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conocer solo uno o muy pocos de los organismos que realizan una
determinada transformacin metablica.
El m. o. y su microambiente
El crecimiento de los m.o. en la naturaleza depende de los recursos (nutrientes)
disponibles y de las condiciones de crecimiento. Las diferencias en el tipo y
cantidad de los recursos y en las condiciones fisicoqumicas de un hbitat
(temperatura, pH, disponibilidad de agua, luz y oxgeno), definen el nicho para
cada organismo en particular. Tericamente se dice que para cada organismo
existe al menos un nicho, que es el principal, aqul en el cual crece mejor. El
mismo m.o. puede habitar otros nichos pero en ellos no desarrollar todas sus
caractersticas como en el principal. En la tierra existen incontables nichos
microbianos y de ellos depende en parte la gran diversidad metablica de los
m.o. y la biodiversidad microbiana que se da en la naturaleza.
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Niveles de nutrientes y velocidad de crecimiento
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interacciones microbianas se denomina sintrofa. Esta es crucial para el xito
competitivo de algunas bacterias anaerbicas (Fig. 14.30). Las relaciones
sintrficas requieren que los organismos participantes convivan en un mismo
microambiente, ya que el producto del metabolismo de uno de ellos debe ser
de fcil acceso al segundo y as sucesivamente.
Crecimiento microbiano
En microbiologa la palabra crecimiento significa o se define como un
incremento en el nmero de clulas.
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Crecimiento de poblaciones
Si el crecimiento es el incremento en el nmero de clulas microbianas en una
poblacin, esta se puede medir como un incremento en la masa microbiana.
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1000 1000
500
10
Aritmtica
100
1 2 3 4 5
Tiempo (horas)
1 x108
t = 2, n = 1
8 x 107 g = t/n = 2h
La poblacin se
duplica cada dos horas
6 x107
Pendiente
Clulas/mL 4 x10 7 = 0.15
3 x 107
2 x107
2h
1 x107
0 1 2 3 4 5
Tiempo (horas)
6
4 x 107
Pendiente = 0.05
Clulas/mL
t = 6 horas
2 x 107 n=1
g = t/n = 6 horas
0 1 2 3 4 5 6
N= N0 2n
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Ejemplo: N = 108, N0 = 5 x 107 y t= 2, por tanto:
Fase de latencia
Esta puede ser larga o corta, dependiendo de diversos factores.
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3. esta fase de latencia tambin se presenta cuando las clulas utilizadas
han sido daadas por tratamientos, por ejemplo: calor, radiaciones,
txicos, entre otros. En este caso, primero la clula tiene que reparar
todos los daos sufridos, siempre y cuando esto sea posible. Adems
tendr que hacer todo el trabajo descrito en los casos anteriores.
4. cuando se transfieren clulas de un medio rico a uno ms pobre,
tambin la clula requiere tiempo para sintetizar las nuevas enzimas que
le permitan utilizar los compuestos que estn presentes en este medio
de cultivo.
Fase exponencial
La mayora de los m.o. unicelulares crecen en forma exponencial, pero las
velocidades de este tipo de crecimiento pueden variar esencialmente. Esta
velocidad de crecimiento es afectada por factores externos o ambientales y por
las caractersticas genticas del m.o. en general los procariotas crecen ms
rpido que los eucariotas, y los eucariotas pequeos, ms rpido que los
grandes.
Fase estacionaria
En un sistema en el que el medio de cultivo no se renueva (caracterstica
principal del cultivo batch), el crecimiento exponencial no puede transcurrir
indefinidamente. Si esto fuera as, se ha calculado que una sola clula con un
tiempo de generacin de 20 minutos, si continuara su crecimiento a ese ritmo
durante 48 horas, producira una poblacin bacteriana equivalente a
aproximadamente 4000 veces el peso de la tierra. Esto es impresionante si
adems, consideramos que el peso de una clula bacteriana es de una
billonsima de gramo (10-12 g). Obviamente, es imposible mantener este ritmo
de crecimiento.
Para que las clulas bacterianas puedan sobrevivir, es necesario que tengan
en su DNA, genes que permitan mantener la viabilidad de la clula en esta
fase. Esto se ha comprobado en estudios con E. coli debido a que en la
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naturaleza muchas clulas bacterianas no crecen o lo hacen muy despacio, no
es sorprendente que hayan evolucionado diversos genes implicados en la fase
estacionaria de crecimiento.
Fase de muerte
Si la incubacin del medio de cultivo contina despus que la poblacin
alcanza la fase estacionaria, las clulas pueden permanecer vivas y
metablicamente activas, pero tambin deben morir. Si lo ltimo ocurre, la
poblacin entra en fase de muerte. En algunos casos esta va acompaada de
lisis celular. Se puede observar que la fase de muerte de un ciclo de
crecimiento tambin es una funcin exponencial, sin embargo en la mayora de
los casos, la velocidad de muerte es mucho ms lenta que el crecimiento.
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este mtodo es el razonamiento de que cada clula viable puede originar una
colonia.
