II.

EFECTO DEL MEDIO AMBIENTE SOBRE LOS

MICROORGANISMOS

El trmino ambiente hace referencia a todo lo que rodea a un organismo vivo;

los factores fsicos, qumicos y biolgicos.

Desde una perspectiva ecolgica, los microorganismos forman parte de

comunidades denominadas ecosistemas. Todos los organismos de un
ecosistema interactan con su medio, al que en algunos casos o en su
mayora, modifican las caractersticas iniciales durante el proceso.

Esto, especialmente con microorganismos que pueden causar cambios

qumicos significativos debido a sus actividades metablicas.

En un ecosistema microbiano, las clulas individuales forman poblaciones. Las

poblaciones relacionadas metablicamente constituyen gremios; y los
conjuntos de gremios que llevan a cabo procesos fisiolgicos complementarios
interaccionan para formar comunidades microbianas. Estas comunidades
interaccionan con comunidades de macroorganismos y definen el conjunto del
ecosistema.

La energa entra en los ecosistemas en forma de luz solar, carbono orgnico o

sustancias inorgnicas reducidas. La luz es utilizada por los organismos
fototrficos para sintetizar materia orgnica nueva, que adems de carbono
tambin contiene, nitrgeno, fsforo, hierro y muchos otros elementos.

Esta materia orgnica sintetizada, junto con la que penetra en el ecosistema

desde el exterior (M.O. alctona), y con sustancias inorgnicas, determina las
actividades metablicas de los organismos quimiorganotrofos y quimiolitotrofos.

En relacin a los elementos qumicos clave de los sistemas vivos, se puede

definir como ciclo biogeoqumico aquel en el cual el elemento qumico
experimenta cambios en su estado de oxidacin al moverse dentro del
ecosistema. Los microorganismos intervienen activamente en los ciclos
biogeoqumicos y en muchos casos son los nicos agentes biolgicos capaces
de regenerar formas de un elemento utilizables por otros organismos,
especialmente por plantas.

La ecologa microbiana tiene dos amplios objetivos:

1. Apreciar la biodiversidad de los microorganismos en la naturaleza y

entender la interaccin existente entre los diferentes gremios que
componen las comunidades microbianas.
2. Medir la actividad de los microorganismos en la naturaleza y controlar
sus efectos en sta.

Se sabe mucho sobre diversidad metablica sin embargo, se sabe rela-

tivamente poco sobre la diversidad de los organismos que llevan a cabo las
distintas reacciones. En muchos casos, el estudio en cultivos naturales permite

1
conocer solo uno o muy pocos de los organismos que realizan una
determinada transformacin metablica.

Sin embargo, la medida de las actividades metablicas en la naturaleza nos ha

permitido evaluar el funcionamiento metablico de las comunidades
microbianas, incluso cuando sabemos poco de los organismos que las
componen. Las transformaciones bioqumicas especficas son una prueba de
que se halla presente el correspondiente gremio microbiano, y de que es
metablicamente activo. Esta informacin es til en la prctica, ya que permite
disear mtodos de trabajo que permiten aislar los microorganismos
responsables.

LOS MICROORGANISMOS EN LA NATURALEZA

Los hbitats naturales de los m. o. son extremadamente diversos. Cualquier

hbitat que sea adecuado para el crecimiento de organismos superiores, lo es
para el crecimiento de m. o. pero hay muchos hbitats que debido a sus
condiciones fsicas o qumicas extremas, no se encuentran organismos
superiores, pero si m. o., que en algunos caso se desarrollan mejor all.

Los m. o. habitan las superficies de organismos superiores y algunos pueden

incluso vivir dentro de plantas y/o animales. En estos hbitats sus poblaciones
pueden ser muy numerosas y muy beneficiosas para la planta o el animal en
relacin con su nutricin. Por otra parte, algunos m.o. son patgenos y causan
dao a su hospedador.

El m. o. y su microambiente
El crecimiento de los m.o. en la naturaleza depende de los recursos (nutrientes)
disponibles y de las condiciones de crecimiento. Las diferencias en el tipo y
cantidad de los recursos y en las condiciones fisicoqumicas de un hbitat
(temperatura, pH, disponibilidad de agua, luz y oxgeno), definen el nicho para
cada organismo en particular. Tericamente se dice que para cada organismo
existe al menos un nicho, que es el principal, aqul en el cual crece mejor. El
mismo m.o. puede habitar otros nichos pero en ellos no desarrollar todas sus
caractersticas como en el principal. En la tierra existen incontables nichos
microbianos y de ellos depende en parte la gran diversidad metablica de los
m.o. y la biodiversidad microbiana que se da en la naturaleza.

Debido a que los m.o. son extremadamente pequeos, al referirnos a su hbitat

debemos considerar esta caracterstica. Por lo tanto, cuando nos referimos a
un nicho de un organismo en particular en su medio natural, consideremos que
en un entorno de aprox. 3 a 6 mm y el tamao del m.o. de 3 m, la distancia
antes mencionada equivale entre 2 a 4 Km. para una persona. Esto significa
que en ese espacio se pueden encontrar diferentes gradientes fsicos y
qumicos que afecten al organismo. Debido a esto, se utiliza el t. rmino
microambiente para referirnos exactamente al lugar del hbitat en el que un
m.o. vive y lleva a cabo su metabolismo.

Los microambientes son muy heterogneos, y las condiciones de un

determinado microambiente pueden cambiar muy deprisa.

2
Niveles de nutrientes y velocidad de crecimiento

Los nutrientes entran en el ecosistema en forma intermitente. Un gran aporte

de nutrientes puede ir seguido de un periodo de fuerte escasez. En la
naturaleza los m.o. llevan una existencia donde situaciones de gran aporte de
alimento se alterna con otras de escasez, por lo que han desarrollado sistemas
bioqumicos de produccin de polmeros que pueden almacenar como material
de reserva. Estos polmeros acumulan los nutrientes en exceso que se
encuentran durante los periodos de crecimiento favorable, para utilizarlos
durante las pocas de escasez.

La fase de crecimiento exponencial no se prolonga por mucho tiempo en

condiciones naturales. Bajo estas condiciones, el crecimiento se da por etapas
o periodos que coinciden o se relacionan con la disponibilidad de nutrientes.

En el medio natural, las condiciones fisicoqumicas ptimas no se dan en forma

simultnea, debido a esto, no es extrao que la velocidad de crecimiento de los
m.o. bajo estas condiciones por lo general sea menor o diferente a la que se
observa en laboratorio. Por ejemplo, la velocidad de crecimiento de E. coli en el
intestino es de 12 h aproximadamente, sin embargo en condiciones ptimas en
el laboratorio es de 20 min.

