93g-1.inhibición de La Carga Microbiana en La Lechuga Con Peróxido de Hidrógeno

INHIBICIN DE LA CARGA
MICROBIANA EN LA LECHUGA
(LACTUCA SATIVA) CON EL
PERXIDO DE HIDRGENO
(H2O2)
Alumnos: Facultad:
Alejos Gallo Mariana Facultad de Ingenier a
1326120199 Qu mica
Chavarra Crdova Oliver Grupo Horario:
1326120314
Cabrera Fernndez, Aldo 02-Q
Leonardo
1326120412 Profesora:
Meza Silva Pedro Abel Ing. Mg. Sonia Elizabeth
1326130045 Herrera Sanchez
Ao y Semestre:
Curso: 2016-I
Microbiolog a
Fecha:
Grupo Horario: 01 06 2016
93-G
Universidad Nacional del Callao
2
Facultad de Ingeniera Qumica
I. RESUMEN
Los procesos de esterilizacin y/o desinfeccin son diariamente llevados a cabo,

no solamente en el laboratorio, donde son fundamentales para evitar la
contaminacin de medios, cultivos, placas etc., sino tambin en otros mbitos
tales como los hospitales, mercados y el hogar.
El objetivo de esta investigacin fue evaluar el efecto anti microbiano de la

aplicacin de Perxido de Hidrgeno (2 2) en las hortalizas; nuestra
investigacin se bas exclusivamente en la Lechuga (Lactuca sativa) contra
distintos tipos de bacterias, especficamente en las bacterias patgenas
Staphylococcus aureus (ATC 6538) y la Escherichia coli (ATCC51 813).
Para el desarrollo de la parte experimental se tom como punto de muestreo el

puesto de un mercado de verduras realizando un estudio sin tratamiento para
verificar cuanta carga microbiana presenta antes de agregar el desinfectante y
para comprobar la efectividad de desinfeccin del Perxido de Hidrogeno (2 2),
realizamos 3 estudios diferentes al 1% v/v, 3% v/v y 5% v/v para cada
microorganismo patgeno en un tiempo determinado.
Los resultados obtenidos fueron muy notorios y fue logrado con xito, obteniendo
resultados positivos y dando a conocer el poder de desinfeccin del Perxido de
Hidrgeno que es muy alto, combatiendo a los microorganismos patgenos:
Staphylococcus aureus y Escherichia coli
En conclusin a esta investigacin, se confirma que el tratamiento de las hortalizas

con el Perxido de Hidrgeno es prcticamente eficaz y su tratamiento puede
evitar futuras enfermedades, tanto individuales como colectivas en la poblacin
peruana.
Laboratorio de Microbiologa Inhibicin de la carga microbiana con

perxido de hidrgeno
3
II. OBJETIVOS
1. Determinar qu tan efectivo el mtodo de desinfeccin con el perxido

de hidrogeno (H2O2) con nuestra muestra de hortalizas (lechuga).
2. Poder determinar la reduccin de la carga microbiana (E. Coli y

Salmonella) de la muestra hasta un nivel de que sea menos daino y
ms apto para el consumo humano.
3. Tener una comparacin del nivel de conservacin de la muestra a

diferentes concentraciones en este caso de 1%, 3% y 5%.

perxido de hidrgeno
4
III. MARCO TERICO
ESTERILIZACION
Es el proceso mediante el cual se alcanza la muerte de todas las formas de vida

microbianas, incluyendo bacterias y sus formas esporuladas altamente resistentes,
hongos y sus esporos, y virus. Se entiende por muerte, la prdida irreversible de la
capacidad reproductiva del microorganismo. Se trata de un trmino absoluto,
donde un objeto est estril o no lo est, sin rangos intermedios.
ANTISEPSIA
Es el proceso que por su baja toxicidad, se utiliza para la destruccin de

microorganismos presentes sobre la superficie cutneo-mucosa. Este trmino
tampoco implica la destruccin de todas las formas de vida. Existen agentes como
los alcoholes que son antispticos y desinfectantes a la vez. Dado que el tema que
se est abordando es: mtodos para controlar o destruir distintas poblaciones
bacterianas; es necesario saber previamente la cintica de dicha destruccin, es
decir, de qu modo muere una poblacin, y que parmetros inciden sobre este
efecto.
DESINFECCION
En este proceso se eliminan los agentes patgenos reconocidos, pero no

necesariamente todas las formas de vida microbianas. Es un trmino relativo,
donde existen diversos niveles de desinfeccin, desde una esterilizacin qumica,
a una mnima reduccin del nmero de microorganismos contaminantes. Estos
procedimientos se aplican nicamente a objetos inanimados.
1. NIVEL DE LOS DESINFECTANTES:
Estos son clasificados en tres niveles (alto, mediano y bajo), segn la intensidad
de su actividad sobre bacterias y esporos, virus (lipdicos y no lipdicos), hongos y
sus esporos, etc.

