180 hectreas sembradas con esta fruta bajo invernadero y a cielo abierto, segn
Jorge Fabara, tcnico frutcola. Tungurahua ocupa el primer lugar con el 60% de la
produccin nacional.
El Fusarium oxysporum es un hongo saprofito que vive en el suelo, pero existen muchas
formas especiales (algo as como variedades) de este hongo capaces de infectar a
muchas especies de plantas comportndose como patgenos vasculares (eso s, al menos
cada una es muy especfica de unas pocas plantas) Forman tres tipos de esporas (que
son las semillas de los hongos), uno capaz de resistir hasta 40 aos en el suelo, otro
capaz de dispersarse por el interior de la planta, y otro capaz de hacerlo por el aire. El
hongo siempre penetra por la raz, movindose por la planta hasta alcanzar el xilema.
Una vez all, el micelio (as es como se llama al tallo de los hongos) se desarrolla
hasta taponar el flujo de savia. El resultado siempre es el marchitamiento de hoja,
amarilleo y eventualmente necrosis y muerte total de la planta.
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PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
La problemtica del cultivo del babaco gira entorno a los limitantes en la produccin
relacionados con la forma de reproduccin del cultivo y el impacto de enfermedades
fungosas. El babaco se reproduce de forma asexual lo que adems de causar problemas
de prdida de variabilidad gentica, est directamente relacionado con el desarrollo de
enfermedades causadas por patgenos, especialmente hongos.
La fusariosis conocida tambin como la pudricin de las races, debido a que por ah
inicia su ataque causando el marchitamiento de la planta; presenta sntomas muy
similares a la muerte descendente. Ocasiona la destruccin del sistema radical del
babaco.
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JUSTIFICACIN
Las familias que poseen casas con reas verdes, muchas veces optan por sembrar
plantas ornamentales y tambin algunos rboles frutales, hortalizas, hierbas medicinales
o especias, tales como: limn, babaco, tomate de rbol, coliflor, papa, perejil, cebolla,
cedrn, hierba buena, manzanilla, etc. Estos productos son cultivados dentro de hogar
para ahorrar tiempo y dinero en viajes al mercado o tienda de barrio, adems se
aseguran que son productos de buena calidad. El mantenimiento que los dueos es dan a
estas pantas se basan en conocimientos empricos trasmitidos verbalmente por
generaciones pasadas.
Muchas de estas plantas caseras no producen o mueren en pocos meses, a causa de las
plagas que las atacan.
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HIPTESIS
Cul es el mejor agroqumico fungicida para el control del hongo Fusarium oxysporum
del babaco?
El mejor agroqumico fungicida para el control del hongo Fusarium oxysporum del
babaco, es un agroqumico fungisttico.
OBJETIVOS
GENERAL
Determinar el efecto de 3 agroqumicos fungicidas en el control del
hongo Fusarium oxysporum del babaco casero.
ESPECIFICOS
i. Determinar el efecto del agroqumico Clorotalonil, suspensin
concentrada de 720 g/l en Fusarium oxysporum del babaco casero
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REVISION DE LITERATURA
El babaco
Es una planta arbustiva, de crecimiento rpido y vida corta, que no se ramifica y puede
alcanzar 5 a 8 m de altura. Su fruto se distingue de la papaya por ser ms angosto
(menos de 10 cm de dimetro). Se lo cultiva por su fruto comestible. El tronco es recto,
cilndrico, no leoso, verde cuando joven de tono castao grisceo en edad adulta, sus
hojas insertadas al tronco estn alternadamente, limbo lobulado con cinco a siete
lbulos; nervadura marcada, pecolo largo. Su verde cambia de tonalidades, segn la
fase de desarrollo. Las flores aparecen de manera continua en las axilas de las hojas,
femeninas de forma acampanada, solitarias, de ptalos blanco-amarillento-verdoso y
spalos verde-oscuros. El fruto es una baya sin semilla, no necesita polinizacin para
desarrollarse, de forma alargada de unos 20 centmetros de largo por 5 o 6 centmetros
de ancho. En una misma planta pueden encontrarse frutos de diferentes tamaos. Cada
planta puede producir anualmente 25 a 30 frutos. (Infojardn, 2008)
Posee un sistema radicular conformado por races carnosas verticales de las cuales se
desprenden pelos absorbentes superficiales y delicadas encargadas de la absorcin de
nutrientes. EI sistema radicular del babaco es susceptible a labores de remocin del
suelo posterior a su plantacin, ya que es un hibrido y su reproduccin es mediante va
asexual o vegetativa, debido a que posee fruto partenocarpico, en otras palabras no
posee semillas. (Fabara, 1985)
Clasificacin cientfica
Reino: Plantae
Divisin: Magnoliophyta
Clase: Magnoliopsida
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Orden: Brassicales
Familia: Caricaceae
Gnero: Carica
Especie: C. pentagona (Fabara, 1985)
TEMPERATURA
La temperatura promedio adecuada para el desarrollo de este cultivo, est entre los 14 y
27 C. Se presentan desrdenes fisiolgicos si las temperaturas son exageradamente
bajas o altas 5 o 35C respectivamente, causando, cada de flores, frutos y tambin
deficiencias nutricionales.
