Separacin de pigmentos de diferentes especies vegetales utilizando la tcnica de

cromatografa en papel

CONTRERAS N., Tatiana; RODRIGUEZ C., Lady Daniela; MARTINEZ M., Paola Andrea.

Unidades Tecnolgicas de Santander. Laboratorio de Biologa. Grupo A136.

Tecnologa en Recursos Ambientales. Bucaramanga. Colombia

e-mail: danielarcamacho@outlook.com

Abril 10 de 2017

RESUMEN

La cromatografa en papel es una tcnica simple que permite la separacin de los pigmentos
vegetales permitiendo la determinacin e identificacin de compuestos, es el Mtodo en el cual los
componentes de una mezcla son separados en una columna adsorbente dentro de un sistema
fluyente, el objetivo de esta prctica es describir e identificar la separacin de pigmentos vegetales en
distintas zonas coloreadas utilizando la tcnica de cromatografa en papel, Para su realizacin se
utiliz la planta Iresine de la familia Amaranthaceae, la cual fue macerada con 5ml de acetona hasta
obtener una mezcla homognea la cual fue filtrada, luego se le

una pisca de cloruro de calcio y por medio de un capilar tomamos la muestra para agregarla al
papel filtro de manera cuidadosa, en la cabina extractora se agreg 3ml de tetracloruro de carbono a
la caja Petri en donde se coloc la parte inferior del papel, en forma de V para observar la separacin
de los pigmentos, de esta se obtuvo un color verde amarillo esto quiere decir que es clorofila de tipo
B.

Palabras Clave: Acetona, sistema fluyente, pigmentos, cloruro de calcio, tetracloruro de carbono.

ABSTRACT

Paper chromatography is a simple technique that allows the separation of the plant pigments allowing
the determination and identification of compounds, is the Method in which the components of a
mixture are separated into an adsorbent column within a flowing system, the objective of This practice
is to describe and identify the separation of plant pigments in different colored areas using the paper
chromatography technique. The Iresine plant of the Amaranthaceae family was used to prepare the
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plant, which was macerated with 5 ml of acetone until a homogeneous mixture was obtained Which
was filtered, then a flicker of calcium chloride was added and by means of a capillary we took the
sample to add it to the filter paper carefully, in the extractor cabin was added 3ml of carbon
tetrachloride to the Petri box where Placed the bottom of the paper, V-shaped to observe the
separation of the pigments Of this was obtained a green yellow color that means that it is chlorophyll of type B

Keywords: Acetone, flowing system, pigments, calcium chloride, carbon tetrachloride.

INTRODUCCION
La cromatografa es una tcnica de separacin que se basa en una fase estacionaria y una mvil.
Con el fin de que los diversos componentes de una mezcla se separen a travs de la fase mvil, la
cromatografa logra la separacin de diversos compuestos en diferentes estados de agregacin, ya
sea slido-lquido, gaseoso-gaseoso entre otros, es de suma importancia debido a su gran uso tanto
en la industria como en el campo de la salud y la biologa (Harris, 2003).

La IUPAC (Unin Internacional de Qumica Pura y Aplicada) define a la cromatografa, como un mtodo
fsico de separacin mediante el cual los componentes de una mezcla se separan por distribucin entre
dos fases: una estacionaria (FE) y otra mvil (FM). El proceso de separacin de cada sustancia es el
resultado de un equilibrio entre dos conjuntos de fuerzas contrapuestas: las de propulsin, pro- movidas
por el flujo de la fase mvil y las fuerzas de retencin, originadas por la fase estacionaria. (Torossi,
2007)

La cromatografa de adsorcin, es una tcnica particularmente til para separar compuestos de

polaridad baja o media. La separacin de compuestos muy polares mediante cromatografa de
adsorcin requiere, debido a la gran retencin que ofrecen, la utilizacin de adsorbentes muy poco
activos, o bien, tratamientos qumicos previos a fin de reducir su polaridad. Fue desarrolla por Martin y
tiene como soporte un papel de celulosa. Adquiri una gran extensin por su sencillez y presenta la
ventaja de poder utilizar miligramos y microgramos, adems presenta la opcin de utilizar tanto la
tcnica descendente (en columna, etc...) como la tcnica ascendente. (Loro, 2001)