perxido de hidrgeno
5
A. Desinfectantes de alto nivel:
Se caracterizan por actuar inclusive sobre los esporos bacterianos (forma ms

resistentes dentro de los microorganismos), produciendo una esterilizacin
qumica si el tiempo de accin es el adecuado.
Se utilizan sobre instrumentos mdicos o quirrgicos termo-sensibles.
Son rpidamente efectivos sobre bacterias no esporuladas. Por lo general el

nmero de esporos en el material a desinfectar es insignificante, por lo que la
esterilizacin es rpida.
Dentro de este grupo se encuentran:
I. Oxido de Etileno
II. Formaldehdo al 8% en alcohol 70%
III. Glutaraldehdo al 2%
IV. Perxido de Hidrgeno
Todos estos son desinfectantes estrictos, no pudindose usar como antispticos.
B. Desinfectantes de mediano nivel:
Si bien no destruyen esporos, si lo hacen con grmenes tipo: M.tuberculosis,

hongos y virus no lipdicos.
Algunos agentes son:
I. Compuestos clorados (por ej.: hipoclorito de sodio)
II. Compuestos iodados (iodforos y alcohol iodado)
III. Compuestos fenlicos
IV. Alcoholes
V. Clorohexidina

perxido de hidrgeno
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La mayora de estos son utilizados como desinfectantes y antispticos.
C. Desinfectantes de bajo nivel:
Son aquellos que actuando durante un tiempo razonable, no destruyen esporos, ni

Micobacterium, ni virus no lipdicos por Ej.:
I. Compuestos de Amonio cuaternario
II. Compuestos mercuriales
En la prctica estos compuestos se utilizan para la limpieza domstica mientras

que estn prcticamente en desuso en los hospitales y laboratorios debido al
empleo de tcticas ms agresivas para la desinfeccin.
TECNICAS DE ESTERILIZACION
Para esto contamos con procedimientos fsicos o qumicos. Estos ltimos ya han
sido vistos al considerar los desinfectantes de alto nivel.
Los procedimientos fsicos se dividen en energticos y mecnicos. Dentro de los

primeros se encuentran: el calor y las radiaciones, dentro de los segundos, la
filtracin.
A. DESTRUCCION DE MICROORGANISMOS MEDIANTE CALOR:
La energa trmica es la forma ms efectiva de esterilizacin. Esta puede utilizarse

como calor hmedo o seco.
I. CALOR HUMEDO:
Mecanismo de Accin: Al igual que los procesos de desinfeccin, la esterilizacin

trmica destruye a los microorganismos en forma gradual; es por esto que no hay
un nico mecanismo de accin, sino ms bien la suma de distintos eventos
complejos que se van sucediendo a medida que aumenta la temperatura.

perxido de hidrgeno
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El primer efecto letal sera la produccin de rupturas de cadena nica en el ADN

que provocaran la muerte celular por activacin o liberacin de enzimas con
actividad de endonucleasas.
El punto crtico aqu, para la supervivencia de la clula sera su capacidad para

reparar la lesin, funcin que depende del estado gentico y fisiolgico de la
bacteria.
A medida que aumenta la temperatura se agregara la prdida de la integridad

funcional de la membrana citoplsmica, lo que producira interferencias en el
intercambio con el medio externo, los procesos respiratorios y la sntesis proteica.
Por ltimo, las temperaturas ms elevadas activaran ribonucleasas que

degradando el ARNr producen la prdida de viabilidad de las clulas expuestas.
Las temperaturas a la cual puede usarse el calor hmedo son:
Por debajo de 100C --- Pasteurizacin
A 100C --- Ebullicin y Tindalizacin
Por encima de 100C --- Autoclavado
Pasteurizacin: se utiliza para la destruccin de grmenes patgenos, con

resistencia trmica similar o inferior a M.tuberculosis, Brucella y Salmonella.
Este no es un mtodo de esterilizacin sino de desinfeccin, donde no se

destruyen ni esporos ni virus no lipdicos (por Ej.: HAV).
Existen dos mtodos de pasteurizacin: o se calienta a 65C durante 30' o a 72C

durante 15". Luego ambas se enfran rpidamente a 10C.
Esta tcnica se utiliza fundamentalmente en la descontaminacin de la leche.
Ebullicin: consiste en mantener un objeto o sustancia en un bao a 100C

durante 30'. Aplicado as destruye la mayora de las formas vegetativas

perxido de hidrgeno
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bacterianas, hongos y virus lipdicos (por Ej.: Herpesvirus y HIV). En cambio no es

efectivo para la destruccin de esporos y virus no envueltos.
La repeticin de este proceso durante tres das consecutivos, constituye la

Tindalizacin. Su fundamento terico est dado por la destruccin de las formas
vegetativas durante los perodos de ebullicin, permitiendo que los esporos
germinen durante el reposo volvindose susceptibles al prximo calentamiento.
Tampoco aqu se esteriliza.
Auto clavado: utiliza vapor de agua a 121C durante 15'o 20'. Esta temperatura
se logra si se obtiene una presin de una atmsfera relativa (dos atmsferas
absolutas), ya que el aumento de la presin provoca aumentos proporcionales en
el punto de ebullicin del agua. Es el mecanismo de destruccin microbiana ms
efectivo, y bien utilizado asegura esterilizacin. El equipo que se utiliza es la
autoclave, del cual existen distintos tipos, como ser:
1. Vertical de manejo manual.