La disminucin de la velocidad de crecimiento, es el reflejo de algunas de las

caractersticas del medio natural:

1. La disponibilidad de nutrientes por lo general es baja.

2. la distribucin de los nutrientes a lo largo del hbitat no es homognea,
por lo general se da en gradientes.
3. Es raro que los m.o. se encuentren como cultivos puros en el medio
natural, esto significa que siempre o casi siempre debern estar en
competencia con otros m.o.

Competencia y cooperacin microbiana

La competencia entre m.o. por los nutrientes disponibles es muy intensa. En el

caso ms sencillo, el resultado de una interaccin competitiva depende de:
a) La tasa de incorporacin de nutrientes,
b) De las tasas metablicas inherentes.
c) De la velocidad de crecimiento.

Sin embargo, en algunos casos de competencia microbiana, un organismo

puede inhibir el crecimiento o metabolismo de otros. Esto mediante la excrecin
de inhibidores especficos, como los antibiticos, o debido a la actividad
fisiolgica de un organismo que produce un producto txico, como el cido que
resulta de la fermentacin de los azcares.

Algunos microorganismos en vez de competir por el mismo sustrato, colaboran

para llevar a cabo una transformacin determinada que ninguno de los
organismos que intervienen podra hacerla por s mismo. Este tipo de

3
interacciones microbianas se denomina sintrofa. Esta es crucial para el xito
competitivo de algunas bacterias anaerbicas (Fig. 14.30). Las relaciones
sintrficas requieren que los organismos participantes convivan en un mismo
microambiente, ya que el producto del metabolismo de uno de ellos debe ser
de fcil acceso al segundo y as sucesivamente.

Tambin se ve cooperacin metablica en las actividades de grupos

microbianos que llevan a cabo metabolismos complementarios, por ejemplo:
las bacterias nitrificantes que oxidan el NH 3 a NO3-. En este proceso, un primer
grupo de bacterias (Nitrosomonas) oxida el amoniaco a nitrito, y un segundo
grupo de bacterias (Nitrobacter), oxida el nitrito a nitrato. En los hbitats
generalmente se dan este tipo de interacciones cooperativas.

Crecimiento microbiano
En microbiologa la palabra crecimiento significa o se define como un
incremento en el nmero de clulas.

El crecimiento es un componente esencial de la funcin microbiana, ya que una

clula individual tiene un periodo de vida determinado en la naturaleza y la
especie se mantiene solamente como resultado de un crecimiento continuo de
la poblacin celular. Adems del conocimiento de las bases del crecimiento,
tambin es necesario saber como controlar ese crecimiento de la poblacin.
Esto ltimo permite disear mtodos que permitan controlar el crecimiento
poblacional microbiano.

La clula bacteriana es en esencia una mquina capaz de duplicarse as

misma. Los procesos sintticos del crecimiento celular bacteriano implican no
menos de 2000 reacciones bioqumicas de una gran variedad de tipos.

Las reacciones principales de la sntesis celular son reacciones de polimeri-

zacin, mediante las cuales se construyen los polmeros (macromolculas) a
partir de monmeros, entre estas; sntesis de DNA, RNA y de protenas. Una
vez que los polmeros estn fabricados, contina el ensamblaje de las
macromolculas y formacin de las estructuras celulares tales como, la pared
celular, membrana citoplasmtica, flagelos, ribosomas, cuerpos de inclusin,
complejos enzimticos, etc.

En la mayora de los procariotas, el crecimiento de una clula individual

continua hasta que se divide en dos nuevas clulas, este proceso de divisin
celular se denomina fisin binaria.

Durante el ciclo de crecimiento, todos los constituyentes celulares incrementan

en nmero de tal manera que cada clula hija recibe un cromosoma completo y
copias suficientes de todas las macromolculas, monmeros y iones
inorgnicos que le permitirn vivir como clula independiente.

El tiempo requerido en bacterias para completar un ciclo de crecimiento es muy

variable y dependiente de muchos factores nutricionales, fisicoqumicos y
genticos.

4
Crecimiento de poblaciones
Si el crecimiento es el incremento en el nmero de clulas microbianas en una
poblacin, esta se puede medir como un incremento en la masa microbiana.

La velocidad de crecimiento es el cambio en el nmero de clulas o masa

celular por unidad de tiempo. El tiempo requerido para que a partir de una
clula se formen dos clulas se denomina tiempo de generacin. Por lo tanto,
tiempo de generacin es el requerido para que se duplique una poblacin
celular, esto tambin se conoce como tiempo de duplicacin.

Durante una sola generacin, tanto el nmero de clulas como el de masa

celular se duplican. El tiempo de generacin vara ampliamente entre los m.o.
muchas bacterias tiene tiempos de generacin de 1-3 horas, pero las de
crecimiento muy rpido pueden hacerlo solo en 10 minutos, mientras que otras
pueden tardar das.

El tiempo de generacin (g) puede calcularse tambin de la pendiente en una

grfica semilogartmica de crecimiento exponencial como: pendiente = 0.301/g

Tiempo (horas) Nmero total de clulas

0 1
0.5 2
1 4
1.5 8
2 16
2.5 32
3 64
3.5 128
4 256
4.5 512
5 1,024
5.5 2,048
6 4,096
.. ..
10 1,48,576

5
 1000 1000

Logartmica Nmero de clulas

(escala logartmica)
Nmero de clulas
(escala aritmtica) 100

500

10

Aritmtica
100

1 2 3 4 5
Tiempo (horas)

1 x108

t = 2, n = 1
8 x 107 g = t/n = 2h
La poblacin se
duplica cada dos horas
6 x107

Pendiente
Clulas/mL 4 x10 7 = 0.15

3 x 107

2 x107
2h

1 x107
0 1 2 3 4 5
Tiempo (horas)

6
 4 x 107

Pendiente = 0.05

Clulas/mL

t = 6 horas
2 x 107 n=1
g = t/n = 6 horas

La poblacin se duplica cada 6 horas

0 1 2 3 4 5 6

Clculo de tiempos de generacin

Para muchos propsitos, en microbiologa es til conocer el tiempo de
generacin de una poblacin microbiana durante el crecimiento exponencial. El
incremento del nmero de clulas que tiene lugar en un cultivo creciendo
exponencialmente, es una progresin geomtrica del nmero 2. Debido a la
progresin geomtrica, hay una relacin directa entre el nmero de clulas
presentes en el momento inicial y el habido en un momento determinado del
crecimiento exponencial, de modo que:

N= N0 2n

Donde: N= nmero final de clulas, N 0= nmero inicial de clulas y n= nmero

de generaciones que han ocurrido durante el periodo de fase exponencial.

El tiempo de generacin (g) de la poblacin celular se calcula como t/n, donde

t son las horas o minutos de crecimiento exponencial. As; conociendo la
poblacin inicial y final es posible calcular el nmero de generaciones y a su
vez el tiempo de generacin.