Vertido en placa: el volumen que se utiliza en este mtodo puede ser de 0.1 a
1.0 ml de una dilucin decimal, o ms si se cree conveniente, ya que el medio y
la muestra se mezclan y posteriormente se vacan en la placa. Una variante de
este mtodo puede ser el que primero se vace la muestra dentro de la caja de
Petri, y posteriormente se vace el medio de cultivo fundido a una temperatura
de 40 a 45C, moviendo la caja de tal manera que facilite el mezclado de la
muestra y el medio de cultivo (en la primera forma, tambin el medio debe
tener esta temperatura). Los organismos que se siembren por este mtodo
deben soportar la temperatura del medio de cultivo (40 a 45C). La caja se lleva
a incubar y se cuentan las colonias en la misma forma que en el mtodo
anterior.
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sembrar, de preferencia nmeros impares (3, 5, 7) de cada una de ellas, segn
se crea conveniente.
Medidas de turbidez: Una forma ms rpida para obtener una estimacin del
nmero de clulas o biomasa consiste en medir la turbidez de una suspensin
celular bacteriana. Una suspensin de estos organismos aparece turbia porque
las clulas dispersan la luz que atraviesa la suspensin. Cuantas ms clulas
haya, ms luz se dispersa y ms turbia aparece la suspensin. Este fenmeno
puede medirse utilizando un fotmetro o un espectrofotmetro, ambos aparatos
hacen pasar la luz a travs de la suspensin celular y miden la luz no
dispersada. La diferencia entre ambos aparatos, es el aditamento que
selecciona la luz incidente. El fotmetro utiliza un filtro simple de color
(normalmente rojo, verde o azul) para generar la luz incidente que es de
longitud de onda relativamente ancha. El espectrofotmetro utiliza un prisma o
red de difraccin para generar luz incidente de banda estrecha. Sin embargo,
ambos aparatos solo miden luz no dispersada, expresando los resultados en
unidades fotomtricas para un fotmetro o unidades de densidad ptica (DO)
para espectro fotmetros.
Se debe tener cuidado con las muestras que se van a leer por este mtodo, ya
que si estn muy concentradas en clulas, la correspondencia de uno a uno
entre turbidez y nmero de clulas, se pierde. Sin embargo, dentro de ciertos
lmites, las medidas de turbidez pueden ser razonablemente precisas, adems
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de ser rpidas y fciles de tomar. Las medidas de turbidez no distorsionan
mucho las muestras. Debido a esto, las medidas de turbidez se utilizan
ampliamente para seguir el crecimiento de los cultivos microbianos. Se puede
medir repetidamente la misma muestra y se pueden construir grficas
semilogartmicas para calcular tiempos de generacin.
CULTIVO CONTINUO
El quimiostato
El sistema ms comn de cultivo continuo se denomina quimiostato, que
permite el control de la densidad de la poblacin y la velocidad de crecimiento
del cultivo.
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8.0 mg/mL
6.0 mg/mL
Nmero de clulas o masa
4.0mg/mL
2.0 mg/mL
1.0 mg/mL
0.5 mg/mL
0.2 mg/mL
0.1mg/mL
Tiempo
Velocidad de
crecimiento Crecimiento
( ______ ) (----------)
0 1 2 3 4 5
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hacia el interior de la clula con la velocidad requerida para un metabolismo
activo, mientras que a concentraciones moderadas o altas del mismo nutriente
las velocidades de crecimiento no son afectadas y la productividad contina
incrementndose.
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concentracin de nutriente en el cultivo virtualmente ser cero. Por lo tanto,
Concentracin bacteriana en equilibrio
ajustando la velocidad de dilucin y la concentracin de nutrientes, se pueden
Produccin de bacterias (g / l / hr)
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Lavado
0 0
0.5 1.0
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Velocidad de dilucin (hr)
Relaciones existentes en estado de equilibrio de un quimiostato. La velocidad de
dilucin viene determinada por la velocidad de salida y por el volumen del vaso.
As, con un vaso de 1000ml y una salida de 500ml/h, la velocidad de dilucin sera
de 0.5h-1 Ntese que a altas velocidades de dilucin, el crecimiento no puede
equilibrarla y la poblacin celular es lavada; a su vez, la concentracin de
sustrato en el vaso se incrementa hasta alcanzar la del reservorio. Sin embargo, a
travs de la mayor parte de las diluciones que se muestran, la densidad celular
permanece constante y la concentracin de sustrato a baja concentracin. Ntese
tambin que aunque la densidad poblacional permanezca constante, la velocidad
de crecimiento vara en un amplio rango. As, el experimentador puede obtener
poblaciones con velocidades de crecimiento muy variables, sin por ello afectar a
la densidad poblacional.
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caractersticas de cada organismo y pueden varias ligeramente de acuerdo con
la composicin del medio de cultivo.
ptimo
Las reacciones enzimticas
tienen lugar a velocidades en
constante aumento.