2. Que opera por gravedad.
3. De esterilizacin rpida.
II. CALOR SECO:
Mecanismo de accin: Es diferente al del calor hmedo. El calor seco (o

desecacin en general) provoca desnaturalizacin de protenas, lesiones por
oxidacin y efectos txicos por niveles elevados de electrolitos.
La accin letal es el resultado del calor trasmitido desde el material con el cual los
microorganismos estn en contacto, y no desde el aire caliente que los rodea.
Existen tres formas principales de esterilizacin por calor seco: flambeado,

incineracin y mediante la utilizacin del horno Pasteur. Hablaremos solamente de
esta ltima.
Para ello se necesita alcanzar mayor tiempo y temperatura que en el autoclave,

debindose mantener un objeto a 160C durante 2hs. El motivo de estos

perxido de hidrgeno
9
incrementos estaran dados porque la ausencia de agua disminuira el nmero de

grupos polares de las cadenas peptdicas, lo que dara mayor estabilidad a las
molculas bacterianas, por lo que se requerira mayor energa para abrirlas.
CONTROLES DE ESTERILIZACIN
Controles fsicos: estn relacionados al operario que realiza el procedimiento y la

vigilancia de ciertos parmetros como: presin, tiempo, temperatura, etc.
Controles qumicos: consiste en tiras de papel con una sustancia que cambia de
color al ser expuesto a la temperatura correspondiente. La ventaja de este
mtodo, es la rapidez con que se sabe el resultado, ya que es inmediato. La gran
desventaja es que dice poco sobre el tiempo de exposicin, por lo que no asegura
un procedimiento correcto. Estos controles deben utilizarse en todos los ciclos de
esterilizacin.
Controles biolgicos: consisten en exponer esporos bacterianos al ciclo de

esterilizacin y luego verificar su viabilidad.
Son los ms seguros. Dentro de una ampolla se encuentra un medio de cultivo

apropiado para el desarrollo de las bacterias en estudio. Por fuera de esta, un tubo
plstico, contiene una cinta de papel marcador de pH, impregnado con esporos de
bacterias capaces de resistir temperaturas cercanas a los procesos realizados.
Este tipo de controles debe realizarse peridicamente, o cuando se dude de la

efectividad del procedimiento.
B. ESTERILIZACION POR RADIACIONES
Con este fin pueden utilizarse tanto las radiaciones ultravioletas (UV) como las
ionizantes y rayos infrarrojos.
RADIACIONES UV:
Mecanismo de accin: el principal mecanismo del efecto letal de la luz UV sobre

las bacterias, se atribuye a su absorcin por el ADN y el resultante dao de este.

perxido de hidrgeno
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As provocan la formacin de uniones covalentes entre los residuos de pirimidina

adyacentes pertenecientes a la misma cadena, lo que provoca la formacin de
dmeros de pirimidina de tipo ciclobutano.
Esto produce distorsiones en la forma del DNA e interfiere en el apareamiento

normal de las bases.
El resultado final es la inhibicin de la sntesis de ADN y secundario a esto,

inhibicin del crecimiento y la respiracin.
APLICACIONES: estas radiaciones pueden producirse artificialmente con

lmparas de vapor de mercurio.
Son igualmente efectivas para Gram (+) y Gram(-).
Su principal uso es para esterilizar el aire y superficies, ya que no penetran en

slidos y lo hacen pobremente en lquidos.
C. ESTERILIZACION POR METODOS MECANICOS:
FILTRACION
Es el mtodo usado en el laboratorio para esterilizar lquidos termolbiles.
Existen distintos tipos de filtros: de asbesto-celulosa, de vidrio, de cermica y de

steres de celulosa o membranas. Las membranas estn compuestas por steres
de celulosa biolgicamente inertes. Los poros varan desde 0.025m a 25m de
dimetro, siendo los de 0.22m los ms utilizados ya que son lo suficientemente
pequeos para detener a todas las bacterias. Con este mtodo se esterilizan:
azcares, urea, sueros, antibiticos, etc.
Los filtros de membrana tambin se utilizan en Microbiologa para otros

propsitos. Dado que son inertes, proporcionan un buen medio para recoger
microorganismos, por ejemplo para cultivar bacterias que se encuentran en bajas
concentraciones en un gran volumen de lquido. El mecanismo de accin es
bastante simple: detienen todas las partculas que posean un tamao mayor que

perxido de hidrgeno
11
los poros. En realidad los "poros" quedan formados por los espacios que resultan
de la superposisin de las fibras de las distintas capas que forman la membrana.
As, algunas partculas de menor tamao son retenidas por otros mecanismos
como las fuerzas de Van der Waals o por suma de partculas retenidas
previamente, etc. por lo cual "el tamao del poro" es un valor virtual definido por el
tamao de la partcula retenida, ms que por un dimetro real y medible.
Qu Factores intervienen durante la desinfeccin?
Concentracin:
Es uno de los factores que con mayor atencin debemos de cuidar durante
el trabajo de desinfeccin. Su valor cambia dramticamente por la intervencin de
otros factores como la materia orgnica, temperatura y tiempo. Debemos de tener
en cuenta que la concentracin del desinfectante que aplicaremos vara segn la
naturaleza del mismo, por ejemplo, para la desinfeccin de cebolln se recomienda
una concentracin de hipoclorito de sodio o calcio que vaya de los sin embargo al
aplicar otro desinfectante como el ozono que es ms potente que los hipocloritos,
la concentracin que se utilizara disminuye considerablemente de ozono. As
mismo es importante utilizar las concentraciones recomendadas para cada tipo de
fruta y hortaliza a fin de no daar la calidad del mismo hay que considerar que
existen productos poco tolerantes a los desinfectantes.
Materia orgnica:
Se debe vigilar constantemente la formacin de materia orgnica (m.o.), ms si

utilizamos un sistema de recirculacin de agua, ya que aunque sean incorporados
cedazos. El aumento de la m.o. en el agua trae como consecuencia una mayor
demanda de cloro, la formacin de subproductos que en algunos casos son
txicos adems que las partculas de m.o. pueden envolver en su interior
organismos patgenos que no son eliminados debido a que el desinfectante no
logra entrar al interior.

