Ingeniera Agroindustrial

GUIA DE DETERMIANCIONDE INDICE DE REFRACCION DE SUERO

1. INTRODUCCION
El grado refractomtrico del suero obtenido de la leche se utiliza para determinar la presencia
de agua agregada en la leche. Si se ha aadido agua la proporcin de las sales solubles de la
leche disminuir en el suero por lo que el grado refractomtrico disminuir tambin.

Cuando una radiacin electromagntica alcanza un medio material, el

vector campo elctrico de la radiacin interacciona con los tomos y molculas
del medio, pudiendo dicha radiacin ser transmitida, absorbida o dispersada.

Experimentalmente, se ha observado que la velocidad con que se propaga

la radiacin a travs de una sustancia transparente, es menor que su velocidad
en el vaco y depende adems de las especies y concentracin de los tomos,
iones o molculas, pero no observndose variacin en la frecuencia de la
radiacin.

Entre los distintos mtodos para la determinacin del contenido proteico de

fluidos biolgicos (fundamentalmente, suero sanguneo), el de refractometra es
uno de los ms utilizados, cuando no se precisa una elevada exactitud.

El ndice de refraccin del agua a 20 C (n=1.3330) se incrementa con una

cierta proporcionalidad con la concentracin de soluto en diluciones acuosas de
concentracin moderada. Este hecho ha encontrado aplicacin clnica para la
determinacin rpida del contenido total de protenas en el suero sanguneo,
para lo cual se parte del hecho de que prcticamente el ndice de refraccin de
un suero a otro vara en funcin de su contenido en protenas y no difieren entre
s apreciablemente en lo que respecta a solutos, electrolitos u otros metabolitos
simples de carcter orgnico.

Las ventajas de este mtodo radican en la rapidez, mnima cantidad de

muestra y facilidad operatoria, si bien, como queda indicado, su exactitud no es
muy elevada, pero cubre correctamente las necesidades clnicas de carcter
rutinario.
Objetivo
Gua de prctica para determinar el ndice de refraccin del suero

2. FUNDAMENTO TEORICO
Este mtodo se basa en usar una solucin de sulfato de cobre para desproteinizar y separar el
suero, al cual una vez filtrado y ajustado a 293 K (20C) determinarle el grado refractomtrico.
Previamente ajustar el refractmetro de inmersin con agua destilada.

Lisbet Dany Quispe Cruz

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El ndice de refraccin de un medio es, en cierta manera, una medida de la

magnitud de dicha interaccin, y se define por:

donde n es el ndice de refraccin a una frecuencia determinada, v1 la velocidad

de la radiacin en el medio considerado y c su velocidad en el vaco, donde es
mxima.

El ndice de refraccin de una sustancia se determina, midiendo el cambio

de direccin de una radiacin
cuando pasa de un medio a otro

Donde:

v1 es la velocidad de propagacin
en el medio menos denso.

v2 es la velocidad de propagacin
en el medio ms denso.

n1 y n2 los ndices de refraccin

respectivos.

1 y 2 los ngulos de incidencia y de refraccin respectivamente.

Para la determinacin del ndice de refraccin se utilizan los aparatos

denominados Refractmetros, siendo el ms utilizado el de Abbe, basado en la
medida del ngulo lmite. Si se hace que el ngulo de incidencia sea
prcticamente igual a 90 (incidencia rasante), el ngulo de refraccin alcanza
su valor mximo, recibiendo el nombre de ngulo lmite de refraccin.

El refractomtro de Abbe, contiene dos prismas rectangulares, opuestos

por sus hipotenusas, fijo el superior y mvil el inferior, sobre el que se coloca la
muestra problema. La luz procedente de una lmpara se hace incidir, de modo

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que el haz atraviese los prismas con la muestra problema situada entre ambos y
son enviados hacia el tubo telescpico donde se encuentra un retculo marcado
con un aspa. Observando por el ocular y moviendo el mando giratorio de los
prismas, se hace coincidir la divisoria del campo con el centro del retculo, lo que
ocurrir exactamente cuando se observe la mitad del campo clara y la otra mitad
oscura. En ese momento, con ayuda del flexo auxiliar, iluminamos por reflexin
una escala graduada en la que directamente se observa el ndice de refraccin
de la muestra problema.

Cuando se utiliza una luz no monocromtica, se produce una dispersin

cromtica en el campo, que debe eliminarse mediante el acromatizador que lleva
incorporado el instrumento.

La lectura debe realizarse bajo termostatizacin.