Para expresar la ecuacin N= N 02n en trminos de n son necesarias las

siguientes transformaciones:
N = N02n
log N = log N0 + n log 2
log N log N0 = n log 2

n = log N log N0 = log N log N0

log 2 0.301

Con n expresada en trminos de cantidades fcilmente mesurables, N y N0 se

pueden calcular los tiempos de generacin.

7
Ejemplo: N = 108, N0 = 5 x 107 y t= 2, por tanto:

n = log 108 log (5 x 107) = 8 7.69 = 0.310 = 1.03

0.301 0.301 0.301

Por lo tanto, el tiempo de generacin (t/n) = 2/1 = 2 horas.

Conociendo n y t, se puede calcular g para diferentes m.o. creciendo

exponencial mente bajo diversas condiciones de crecimiento. El tiempo de
generacin es buen indicador del estado fisiolgico de una poblacin
microbiana. Esto frecuentemente se utiliza para ensayar el efecto positivo o
negativo de algn tratamiento sobre el cultivo microbiano.

CICLO DE CRECIMIENTO DE POBLACIONES

Mediante el establecimiento de un cultivo batch, en condiciones ptimas para el
crecimiento bacteriano, se puede representar el comportamiento de ese
crecimiento mediante grficas (fig.1), la resultante de ese comportamiento se
denomina curva de crecimiento bacteriano, en la que se pueden observar
cuatro fases bien diferencia das, a saber: latencia, exponencial, estacionaria
y muerte.

Fase de latencia
Esta puede ser larga o corta, dependiendo de diversos factores.

Si se toman clulas de un cultivo en crecimiento exponencial, y ste se inocula

en un medio fresco pero idntico en el que estaba inicialmente, se puede
observar que no hay fase de latencia, sino que el m.o. contina creciendo
exponencialmente. Pero si el inculo se toma de un cultivo viejo y se inocula en
cultivo fresco, tambin se observa que se presenta la fase de latencia.

Lo anterior pone en evidencia que:

1. Si las clulas que se inocularon en el medio fresco, provienen de un
medio diferente al fresco, las clulas primero tienen que adaptarse a
ese medio nuevo. Esto significa que est reconociendo
bioqumicamente a su nuevo nicho ecolgico, por lo que es posible que
necesite o requiera de la participacin de algunas sustancias o
componentes qumicos (generalmente enzimas especficas) para llevar a
cabo reacciones fundamentales que le permitan iniciar su actividad
metablica y crecimiento. Por lo que es en esta fase cundo dichos
componentes se sintetizan ya sea a partir de materiales de reserva de la
clula o bien, tomando directamente a estos o sus precursores del
medio de cultivo.
2. Esto tambin es vlido para las clulas provenientes del cultivo viejo.
Solo que en este caso, las clulas si contaban con dichas sustancias o
componentes, pero es posible que al tomar estas clulas, an cuando
todas sean viables, en las ltimas fases del crecimiento esas sustancias
pudieron ser modificadas por el metabolismo secundario, lo que les hizo
perder su actividad especfica. Por lo tanto, tambin ellas requieren
resintetizar dichas sustancias.

8
 3. esta fase de latencia tambin se presenta cuando las clulas utilizadas
han sido daadas por tratamientos, por ejemplo: calor, radiaciones,
txicos, entre otros. En este caso, primero la clula tiene que reparar
todos los daos sufridos, siempre y cuando esto sea posible. Adems
tendr que hacer todo el trabajo descrito en los casos anteriores.
4. cuando se transfieren clulas de un medio rico a uno ms pobre,
tambin la clula requiere tiempo para sintetizar las nuevas enzimas que
le permitan utilizar los compuestos que estn presentes en este medio
de cultivo.

Fase exponencial
La mayora de los m.o. unicelulares crecen en forma exponencial, pero las
velocidades de este tipo de crecimiento pueden variar esencialmente. Esta
velocidad de crecimiento es afectada por factores externos o ambientales y por
las caractersticas genticas del m.o. en general los procariotas crecen ms
rpido que los eucariotas, y los eucariotas pequeos, ms rpido que los
grandes.

Fase estacionaria
En un sistema en el que el medio de cultivo no se renueva (caracterstica
principal del cultivo batch), el crecimiento exponencial no puede transcurrir
indefinidamente. Si esto fuera as, se ha calculado que una sola clula con un
tiempo de generacin de 20 minutos, si continuara su crecimiento a ese ritmo
durante 48 horas, producira una poblacin bacteriana equivalente a
aproximadamente 4000 veces el peso de la tierra. Esto es impresionante si
adems, consideramos que el peso de una clula bacteriana es de una
billonsima de gramo (10-12 g). Obviamente, es imposible mantener este ritmo
de crecimiento.

Lo que sucede en esta fase es que:

1. Un nutriente esencial del medio de cultivo se agota, lo que disminuye el
ritmo de crecimiento hasta que este se detiene.
2. Algn producto de desecho se acumula en el medio hasta alcanzar una
concentracin que se vuelve inhibitoria del crecimiento exponencial.

En este estadio del crecimiento, no hay aumento o disminucin neta de clulas.

Sin embargo, auque aparentemente ya no hay crecimiento, el metabolismo no
se ha detenido por completo, lo que significa que todava hay funciones
celulares importantes, incluso degradacin de sustratos y procesos de
biosntesis de algunas molculas complejas.

En algunos organismos puede haber crecimiento a ritmos muy lentos, en la que

algunas clulas crecen y otra mueren manteniendo el balance de crecimiento
neto nulo, este crecimiento, cuando se presenta se conoce como crecimiento
crptico.

Para que las clulas bacterianas puedan sobrevivir, es necesario que tengan
en su DNA, genes que permitan mantener la viabilidad de la clula en esta
fase. Esto se ha comprobado en estudios con E. coli debido a que en la

9
naturaleza muchas clulas bacterianas no crecen o lo hacen muy despacio, no
es sorprendente que hayan evolucionado diversos genes implicados en la fase
estacionaria de crecimiento.

Fase de muerte
Si la incubacin del medio de cultivo contina despus que la poblacin
alcanza la fase estacionaria, las clulas pueden permanecer vivas y
metablicamente activas, pero tambin deben morir. Si lo ltimo ocurre, la
poblacin entra en fase de muerte. En algunos casos esta va acompaada de
lisis celular. Se puede observar que la fase de muerte de un ciclo de
crecimiento tambin es una funcin exponencial, sin embargo en la mayora de
los casos, la velocidad de muerte es mucho ms lenta que el crecimiento.

Es importante recalcar que los acontecimientos que se consignan y repre-

sentan mediante la curva de crecimiento tpico bacteriano, corresponde a
poblaciones celulares o bacterianas, no a clulas individuales. Por lo tanto, los
trminos fase de latencia, exponencial, estacionaria y de muerte no son
aplicables a clulas individuales, sino a poblaciones de individuos.