perxido de hidrgeno
12
Tiempo:
El tiempo de exposicin del producto al desinfectante resultara en la posibilidad de

eliminar la mayor cantidad posible de organismos adheridos a la superficie del
producto, ya que entre mayor sea el tiempo tambin lo ser la eliminacin, sin
embargo la mayor parte de los vegetales sufren daos cuando son expuestos por
largos periodos a los desinfectantes qumicos.
Asimismo hay que considerar que cuanto mayor sea la concentracin del
desinfectante los tiempos de exposicin debern reducirse y viceversa, esto
considerando siempre el no daar el producto.
Normalmente estos tiempos son obtenidos en la industria gracias a la realizacin

de pruebas donde se busca tener una buena desinfeccin equilibrando la
concentracin ms tiempo de exposicin ms calidad de producto.
Ph:
Este parmetro debe ser continuamente medido cuando utilizamos desinfectantes

que afectan, y que tambin los afecta los valores del pH en el agua, como los
hipocloritos y en mucha menor medida dixido de cloro. Los rangos de pH cuando
se utiliza hipoclorito de calcio CaCl2O2 o hipoclorito de sodio NaClO, van de los 6-
8. Menor que 6 se vuelve inestable en el agua y se proyecta al ambiente lo cual
puede resultar toxico, en contraste un valor mayor que 8 se convierte en casi
totalmente en ion hipoclorito ClO su forma menos activa, para lo cual tendramos
que aumentar al menos 100 veces ms el tiempo de exposicin.
Temperatura:
Afecta principalmente la solubilidad de algunos desinfectantes en el agua, en el

caso de los hipocloritos, a mayor temperatura disminuye su solubilidad en el
agua y tiende a dispersarse hacia al aire. Contrariamente a menor temperatura su
estabilidad en el agua es mayor.

perxido de hidrgeno
13
AGENTES DESINFECTANTES
Los tratamientos con agentes desinfectantes se hacen en solucin acuosa por

inmersin o aspersin. El alcance del tratamiento depende del compuesto
desinfectante y de los microorganismos que se quiera eliminar. Su eficacia vara
con la concentracin del agente, y en mayor o menor medida con la temperatura,
el ph, el tiempo de contacto y el contenido de materia orgnica.
Dentro de los agentes desinfectantes utilizados para frutas y hortalizas se

encuentran, compuestos halogenados, cidos, amonio cuaternarios y
compuestos de oxigeno activo.
PEROXIDO DE HIDROGENO:
El perxido de hidrgeno es un fuerte oxidante. Los productos de reaccin con

materia orgnica son oxgeno y agua, los cuales son totalmente inocuos. Su
actividad antimicrobiana est basada en su poder oxidante. El uso de perxido de
hidrgeno como agente desinfectante est limitado a algunas frutas y hortalizas.
No es aconsejable su uso sobre fresas y frambuesas debido al blanqueamiento
de pigmentos.
El uso del perxido o agua oxigenada como tambin se le conoce, es muy

extendido con fines curativos, ya que es muy eficiente en su desinfeccin y tiene la
ventaja de no dejar residuos ya que se descompone en agua y oxigeno:
2H2O2 2H2O + O2
Una ventaja en la desinfeccin de agua es que no forma residuos halogenados

precursores de los THM, pero su mucho mayor costo es una de las principales
razones por las cuales no se emplea extensivamente en la desinfeccin de aguas
potables.
Tambin como el agente activo en la desinfeccin es el oxgeno generado en la

reaccin de descomposicin del perxido, este se pierde rpidamente y no tiene

perxido de hidrgeno
14
efecto residual, por lo que no es conveniente emplearlo si el agua no se

consume inmediatamente y se almacena para su posterior consumo.
Otra desventaja es el control de la dosis agregada, ya que la cuantificacin de

cloro libre residual es fcil de realizar pero no la de perxido.
En la industria de alimentos, en la fabricacin de papel y otros procesos, se

emplea con frecuencia este desinfectante por las ventajas que ofrece sobre el
cloro.
Adems de su mecanismo de accin como agente oxidante este compuesto

produce la formacin de radicales libres hidroxilos, que contribuyen a
desestabilizar las molculas celulares.
Utilizado en solucin al 3% es de escasa y breve actividad como antisptico, ya

que es rpidamente inactivado por las enzimas catalasa, tanto de los
microorganismos como las tisulares.
En soluciones estabilizadas al 10% acta como desinfectante de alto nivel. Se

utiliza sobre dispositivos mdico-quirrgicos, lentes de contacto de plstico blando,
etc.
Otra forma de utilizacin es en combinacin con cido peractico para esterilizar

maquinarias (por Ej.: equipos de pasteurizacin). El perxido de hidrgeno en
solucin al 30% y luego vaporizado, se utiliza para esterilizar superficies (por Ej.:
cabinas de seguridad).
LECHUGA, LACTUCA SATIVA
La lechuga es una hortaliza muy popular que se cultiva por sus grandes hojas que
en algunos casos se aprietan formando repollos ms o menos compactos. Existen
muchsimas variedades de esta verdura, y el nmero aumenta cada ao.
La lechuga es un alimento que aporta muy pocas caloras por su alto contenido en
agua, su escasa cantidad de hidratos de carbono y menor an de protenas y
grasas.

