Reporte No.

3
Preparacin de un buffer y su accin
amortiguadora

Centro de Ciencias Bsicas.

Departamento de Qumica.
Academia de Bioqumica.
Lic. Anlisis Qumicos Biolgicos.

Materia: Bioqumica I
Profesor: M.C. Javier Martnez Rodrguez.
Alumnas:
Joselyn Georgina Flores Ibarra.
Dulce Mara Palos Dueas.
Alejandra Ramos Hernndez.

Fecha: 14/Septiembre/2017
OBJETIVO
Preparar una solucin buffer y observar su accin amortiguadora en material biolgico.
INTRODUCCIN
Se llama amortiguador a toda sustancia capaz de unirse de manera reversible a los iones
H+. La frmula general de la reaccin de amortiguamiento es:

En este ejemplo, un H+ libre se combina con el amortiguador para formar un cido dbil
(HAmortiguador) que puede permanecer como una molcula no disociada o volver a
disociarse en amortiguador y H+. Cuando aumenta la concentracin de iones H+, la
reaccin se desplaza hacia la derecha, con lo que se incrementa la cantidad de iones de
H+ que son captados por el amortiguador, en tanto existan cantidades disponibles de este.
Por el contrario, cuando la concentracin de iones H+ disminuye, la reaccin se desva
hacia la izquierda, liberando los iones de H+ del amortiguador. De esta forma se consiguen
contrarrestar los cambios de la concentracin de iones H+(McKee and Gonzalez de
Buitrago, 2005).
La importancia de los amortiguadores de los lquidos orgnicos se nota, si consideramos la
baja concentracin de iones de H+ presentes en los lquidos orgnicos y la cantidad
relativamente grande de cidos que el organismo produce cada da.
La mayor parte de los pares de amortiguadores de los lquidos corporales consisten en un
cido dbil y la sal del mismo. Los principales pares de amortiguadores que se presentan
en los lquidos corporales son los siguientes:

El sistema amortiguador cuantitativamente ms importante del LEC es el amortiguador de

bicarbonato.
MATERIAL REACTIVOS
4 Vasos de precipitado de 100 mL Fosfato monobsico de potasio 0.15M
2 pipetas de 10 mL Fosfato monocido de sodio 0.15M
4 pipetas de 5 mL NaOH 0.1M
6 Vasos de precipitado de 50 mL HCl 0.1 M
2 pipetas Pasteur con bulbo Albumina de huevo al 2%
1 Vaso de precipitado de 250 mL Agua destilada
1 Potencimetro

PROCEDIMIENTO
A. Preparacin de la solucin buffer.

2. Aadir 49 mL de
1. En un vaso de la solucin de
precipitado de 250 Na2HPO4 0.15M y Guarde la solucin
mL colocar 77mL de medir con el buffer para el
la solucin de potenciometro hasta experimeto B.
KH2PO4 0.15M. obtener un pH de
7.0.

B. Accin amortiguadora del buffer preparado y un buffer biolgico.

3. Despus con el
2. Realizar las potenciometro
1. Numerar una mediciones pH de determinar la
serie de vasos de las soluciones que capacidad
precipitado de 50mL se indican en los amortiguadora de
de 1 a 6, y seguir vasos antes de cada solucin
las indicaciones. agregar HCl y midiendo el pH fianl
NaOH. despus del cido y
base fuerte.

RESULTADOS
Tabla 1 Variacin de los valores de pH antes y despus de agregar el acido y base fuerte.

Vaso pH pH
Solucin a colocar Adicionar
no. inicial final
1 20mL H2O destilada 8.3 8 gotas HCl 0.1N 2.90
20mL solucin buffer
2 7.14 8 gotas HCl 0.1N 7.12
preparada
3 20mL albumina de huevo 7.23 8 gotas HCl 0.1N 6.61
4 20mL H2O destilada 8.30 8 gotas de NaOH 0.1N 11.21
20mL solucin buffer
5 7.14 8 gotas de NaOH 0.1N 7.10
preparada
6 20mL albumina de huevo 7.23 8 gotas de NaOH 0.1N 7.43
Ilustracin 1 Soluciones de albumina de huevo.

Ilustracin 2 Medicin del pH de la solucin preparada por medio de un potencimetro.