MEDICIN DEL CRECIMIENTO

Una poblacin microbiana se puede medir en funcin de los cambios en el

nmero de clulas o el peso de la biomasa celular.

Existen diversos mtodos para hacer las determinaciones de ambos

parmetros, considerando el tipo de microorganismo de que se trate.

Contaje total de clulas

El nmero de clulas se puede contar directamente con ayuda de un
microscopio y una cmara especial. El valor que nos da este mtodo es No de
clulas por ml (cel/ml). Esta es una manera rpida de estimar el nmero de
clulas microbiana, sin embargo; tiene algunos inconvenientes:
1. Las clulas muertas no se distinguen de las vivas.
2. Las clulas pequeas son difciles de ver al microscopio, y algunas de
ellas probablemente no se cuenten
3. Se requiere tiempo y habilidad para conseguir precisin por este
mtodo.
4. Se requiere un microscopio de contraste de fases cuando la muestra no
est teida.
5. Este mtodo no es bueno para una suspensin de clulas poco densa.

Las muestras diluidas pueden contarse si previamente se concentran por

centrifugacin en un volumen pequeo.

Contaje de clulas viables

En este mtodo solo se contarn aquellas clulas que sean viables,
entendiendo como viables aquellas clulas capaces de dividirse para formar
descendencia, lo que significa que pueden formar colonias sobre la superficie
de un medio de cultivo slido. Por esta razn a este mtodo tambin se le
denomina contaje en placa o contaje de colonias. El fundamento que valida a

10
este mtodo es el razonamiento de que cada clula viable puede originar una
colonia.

Hay dos formas de llevar a cabo este mtodo:

Siembra en superficie y
Vertido en placa

Siembra en superficie: para este mtodo, la cantidad de muestra que

normalmente se utiliza es de 0.1 ml de una dilucin que se considere
conveniente. Este volumen de muestra se extiende por toda la superficie del
medio mediante una varilla de vidrio estril en forma de L. Se recomienda que
la superficie de siembra est seca para que permita que la muestra
rpidamente se adhiera, de lo contrario, un exceso de humedad puede
provocar que al crecer las colonias se junten por efecto de escurrimiento
dificultando diferenciar las colonias que se formaron. La placa se incuba en las
condiciones y tiempo que sean las apropiadas para el o los organismo en
cuestin. Una vez que se observan las colonias bien desarrolladas, se procede
a hacer el contaje de todas las colonias que aparecieron.

Vertido en placa: el volumen que se utiliza en este mtodo puede ser de 0.1 a
1.0 ml de una dilucin decimal, o ms si se cree conveniente, ya que el medio y
la muestra se mezclan y posteriormente se vacan en la placa. Una variante de
este mtodo puede ser el que primero se vace la muestra dentro de la caja de
Petri, y posteriormente se vace el medio de cultivo fundido a una temperatura
de 40 a 45C, moviendo la caja de tal manera que facilite el mezclado de la
muestra y el medio de cultivo (en la primera forma, tambin el medio debe
tener esta temperatura). Los organismos que se siembren por este mtodo
deben soportar la temperatura del medio de cultivo (40 a 45C). La caja se lleva
a incubar y se cuentan las colonias en la misma forma que en el mtodo
anterior.

Para estos dos mtodos, es indispensable que el nmero de colonias que

desarrollen, no debe ser muy elevado ni muy escaso, para que este sea
representativo y con validez estadstica. El nmero que se considera adecuado
debe ser entre 30 y 300 colonias por placa. Por otro lado, la muestra siempre
debe proceder de una dilucin decimal, para facilitar los clculos a realizar.

Fuentes de error en el mtodo de contaje en placa.

El nmero de colonias obtenido en un contaje viable depende, adems del
tamao del inculo, del medio de cultivo, las condiciones de incubacin y el
tiempo de incubacin. Los microorganismos no desarrollan sus colonias al
mismo tiempo, por lo que si se mantiene un tiempo de incubacin corto, no se
permitir que todas las colonias posibles se desarrollen. Por otro lado, el
tamao de las colonias vara ampliamente, por lo que las muy pequeas
pueden no ser contadas. Para evitar estos errores, es recomendable fijar las
condiciones de incubacin (medio de cultivo, temperatura y tiempo) que
permitan obtener el nmero mximo de colonias que potencialmente pueden
ser generadas por los organismos presentes en la muestra problema. Otra
precaucin que se debe considerar es la de hacer repeticiones de las placas a

11
sembrar, de preferencia nmeros impares (3, 5, 7) de cada una de ellas, segn
se crea conveniente.

Para evitar confusiones al reportar el nmero de microorganismos en una

muestra problema, se recomienda expresar los resultados de cuenta viable
como unidades formadoras de colonias/ g ml. (UFC/g o mL) Esto debido a
que una colonia puede haber sido formada por ms de una clula viable.

Medidas de masa celular y turbidez

Masa celular: En algunos casos es ms recomendable por el trabajo en
particular, determinar la masa celular presente en el cultivo que el nmero de
clulas. Sin embargo, como la masa celular es proporcional al nmero de
clulas, determinando un parmetro se puede estimar el otro.

La masa celular neta se puede medir centrifugando un volumen conocido y

simplemente pesar el precipitado. El peso puede ser expresado como peso
hmedo o bien, peso seco; que es la forma ms utilizada. La masa seca de las
clulas bacterianas es aproximadamente entre el 10 y el 20% de la masa
hmeda.

Medidas de turbidez: Una forma ms rpida para obtener una estimacin del
nmero de clulas o biomasa consiste en medir la turbidez de una suspensin
celular bacteriana. Una suspensin de estos organismos aparece turbia porque
las clulas dispersan la luz que atraviesa la suspensin. Cuantas ms clulas
haya, ms luz se dispersa y ms turbia aparece la suspensin. Este fenmeno
puede medirse utilizando un fotmetro o un espectrofotmetro, ambos aparatos
hacen pasar la luz a travs de la suspensin celular y miden la luz no
dispersada. La diferencia entre ambos aparatos, es el aditamento que
selecciona la luz incidente. El fotmetro utiliza un filtro simple de color
(normalmente rojo, verde o azul) para generar la luz incidente que es de
longitud de onda relativamente ancha. El espectrofotmetro utiliza un prisma o
red de difraccin para generar luz incidente de banda estrecha. Sin embargo,
ambos aparatos solo miden luz no dispersada, expresando los resultados en
unidades fotomtricas para un fotmetro o unidades de densidad ptica (DO)
para espectro fotmetros.