perxido de hidrgeno
15
Composicin por 100 gramos de porcin comestible
Energa (Kcal) 16,7
Agua (ml) 95
Hidratos carbono (g) 1,4
Fibra (g) 1,5
Protenas (g) 1,5
Potasio (mg) 240
Magnesio (mg) 5,7
Calcio (mg) 34,7
Vitamina A (mcg de Eq. de retinol) 29
Folatos (mcg) 33,6
Vitamina C (mg) 12,2
mcg = microgramos (millonsima parte de un gramo)
Microorganismos en productos frescos
Dentro de los microorganismos que pueden contaminar los productos frescos y

causar enfermedades en los seres humanos, se pueden mencionar,
esencialmente, tres tipos de organismos que pueden ser transportados por las
frutas y hortalizas y que representan un peligro para la salud humana: virus
(hepatitis A, por ejemplo), bacterias (Salmonella spp., Escherichia coli, Shigella
spp).
Entre las bacterias patgenas que han sido asociadas con el consumo de
hortalizas frescas se pueden mencionar Escherichia coli enterotoxignica, E. coli

perxido de hidrgeno
16
enterohemorrgica, especies de Shigella, Salmonella, Listeria, Campilobacter,

Clostridium y Staphylococcus entre otras. En general, todos los casos, a nivel
mundial, de brotes de enfermedades han puesto en entredicho la inocuidad de las
frutas y hortalizas. Esto ha ocasionado que instituciones de salud mundial estn
en alerta para vigilar ms de cerca la calidad microbiolgica del producto de
exportacin, y tomar medidas para reducir riesgos de contaminacin por
microorganismos causantes de enfermedades en la poblacin humana.
MTODOS DE DESINFECCIN PARA HORTALIZAS
Generalidades de la desinfeccin de hortalizas:
La contaminacin superficial de las hortalizas varia en nmero y tipo dependiendo

del producto y del manejo previo y posterior a la cosecha, que dicho producto haya
recibido, por lo que para asegurar la inocuidad de las hortalizas es necesario
minimizar la contaminacin de los productos con microorganismos patgenos que
pueden afectar la salud de los consumidores.
Existen varios mtodos para reducir la flora superficial de las hortalizas,

sin embargo cada mtodo tienes ventajas y desventajas dependiendo del producto
y del proceso. En general los mtodos utilizados se basan en procesos fsico
y/o qumicos.
Los mtodos qumicos involucran el uso de agentes qumicos como desinfectantes

superficiales. En general estos desinfectantes qumicos se utilizan en soluciones
acuosas, sin embargo existen algunos casos de desinfectantes gaseosos.
DESINFECCION POR AGENTES QUIMICOS
La desinfeccin del producto de ningn modo garantiza la eliminacin de los

microorganismos, ms aun, un producto ya contaminado es
prcticamente imposible reducir a la mnima expresin su carga microbiolgica

perxido de hidrgeno
17
contenida en la superficie, por lo tanto el objetivo principal de la desinfeccin de

nuestro producto ser el evitar la introduccin de ms patgenos y de manera
secundaria ayudar a reducir su carga contenida.
IV. PARTE EXPERIMENTAL

perxido de hidrgeno
18
Muestra trabajada: LECHUGA (Lactuca sativa)
MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS.
Agua desionizada
Placas Petri
Vaso de precipitado de 250mL
Vaso de precipitado de 500mL
Bagueta
Mechero de bunsen
Trpode
AGAR NUTRITIVO
AGAR XLD
Probeta de 50mL
Bolsas ziploc
Incubadora
Contador de colonias
Luna de reloj
Propipeta
Guantes quirrgicos
Cofias
Mascarillas
Sal
Perxido de hidrgeno (inhibidor)
METODOLOGA DE ANLISIS.
A.- Toma de muestra

perxido de hidrgeno
19
La lechuga fue adquirida en el Mercado La Aurora, ubicada en Av.

Emancipacin 668 Cercado de Lima, referencia el cruce de la Av.
Emancipacin con Jr. Caete, la temperatura promedio de dicho lugar es
de 20C.
B.- Ubicacin del trabajo de investigacin
El trabajo se realiz en las instalaciones del laboratorio de

Microbiologa de la Facultad de Ingeniera de la Universidad Nacional del
Callao a una temperatura de 18 a 20C y a una presin de 1atm.
C.- Desarrollo de la Investigacin
El mtodo de desinfeccin con perxido de hidrgeno nos ayuda a

inhibir la carga microbiana presente en la hortaliza (lechuga), debido a
su alto poder oxidante.
En nuestro anlisis microbiano, el grupo busca verificar la

eficacia de dicho inhibidor tratando las muestras de lechuga con soluciones
diluidas de 2 2 para observar la reduccin de la carga microbiana,
haciendo uso del AGAR NUTRITIVO (E. Coli) y AGAR XLD (Salmonella)

perxido de hidrgeno
20
para el cultivo de dichas muestras en una incubadora que se encuentra a

37C durante 48 hrs. para luego cuantificarlas con el contador de colonias.
PROCEDIMIENTO.
1. Calentamos a bao mara los agares NUTRITIVO y XLD dentro de un

vaso de precipitado de 250 mL.
2. Por otro lado preparamos la solucin salina, que est compuesta por 8gr
de sal en 1Lt de agua desionizada.
3. Pesamos las muestras de lechuga, para E. Coli 10g y para Salmonella

25g, y las colocamos en las bolsas ziploc.

perxido de hidrgeno
21
4. Luego adicionamos 90 mL de la solucin salina en cada una de las

muestras.
5. Luego sacamos 1 mL y lo colocamos en el centro de la placa Petri.
6. En la muestra de E. Coli para poder hacer la segunda dilucin

sacamos 1mL de la solucin y lo colocamos en una probeta y aadimos

perxido de hidrgeno
22
solucin salina hasta completar nuevamente los 10mL. Para luego repetir
el paso 5. Todo esto lo hacemos para las muestras patrn (libre de
inhibidor).
7. Para las muestras desinfectadas al 1%, 3% y 5% dejamos reposar

con el perxido de oxigeno durante unos 2 minutos en una bolsa ziploc,
luego desechamos el desinfectante. Luego seguimos los pasos 4 y 5.