HUMEDAD
La humedad ambiental ms recomendada para el desarrollo del cultivo esta dentro del
rango del 70 al 80 % el mismo que puede ser controlado en los invernaderos, mediante
una adecuada ventilacin. Caso contrario se presentarn enfermedades como el OIDIO
o CENICILIA y plagas como la ARAITA ROJA, cuando la humedad relativa alcanza
niveles bajos (60 % o menos por ms de 8 das).
LUMINOSIDAD
Este cultivo no es muy exigente en horas luz, pero si necesita un mnimo de 4.5 horas
luz por da.
RIEGOS
EI riego del cultivo de babaco bajo invernadero, necesita riegos espaciados cada 12 o 15
das de acuerdo con el clima y las condiciones texturales del suelo.
La recomendacin para suelos francos es: iniciar regando 5 litros por planta cada 12
das para terminar con alrededor de 20 litros por planta cada 12 das.
En suelos franco arenosos es recomendable realizar riegos cada 8 das en las cantidades
anteriormente indicadas.
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Para riego por goteo se recomienda iniciar el riego de 1 Litro por planta da para luego
avanzar a 3 Litros por planta da, colocando siempre dos goteros por planta alejados
mnimo 30 cm del tallo de la planta.
SUELOS
La textura ideal del suelo es la franca o franca arenosa arcillosa, ricos en materia
orgnica, alrededor del 5%. Se adapta tambin a suelos limosos de fcil drenaje.
Se debe tener especial cuidado con el exceso de agua en el suelo para evitar pudriciones
radiculares.
PROPAGACION
PLAGAS
Se consideraba plaga a cualquier animal que produce daos a los cultivos. (Wikipedia,
2014)
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ENFERMEDADES
Enfermedades de las plantas son las respuestas de las clulas y tejidos vegetales a los
microorganismos patognicos carolains o a factores ambientales que determinan un
cambio adverso en la forma, funcin o integridad de la planta y puedan conducir a una
incapacidad parcial o a la muerte de la planta o de sus partes. (Wikipedia, 2014)
Las enfermedades que se presentan en las plantas de babaco las ms comunes son
- Alternariosis (Alternariasp.)
- Fusariosis (Phytophthora sp., Pythium sp., Rhizoctonia sp., y Fusarium sp.)
- Oidio (Oidiumsp.)
- Peca del Babaco (Asperosporumcaricae)
- Antracnosis (Mycosphaerella sp.)
- Foma (Phoma sp.)
- Tumor del cuello (Agrobacterium sp.)
- Pudricin radicular (Erwinia carotovora)
- Virus del mosaico
- Virus rugoso (Fabara, 1985)
Fusariosis
Esta enfermedad est causada por el hongo Fusarium oxysporum que produce un
marchitamiento general de la planta o tambin llamada la seca de la planta, debido a
la trombosis de los vasos. Ataca en todos los estados de crecimiento y en caso de
producirse en semillero, acaba con la muerte de la plntula.