Para organismos unicelulares, las unidades fotomtricas son proporcionales

(dentro de ciertos lmites) a la masa celular y tambin al nmero de clulas. Por
tanto las medidas de turbidez pueden utilizarse como un sustituto para otros
mtodos de contaje. Antes de utilizar la turbidez como mtodo de contaje, hay
que realizar una curva estndar que relacione medidas directas (microscpicas
o por recuento en placa) con las indirectas de turbidez. Estas curvas contienen
datos para nmero de clulas y masa celular, permitiendo la estimacin de
ambos parmetros a partir de una sola medida de turbidez.

Se debe tener cuidado con las muestras que se van a leer por este mtodo, ya
que si estn muy concentradas en clulas, la correspondencia de uno a uno
entre turbidez y nmero de clulas, se pierde. Sin embargo, dentro de ciertos
lmites, las medidas de turbidez pueden ser razonablemente precisas, adems

12
de ser rpidas y fciles de tomar. Las medidas de turbidez no distorsionan
mucho las muestras. Debido a esto, las medidas de turbidez se utilizan
ampliamente para seguir el crecimiento de los cultivos microbianos. Se puede
medir repetidamente la misma muestra y se pueden construir grficas
semilogartmicas para calcular tiempos de generacin.

CULTIVO CONTINUO

En las primeras fases de un cultivo tipo batch o monofsico, las condiciones

pueden ser ms o menos constantes, pero en fases ms avanzadas cuando el
nmero de clulas es muy grande, se dan cambios drsticos en el medio de
cultivo. Para algunos tipos de estudios microbianos, es deseable mantener los
cultivos en condiciones constantes durante periodos de tiempo prolongados.
Esto se logra mediante un tipo de cultivo denominado cultivo continuo.

Un cultivo continuo es en esencia un cultivo a volumen constante al que se le

aade medio fresco y del que rebosan clulas y medio usado. Una vez que se
alcanza el equilibrio, el nmero de clulas y el estadio metablico se mantienen
constantes, esto significa que se ha alcanzado el estado de equilibrio.

El quimiostato
El sistema ms comn de cultivo continuo se denomina quimiostato, que
permite el control de la densidad de la poblacin y la velocidad de crecimiento
del cultivo.

Se usan dos elementos de control en este sistema: la velocidad de dilucin y

la concentracin de un nutriente limitante, tales como la fuente de carbono o
de nitrgeno. En un cultivo tipo batch, la concentracin del nutriente puede
afectar tanto la velocidad de crecimiento como la produccin del
microorganismo.

13
 8.0 mg/mL

6.0 mg/mL
Nmero de clulas o masa

4.0mg/mL

2.0 mg/mL

1.0 mg/mL

0.5 mg/mL

0.2 mg/mL

0.1mg/mL

Tiempo

Relacin entre la concentracin de nutriente, la velocidad de crecimiento, y

el mximo rendimiento o cosecha mxima a diferentes concentraciones de
nutrientes

Produccin Solo la produccin est afectada

y vel. Estn
afectados

Velocidad de
crecimiento Crecimiento
( ______ ) (----------)

0 1 2 3 4 5

Concentracin de nutrientes (mg/mL)

A concentraciones muy bajas de un nutriente especfico, la velocidad de

crecimiento se reduce probablemente porque ste no puede ser transportado

14
 hacia el interior de la clula con la velocidad requerida para un metabolismo
activo, mientras que a concentraciones moderadas o altas del mismo nutriente
las velocidades de crecimiento no son afectadas y la productividad contina
incrementndose.

Al contrario que en los cultivos batch, en un quimiostato la velocidad de

crecimiento y la produccin celular pueden controlarse independientemente. La
velocidad de crecimiento se ajusta con la velocidad de dilucin y la produccin
celular variando la concentracin del nutriente limitante.

Los lmites en los que la velocidad de dilucin controla la velocidad de

crecimiento son muy amplios, aunque a diluciones muy bajas o muy altas el
equilibrio se rompe.

A velocidades de dilucin muy altas, el organismo no puede crecer

suficientemente rpido para igualar a la velocidad de dilucin por lo que se dice
que el cultivo es lavado del quimiostato. En el extremo opuesto, a velocidades
de dilucin muy bajas, una fraccin importante de la poblacin celular puede
morir por falta de nutriente dentro del quimiostato. Probablemente hay una
cantidad de energa mnima necesaria para mantener la integridad y estructura
celular denominada energa de mantenimiento, de tal manera que los
nutrientes utilizados para ello, no estn disponibles para la biosntesis y
crecimiento celulares. Por lo tanto, a velocidades de dilucin muy bajas el
equilibrio tambin se rompe y la poblacin celular es lavada.

Debido a que el nutriente limitante rpidamente es consumido, su

concentracin es virtualmente cero hasta que se consiguen velocidades de
dilucin muy altas, momento en que el cultivo comienza a ser lavado.

La densidad celular (clulas/ml) en el quimiostato est controlada por el nivel

de nutriente limitante, de igual manera que la biomasa celular est controlada
en el cultivo monofsico.

Si la concentracin de este nutriente en el medio entrante se eleva,

manteniendo constante la velocidad de dilucin, la densidad celular se
incrementar aunque la5 velocidad deProduccin de bacterias
crecimiento
permanecer constante y la
Concentracin bacteriana en equilibrio (g / l)

10
concentracin de nutriente en el cultivo virtualmente ser cero. Por lo tanto,
Concentracin bacteriana en equilibrio
ajustando la velocidad de dilucin y la concentracin de nutrientes, se pueden
Produccin de bacterias (g / l / hr)

obtener una gran variedad de densidades poblacionales creciendo a diferentes 6

Conc de
8
velocidades de crecimiento
4 especficas. La forma de la curva que se origine, Tiempo de
sustrato
depender
en del organismo, de las condiciones ambientales, y de las generacin
concentraciones
equilibrio de nutriente limitante. (hr)
(g/l) 6 3
4
Crecimiento
4 2 Tiempo de
generacin 2

2 1
Lavado

0 0
0.5 1.0
15
Velocidad de dilucin (hr)
 Relaciones existentes en estado de equilibrio de un quimiostato. La velocidad de
dilucin viene determinada por la velocidad de salida y por el volumen del vaso.
As, con un vaso de 1000ml y una salida de 500ml/h, la velocidad de dilucin sera
de 0.5h-1 Ntese que a altas velocidades de dilucin, el crecimiento no puede
equilibrarla y la poblacin celular es lavada; a su vez, la concentracin de
sustrato en el vaso se incrementa hasta alcanzar la del reservorio. Sin embargo, a
travs de la mayor parte de las diluciones que se muestran, la densidad celular
permanece constante y la concentracin de sustrato a baja concentracin. Ntese
tambin que aunque la densidad poblacional permanezca constante, la velocidad
de crecimiento vara en un amplio rango. As, el experimentador puede obtener
poblaciones con velocidades de crecimiento muy variables, sin por ello afectar a
la densidad poblacional.