perxido de hidrgeno
23
8. Luego de todo este

procedimiento a cada una de las placas se les agrega 20mL a una
temperatura entre 50-60C del agar respectivo para cada microorganismo.
Agar NUTRITIVO (E.Coli) y agar XLD (Salmonella). Y dejamos enfriar
cada una de las placas.
9. Colocar las placas en la incubadora a 37C por 48 horas.

perxido de hidrgeno
24
10. Hacer la lectura, cuantificando las colonias existentes en cada

una de las placas Petri con la ayuda del contador de colonias.
V. ANALISIS Y RESULTADOS

perxido de hidrgeno
25
Anlisis: E.Coli Salmonella

Lugar: Laboratorio de Microbiologa
Fecha de muestreo: 14-06-2016
Fecha de ejecucin: 15-06-2016
MICROORGANISMO
MUESTRA
Escherichia Coli Salmonella Sp.
PATRN 293 102 / 6/25
2 2
56 102 / 30/25
1%
2 2
39 102 / 16/25
3%
2 2
20 102 / /25
5%
Lmite mx. permisible 102 / /25
SALMONELLA SP.
ESCHERICHIA COLI
Resultados de Escherichia Coli.

perxido de hidrgeno
26
m
Microorganismo UFC/ml Resultados Foto
Encontrado o mg
I. Muestra Patrn (sin tratamiento).
Observacin:
La muestra trabajada (lechuga) contiene E.Coli, y a su vez
m
Encontrado o mg
ESCHERICHIA COLI 102 293*102 UFC/g
excede los lmites establecidos por la norma RMN 591- 2008 MINSA
NORMA SANITARIA QUE ESTABLECE LOS CRITERIOS
MICROBIOLGICOS DE CALIDAD SANITARIA E INOCUIDAD
PARA LOS ALIMENTOS Y BEBIDAS DE CONSUMO HUMANO.
Por tanto procederemos a tratarla para reducir la carga microbiana,
debido a que no es apta para el consumo humano.
II. Muestra tratada con 2 2 al 1%.

perxido de hidrgeno
27
m
Encontrado o mg
Observacin:
La muestra, al ser tratada por un par de minutos con una
concentracin de perxido de hidrgeno al 1% inhibe la carga
microbiana hasta 56*102 UFC/g. Sin embargo, an excede los lmites
de la RMN 591 2008 / MINSA, por consiguiente sigue sin ser apta
para el consumo humano.
III. Muestra tratada con 2 2 al 3%.

perxido de hidrgeno
28
m
Encontrado o mg
Observacin:
IV. Muestra tratada con 2 2 al 5%.

perxido de hidrgeno
29
Observacin:
CONCLUSIN.
Se logr reducir en gran porcentaje la carga microbiana de ESCHERICHIA

COLI hallada en la lechuga, sin embargo no se logr inhibir por completo la carga
para que pueda estar dentro de los lmites establecidos en la RMN 591-
2008/MINSA.
RESULTADOS DE SALMONELLA SP.

perxido de hidrgeno
30
I. Muestra Patrn (sin tratamiento).
Microorganismo m Resultados Foto

Encontrado UFC/25g
SALMONELA SP Ausencia 6 UFC/25g
Observacin:
Se encontr que la muestra trabajada (lechuga) contiene
SALMONELLA SP. De acuerdo con el contador de colonias podemos ver
que el resultado es 6, sin embargo en la imagen se observa que en la placa
existe una mancha grande negra, que podra ser el conjunto de varias
colonias, pero que no permite contabilizar exactamente.
Por tanto consideraremos que excede los lmites establecidos por la

RMN 591 2008 / MINSA NORMA SANITARIA QUE ESTABLECE LOS

perxido de hidrgeno
31
CRITERIOS MICROBIOLGICOS DE CALIDAD SANITARIA E

INOCUIDAD PARA LOS ALIMENTOS Y BEBIDAS DE ONSUMO
HUMANO. Por eso procederemos a tratarla para inhibir la carga
microbiana, debido a que no es apta para el consumo humano.
II. Muestra tratada con 2 2 al 1%.
Observacin:

Encontrado UFC/25g
La muestra despus de haber sido tratada por unos minutos con

perxido de hidrgeno al 1% inhibe la carga hasta 30 UFC/25g. Sin
embargo, an excede los lmites de la RMN 591 2008 / MINSA, por
consiguiente sigue sin ser apta para el consumo humano.

perxido de hidrgeno
32
III. Muestra tratada con 2 2 al 3%.