PRINCIPIOS TERICOS

Refraccin
La refraccin es el cambio de direccin que experimenta una onda al pasar de
un medio a otro. Slo se produce si la onda incide oblicuamente sobre la
superficie de separacin de los dos medios y si stos tienen ndices de refraccin
distintos. La refraccin se origina en el cambio de velocidad que experimenta la
onda. El ndice de refraccin es precisamente la relacin entre la velocidad de la
onda en un medio de referencia (el vaco para las ondas electromagnticas) y su
velocidad en el medio de que se trate.
Un ejemplo de este fenmeno se ve cuando se sumerge un lpiz en un vaso con
agua: el lpiz parece quebrado.
Tambin se produce cuando la luz atraviesa capas de aire a distinta temperatura,
de la que depende el ndice de refraccin. Los espejismos son producidos un
caso extremo de refraccin, denominado reflexin total.

Refraccin de la luz

Lisbet Dany Quispe Cruz

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Se produce cuando la luz pasa de un medio de propagacin a otro con una

densidad ptica diferente, sufriendo un cambio de velocidad y un cambio de
direccin si no incide perpendicularmente en la superficie. Esta desviacin en la
direccin de propagacin se explica por medio de la ley de Snell. Esta ley, as
como la refraccin en medios no homogneos, son consecuencia del principio
de Fermat, que indica que la luz se propaga entre dos puntos siguiendo la
trayectoria de recorrido ptico de menor tiempo.
La propagacin de la luz en un medio distinto del vaco est en relacin con la
longitud de la onda y, cuando un haz de luz blanca pasa de un medio a otro,
cada color sufre una ligera desviacin. Este fenmeno es conocido como
dispersin de la luz. Por ejemplo, al llegar a un medio ms denso, las ondas ms
cortas pierden velocidad sobre las largas (ej: cuando la luz blanca atraviesa un
prisma). Las longitudes de onda corta son hasta 4 veces ms dispersadas que
las largas lo cual explica que el cielo se vea azulado, ya que para esa gama de
colores el ndice de refraccin es mayor y se dispersa ms.

Ley de refraccin (Ley de Snell)

La relacin entre el seno del ngulo de incidencia y el seno del ngulo de

refraccin es igual a la razn entre la velocidad de la onda en el primer medio y
la velocidad de la onda en el segundo medio.

No relaciona los ngulos de los rayos luminosos con la perpendicular a la

superficie de refraccin, sino los senos de esos ngulos. En smbolos
matemticos se expresa as:

sen (i) / sen (r') = constante = n

Esto es, el cociente de los senos de los ngulos de incidencia i y de refraccin r'
toma el mismo valor para todos los valores posibles de estos ngulos.

Para un rayo luminoso con un ngulo de incidencia 1 sobre el primer medio,

ngulo entre la normal a la superficie y la direccin de propagacin del rayo,
tendremos que el rayo se propaga en el segundo medio con un ngulo de
refraccin 2 cuyo valor se obtiene por medio de la ley de Snell.

Lisbet Dany Quispe Cruz

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Obsrvese que para el caso de 1 = 0 (rayos incidentes de forma perpendicular

a la superficie) los rayos refractados emergen con un ngulo 2 = 0 para
cualquier n1 y n2. Es decir los rayos que inciden perpendicularmente a un medio
no se refractan.

ndice de refraccin absoluto y relativo

La velocidad de la luz depende del medio en el cual se propaga y de su longitud

de onda. Solo en el vaco la velocidad de propagacin es la misma para cualquier
longitud de onda. El concepto que nos da una medida cuantitativa de la velocidad
de propagacin de la luz en un medio material es el ndice de refraccin. ndice
de refraccin absoluto de un medio es la razn entre la velocidad de la luz en el
vaco y la velocidad en dicho medio. Si llamamos n al ndice absoluto de
refraccin, c a la velocidad de la luz en el vaco y v a su velocidad en el medio
considerado se tiene:

N=c/v

ndice de refraccin relativo de dos medio materiales cualesquiera es la razn

entre sus relativos ndices de refraccin absoluto. Si lo designamos igualmente
por n resulta:

N= n1 / n2

Pero:
n1 = c / v1 y n2 = c / v2

Luego:
N = v2 / v1

Esto ltimo indica que ndice de refraccin relativo de dos medios es igual a la
razn inversa de la velocidad de la luz en dichos medios. El ndice de refraccin
del vaco, por definicin es igual a la unidad. El del aire es 1,0002926, a 0 C y
760 mm Hg. En la prctica se lo considera igual a 1.

Los lquidos para ndice de refraccin estn formulados para un ndice de

refraccin especfico, a una longitud de onda especfica y generalmente tienen
una viscosidad menor que los aceites de inmersin, puesto que stos se usan

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para el montaje real de muestras. As, mientras que en algunos aspectos existen
similitudes, al mismo tiempo, la manera en que se utilizan los dos grupos de
fluidos es sustancialmente diferente.