EFECTO DE FACTORES AMBIENTALES SOBRE EL CRECIMIENTO

Las actividades microbianas se ven muy afectadas por las condiciones

fisicoqumicas del ambiente. El conocimiento de estas influencias sobre los
m.o., nos ayuda a explicar su distribucin en la naturaleza, y a disear mtodos
para su control o su destruccin, si fuera necesario.

No todos los microorganismos responden de igual forma a una condicin

ambiental en particular, lo que para un organismo puede ser daino, para otro
puede ser beneficiosa. Los organismo pueden tolerar algunas condiciones
adversas, que rebasadas no les permiten crecer.

Dejando de lado las relaciones interespecficas en las comunidades

microbianas naturales, el ambiente puede afectar significativamente sus
capacidades metablicas y en consecuencia su crecimiento. Los factores ms
importantes son: temperatura, pH, disponibilidad de agua y oxgeno.

Efecto de la temperatura sobre el crecimiento microbiano

La temperatura es uno de los factores ambientales que ms afecta el
crecimiento y a la supervivencia microbiana.

Puede afectar a los microorganismos de dos formas diferentes:

A medida que la temperatura sube, las reacciones enzimticas son ms

rpidas y el crecimiento se hace ms rpido. Sin embargo, por encima de
una cierta temperatura las protenas, cidos nucleicos y otros componentes
celulares pueden daarse irreversiblemente. Por encima de este punto las
funciones celulares paran.

Por lo tanto para cada m.o. existe:

1. Una temperatura mnima por debajo de la cual no existe crecimiento.
2. Una temperatura ptima a la cual el crecimiento es lo ms rpido
posible.
3. Una temperatura mxima rebasada sta, no existe crecimiento.

La temperatura ptima siempre est ms cerca de la mxima que de la mnima,

estas tres temperaturas se denominan temperaturas cardinales, son

16
caractersticas de cada organismo y pueden varias ligeramente de acuerdo con
la composicin del medio de cultivo.

La temperatura mxima de crecimiento refleja una actividad inhibitoria por

desnaturalizacin de componentes celulares importantes. Sin embargo, los
factores que controlan la temperatura mnima de crecimiento no estn
suficientemente claros. Lo que se cree actualmente con base en evidencias
experimentales, es que la inhibicin del crecimiento se puede deber a
fenmenos de tipo fsico que se dan en la membrana citoplasmtica. Se sabe
que sta debe ser fluida o tener cierto grado de fluidez para que sus funciones
metablicas se den adecuadamente. Al disminuir demasiado la temperatura las
molculas estructurales de ella pierden movilidad, lo que se refleja en un
transporte deficiente de nutrientes al interior celular, as como la formacin del
gradiente protnico. Como resultado se tiene que el crecimiento es muy lento o
se detiene por completo.

Efecto de la temperatura sobre la velocidad de crecimiento y las

consecuencias moleculares para la clula.

Las reacciones enzimticas

tienen lugar a la mxima
velocidad posible.

ptimo
Las reacciones enzimticas
tienen lugar a velocidades en
constante aumento.
Velocidad
de
crecimient
o
Mnimo

Mximo

La membrana se gelifica; el transpor Temperatura Desnaturalizacin proteica;

te a travs de ella es tan lento que no colapso de la membrana cito
hay crecimiento. plasmtica, lisis trmica.

Las temperaturas cardinales para diferentes microorganismos difieren

enormemente. Algunos m.o. tienen temperaturas tan bajas como 5 a 10C y
otros hasta 100C. De hecho, el abanico de temperaturas es mucho ms
amplio que este, ya que va desde puntos por debajo de la congelacin del agua
hasta 110C. El rango habitual de crecimiento es de unos 30C (en temperatura
mxima y mnima), aunque esto no es constante para todos los m. o.

17
 Clasificacin segn la temperatura de crecimiento

En trminos de la temperatura de crecimiento ptima, es posible distinguir

cuatro grupos microbianos:

1. Psicrfilos: con temperaturas ptimas bajas.

2. Mesflios: con temperaturas ptimas medianas
3. Termfilos: con temperaturas ptimas ms altas
4. Hipertermfilos: con temperaturas ptimas muy altas.

Los mesfilos se encuentran en animales de sangre caliente o en ambientes

temperados y tropicales. Los psicrfilos y termfilos se encuentran en
ecosistemas Inusualmente fros y calientes, respectivamente, y los
hipertermfilos se encuentran en hbitats muy concretos como son: giseres y
fuentes termales abisales.
Relacin de la temperatura y velocidades de crecimiento de un psicrfilo, un
mesfilo, un termfilo y dos hipertermfilos. En la grfica se indican las
temperaturas ptimas de esos organismos

Ejemplo de hipertermfilo:
Ejemp. de Pyrodictium brockii
Ejemplo de termfilo: B. hipertermfilo:
stearothermophilus Thermococcus celer

Ejemplo de
mesfilo: E. coli
Velocid
ad de Ejemplo de
crecimi psicrfilo:
ento Flavobacterium
sp.

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120

Temperatura (C)

Un microorganismo psicrfilo se puede definir como: aquel con una

temperatura ptima de crecimiento de 15C o ms baja, una mxima por
debajo de 20C y una mnima de 0C o menor. Los organismos que crecen a
0C pero cuya temperatura ptima se encuentra entre 20 40C se denominan
psicrotolerantes.

18
Microorganismos psicrfilos
Por lo anterior, los m.o. psicrfilos se encuentran en ambientes
permanentemente fros y mueren rpidamente si se exponen a temperaturas
ambientes ms altas. Por esta razn, su estudio es difcil ya que para hacerlo
se deben conservar en el laboratorio las condiciones de temperatura fra para
evitar alteraciones en estos m.o.

Los m.o. psicrotolerantes estn mucho ms ampliamente distribuidos que los

psicrfilos puros y pueden aislarse del suelo y aguas de climas temperados as
como de la carne, leche y otros productos lcteos, sidra, vegetales y frutas
almacenadas en refrigeracin (4C). Los m.o. psicrotolerantes crecen mejor
entre 20 40C. Debido a que las temperaturas ambientales se caldean en
verano, normalmente los psicrotolerantes excluyen a los verdaderos psicrfilos
en climas temperados. Aunque los psicrotolerantes crecen a 0C, lo hacen muy
deficientemente, por lo que hay que esperar varias semanas antes que sea
visible su crecimiento. En este grupo se incluyen gneros de bacterias, hongos,
algas y protozoos.