Encontrado UFC/25g
Observacin:
perxido de hidrgeno al 3% inhibe la carga hasta 16 UFC/25g. Sin
embargo, an excede los lmites de la RMN 591 2008 / MINSA, por
consiguiente sigue sin ser apta para el consumo humano.
IV. Muestra tratada con 2 2 al 5%.

perxido de hidrgeno
33

Encontrado UFC/25g
SALMONELA SP Ausencia Ausencia/25g
Observacin:
perxido de hidrgeno al 5% inhibe totalmente la carga microbiana
obteniendo Ausencia/25g. Siendo as la muestra tratada totalmente
apta para el consumo humano, ya que cumple con la RMN 591-
2008/MINSA.
CONCLUSIN.
Despus de tratar la muestra con soluciones a distintas concentraciones de

perxido de hidrgeno logramos inhibir totalmente la carga microbiana de
SALMONELA SP, convirtiendo as la muestra, apta para el consumo humano
segn la RMN 591-2008/MINSA, ya que cumple los lmites establecidos.
GRAFICOS.

perxido de hidrgeno
34
Escherichia Coli
350
300 0, 293
250
10^2 UFC/g
200
150
100
50 1, 56
3, 39
5, 20
0
0 1 2 3 4 5 6
% V/V
SALMONELLA SP.
140
0, 127
120
100
UFC/25g
80
60
40
1, 30
20
3, 16
0 5, 0
0 1 2 3 4 5 6
% V/V

perxido de hidrgeno
35
CUADROS DE INHIBICION DE CARGA MICROBIANA EN PORCENTAJE
E
S
Concentracin
C % % %
H
E
R
I
A
C
O Reduccin 80.88% 86.68% 93.17%
L
I
S
A Concentracin
% % %
L
M
O
N
E
L
L
A
Reduccin 76.37% 87.40% 100%
S
P

perxido de hidrgeno
36
VI. CONCLUSIONES
1. Basndonos en nuestros resultados se determin una considerable

reduccin de carga microbiana.
2. Se comprob la efectividad de nuestro agente sanitizante para hortalizas

(lechuga) al 5% para salmonella.
3. Se determin una mejor conservacin de la muestra con nuestro agente

sanitizante al 5% para E. Coli.
VII. RECOMENDACIONES
Cada miembro del equipo debe estar con su respectivo EPI, para poder as
evitar la contaminacin de nuestra muestra en pleno desarrollo de la
experiencia, y viceversa, para que nos pueda infectar.
Cada utensilio, material, equipo de laboratorio debi de ser previamente

esterilizado en la estufa en un tiempo aprx de 1 a 2 hrs.
Calentar el agar hasta que se encuentre en un estado totalmente lquido,

luego dejarlo enfriar hasta la temperatura apta (50C < T apta < 60C) para
luego verter en las placas petri.
Al momento de hacer la lectura se debe tener en cuenta la forma que tiene

el microorganismo segn su AGAR.
VIII. REFERENCIAS

perxido de hidrgeno
37
1. TRABAJOS PUESTO EN INTERNET:
ESTERILIZACION Y DESINFECCION, RAFAEL VIGNOLI

Desinfeccion y esterilizacin, Paula Gutierrez, Profesora de
baile at Guarderia Jardin Pasos y trasos
Uso de agentes antimicrobianos naturales en la conservacin
de frutas y hortalizas, Ra Ximhai Revista de Sociedad, Cultura y
Desarrollo Sustentable, Elvia Nereyda Rodrguez Sauceda,
Universidad Autnoma Indgena de Mxico
2. PAGINAS WEB:
http://www.monografias.com/trabajos15/esterilizacion-
desinfeccion/esterilizacion-desinfeccion.shtml
http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2027.pdf
http://verduras.consumer.es/lechuga/introduccion
IX. ANEXOS

perxido de hidrgeno
38
El papel del perxido de hidrgeno en la prevencin de infecciones
El perxido de hidrgeno en el ambiente es un mtodo eficaz para el control de

infecciones en el entorno inanimado de un hospital, segn el anlisis sistemtico
de evidencias clnicas publicadas.
El informe: Falagas ME, et al., Airborne hydrogen peroxide for disinfection of

the hospital environment and infection control: a systematic review, Journal
of Hospital Infection (2011), examin 10 estudios distintos sobre el uso del
perxido de hidrgeno.
Se hall que entre el 0 y el 4 % de los centros que se limpiaban y luego se

descontaminaban con perxido de hidrgeno, no presentaban patgenos
peligrosos que puedan causar la difusin de enfermedades en entornos sanitarios.
El informe indicaba que el perxido de hidrgeno tambin serva de ayuda en la

erradicacin de brotes de infecciones peligrosas en diferentes entornos sanitarios.
La evaluacin de los datos relevantes extrados de los 10 estudios incluidos en

nuestro anlisis, indica que el perxido de hidrgeno en el ambiente, sea en forma
de vapor o nebulizacin seca, puede ser un mtodo efectivo de desinfeccin del
entorno inanimado del hospital.
En todos los estudios incluidos, se encontraron pocos centros positivos al cultivo

de los patgenos estudiados tras la aplicacin de perxido de hidrgeno en el
ambiente, en comparacin a otros mtodos de control de limpieza. Adems, se
consigui una desinfeccin completa o casi completa de los hospitales analizados
gracias al perxido de hidrgeno en el ambiente.
El objetivo del anlisis era investigar la eficacia del perxido de hidrgeno en el

ambiente en un entorno hospitalario y como mtodo de control de infecciones. Los
analistas investigaron, en diferentes estudios, el uso de del perxido de hidrgeno
en diferentes entornos hospitalarios, incluyendo salas con varias camas, salas de
aislamiento, cuartos de bao y de almacenamiento. De los resultados, el perxido
de hidrgeno mostr reducir drsticamente el rea de contaminacin tras la
limpieza terminal inicial.
Antes de la limpieza, el 39 % de los centros estaban contaminados, tras la

limpieza finalizada, se redujo al 28,3 %, y tras la desinfeccin con perxido de
hidrgeno, solo el 2,2 % de las superficies estaban contaminadas.
El anlisis hall evidencias de que el perxido de hidrgeno es una medida de
control efectiva contra las infecciones.

