CULTIVO DE CELULAS EN SUSPENSIN

El cultivo de clulas en suspensin consiste en un conjunto de clulas aisladas, as como

de pequeos racimos celulares distribuidos en un medio de cultivo lquido en constante
movimiento. Este sistema es un poderoso implemento para llevar a cabo tanto estudios
sobre embriognesis, crecimiento y diferenciacin, organognesis, ciclo celular, gentica,
nutricin, bioqumica y metabolismo, as como la obtencin de diversos productos
secundarios.
En 1954 W. H. Muir, Hilderbrandt y Riker transfirieron fragmentos de tejido de callo a medio
lquido en agitacin y obtuvieron un contenido de clulas aisladas y pequeas mamas
celulares.
ESTABLCIMIENTO Y DESARROLLO DE CULTIVO
El establecimiento de un cultivo de clulas en suspensin puede lograrse directamente a
partir de un inculo (mesfilo de hoja, fragmento de cotiledn, etc.) o bien transfiriendo un
fragmento de callo al medio lquido, el cual se mantiene en agitacin durante el periodo de
cultivo.
El cultivo a partir de un inculo requiere, en comparacin con el de callo, de un periodo
mayor para inicia la suspensin de las clulas. Al dividirse las clulas se liberan del inculo
debido a la accin de la agitacin del medio lquido y posteriormente el cultivo estar
compuesto por clulas aisladas, masas celulares de diversos tamaos, fragmentos
residuales de inculo.
El cultivo a partir de un fragmento de callo es ms rpido, aunque depende de la friabilidad
que del tejido calloso que se refiere a la capacidad de separacin de las clulas es decir
que estas se disgreguen fcilmente despus de una divisin celular. Aun cuando el callo
presente una alta friabilidad, el cultivo en suspensin se establece despus de un periodo
de adaptacin en el medio lquido para dar lugar a un cultivo apropiado, donde se forma
una suspensin de clulas asiladas y masas celulares que consisten, desde unas cuantas
clulas hasta cientos de ellas.
La composicin del medio de cultivo lquido y el constante movimiento del medio mediante
agitacin o burbujeo, son factores que influyen en el grado de dispersin de las clulas de
tejido.
La capacidad de separacin o friabilidad de las clulas en un cultivo de suspensin se
puede promover con una mayor concentracin de auxina que de citocinina, vitaminas e
incorporacin de enzimas degradantes de la pared celular (como macerozima).

EVALUCIN DEL CRECIMIENTO DE CLULAS EN SUSPENSIN

Al iniciarse un cultivo en suspensin el comportamiento que presenta las clulas en
crecimiento es tpicamente sigmoide.
Presenta las siguientes fases: Reposo, Exponencial, Lineal, Disminucin progresiva,
Estacionaria
En el reposo, el inculo no presenta ninguna seal de divisin celular, ya que solo se est
adaptando a las nuevas condiciones nutricionales. En las fases exponencial y lineal se
incrementa la velocidad de la divisin celular, mientras que en la velocidad de divisin va
disminuyendo gradualmente hasta dar inicio a la fase estacionaria que sera cuando se
hayan agotado los nutrientes. Durante esta fase las clulas han alcanzado su mxima
densidad celular permaneciendo viables, pero sin divisin.
MORFOLOGA DE LAS CLULAS EN SUSPENSIN
Son heterogneos, con clulas aisladas y pequeos agregados celulares. La proporcin
entre ambos, as como tamao, depende de la especie vegetal de la cual se ha derivado el
cultivo, de la edad del cultivo, de la composicin del medio y de las condiciones ambientales.
La duplicacin de las clulas en suspensin se alcanza entre 20 y 60 horas, por lo que el
riesgo de alteraciones genticas es potencialmente mayor en un cultivo de clulas en
suspensin que un cultivo de callos, pudindose originar euploidias o aneuploidas en el
material cromosmico de las clulas. Las clulas en suspensin pueden inducirse para la
formacin de embriones, por lo que pueden producir plntulas.
SISTEMAS DE CULTIVO PARA CLUAS EN SUSPESIN
El diseo de los recipientes y sistemas para cultivar las clulas vegetales en suspensin se
bas en los recipientes de fermentacin, usados para el crecimiento de macroorganismos.
Se puede realizar en sistemas cerrados o abiertos; el sistema es cerrado cuando algn
componente del cultivo no puede entrar ni salir y el material celular crece en un volumen
fijo de medio de cultivo en agitacin, lo cual sirve para mantener la distribucin de las clulas
individuales y de las masas celulares. La cantidad de material celular durante la incubacin
aumenta por un tiempo limitado, alcanzando el punto mximo de produccin; en este punto
cesa el crecimiento debido al agotamiento del medio de cultivo o algn otro factor.
En 1952 Steward, Caplin y Millar fueron los primeros en descubrir un aparato para el cultivo
de clulas suspendidas: los recipientes de cultivo constan de tubos similares a los de
ensayo con una abertura en la porcin media lateral del tubo. Estos recipientes se colocan
en un disco que gira verticalmente.
Los sistemas abiertos tienen la caracterstica de que la renovacin del medio de cultivo y la
toma de muestras del material celular se realiza sin interrumpir el cultivo.
Existen dos tipos de sistemas abiertos: lo semicontinuos y los cultivos continuos.
Los sistemas semicontinuos son, en esencia, cultivos masivos en los cuales el volumen del
medio de cultivo se renueva con medio freso en un determinado intervalo de tiempo.
Los sistemas continuos, consta de un recipiente de cultivo dentro del cual se bombea un
fluido constante del medio nutritivo, causando el desplazamiento de un volumen igual al del
cultivo (medio nutritivo ms clulas). La propiedad ms importante de este cultivo es que la
velocidad de crecimiento puede ajustarse. Por tanto, se producen clulas nuevas a una
velocidad, la cual se compensa exactamente por aquellas que han sido eliminadas. Esto
cultivos pueden usarse para estabilizar los estados fisiolgicos de las clulas.