Los psicrfilos producen enzimas que funcionan ptimamente a temperaturas

fras y que se desnaturalizan rpidamente a temperaturas mesfilas. En los
psicrfilos se observa transporte activo en su membrana, esto indica que la
composicin de esta difiere con la de los mesfilos. De hecho estas
membranas contienen una mayor proporcin de cidos grasos insaturados, lo
que ayuda a mantener la semifluidez de la membrana a bajas temperaturas.
Los lpidos de algunas bacterias psicrfilas tambin contienen cidos grasos
poliinsaturados e hidrocarburos de cadena larga y dobles enlaces mltiples.

Es conveniente aclarar que aunque el fro en general previene el crecimiento

microbiano, esto no significa necesariamente muerte celular. Por otro lado, el
medio en que se encuentren las clulas bacterianas influye o afecta su
sensibilidad al fro. Existen sustancias qumicas que en ciertas concentraciones
en el medio logran penetrar al interior de la clula y evitan daos a sta al
prevenir la formacin de cristales de hielo en su interior. La adicin de estos
compuestos (glicerol y dimetilsulfxido) conocidos como crioprotectores es la
forma habitual de conservar cultivos microbianos a temperaturas muy bajas (-
70 a 196C)

Microorganismos termfilos e hipertermfilos

Los organismos con temperaturas ptimas por encima de 45C se denominan
termfilos y los que tienen temperaturas ptimas por encima de 80C se llaman
hipertermfilos. Estas temperaturas solo las vamos a encontrar en ciertas
reas. Algunos suelos con fuerte insolacin pueden alcanzar fcilmente los
50C a medioda e incluso llegar a los 70C. Algunos materiales en
fermentacin como las compostas y ensilados fcilmente alcanzan los 60
65C. Aunque las temperaturas extremas estn asociadas con actividad
volcnica.

Muchos arroyos calientes estn prximos al punto de ebullicin del agua (99C
al nivel del mar). A medida que el agua corre se va enfriando originando un
gradiente de temperatura. A lo largo de este gradiente crecen varios

19
microorganismos, con diferentes especies creciendo en un amplio rango de
temperaturas. Con base en estudios realizados en estos gradientes y en
diferentes partes del mundo, es posible determinar el lmite superior de
temperatura para cada clase de organismos. De esta informacin se puede
concluir que:

1. Los organismos procariotas en general, son capaces de crecer a

temperaturas ms altas que los eucariotas.
2. Las especies ms termoflicas de todos los procariotas son ciertas
Archaea.
3. Los organismos no fototrficos son capaces de crecer a temperaturas
ms altas que los fototrofos. Debemos aclarar que no todos los
organismos de un mismo grupo son capaces de crecer cerca del lmite
superior, sino solamente unos cuantos.

Las enzimas y otras protenas de estos organismos son mucho ms estables al

calor que las de los mesfilos, funcionando ptimamente a temperaturas altas.
La estabilidad trmica de estas protenas se debe a la presencia de algunos
aminocidos diferentes en su secuencia de aminocidos y cambios pequeos
aminoacdicos en algunos puntos clave, permiten un plegamiento diferente de
la cadena polipeptdica, dando como resultado la resistencia al calor, aunque
en realidad esto es en ltimo trmino, el responsable de esta caracterstica.

La estabilidad trmica de las protenas de estos m. o. tambin est influenciada

por la formacin de puentes salinos, y un empaquetamiento altamente
hidrofbico del interior de las protenas. Por otro lado, la maquinaria
biosintetizadora de protenas de estos organismos es tambin estable al calor.
Lo mismo ocurre con la membrana citoplasmtica. A diferencia de los
psicrfilos, las membranas de los termfilos son ricas en cidos grasos
saturados, lo que permite que se mantengan funcionales a altas temperaturas.
Los cidos grasos saturados permiten la formacin de enlaces hidrofbicos
ms estables.

Los hipertermfilos no contienen cidos grasos en sus membranas, en su lugar

se encuentran hidrocarburos de cadena larga formados por unidades
repetitivas de fitano, unidos por un enlace ter al glicerofosfato.

La importancia desde el punto de vista industrial de las posibles aplicaciones o

usos de estos microorganismos, se centra en el aislamiento de las enzimas una
vez propagado el m.o. en reactores industriales, ya que debido a su resistencia
trmica la aplicacin de stas en procesos biotecnolgicos, ha demostrado ser
mucho ms ventajosos que las enzimas obtenidas de organismos mesfilos.

Acidez y alcalinidad (pH) acidez y alcalinidad

La acidez o alcalinidad de un medio se expresa en una escala en la que el
punto neutro es pH 7. Por lo tanto, los valores por debajo de 7 son cidos y por
arriba de 7 son bsicos o alcalinos. Lo importante de la escala de pH es que es
una funcin logartmica, esto significa que por cada unidad que cambia el pH el
cambio real es de 10 veces de una unidad a la siguiente en concentracin de
hidrogeniones.

20
pH y crecimiento microbiano
Cada organismo tiene un rango de pH dentro del que puede crecer y tambin
posee un pH ptimo definido. La mayora de los ambientes naturales tienen
valores de pH entre 5 y 9, por lo que la mayora de los grupos microorganismos
se encuentran creciendo dentro de este rango. Solo pocas especies pueden
crecer a pH inferior a 2 o mayor de 10.

Los microorganismos que crecen sin dificultad en condiciones cidas (pH bajo),
se denominan acidfilos, en este grupo se encuentran los hongos
principalmente, ya que estos son ms tolerantes a condiciones cidas que las
bacterias. La mayora de ellos crecen ptimamente a pH 5 o ms, pero pocos
lo hacen a menos de 2. Tambin existen bacterias acidfilas, de hecho algunas
son acidfilas obligadas, incapaces de crecer a pH neutro. Entre ellas se
encuentran bacterias del gnero Thiobacillus, y diversos gneros de Archaea
entre ellos se encuentran Sulfolobus, Thermoplasma.

Algunas especies de Thiobacillus y Sulfolobus tienen la propiedad de oxidar

compuestos sulfurados para producir cido sulfrico.

Probablemente el factor ms crtico para la acidofilia obligada sea la membrana

citoplasmtica, se ha observado en estos microorganismos que si su medio se
lleva a la neutralidad, la membrana se disuelve y la clula muere. Esto sugiere
la necesidad de altas concentraciones de hidrogeniones para la estabilidad
membranal.

Algunos microorganismos tienen pH ptimo entre 10 y 11 y a estos se les

conoce como alcalfilos, estos organismos se encuentran habitualmente en
suelos carbonatados y lagos bicarbonatados. La mayora de estos
microorganismos pertenecen al gnero Bacillus. Algunos tambin son
haloflicos. Estos organismos son de inters industrial debido a que producen
proteasas alcalinas que se emplean como suplementos en detergentes.