Se trata de hongos del suelo que pueden actuar como parsito, al desarrollarse sobre
plantas vivas, y como saprfito, pues sobreviven sobre restos de cultivos y materia
orgnica en descomposicin. Produce estructuras resistentes que se mantienen en el
terreno durante muchos aos. Puede afectar tambin a las semillas, lo que supone una
va de transmisin junto con el suelo y el agua de riego. Como en todas las
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enfermedades, para que se produzca se necesita un nmero de plantas suficientes, buena
dispersin de las esporas y condiciones favorables de temperatura y humedad.
Las toxinas tambin pueden ser llevadas hacia las hojas, en las que hacen que disminuya
la sntesis de clorofila ocasionando el aclaramiento de la hoja as como la habilidad para
controlar la prdida de agua por la transpiracin; consecuentemente se produce
epinastia, marchitamiento, necrosis intervenla, empardecimiento y muerte de hojas
(Granada, 2001).
Fusarium puede diseminarse en el suelo, en menor grado por formacin de micelio que
se desarrollan races o restos de plantas. La principal forma de propagacin son las
esporas y esclerocios llevados por el agua, herramientas agrcolas, material vegetal de
propagacin y en algunos casos por el viento (Agrios, 1995).
Susceptibilidad
Todo organismo para poder sobrevivir requiere de sustancias nutritivas las mismas que
las pueden adquirir de diferente forma de acuerdo al medio en donde se ha adaptado.
As como se seal anteriormente Fusarium puede extraer nutrientes a partir de material
vegetativo en descomposicin (saprofitismo) o parasitando a organismos vivos como las
plantas siendo esta forma la ms comn de ingerir sus nutrientes (Badillo, 1993)
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Fusarium ya en el interior del hospedero provoca la degradacin de la pared celular por
la accin de enzimas que actan sobre sus componentes como la celulosa y la pectina
que son fuente de alimento para el hongo lo que le permite crecer y reproducirse dentro
de los vasos de xilema invadidos produciendo desorganizacin de los tejidos (Granada,
2001)
Fusarium oxysporum produce algunas enzimas que actan sobre la pectina y celulosa de
las paredes celulares. Las enzimas producidas por el hongo afectan a los tejidos en
varias formas y son capaces de degradar componentes estructurales de la pared celular,
adems interfieren con los sistemas funcionales (Vasquez, 1992)
Numerosos roles pueden ser propuestos para las enzimas que degradan a las paredes
celulares e inducen los sntomas. Enzimas hidrolticas juegan un rol decisivo que
permite la distribucin sistemtica de patgeno por debilitamiento de los geles
vasculares que normalmente contribuyen la localizacin de infecciones. Siguiendo la
infeccin sistmica, estas degradan geles pudiendo tambin contribuir a la difusin
vascular y estrs hdrico (Agrios, 1995)
Entre las principales toxinas que produce Fusarium oxysporum esta Lycomarasin y el
cido fusrico, las cuales estn involucradas en la Marchitez Vascular. Las toxinas son
capaces de producir varias alteraciones en las plantas como el incremento de la
respiracin, alteracin de metabolismo del fenol, activacin de la polifenoloxidasa,
incremento de la actividad de los reguladores del crecimiento, disminucin de la tasa
fotosinttica, perdida de agua a travs de la transpiracin (Agrios, 1995).
Tolerancia
Un hospedante muestra tolerancia cuando restringe el dao de la infeccin producida
por el patgeno. Sin embargo, la tolerancia no restringe el contacto del patgeno ni el
crecimiento y reproduccin del parasito despus su establecimiento. Por lo tanto, la
tolerancia no afecta la cantidad de infeccin. La tolerancia reduce la cantidad de dao o
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sntomas por unidad de parasito presente. La presencia de un parasito sobre una planta
tolerante conlleva a menos dao (expresado como menor reduccin en el rendimiento) o
permite sntomas ms ligeros que en una planta sensible (Granada, 2001).
Resistencia
Es la capacidad de la planta para reducir el crecimiento y desarrollo del patgeno
despus de que se ha iniciado o establecido el contacto (Wikipedia, 2014).