La planta utilizada en esta prctica fue Iresine, es un gnero de plantas con flores con un gran nmero
de plantas ornamentales en la familia Amaranthaceae. Estas plantas se encuentran en
la Amrica tropical, donde hay entre 20 y 25 especies. Sin embargo, solamente algunas especies son
cultivadas por el colorido de sus hojas, las cuales se llaman hojas de sangre (Molina, 1975)

Describir e identificar la separacin de pigmentos vegetales de la planta Iresine herbstii en distintas

zonas coloreadas utilizando la tcnica de cromatografa en papel.
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MATERIAL Y METODOLOGIA

Material Biolgico

Hojas de sanguinaria o de sangre.

Material de Laboratorio

1 mortero con pistilo

1 embudo de vidrio

1 Erlenmeyer de 200 ml

1 caja de Petri

2 capilares

Papel filtro

Tijeras

Regla

Reactivos

Acetona o (alcohol 96%)

Cloruro de calcio (CaCl2)

ter de petrleo o (tetracloruro de carbono, CCL4)

Equipos

Extractor de gases y humos marca physis

Se analiz la hoja vegetal de iresine, familia amaranthaceae, esta especie es herbistii nombre
popular sanguinaria u hojas de sangre.

En esta prctica se realiz la separacin de pigmentos vegetales por cromatografa, con ayuda de las
tijeras se retir las nerviaciones ms gruesas de la hoja cortando el limbo en secciones pequeas y
se coloc en el mortero, se le agreg 5 ml d acetona (sustancia extractora) triturando hasta que la
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mezcla se homogenizara, se agreg 6 ml de acetona nuevamente y se procedi a recoger la
sustancia resultante para llevarla a filtrar. Con el embudo de vidrio y el papel de filtro se procedi a
filtrar la sustancia resultante que se obtuvo en el mortero y se recogi el filtrado en el vaso
precipitado. Se obtuvo una solucin de pigmentos vegetales a la cual se le agrego una pequea
cantidad de CaCl2, la cual fue cubierta con la tapa de la caja de Petri y se dej reposar por 5
minutos.

Se cort una tira de papel filtro de aproximadamente 5 cm de ancho por 10 cm de alto. Teniendo
precaucin de utilizar siempre guantes para manipular el papel filtro puesto que la grasa de la mano
puede estropear la cromatografa, se marc con lpiz la lnea de la siembra a 1 cm de la base y
doblar el papel filtro por la mitad (para que se mantenga de pie)

Con el capilar y sobre la lnea trazada se aplic de 3 a 6 capas del extracto foliar, dejando secar la
acetona entre cada pasada, se verifico que cada pasada del extracto vegetal fuera estrecha y
concentrada, se ventilo el papel filtro despus de cada capa del extracto. En la caja de Petri se
coloc 5 ml del solvente separador (tetracloruro de carbono o ter de petrleo) de tal modo, que
hiciera contacto con la extremidad del papel filtro ya sembrado.

Se coloc cuidadosamente el papel filtro ya sembrado en forma de V en la caja de Petri.

Observando como los pigmentos se van separando segn su absorcin o afinidad con el solvente. Se
dej secar la muestra para su debida observacin.

RESULTADOS Y DISCUSION

Tabla 1 taxonoma de la planta analizada

Taxonoma

reino plantae

divisin maqnoliophyta

clase Magnoliopsida

orden caryophyllales

familia amaranthaceae

subfamilia gomphrenoideae Figura 1 planta Iresine herbstii

genero Iresine

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Figura 2 explicacion de la coloracin Figura 3 resultado de la
coloracin, clorofila tipo b
DONDE????