Velocidad
de
crecimient
o
Mnimo
Mximo
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Clasificacin segn la temperatura de crecimiento
Ejemplo de hipertermfilo:
Ejemp. de Pyrodictium brockii
Ejemplo de termfilo: B. hipertermfilo:
stearothermophilus Thermococcus celer
Ejemplo de
mesfilo: E. coli
Velocid
ad de Ejemplo de
crecimi psicrfilo:
ento Flavobacterium
sp.
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Microorganismos psicrfilos
Por lo anterior, los m.o. psicrfilos se encuentran en ambientes
permanentemente fros y mueren rpidamente si se exponen a temperaturas
ambientes ms altas. Por esta razn, su estudio es difcil ya que para hacerlo
se deben conservar en el laboratorio las condiciones de temperatura fra para
evitar alteraciones en estos m.o.
Muchos arroyos calientes estn prximos al punto de ebullicin del agua (99C
al nivel del mar). A medida que el agua corre se va enfriando originando un
gradiente de temperatura. A lo largo de este gradiente crecen varios
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microorganismos, con diferentes especies creciendo en un amplio rango de
temperaturas. Con base en estudios realizados en estos gradientes y en
diferentes partes del mundo, es posible determinar el lmite superior de
temperatura para cada clase de organismos. De esta informacin se puede
concluir que:
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pH y crecimiento microbiano
Cada organismo tiene un rango de pH dentro del que puede crecer y tambin
posee un pH ptimo definido. La mayora de los ambientes naturales tienen
valores de pH entre 5 y 9, por lo que la mayora de los grupos microorganismos
se encuentran creciendo dentro de este rango. Solo pocas especies pueden
crecer a pH inferior a 2 o mayor de 10.
Los microorganismos que crecen sin dificultad en condiciones cidas (pH bajo),
se denominan acidfilos, en este grupo se encuentran los hongos
principalmente, ya que estos son ms tolerantes a condiciones cidas que las
bacterias. La mayora de ellos crecen ptimamente a pH 5 o ms, pero pocos
lo hacen a menos de 2. Tambin existen bacterias acidfilas, de hecho algunas
son acidfilas obligadas, incapaces de crecer a pH neutro. Entre ellas se
encuentran bacterias del gnero Thiobacillus, y diversos gneros de Archaea
entre ellos se encuentran Sulfolobus, Thermoplasma.
Buffer o tampones
En un cultivo en el que el medio no se renueva, el pH puede cambiar como
resultado de la actividad metablica. Por esto, regularmente se emplea
tampones para mantener constante el pH del medio de cultivo. Estas
sustancias solo funcionan regulando el pH en rangos estrechos, por lo que para
valores diferentes de pH, es necesario utilizar diferentes tampones.
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DISPONIBILIDAD DE AGUA
Todo organismo viviente requiere agua para que pueda realizar todas sus
actividades en condiciones adecuadas. Los microorganismos no son la
excepcin.
El agua difunde desde una regin de baja concentracin de solutos hacia una
de alta concentracin, este proceso se denomina smosis. Por lo general, el
citoplasma celular posee mayor concentracin de solutos que el medio exterior,
por lo que el agua tiende siempre a difundir hacia el interior de las clulas, lo
que significa que existe un balance de agua positivo. Cuando una clula se
encuentra en un ambiente con baja aw, existe una tendencia a salir agua de la
clula. Es la razn por la cual en conservacin de algunos alimentos se utiliza
concentraciones elevadas de sal o azcar para provocar el fenmeno de salida
de agua de la clula y se de la plasmlisis.
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Microorganismos discretamente halfilos son los que solo requieren entre 1 a
6% de esta sal.
Solutos compatibles
Cuando los microorganismos pueden crecer en condiciones de baja aw, solo
podr obtener agua del medio ambiente para llevar a cabo sus reacciones
metablicas, aumentando la concentracin intracelular de solutos. Esto lo
pueden realizar de dos formas, una es bombeando iones del exterior hacia el
interior celular o bien, sintetizando o concentrando un soluto orgnico.
Los solutos compatibles pueden ser sintetizados directamente por los m.o. o
bien, tomados y concentrados del exterior. La concentracin de los solutos
compatibles est en funcin de los solutos extracelulares. En cada organismo
la cantidad mxima sintetizada o acumulada est determinada genticamente.
OXGENO
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derivado del metabolismo del oxgeno. Cuando se reduce el
oxgeno se producen algunos elementos txicos tales como el
perxido de hidrgeno (H 2O2), superxido (O2-) y radicales
hidroxilo (OH*). Muchos m.o. anaerobios obligados son ricos en
enzimas flavnicas, que reaccionan espontnea mente con el
oxgeno para dar este tipo de compuestos txicos. Los aerobios
poseen enzimas que descomponen los productos txicos.
Estas no se encuentran en los anaerobios.
Catalasa:
H2O2 + H2O2 2 H 2O + O 2
Peroxidasa:
H2O2 + NADH + H+ 2 H2O + NAD+
Superxido dismutasa:
O2- + O2- + 2H+ H2O2 + O2
Superxido dismutasa / Catalasa:
4 O2- + 4H+ 2 H2O + 3 O2
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