DISCUSIONES
JOSELYN GEORGINA
Existen ciertas soluciones a las cuales se pueden adicionar cantidades relativamente
grandes de cidos o lcalis sin alterar de manera significativa su pH. Por tal motivo se les
denomina soluciones reguladoras, amortiguadoras, buffer o tampn.
Lo que resulta evidente es que dichas soluciones tienen una accin amortiguadora,
entendindose por sta la capacidad de resistir la adicin o prdida de iones hidrgeno o
de iones hidroxilo sin que se produzca un cambio acentuado en su pH. Si bien es cierto
que los cidos y las bases fuertes pueden actuar como Amortiguadores, en circunstancias
ordinarias la accin amortiguadora se debe a la presencia en la solucin de un sistema
formado por un cido o por una base dbil y su sal correspondiente (cido-base conjugado).
Por lo que esta propiedad se aprovecha para preparar soluciones que mantienen un pH
constante. (Rubinson, 2000)
La regulacin fisicoqumica tiene lugar en todos los medios que contienen Reguladores,
constituidos principalmente por cidos o bases dbiles y sus sales. Por ejemplo el de
fosfatos H2PO4- / HPO4= con un pH de 7.2 (o 6.8 a la temperatura corporal), es el principal
amortiguador intracelular. El principal amortiguador extracelular en la sangre y lquidos
intersticiales es el sistema bicarbonato H2CO3 / HCO3- con un pH de 6.1. (Chang, 2010)
Comprobamos que debido a los propiedades que posee una solucin amortiguadora es
ms difcil que os cambios de pH ene este tipo de soluciones se manifiesten en comparacin
de una solucin no amortiguadora que por la ausencia de estas propiedades el pH cambio
muy rpidamente.
La aplicacin ms importante de esta teora de los amortiguadores es, para los fisilogos,
el estudio de la regulacin del equilibrio cido-base. Para dar una idea de la importancia de
los amortiguadores de la sangre, recordemos que la concentracin de hidrogeniones del
agua pura experimenta una elevacin inmediata cuando se aade una mnima cantidad de
un cido cualquiera, y crece paralelamente a la cantidad de cido aadido. No ocurre as
en la sangre, que admite cantidades del mismo cido, notablemente mayores, sin que la
concentracin de hidrogeniones aumente de una manera apreciable. (Skoog, 1986)
DULCE MARA
La preparacin de tampones constituye una tarea de rutina en un laboratorio de bioqumica.
Su utilizacin no solo es indispensable en la manipulacin de cualquier enzima, sino que
todas aquellas tcnicas, analticas o preparativas, para la separacin de molculas
biolgicas capaces de ionizarse, basadas precisamente en la diferencia de carga
(electroforesis, cromatografa de intercambio inico) de las distintas molculas implican la
utilizacin de tampones adecuados que permitan una ionizacin diferenciada de las
molculas y, por tanto, su separacin. (Teijn Rivera, et al., 2009).
Es imprescindible, en consecuencia, familiarizarse con la preparacin y caractersticas de
los tampones. Cmo preparar un tampn adecuado?, Cul es la zona til de un tampn?,
Cul es la capacidad de un tampn?, y, en definitiva Cmo debe prepararse un tampn?
Son cuestiones que debemos tener absolutamente claras. (Teijn Rivera, et al., 2009).
Como se menciona en el prrafo anterior, es importante saber preparar, identificar y saber
todo sobre soluciones buffer dentro de la bioqumica y otras reas de la qumica ya que
como estudiantes en preparacin para analistas qumico biolgicos es uno de los
procedimientos bsicos en el rea de practica tanto estudiantil y laboral.
Los tampones son, como sabemos, mezcla de cidos o bases dbiles con sus sales, y su
zona de utilidad como tales depende lgicamente del valor de su pKa. Este es pues un
factor limitante a la hora de seleccionar un tampn. Pero adems hay que tener en cuenta,
por ejemplo, si alguno de los componentes del tampn puede interferir con la reaccin o el
proceso a realizar. Este dato no siempre tendremos la posibilidad de conocerlo a priori y
puede ser necesario ensayar varios tampones de similar pKa. Por otra parte hemos de tener
en cuenta cuales van a ser los cambios previsibles de la concentracin de iones hidrgeno
durante el proceso, con el fin de que el tampn que preparemos tenga una capacidad
adecuada para amortiguar dicho cambio en forma conveniente. (Vasey, 2003)
En este sentido, hemos de tener en cuenta que si bien el valor de pH que se obtiene con
determinado tampn es dependiente de la relacin existente entre los dos componentes del
tampn, con independencia (dentro de ciertos mrgenes de concentracin en lo que las
variaciones de actividad sean despreciables) de la concentracin del tampn, expresada
siempre como la suma de las concentraciones de ambos componentes. En definitiva, pues,
la preparacin de un tampn implica la seleccin inicial del mismo en base a los requisitos
sealados previamente. El clculo de la relacin de concentraciones entre ambos
componentes necesaria para obtener el pH deseado, se utiliza la ecuacin de Henderson-
Hasselbalch, y el clculo de las cantidades de cada uno de los componentes en base a la
concentracin deseada y del volumen total a preparar. Los valores obtenidos en la prctica
van de acuerdo a lo terico, o sea que el pH de las soluciones que son buffer como la
albumina y la solucin buffer dada por la tcnica de laboratorio aumentaba o baja muy poco
al aadir la base y el cido respectivamente, que al contrario al agua que no es solucin
amortiguadora los valores de pH fueron muy altos y muy bajos.
ALEJANDRA
Los amortiguadores ayudan a mantener una concentracin de ion hidrgeno relativamente
constante. Los amortiguadores ms habituales son los cidos dbiles y sus bases
conjugadas. Una solucin amortiguada puede soportar cambios de pH debido a que entre
los componentes del amortiguador se establece un equilibrio. Por lo tanto, los
amortiguadores obedecen al principio de Le Chatellier , que establece que si a una reaccin