Todos los aceites de inmersin son formulados para tener "baja" fluorescencia,
pero los aceites formulados especficamente para utilizarse en fluorescencia,
tienen mucho menor, o ninguna fluorescencia. No se debiera tratar de ahorrar
dinero usando aceites estndar, cuando se lleven a cabo estudios de
fluorescencia.

3. MATERIALES Y METODOS

3.1 Reactivos
3.1.1 Los reactivos que a continuacin se mencionan, deben ser grado analtico;
cuando se indique agua, debe entenderse agua destilada.
- Solucin de sulfato de cobre.- Pesar 72.5 g de sulfato de cobre pentahidratado
CuSO4
.5H2O y diluir a un litro con agua. Ajustar a una lectura de 36 grados
refractomtricos a 293 K (20C) con el refractmetro de inmersin.
3.2 Materiales.
Matraz volumtrico.
RECOPILADO POR: EL PROGRAMA UNIVERSITARIO DE ALIMENTOS
Pipetas volumtricas de 5 y 20 cm3
.
Embudo de filtracin.
Termmetro certificado de escala corta de 273 K- 323 K (0C- 50C).
Cubas para refractmetro.
Papel filtro de poro abierto.
Material comn de laboratorio.

4. EQUIPO

Refractmetro de inmersin Zeiss, Bauch and Lomb o equivalente.

Antes de emplear el refractmetro de inmersin ajustarlo de manera que la
lectura con agua destilada a 293 K (20C) sea de 14.5.
Bao para refractmetro que mantenga la temperatura a 293 K (20C)

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5. PROCEDIMIENTO
En un matraz colocar 20 cm3 de leche y aadir 5 cm3 de solucin de sulfato de
cobre. Agitar perfectamente y filtrar. Colocar el filtrado en una cuba para
refractmetro y ajustar su temperatura a 293 K (20C). Ponerlo en el soporte del
bao de temperatura constante y determinar la lectura refractomtrica.

METODOS

Colocar el refractmetro frente a una buena fuente de iluminacin.

Una vez comprobado que los prismas estn perfectamente limpios, con una
pipeta Pasteur y sobre la superficie del prisma inferior (en posicin horizontal),
se ponen 1 2 gotas de suero,
se cierra el prisma.
Abriendo la ventana se hace incidir un haz de radiacin. Observando por el
ocular, con el acromatizador (mando situado a la derecha), corregimos la
aberracin cromtica y a continuacin ajustamos la medida del ndice de
refraccin con el mando situado abajo a la derecha.
La escala de lectura situada en la parte inferior del campo se ilumina con el flexo
auxiliar

5. RESULTADOS Y DISCUSIONES

Tabla de lectura de ndices de refraccin correspondientes a distintas

concentraciones proteicas realizadas a 17.5 C en el suero de leche.

ndice de refraccin g% de protenas

1.3431 3.96
1.3435 4.15
1.3438 4.34
1.3442 4.53
1.3446 4.71
1.3450 4.90
1.3453 5.08
1.3457 5.27
1.3461 5.46
1.3465 5.65
1.3468 5.83
1.3472 6.02
1.3476 6.20

Lisbet Dany Quispe Cruz

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1.3479 6.39
1.3483 6.58
1.3487 6.76
1.3491 6.95
1.3494 7.13
1.3498 7.32
1.3502 7.50
1.3505 7.69
1.3509 7.87
1.3513 8.06
1.3516 8.24

1.3520 8.42
1.3524 8.61
1.3527 8.79

6. CONCLUSIONES
Una vez que determinemos los ndices de refraccin obtenidos con
concentracin de suero de leche , es decir la fraccin molar; obtuvimos una recta,
lo que indica que el ndice de refraccin vara linealmente con la concentracin
del elemento ms voltil.

7. BIBLIOGRAFIA

Chemist Arlington, va , USA,HART, L. Y FISHER 1991. Analisis modernos

de los alimentos . zaragoza ( Espaa).

David R. Lide, Handbook of Chemistry, 84va ed., CRC, 2003-2004

MAIER, H. 1981. Metodos modernos de Analisis de alimentos. Acribia

Zaragoza.

- Oficial Mtodos of Analysis of the Association of Oficial Analysis

Chemists. Thirteenth Edition, 1980. Part 16.098, Chapter 16.
- Mtodo de Prueba de la Direccin General de Laboratorios.
Subsecretara de Salubridad. Mxico, D. F., a los diecisis das del mes
de julio 2000
General de Laboratorios de Salud Pblica de la Subsecretara de
Salubridad, Ernesto Favela Alvarez.- Rbrica.-

Lisbet Dany Quispe Cruz

Ingeniera Agroindustrial

El Director General de Normas Comerciales de la Secretara de

Comercio, Hctor Vicente Bayardo Moreno.- Rbrica.- El Director General
de Normas, Romn Serra Castaos.- Rbrica.2011

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