En esta prctica se pudieron observar los distintos pigmentos fotosintticos que se encuentran dentro
de las hojas de sanguinaria a travs de la cromatografa, en primer lugar al romper las clulas en el
mortero los pigmentos que se hallaban encerrados en los cloroplastos dentro de ellas pasa el
metanol. En numerosas ocasiones hay un pigmento que es ms abundante y enmascara a los dems
que no se pueden observar (Badui, 1995).

Las hojas de las plantas son verdes porque tienen mucha clorofila, el pigmento principal que captura
la luz solar para el proceso de fotosntesis. Hay dos tipos de clorofila y entre ambas absorben todos
los colores de la luz excepto el verde, que es reflejado y por eso la mayora de las hojas tiene ese
color. Las hojas tambin producen otros pigmentos que absorben y reflejan otros colores, pero
generalmente tienen tanta clorofila que los dems pigmentos quedan ocultos. Cuando la hoja se
apresta a morir, la clorofila es removida y comenzamos a ver los colores reflejados por los otros
pigmentos, que pertenecen a dos grupos principales: carotenoides (amarillo, anaranjado y pardo) y
antocianinas (rojo y morado). (Badui, 1995)

Lo anterior quiere decir que las hojas de la figura 1 tienen menos clorofila que los dems pigmentos.
Pero est presente y captura luz para la fotosntesis. Adems, la energa capturada por los otros
pigmentos se suma a la capturada por la clorofila. Conocida en ingls como coleus y en espaol por
tocador y otros nombres, P. scutellarioides es nativa de Asia pero se cultiva ampliamente a travs de
los trpicos. Los cruces entre las distintas variedades han generado una enorme variacin en el color
y la forma de sus hojas. (Badui, 1995)

Todas las sustancias presentan un grado diferente de solubilidad, lo cual permite su separacin cuando
una solucin de la misma asciende por capilaridad por una tira de papel poroso (papel de filtro), ya que

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las ms solubles se desplazarn a mayor velocidad, pues acompaarn fcilmente al disolvente a
medida que ste va ascendiendo. De esta forma, al cabo de cierto tiempo, a lo largo del papel de filtro
se irn situando los distintos pigmentos en forma de bandas coloreadas, tanto ms desplazadas cuanto
ms solubles sean los pigmentos a que pertenecen y tanto ms anchas cuanto mayor sea la
abundancia de estos en la mezcla.(figura 2) (Pinzn, 2016).

El orden en que se eluden los pigmentos es de forma inversa a su polaridad, es decir, los ms polares
quedan retenidos cerca de la lnea de aplicacin mientras que los menos polares, cerca de la lnea de
mxima altura del eluyente. Generalmente, los carotenos se mueven con el frente del eluyente
formando una sola mancha. Las xantofilas, usualmente se distinguen debajo de los carotenos y su
orden est en relacin al nmero de tomos de oxgeno que posee la molcula. (Torossi, 2007)

La adicin de una pequea proporcin de un disolvente polar como la acetona, por ejemplo, en el cual
ellas son solubles, posibilitar el establecimiento de esa serie de equilibrios y, por ende, su separacin.
Como puede apreciarse, la solubilidad de cada pigmento en la fase mvil tiene importancia, pero ella,
por si sola, no explica su separacin.(Torossi, 2007)

La acetona y el tetracloruro de carbono se volatilizan con gran velocidad, esto impide un desarrollo
normal de la cromatografa (Mallol, 2008).

