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Laboratorio de Qumica Orgnica

SEPARACION DE -CAROTENOS POR CROMATGRAFIA DE CAPA FINA


Jose Heriberto Vargas espinosa
Programa de Biologa, Universidad del Quindo
Docente. Edwar Cortes G.

RESUMEN. En la practica de laboratorio efectuada se realizo la separacin -carotenos por cromatografa de capa fina.
Se us una placa de vidrio con una capa de gel de slice, el gel de slice es una sustancia incolora, porosa y amorfa capaz
de absorber agua y otras sustancias polares, gracias a estas propiedades resulta un excelente material para realizar una
cromatografa por absorcin; como solventes usamos 3,5 ml de diclorometano y 3,5 ml de metanol, el primero de ellos un
compuesto apolar y el otro polar; como solutos usamos los pigmentos de la espinaca agregando 5 ml de ter de petroleo,
estos pigmentos se encuentran en la clorofila y los carotenoides, responsables de la obtencin de energa para la planta; se
distinguen dos tipos de clorofila, y ambas existen en la hoja de la espinaca, ellas son la clorofila a y la clorofila b, tambin
dentro de los carotenoides encontramos los carotenos y las xantofilas, el tipo de polaridad de estas sustancias permiten que
los solventes de acuerdo con su naturaleza polar o apolar las arrastren o no.

Palabras claves: Capa, polares, clorofila, carotenos. Cromatografa en capa fina


INTRODUCCIN.
La cromatografa es un mtodo usado principalmente En este caso se utiliza una placa recubierta con fase
para la separacin de los componentes de una muestra, estacionaria manteniendo un pequeo espesor constante
en el cual los componentes son distribuidos entre dos a lo largo de la placa. El eluyente ascender, por
fases, una de las cuales es estacionaria, mientras que la capilaridad, por la placa y arrastrar los componentes a
otra es mvil. La fase estacionaria puede ser un slido o lo largo de sta produciendo manchas de los
un lquido soportado en un slido o en un gel (matriz). componentes.
La fase estacionaria puede ser empaquetada en una
columna, extendida en una capa. En la cromatografa en capa fina (ccf), el grado de
elucin de las sustancias depende tanto de su propia
Las tcnicas cromatogrficas dependen de la distribucin polaridad como de la polaridad del eluyente utilizado.
de los componentes de la mezcla entre dos fases
inmiscibles: una fase mvil, llamada tambin activa, que El adsorbente se coloca en forma de una capa delgada
transporta las sustancias que se separan y que progresa adherida sobre un soporte rgido, que pueden ser placas
en relacin de con la otra, denominada fase estacionaria. de vidrio, aluminio o polister. Los tamaos de la placa
La fase mvil puede ser un lquido o un gas y la para ccf convencional son: 20 x 20; 10 x20 y 52 cm.
estacionaria puede ser un slido o lquido.
Hay adsorbentes que contienen un indicador de
Todos los slidos finamente pulverizados tienen el poder fluorescencia para facilitar la identificacin de muestras.
de adsorber en mayor o menor grado otras sustancias Si no se usa indicador y los componentes no son
sobre su superficie; y, similarmente todas las sustancias coloridos, se requerirn otras tcnicas de revelado.
pueden ser adsorbidas, unas con ms facilidad que otras.
Este fenmeno de adsorcin selectiva es el principio
fundamental de la cromatografa. Algunos eluyentes ms comunes para cromatografa en
capa fina son:
Concepto de Rf
-ter de petrleo
El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales
se corre la muestra (tipo de adsorbente, eluyente, as cloruro de metileno
como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de
saturacin, etc.) Tiene una reproducibilidad de 20%, n-hexano
por lo que es mejor correr duplicados de la misma placa.
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acetato de etilo Para la seleccin del adsorbente deber tomar las


siguientes consideraciones:
ciclohexano
a) Polaridad
acetona
b) Tamao de partcula
iso-propanol
c) Dimetro
dietil-ter etanol
d) rea Superficial
t-butil-ter
e) Homogeneidad
metanol
f) Pureza
cloroformo
Factores que influyen en una separacin por
cido actico cromatografa de capa fina.

Reveladores ms comunes para cromatografa en a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se


capa fina adsorben ms en la fase estacionaria.