Una planta puede ser inmune a un patgeno, es decir no es atacada por el patgeno aun
en las condiciones ms favorables para este, o mostrar grados de resistencia, que van
casi desde la inmunidad hasta completa susceptibilidad. La resistencia puede estar
condicionada por varios factores internos y externos que influyen para reducir la
probabilidad y el grado de infeccin (Agrios, 1995).
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Mecanismos de defensa de las plantas
Las plantas tienen dos formas de defenderse ante la presencia de agentes extraos como
son los patgenos, puede ser con formacin de estructuras actuando como barreras
fsicas que impidan la penetracin del patgeno hacia otros tejidos o por reacciones
bioqumicas que tienen lugar en clulas y tejidos, las cuales producen sustancias toxicas
para el patgeno o crean condiciones que inhiben sus desarrollo (Agrios, 1995).
La resistencia a Fusarium oxysporum puede ser alcanzada por mecanismos que operan
durante el estado pre vascular de patognesis, en el estado vascular o ambos. Los
mecanismos incluyen la formaciones una papila, engrosamiento celular de paredes y
rpida diferenciacin de la endodermis, siendo estos algunos de los mecanismos ms
importantes en la limitacin de la invasin de Fusarium oxysporum. La produccin
barreras fsicas impenetrables que impiden la expansin del hongo arriba y/o la
acumulacin de compuestos que afectan el crecimiento reproduccin del hongo y su
posterior diseminacin (Vasquez, 1992)
Barreras fsicas
Formacin de geles
Los geles y gomas son compuestos de carbohidratos, protenas y pectinas, que se
depositan con gran rapidez en los espacios intercelulares y dentro de las clulas que
rodean la lesin (Agrios, 1995).
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Formacin de calosa
Est relacionada qumicamente con la celulosa es un polisacrido formado por
glucosa, cuya funcin principal es reparar el dao celular, sin embargo parece
evitar que el patgeno entre en la clula (Agrios, 1995).
Formacin de tilosa
Son excreciones de las clulas parenquimatosas, se forman en los vasos del
xilema en plantas que se encuentran bajo condiciones ambientales adversas y
durante la invasin que llevan a cabo la mayora de los patgenos vasculares
(Agrios, 1995).
Barreras qumicas
Exudados
Son exudados de las races tienen una influencia directa sobre la rizosfera
reduciendo el grado de infeccin, lo que impedir la penetracin del patgeno
vascular, por lo que la resistencia se puede deber a que estos exudados podran
afectar la germinacin de las esporas de diferentes razas fisiolgicas).
Fitoalexinas
Los fenoles relacionados con la resistencia a las enfermedades aumentan una vez
producida la infeccin, cuando la produccin de fenoles es estimulada por un
patgeno se conoce como fitoalexina (Agrios, 1995). Estas sustancias son
especificas del hospedante, pero no del patgeno, son sustancias toxicas
producidas por las clulas sanas alrededor del lugar de penetracin o heridas,
adyacentes a la clulas necrticas o daadas (Granada, 2001)
Clorotalonil
Identificacin:
Ingrediente activo
Ftalonitrilo, aromtico policlorado derivado del cido cloroisoftlico con actividad
fungicida, de amplio espectro, de aplicacin foliar, no sistmico, con limitada capacidad
de traslocacin local, actividad por contacto y accin preventiva y erradicativa sobre
numerosas enfermedades de origen fngico. Inhibe la respiracin de las clulas del
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hongo, es decir, la transformacin de los hidratos de carbono en energa porque las
molculas de clorotalonil se unen a grupos sulfhidrilos de algunos aminocidos. Las
enzimas que afectan al ciclo de Krebs se desactivan y no se produce ATP
(adenosintrifosfato). Al no poder completar este proceso la clula muere. Se considera
que el clorotalonil acta como un fungitxico no especfico, de accin rpida, pertenece
al grupo de inhibidores multisitio. Los sntomas generales de su accin sobre las clulas
fngicas son el retraso del crecimiento del micelio y la inhibicin de la germinacin de
las esporas. El no ser especfico explica, en gran parte, su amplio espectro de accin y la
no aparicin de resistencias genticas. Tambin posee efecto cicatrizante sobre las
lesiones producidas por los patgenos sensibles observndose una piel ms tersa y una
recuperacin ms rpida de los tejidos daados.