Los pigmentos fotosintticos de las plantas estn representados por las clorofilas a y b, y un amplio
grupo de sustancias denominadas carotenoides, que se dividen en carotenos y xantofilas. Las
molculas de clorofila poseen un tomo central de Mg contenido en un anillo de porfirina junto a un
alcohol insaturado llamado fitol. Ambas estructuras slo difieren en el sustituyente del carbono C-3.
Mientras que la clorofila a, posee un grupo metilo (-CH3), la b dispone de un grupo aldehdo (-
CHO). Esta sutil diferencia no solo se traduce en cambios de coloracin, un verde azula- do para la
clorofila a y verde amarillento para la b (figura 3), sino adems, en una mayor polaridad de esta ltima
con respecto a la primera. (Lpez 2004)

Las muestras se aplican en forma de manchas circulares sobre uno de los extremos del papel. Tras el
desarrollo, la identificacin de cada componente de la mezcla se realiza midiendo el desplazamiento
relativo de cada mancha en el papel respecto a un compuesto patrn o al frente del disolvente (Walton
y Reyes, 1983)

La clorofila a esta encargada de capturar las longitudes de onda violeta y rojo, siendo ms abundante
que la clorofila b que representa un color verde amarillento como lo muestra la figura 3, los carotenoides
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junto con la clorofila b son los responsables de absorber aquellas longitudes de onda que no es capaz
de absorber la clorofila a. (Walton y Reyes, 1983)

CONCLUSIONES

Este mtodo se basa en la absorcin, solubilidad y separacin de pigmentos vegetales, consiste en el

uso de una tira de papel en la cual se permite la separacin de los pigmentos, a medida que se
desplaza estos se van situando a lo largo del papel el cual va tomando un color, en este caso la
nuestra tomo un color verde amarillo, Estas sustancias son coloridas por el nmero elevado de
compuestos. Cada tipo de pigmento que la compone presenta una estructura qumica definida, con
un patrn caracterstico de uniones dobles conjugadas que determinan la absorcin selectiva de
ciertas longitudes de ondas y as haciendo que cada pigmento presente una coloracin especifica.
Los resultados de la cromatografa dependen de variables como la fuente de los pigmentos, la
eficiencia de la extraccin, la actividad del absorbente, los volmenes de cada solvente y las mezclas
de cada solvente utilizadas en el desarrollo.

REFERENCIAS

Badui, S. 1995. Qumica de los Alimentos. 3era edicin. Ed. Alhambra Mexicana, S.A. Mxico,
D.F. recuperado de https://es.scribd.com/doc/173762710/Informe-de-Cromatografia

Harris, D. 2003. Anlisis Qumico Cuantitativo (6ta edicin). Barcelona: Editorial Revert.
Recuperado de https://es.scribd.com/doc/173762710/Informe-de-Cromatografia
Lopez cueto G. 2004. Leccion inaugural ciclo lectivo, universidad de alicante Espaa .
recuperado de file:///C:/Users/Personal/Downloads/Dialnet-
UnaExperienciaSencillaConFundamentosComplejos-2510362%20(1).pdf

Loro Ferrer J F 2001. Gobierno de Canarias Manual de cromatografa, Direccin General de

Universidades e Investigacin Recuperado de
http://www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/Thin.htm#historia

Mallol, J. (2008). Manual de Radiofarmacia. Ediciones Daz de Santos, Espaa,Pp71.

Recuperado de https://es.scribd.com/doc/173762710/Informe-de-Cromatografia

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 Molina Rosito, A. 1975. Enumeracin de las plantas de Honduras. Ceiba 19(1): 1118.
Recuperado de
http://www.ipni.org/ipni/advPlantNameSearch.do?find_family=&find_genus=Iresine&find_speci
es=&find_infrafamily=&find_infragenus=&find_infraspecies=&find_authorAbbrev=&find

J. Pinzon Torres. Manual de Practicas de Laboratorio de Biologia Revisado II-2016, 4a edicion.

Unidades Tecnologicas de Santander.

Torossi D. 2007. Principios de Anlisis Instrumental. Editorial Cengage Learning S.A., 6 edicin,
Mxico, Pp848-849. Recuperado de https://es.scribd.com/doc/173762710/Informe-de-
Cromatografia

Walton, H.; Reyes, J. 1983. Anlisis Qumico e Instrumental Moderno. EditorialRevert, edicin
en espaol, Espaa, Pp332-333. Recuperado de https://es.scribd.com/doc/173762710/Informe-
de-Cromatografia

BUEN INFORME!!!!
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