en equilibrio se le aplica una distorsin, el equilibrio se desplazar en la direccin que
contrarreste la distorsin.(McKee, McKee and Gonzalez de Buitrago, 2005).
Se prepararon seis soluciones, dos Buffers preparados (sintticos),dos soluciones de
albumina de huevo(Buffer natural) y otras dos soluciones de agua destilada ,se les
determino el pH y despus de esto a tres soluciones (una de Buffer preparado, Buffer
natural y agua destilada) se les agrego HCl al 0.1 N mientras que a las otras tres restantes
se les agreg hidrxido de sodio al 0.1 Despus de agregar el cido o la base
respectivamente se midi nuevamente el pH con el potencimetro con esto se pudo
observar en base a los resultados del pH Final y el pH Inicial la capacidad de los Buffers
para amortiguar las soluciones ya que se observ solo un pequeo descenso de pH al
agregar el cido clorhdrico a la soluciones 2 y 3 como se muestra en los resultados. Por
otra parte las soluciones 5 y 6(buffer preparado y albumina de huevo respectivamente) al
agregar la base en este caso hidrxido de sodio se observ un pequeo asenso de pH
demostrando as su capacidad amortiguadora, es decir, la capacidad de resistir la adicin
de cido o base con poco cambio de pH, lo que se relaciona de manera directa con la
concentracin de todos los constituyentes del amortiguador.
La capacidad de un amortiguador para mantener un pH especfico depende de dos factores:
(1) la concentracin molar del par cido-base conjugada, y (2) el cociente de sus
concentraciones. La capacidad amortiguadora es directamente proporcional a la
concentracin de los componentes del amortiguador. En otras palabras, cuantas ms
molculas del amortiguador estn presentes, ms cantidades de iones H+ y OH- pueden
absorberse sin que cambie el pH. La concentracin del amortiguador se define como la
suma de la concentracin del cido dbil y de su base conjugada. (McKee, McKee and
Gonzalez de Buitrago, 2005).
CONCLUSIONES
JOSELYN GEORGINA
En relacin a los resultados obtenidos podemos concluir que efectivamente logramos llevar
acabo los objetivos esperados, es decir logramos aplicar todos nuestros conocimientos
sobre las soluciones amortiguadoras las cuales son compuestas por cidos dbiles o bases
dbiles en donde una de sus sales correspondientes, constituyen las llamadas soluciones
amortiguadoras o tampn y estas son de gran importancia ya que poseen la propiedad de
resistir las variaciones de pH, en donde de igual forma se da un fenmeno conocido como
capacidad amortiguadora que se conoce como el nmero de moles de OH- o H+ que se
requieren para producir un cambio de una unidad de pH a comparacin de una solucin no
amortiguadora, la cual no posee esta oposicin a cambios de pH. Durante la prctica se
pudo observar como ciertas sustancias cambiaban de pH de una manera muy drstica
mientras que en las otras el cambio era muy pequeo.
DULCE MARA
En esta prctica se pudo preparar, identificar, y conocer algunas propiedades de las
soluciones amortiguadores a su vez se observ su accin. Tambin se compar una
solucin buffer preparada por nosotros y otra biolgica como la albumina.
Se puede concluir que as como la albumina de huevo, existen otros amortiguadores
fisiolgicos que son importantes para cada organismo para su regulacin de pH. A su vez
es importante saber preparar, identificar y saber todo sobre soluciones buffer dentro de la
bioqumica y otras reas de la qumica ya que como estudiantes en preparacin para
analistas qumico biolgicos es uno de los procedimientos bsicos en el rea de practica
tanto estudiantil y laboral.
ALEJANDRA
Se cumpli con el objetivo de preparar una solucin Buffer as como observar su capacidad
amortiguadora. Tambin se comprendi la importancia de una solucin Buffer o
amortiguadora en el organismo ya que en los organismos vivos se estn produciendo
continuamente cidos orgnicos que son productos finales de reacciones metablicas,
catabolismo de protenas y otras molculas biolgicamente activas. Mantener el pH en los
fluidos intra y extracelulares es fundamental puesto que ello influye en la actividad biolgica
de las protenas, enzimas, hormonas, la distribucin de iones a travs de membranas, etc
La manera en que podemos regular el pH dentro de los lmites compatibles con la vida son:
1) los tampones fisiolgicos y 2) la eliminacin de cidos y bases por compensacin
respiratoria y renal.
Los tampones fisiolgicos son la primera lnea de defensa frente a los cambios de pH de
los lquidos corporales, entre los que destacan: el tampn fosfato, el tampn bicarbonato y
el tampn hemoglobina.
La regulacin del pH es una actividad universal y esencial de los seres vivos. La
concentracin de ion hidrgeno debe mantenerse dentro de unos lmites muy estrechos.
Por ejemplo, la sangre humana normal tiene un pH de 7.4. Puede variar entre 7.35 y 7.45,
aunque la sangre normalmente contiene disueltos en ella muchos productos de desecho
cidos y bsicos. Algunas enfermedades producen cambios de pH que, si no se corrigen,
pueden ser desastrosos. La acidosis, un trastorno que se produce cuando el pH de la
sangre desciende por debajo de 7.35, es consecuencia de una produccin excesiva de
cidos en los tejidos, de una prdida de bases de los lquidos corporales, o de un fallo de
los riones para excretar metabolitos cidos. La acidosis tiene lugar en determinadas
enfermedades (p. ej., diabetes mellitus) y durante la inanicin. Si el pH de la sangre cae por
debajo de 7, el sistema nervioso central se deprime, lo cual conduce al coma y, finalmente,
a la muerte. Cuando el pH aumenta por encima de 7.45, tiene lugar una alcalosis. Este
trastorno, causado por vmitos prolongados o por la ingestin de cantidades excesivas de
frmacos alcalinos, sobreexcita al sistema nervioso central y los msculos entran en un
estado de espasmo. Si no se corrige, se producen convulsiones y parada respiratoria.
(McKee and Gonzalez de Buitrago, 2005).