El sulfato de cobre (II), tambin llamado sulfato cprico (CuS4), vitriolo azul, piedra
azul, caparrosa azul, vitriolo romano o calcantita es un compuesto qumico derivado del
cobre que forma cristales azules, solubles en agua y metanol y ligeramente solubles en
alcohol y glicerina. Su forma anhdrida (CuS4) es un polvo verde o gris-blanco plido,
mientras que la forma hidratada (CuS4 52 O) es azul brillante. (Murciasalud, 2008)
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Otros nombres: Sulfato de cobre (II), Sulfato cprico, Caparrosa azul, Piedra
azul, Piedra lipe, Calcantita, Vitriolo azul, Vitriolo romano
Frmula semidesarrollada CuSO4
Propiedades fsicas
Estado de agregacin Slido
Apariencia Pentahidratado: Cristales azules
Anhidro: Polvo blanco grisceo
Densidad 3603 kg/m3; 3,603 g/cm3
Masa molar 159,6 g/mol
Estructura cristalina triclnico (Terralia, 2014)
Tiofanato Metil
MATERIALES Y METODOS
Ubicacin del lugar de investigacin
Ubicacin poltica
El rea donde se realiz la investigacin se encuentra ubicada en la provincia de
Pichincha, Cantn Rumiahui, Parroquia San Fernando, Hacienda El Prado (IASA I).
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Ubicacin geogrfica
Altitud de 2,748 msnm
Latitud de 0 23' 20'' S
Longitud de 70 24' 44'' W
Material Cantidad
Cajas Petri 4
Gradilla 1
Tubos de ensayo 2
Vaso de precipitacin 1
Mechero 1
Matraz 1
Pinza 1
Balanza 1
Asa de platino 1
Frasco erlenmeyer 1
Sensidiscos 3
Bolsa hermtica 2
Parafilm 150cm2 (5x15)
Equipo Cantidad
Cmara de flujo laminar 1
Autoclave 1
Incubadora 1
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Cuadro Descripcin de Reactivos de Laboratorio
Reactivo Cantidad
Agar Papa Dextrosa 20g
Agua destilada 4 ml
Clorotalonil 2 ml
Tiofanatometil 2 ml
Sulfato de cobre 2 ml
Mtodo:
1. Tomar muestras de la hoja de planta de babaco que presenten sntomas de
amarillamiento por Fusarium
2. Colocar la muestra, previamente humedecida dentro de una bolsa, con cierre
hermtico, y adherir a sta el rtulo que corresponda
Preparacin del medio de cultivo PDA:
Las siglas PDA corresponden a los componentes del medio: papa, dextrosa y agar.
Este medio se usa para aislar ste y otros patgenos.
Preparacin:
1. Se pesan los ingredientes, se colocan en un recipiente grande, que puede ser un
vaso de precipitado, y se les agrega el agua; esta solucin se envasa en 1 frasco
erlenmeyer (500 ml).
2. Los frascos erlenmeyer con el medio de cultivo PDA se esterilizan en autoclave.
Esta mquina, con una presin de 20 libras y una temperatura de 121 C, realiza
el proceso total de esterilizacin en 40 minutos aproximadamente.
3. El medio esterilizado se deja enfriar hasta que pueda manipularse, y se vierte
luego en cajas petri, a razn de 20 ml por caja C. Aislamientos de F. oxysporum
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Nota: Todos los procedimientos se deben ejecutar dentro de la cmara de flujo laminar;
adems, deben cumplirse todas las condiciones de asepsia y esterilidad que se exigen en
un laboratorio. En otras palabras, se aplican siempre las buenas prcticas
microbiolgicas (BPM).
Pasos del proceso
1. Cortar varios trozos del tejido enfermo utilizando una tijera estril.
2. Pinza estril y sembrarlos en una caja petri que contenga el medio de cultivo
PDA. Hacer lo mismo con las dems cajas (para multiplicar las muestras).