perxido de hidrgeno
39
El uso de la desinfeccin ambiental con perxido de hidrgeno contribuy a la

erradicacin de un brote de A Serratia spp. en una UCI neonatal y un brote de
SARM policlonal en una sala quirrgica de 28 camas, respectivamente. En un
estudio adicional, el uso de la desinfeccin con perxido de hidrgeno en el aire
erradic la contaminacin persistente de SARM en una sala quirrgica de 20
camas.
En el estudio, la desinfeccin ambiental con perxido de hidrgeno de cinco salas

con 500 camas de un hospital universitario, que tena la mayor incidencia de
enfermedades asociadas a C. difficile se relacion con una reduccin significativa
de C. difficile en el hospital.
El anlisis concluy que el uso de perxido de hidrgeno ofreca otras ventajas

frente a otros sistemas de limpieza, como muestran los exhaustivos resultados de
descontaminacin que obtuvieron los estudios.
Fuente: ASP Johnson & Johnson company

perxido de hidrgeno
40

perxido de hidrgeno
41

perxido de hidrgeno

93g-1.inhibición de La Carga Microbiana en La Lechuga Con Peróxido de Hidrógeno

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93g-1.inhibición de La Carga Microbiana en La Lechuga Con Peróxido de Hidrógeno

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INHIBICIN DE LA CARGA

Los procesos de esterilizacin y/o desinfeccin son diariamente llevados a cabo,

El objetivo de esta investigacin fue evaluar el efecto anti microbiano de la

Para el desarrollo de la parte experimental se tom como punto de muestreo el

En conclusin a esta investigacin, se confirma que el tratamiento de las hortalizas

Laboratorio de Microbiologa Inhibicin de la carga microbiana con

1. Determinar qu tan efectivo el mtodo de desinfeccin con el perxido

2. Poder determinar la reduccin de la carga microbiana (E. Coli y

3. Tener una comparacin del nivel de conservacin de la muestra a

Laboratorio de Microbiologa Inhibicin de la carga microbiana con

III. MARCO TERICO

Es el proceso mediante el cual se alcanza la muerte de todas las formas de vida

Es el proceso que por su baja toxicidad, se utiliza para la destruccin de

En este proceso se eliminan los agentes patgenos reconocidos, pero no

1. NIVEL DE LOS DESINFECTANTES:

Laboratorio de Microbiologa Inhibicin de la carga microbiana con

A. Desinfectantes de alto nivel:

Se caracterizan por actuar inclusive sobre los esporos bacterianos (forma ms

Se utilizan sobre instrumentos mdicos o quirrgicos termo-sensibles.

Son rpidamente efectivos sobre bacterias no esporuladas. Por lo general el

Dentro de este grupo se encuentran:

II. Formaldehdo al 8% en alcohol 70%

IV. Perxido de Hidrgeno

Todos estos son desinfectantes estrictos, no pudindose usar como antispticos.

B. Desinfectantes de mediano nivel:

Si bien no destruyen esporos, si lo hacen con grmenes tipo: M.tuberculosis,

Algunos agentes son:

I. Compuestos clorados (por ej.: hipoclorito de sodio)

II. Compuestos iodados (iodforos y alcohol iodado)

III. Compuestos fenlicos

Laboratorio de Microbiologa Inhibicin de la carga microbiana con

La mayora de estos son utilizados como desinfectantes y antispticos.

C. Desinfectantes de bajo nivel:

Son aquellos que actuando durante un tiempo razonable, no destruyen esporos, ni

I. Compuestos de Amonio cuaternario

II. Compuestos mercuriales

En la prctica estos compuestos se utilizan para la limpieza domstica mientras

Los procedimientos fsicos se dividen en energticos y mecnicos. Dentro de los

A. DESTRUCCION DE MICROORGANISMOS MEDIANTE CALOR:

La energa trmica es la forma ms efectiva de esterilizacin. Esta puede utilizarse

Mecanismo de Accin: Al igual que los procesos de desinfeccin, la esterilizacin

Laboratorio de Microbiologa Inhibicin de la carga microbiana con

El primer efecto letal sera la produccin de rupturas de cadena nica en el ADN

El punto crtico aqu, para la supervivencia de la clula sera su capacidad para

A medida que aumenta la temperatura se agregara la prdida de la integridad

Por ltimo, las temperaturas ms elevadas activaran ribonucleasas que

Las temperaturas a la cual puede usarse el calor hmedo son:

Por debajo de 100C --- Pasteurizacin

A 100C --- Ebullicin y Tindalizacin

Por encima de 100C --- Autoclavado

Pasteurizacin: se utiliza para la destruccin de grmenes patgenos, con

Este no es un mtodo de esterilizacin sino de desinfeccin, donde no se

Existen dos mtodos de pasteurizacin: o se calienta a 65C durante 30' o a 72C

Esta tcnica se utiliza fundamentalmente en la descontaminacin de la leche.

Ebullicin: consiste en mantener un objeto o sustancia en un bao a 100C

Laboratorio de Microbiologa Inhibicin de la carga microbiana con

bacterianas, hongos y virus lipdicos (por Ej.: Herpesvirus y HIV). En cambio no es

La repeticin de este proceso durante tres das consecutivos, constituye la

1. Vertical de manejo manual.

II. CALOR SECO:

Mecanismo de accin: Es diferente al del calor hmedo. El calor seco (o

Existen tres formas principales de esterilizacin por calor seco: flambeado,

Para ello se necesita alcanzar mayor tiempo y temperatura que en el autoclave,