Es interesante observar, que independientemente del pH que impere en el

medio ambiente que rodea al microorganismo, el pH intracelular debe
permanecer cercano a la neutralidad, esto con la finalidad de proteger de la
descomposicin a las macromolculas lbiles en condiciones cidas o
alcalinas.

En los acidfilos o alcalfilos extremos, el pH intracelular puede variar entre 1 y

1.5 unidades respecto a la neutralidad, pero para la mayora de los
microorganismos cuyo pH extremo est entre 6 y 8, conocidos como
neutrfilos, el pH del citoplasma es neutro o casi neutro.

Buffer o tampones
En un cultivo en el que el medio no se renueva, el pH puede cambiar como
resultado de la actividad metablica. Por esto, regularmente se emplea
tampones para mantener constante el pH del medio de cultivo. Estas
sustancias solo funcionan regulando el pH en rangos estrechos, por lo que para
valores diferentes de pH, es necesario utilizar diferentes tampones.

21
DISPONIBILIDAD DE AGUA

Todo organismo viviente requiere agua para que pueda realizar todas sus
actividades en condiciones adecuadas. Los microorganismos no son la
excepcin.

La disponibilidad de agua no solo depende de que tan hmedo o seco se

encuentre el ambiente o hbitat determinado, sino tambin de la concentracin
de solutos disueltos que se encuentre en ella, ya que toda el agua que se
encuentra asociada con los solutos, no est disponible para los
microorganismos.

Actividad de agua y smosis

La disponibilidad del agua se expresa en trminos fsicos como actividad del
agua (aw).

Aw es el resultado de la presin de vapor del aire en equilibrio con una

sustancia o solucin / presin de vapor, a la misma temperatura del agua pura.
Por lo tanto, sus valores varan entre 0 y 1. La aw en suelos agrcolas oscila
entre 0.90 y 1.00.

El agua difunde desde una regin de baja concentracin de solutos hacia una
de alta concentracin, este proceso se denomina smosis. Por lo general, el
citoplasma celular posee mayor concentracin de solutos que el medio exterior,
por lo que el agua tiende siempre a difundir hacia el interior de las clulas, lo
que significa que existe un balance de agua positivo. Cuando una clula se
encuentra en un ambiente con baja aw, existe una tendencia a salir agua de la
clula. Es la razn por la cual en conservacin de algunos alimentos se utiliza
concentraciones elevadas de sal o azcar para provocar el fenmeno de salida
de agua de la clula y se de la plasmlisis.

Los microorganismos que se aslan del mar o ambientes similares, tienen

normalmente requerimientos especficos para el sodio, estos organismos se
denominan halfilos. El crecimiento de estos m.o. requiere al menos algo de
NaCl, aunque la concentracin ptima vara de un m.o. a otro.

Los microorganismos halotolerantes pueden soportar cierta reduccin de la aw,

de sus ambientes, pero generalmente crecen mejor en ausencia de cualquier
soluto que reduzca significativamente la aw.
Sin embargo, existen microorganismos que se caracterizan por su capacidad
para vivir y crecer en condiciones de altas concentraciones de solutos,
particularmente NaCl. Esta caracterstica es muy importante sobre todo, en la
industria alimentaria relacionada con la conservacin de alimentos, en las que
se utiliza la sal o azcar como aditivos en alimentos para impedir el crecimiento
microbiano.

Microorganismos moderadamente halfilos son aquellos que requieren entre

6 a 15% de NaCl.

22
Microorganismos discretamente halfilos son los que solo requieren entre 1 a
6% de esta sal.

Los microorganismos capaces de crecer en ambientes con muy alta

concentracin salina se denominan halfilos extremos, ya que requieren de
15 a 30% de NaCl para crecimiento ptimo.
Los microorganismos capaces de crecer en ambientes con altas
concentraciones de azcar se llaman osmfilos y los que crecen en ambientes
muy secos (por falta de agua) se denominan xerfilos.

Solutos compatibles
Cuando los microorganismos pueden crecer en condiciones de baja aw, solo
podr obtener agua del medio ambiente para llevar a cabo sus reacciones
metablicas, aumentando la concentracin intracelular de solutos. Esto lo
pueden realizar de dos formas, una es bombeando iones del exterior hacia el
interior celular o bien, sintetizando o concentrando un soluto orgnico.

Los solutos que se acumulen en el citoplasma para ajustar su actividad de

agua, no deben ser inhibitorios para la actividad celular, por esta razn se
denominan solutos compatibles. Todas estas sustancias se caracterizan por
ser muy solubles en agua, entre ellas se encuentran azcares, polialcoholes,
aminocidos y derivados y en el caso de los halfilos extremos el in K+.

Los solutos compatibles pueden ser sintetizados directamente por los m.o. o
bien, tomados y concentrados del exterior. La concentracin de los solutos
compatibles est en funcin de los solutos extracelulares. En cada organismo
la cantidad mxima sintetizada o acumulada est determinada genticamente.

OXGENO

Los microorganismos varan en sus necesidades o tolerancia al oxgeno. En

funcin de esta caracterstica, se pueden dividir en diversos grupos:

1. Aerobios: pueden crecer con tensiones de oxgeno total (21% en la

atmsfera), incluso; soportar concentraciones ms altas.
2. Microaerfilos: son aerobios que pueden utilizar este gas solo cuando
su tensin es menor a la del aire. Esto puede ser por su limitada
capacidad para respirar o porque contiene alguna molcula o enzima (s)
sensibles al oxgeno.
3. Anaerobios: estos organismos se caracterizan por carecer de sistema
respiratorio, por lo que no pueden utilizar el oxgeno como aceptor final
de electrones.
a. Anaerobios tolerantes: pueden tolerar el oxgeno y crecer en
presencia de l an cuando no puedan utilizarlo.
b. Anaerobios estrictos: estos organismos no pueden tolerar el
oxgeno por lo que mueren en su presencia. Esto probablemente
se deba a que son incapaces de eliminar algn producto txico

23
 derivado del metabolismo del oxgeno. Cuando se reduce el
oxgeno se producen algunos elementos txicos tales como el
perxido de hidrgeno (H 2O2), superxido (O2-) y radicales
hidroxilo (OH*). Muchos m.o. anaerobios obligados son ricos en
enzimas flavnicas, que reaccionan espontnea mente con el
oxgeno para dar este tipo de compuestos txicos. Los aerobios
poseen enzimas que descomponen los productos txicos.
Estas no se encuentran en los anaerobios.

Enzimas que actan sobre los compuestos txicos derivados del

oxgeno:

Catalasa:
H2O2 + H2O2 2 H 2O + O 2
Peroxidasa:
H2O2 + NADH + H+ 2 H2O + NAD+
Superxido dismutasa:
O2- + O2- + 2H+ H2O2 + O2
Superxido dismutasa / Catalasa:
4 O2- + 4H+ 2 H2O + 3 O2

24