3. Se infect la muestra y se tuvo que purificar el hongo Fusarium oxysporum,
consisti en pasar una pequea porcin del micelio desarrollado sobre las
secciones de tejido vegetal de cada muestra a cajas Petri que contena medio
PDA al 100% hasta obtener cultivos puros.
4. Incubar las cajas a 28 C durante 3-5 das, tiempo en que el hongo producir
masas de conidios y micelio.
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ANALISIS DE RESULTADOS
Tabla N1. Dimetro del halo de inhibicin de crecimiento del hongo Fusarium
21
CONCLUSIONES
1. Realizando un anlisis comparativo entre los resultados de los tres
agroqumicos se ha llegado a la conclusin que el Sulfato de Cobre
Pentahidratado, ha sido el qumico ms efectivo frente al hongo, ya que
ha presentado un mayor dimetro en el halo de inhibicin siendo este de
4 mm en comparacin con Clorotalonil y Tiofanato Metil que tuvieron
un halo de inhibicin de 3.5 mm y 0.5 mm respectivamente.
RECOMNEDACIONES
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BIBLIOGRAFIA
Agrios, G. (1995). Fitopatologa. En G. Agrios, Fitopatologa (pg. Mxico). Limusa.
Granada, E. O. (2001). Furarium oxyporum El hongo que nos faltaba conocer. Acta
biolgica Colombiana, 7-24.
23
ANEXOS
Caja Petri con muestra impura 1 Caja Petri con muestra impura 2
24
Caja petri con muestra purificada 1 Caja petri con muestra purificada 2
Agroqumicos Funguicidas
Incubadora
Mechero y Sensidiscos
25
2
3
1 6
3
3
Agroqumicos Utilizados
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Contenido
1. RESUMEN .................................................................................................................................. 2
2. INTRODUCCIN ......................................................................................................................... 3
3. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ............................................................................................ 4
4. JUSTIFICACIN .......................................................................................................................... 5
5. HIPTESIS .................................................................................................................................. 6
6. OBJETIVOS ................................................................................................................................. 6
7. REVISION DE LITERATURA ......................................................................................................... 7
7.1 El babaco ............................................................................................................................. 7
7.2 Clasificacin cientfica ......................................................................................................... 7
7.3 CONDICIONES AMBIENTALES DE CULTIVO ......................................................................... 8
7.3.1 TEMPERATURA ............................................................................................................. 8
7.3.2 HUMEDAD .................................................................................................................... 8
7.3.3 LUMINOSIDAD .............................................................................................................. 8
7.3.4 RIEGOS.......................................................................................................................... 8
7.3.5 SUELOS ......................................................................................................................... 9
7.3.6 PROPAGACION ............................................................................................................. 9
7.4 PLAGAS ................................................................................................................................ 9
7.5 ENFERMEDADES ................................................................................................................ 10
7.5.1 Fusariosis .................................................................................................................... 10
7.6 Susceptibilidad, tolerancia y resistencia ........................................................................... 11
7.6.1 Susceptibilidad ........................................................................................................... 11
7.6.2 Produccin de enzimas y toxinas del patgeno. ........................................................ 12
7.6.3 Tolerancia ................................................................................................................... 12
7.6.4 Resistencia.................................................................................................................. 13
7.7 Mecanismos de defensa de las plantas............................................................................. 14
7.7.1 Barreras fsicas ........................................................................................................... 14
7.7.2 Formacin de geles .................................................................................................... 14
7.7.3 Barreras qumicas ....................................................................................................... 15
7.8 Clorotalonil ........................................................................................................................ 15
7.8.1 Identificacin .............................................................................................................. 15
7.8.2 Ingrediente activo ...................................................................................................... 15
7.9 Sulfato de cobre Pentahidratado ...................................................................................... 16
7.10 Tiofanato Metil ................................................................................................................ 17
8. MATERIALES Y METODOS........................................................................................................ 17
9. ANALISIS DE RESULTADOS ....................................................................................................... 21
27
10. CONCLUSIONES ..................................................................................................................... 22
11. RECOMNEDACIONES ............................................................................................................. 22
12. BIBLIOGRAFIA ........................................................................................................................ 23
13. ANEXOS ................................................................................................................................. 24
28