Las manchas de color son, por supuesto, inmediatamente b) La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea sin
visibles; las incoloras pueden revelarse mediante: corrientes de aire.

a) Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se c) Limpieza de las placas. Muchas placas estn
puede usar una fase estacionaria impregnada con un contaminadas con grasa o agentes plastificantes o
indicador fluorescente (F25a o F366), el nmero que adhesivos. Para el trabajo a pequea escala, stas deben
aparece como subndice nos indica la longitud de onda limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y
de excitacin del indicador utilizado. metanol y despus dejar secar completamente antes de
aplicar la muestra.
b) La introduccin de la placa en vapores de yodo
d) Pureza de los disolventes.
c) El roco con una solucin de agua/H2SO4 1:1 (dentro
de un compartimiento especialmente protegido y bajo Cromatografa en columna
una campana de extraccin de gases). Despus calentar
intensamente, por ejemplo, con un mechero hasta En la cromatografa en columna la separacin se
carbonizar los compuestos. consigue haciendo fluir la mezcla a travs de una
Adsorbentes ms comunes para cromatografa en columna de adsorbente. Los compuestos emergen de la
capa fina. columna a tiempos diferentes, y pueden ser recogidos en
fracciones separadas.
a) Gel de slice (se utiliza en el 80% de las separaciones)
En una columna cromatogrfica se deben tener en cuenta
b) Oxido de Aluminio Almina (cida, neutra o bsica) los siguientes trminos:

c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina) matriz de la columna. Sustancia que est empapada


de solvente y que se empaqueta en la columna.
Tambin se denomina el lecho de la columna.
d) Poliamidas

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longitud de la columna. Longitud del dispositivo en RESULTADOS Y DISCUSIN.


el que se empaqueta la columna.
volumen de la columna. Volumen total de gel que se En la fase movil de la cromatografia se obtuvo como
empaqueta en una columna cromatogrfica. resultado los siguientes datos:
volumen muerto de la columna. Cantidad de solvente
que tiene que atravesar la columna para asegurar que PLACA #1 PLACA #2 PLACA #2
se ha reemplazado completamente. 6 cm 5,5 cm 5,8 cm

El adsorbente ms utilizado para cromatografa de En la observacion que se hizo en la camara de


columna es gel de slice, aunque tambin se puede cromatografia no se encontro presencia de ningun
emplear almina y florisil. La elucin de la pigmento puesto que, se realizaron errores a la hora de la
cromatografa puede realizarse por gravedad o mediante
realizacion de la practica.
presin (Flash chromatography), la diferencia en ambos
casos est en el tamao de las partculas de gel de slice
Es importante precisar que los pigmentos son de acuerdo
(0,063-0,200 nm, slice de columna, 0,040-0,063 nm,
slice flash). Debido a que la disminucin del tamao de a el tipo de clorofilas.
las partculas de adsorbente conduce a una separacin
ms eficaz, la cromatografa a media presin (flash) Carotenos Naranja
proporciona mejores resultados, adems de ser ms
Verde
rpida. Las variables que ms influyen en la eficacia de Clorofila a
azulado
la separacin en cromatografa de columna y utilizando
gel de slice como adsorbente son las siguientes;
Xantofilas Amarillo

a) Dimetro de la columna y cantidad de gel de slice. La


altura del adsorbente est relacionada con la diferencia Clorofila b Verde
de Rf de los componentes de la mezcla. El dimetro de la
columna con la cantidad de producto a separar.
La estructura molecular dede cada una es:
b) Eleccin del disolvente. El disolvente tienen que
conducir a una buena separacin de los componentes de
la mezcla en capa fina, utilizndose en muchos casos
mezclas de disolventes y se realiza una elucin en
gradiente. Una de las mezclas ms utilizadas es
hexano/acetato de etilo.

Aplicaciones

Las tcnicas de aplicacin de la cromatografa en capa


fina se aplican para desarrollar las condiciones para la
separacin en cromatografa en lquidos de alta
resolucin.
Clorofila
La cromatografa en capa fina tiene amplio uso en los A
laboratorios clnicos y es la estructura de apoyo de
muchos estudios bioqumicos y biolgicos. Tambin
tiene una gran aplicacin en los laboratorios industriales.

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la cromatografa en capa fina es uno de los mtodos mss


versatiles de analisis cromatografico para la separacin e
identificacin de sustancias qumicas. es un instrumento
de separacin sencillo, rapido y efectivo para el analisis
cualitativo y cuantitativo.

el factor que mas influye en la separacin de los


componentes en este tipo decromatografa es la
polaridad de estos compuestos.

La placa esta formada por una capa de gel de slice, una


sustancia muy polar, y por lo tanto atraer en mayor
Carote cantidad a los componentes mas polares
nos

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.

1. Harry W. Lewis & Christopher J. Moody (13 de


junio de 1989). Experimental Organic Chemistry:
Principles and Practice (ilustrada edicin).
WileyBlackwell. pp. 159-173.

2. A.I. Vogel; A.R. Tatchell; B.S. Furnis; A.J.


Hannaford; P.W.G. Smith. Vogel's Textbook of
Clorofil Practical Organic Chemistry (5 edicin)
aB

Xantofil
as

CONCLUSIONES

Al realizar esta prctica podemos concluir que la


cromatografa es una buena tcnica para la separacin
de especies qumicas estrechamente relacionadas en
mezclas complejas, siendo por ello una de los principales
mtodos de separacin, ya que tiene numerosas ventajas,
aparte de ser rpida, sencilla y barata, tiene tambin la
ventaja de utilizar poca cantidad de muestra.
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