CUESTIONARIO
1. Por qu el agua destilada se observa mayor alteracin de pH?
Debido que esta no es una solucin amortiguadora y que no hay ms sustancias en ella, y
al agregar cido y el hidrxido se convierte en una solucin con mayor nmero de
hidrgenos y/o iones hidroxilo, alterando su pH constantemente.
2. Por qu considera que la albumina de huevo debe tener propiedades
amortiguadoras?
Consideramos que debido a que la albumina es una protena y tiene diferentes cargas por
tener grupos amino y carboxilo, y esto hace que tenga diferentes pKa, por lo cual puede
funcionar como buffer.
3. En general, qu papel desempean las soluciones buffer dentro de la bioqumica?
Su papel es el de regular el pH fisiolgico de los organismos.
4. Qu sucede cuando un sistema amortiguador la concentracin molar de la sal y
del cido que integran la solucin son iguales?
La capacidad amortiguadora es mxima y el pH de la solucin es igual al pKa.

BIBLIOGRAFA

Chang Raymond. Qumica. (6. Ed), Mxico, Df: editorial Mc Graw Hill. 1999.
Chang, R. (2010). Qumica . Mxico D.F.: McGraw Hill.
Mahan Bruce H. Qumica curso universitario. Editorial fondo educativo
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McKee T, Mckee JR (2003). El agua: el medio de la vida. En Mckee T, McKee JR
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 McKee, T., McKee, J. and Gonzalez de Buitrago, J. (2005). Bioquim ica. 3rd ed.
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Rubinson, J.F. y Rubinson, K.; Qumica analtica Contempornea; Editorial Prentice-
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Skoog Douglas A. y West Donald; Introduccin a la qumica analtica; Editorial
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Teijn Rivera, Jos Mara, Garrido Pertierra, Amando, and Blanco Gaitn, Mara
Dolores. Bioqumica estructural: conceptos y tests (2. Ed.). Madrid, ES: Editorial
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Vasey Cristhofer. La Importancia del equilibrio cido-base una visin practica y
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