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69

Srie
Tecnologia
Ambiental

Misso Institucional
(Eco)toxicologia de Metais em
A misso do Centro de Tecnologia Mineral - CETEM
Solos: Conceitos, Mtodos e
desenvolver tecnologia para o uso sustentvel dos
Interface
recursos minerais brasileiros. com a Geoqumica
Ambiental
O CETEM

Ricardo Gonalves Cesar


Zuleica Carmen Castilhos
Ana Paula de Castro Rodrigues
Edison Dausacker Bidone
Silvia Gonalves Egler
Helena Polivanov
S RIE T ECNOLOGIA A MBIENTAL

(Eco)toxicologia de Metais em Solos: Conceitos,


Mtodos e Interface com a Geoqumica Ambiental
PRESIDNCIA DA REPBLICA
Dilma Vana Rousseff
Presidente

Michel Miguel Elias Temer Lulia


Vice-Presidente

MINISTRIO DA CINCIA, TECNOLOGIA E INOVAO


Clelio Campolina Diniz
Ministro da Cincia e Tecnologia

Alvaro Toubes Prata


Secretrio-Executivo

Andr Tortato Rauen


Subsecretrio de Coordenao das Unidades de Pesquisa

CETEM CENTRO DE TECNOLOGIA MINERAL


Fernando Antonio Freitas Lins
Diretor

Arnaldo Alcover Neto


Coordenador de Anlises Minerais

Claudio Luiz Schneider


Coordenador de Processos Minerais

Cosme Antnio de Moraes Regly


Coordenador de Administrao

Francisco Wilson Hollanda Vidal


Coordenador de Apoio Tecnolgico s Micro e Pequenas Empresas

Jackson de Figueiredo Neto


Coordenador de Planejamento, Gesto e Inovao

Ronaldo Luiz Correa dos Santos


Coordenador de Processos Metalrgicos e Ambientais
S RIE T ECNOLOGIA AMBIENTAL
ISSN 0103-7374 ISBN 978-85-8261-026-8
STA - 69

(Eco)toxicologia de Metais em Solos:


Conceitos, Mtodos e Interface com a
Geoqumica Ambiental

Ricardo Gonalves Cesar


DSc. Gegrafo

Zuleica Carmen Castilhos


DSc. Farmacutica

Ana Paula de Castro Rodrigues


DSc. Biloga

Edison Dausacker Bidone


DSc. Gelogo

Silvia Gonalves Egler


MSc. Biloga

Helena Polivanov
DSc. Geloga

CETEM/MCTI
2014
S RIE T ECNOLOGIA A MBIENTAL
Luis Gonzaga Sobral
Editor

Andra Camardella de Lima Rizzo


Subeditora

CONSELHO EDITORIAL
Mariza Bezerra de M. Monte (CETEM), Paulo Sergio M. Soares
(CETEM), Saulo Rodrigues P. Filho (CETEM), Silvia Gonalves
Egler (CETEM), Vicente Paulo de Souza (CETEM), Antonio
Carlos A. da Costa (UERJ), Ftima Maria Z. Zotin (UERJ),
Jorge Rubio (UFRGS), Jos Ribeiro Aires (CENPES), Luis
Enrique Snches (EPUSP) e Virginia S. Ciminelli (UFMG).

A Srie Tecnologia Ambiental divulga trabalhos relacionados ao setor


minerometalrgico, nas reas de tratamento e recuperao ambiental,
que tenham sido desenvolvidos, ao menos em parte, no CETEM.
O contedo desse trabalho de responsabilidade exclusiva do(s)
autor(es).
Valria Cristina de Souza
Coordenao Editorial
Valria Cristina de Souza
Editorao Eletrnica
Andrezza Milheiro
Reviso

Cesar, Ricardo Gonalves


(Eco)toxicologia de metais em solos: conceitos, mtodos e
interface com a geoqumica ambiental / Ricardo Gonalves Cesar
[et al.]. __Rio de Janeiro: CETEM/MCTI, 2014.
100p. (Srie Tecnologia Ambiental, 69).
1. Geoqumica ambiental. 2. Ecotoxicologia. 3.Bioensaios. 4 Solos.
I. Centro de Tecnologia Mineral. II.Cesar, Ricardo Gonalves. III.
Castilhos, Zuleica Carmen. IV. Rodrigues, Ana Paula de Castro. V. Egler,
Silvia Gonalves. VI. Polivanov, Helena. VII. Ttulo. VIII. Srie.

CDD 574.52
RESUMO _________________________________________ 7

ABSTRACT _______________________________________ 8

1 | ECOTOXICOLOGIA: UMA ABORDAGEM


CONCEITUAL __________________________________ 9

2 | SADE HUMANA E AMBIENTAL EM


GEOCINCIAS _________________________________ 12
2.1 | Mapeamento Geoqumico de Baixa
Densidade _________________________________ 14

3 | ECOTOXICOLOGIA E GEOQUMICA: CONCEITOS


ESSENCIAIS ___________________________________ 16

3.1 | Geodisponibilidade _________________________ 16

3.2 | Biodisponibilidade _________________________ 17


3.3 | Bioacessibilidade __________________________ 19

4 | ABORDAGEM GEOCIENTFICA ___________________ 21

4.1 | Suportes Geoqumicos ______________________ 21


4.2 | Metais-traos: Aspectos Ambientais e
(Eco)toxicolgicos __________________________ 27

4.3 | ndices de Poluio _________________________ 31

4.4 | Extraes: Sequencial e Seletiva _____________ 37

4.5 | Ensaios de Batelada ________________________ 38

4.6 | Ensaios de Coluna _________________________ 39

5 | ECOTOXICOLOGIA TERRESTRE, ATRIBUTOS


GEOQUMICOS E INTERFACE COM A LEGISLAO
AMBIENTAL BRASILEIRA __________________________ 43
6 | ABORDAGEM ECOTOXICOLGICA: MTODOS E
APLICAES ____________________________________ 46

6.1 | Avaliao de Risco Ecolgico ________________ 47


6.2 | Bioensaios como Ferramenta de
Monitoramento _____________________________ 52

6.3 | Bioensaios com Oligoquetas (Eisenia andrei) ___ 57


6.4 | Bioensaios com Colmbolos
(Folsomia candida) _________________________ 66

6.5 | Bioensaios com Enquitredeos


(Enchytraeuds crypticus) ____________________ 72

6.6 | Bioensaios com Microcrustceos


(Daphnia similis) ___________________________ 75
6.7 | Bioensaios com Algas
(Pseudokirchneriella subcaptata) ______________ 78

7 | CONSIDERAES FINAIS _______________________ 82


REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ___________________ 84
RESUMO
A contaminao por metais tem despertado a ateno da
comunidade cientfica devido aos severos danos que esses
elementos podem trazer sade humana e ao meio ambiente.
Neste sentido, a presente publicao apresenta uma anlise
reflexiva acerca de alguns conceitos e mtodos fundamentais
que frequentemente permeiam os estudos de contaminao
por metais em geoqumica ambiental e em ecotoxicologia de
solos, incluindo a apresentao de estudos de casos descritos
pela literatura cientfica. A ecotoxicologia de solos possui
diversos desafios na avaliao de impactos na regio tropical,
sobretudo no que se refere padronizao de bioensaios
capazes de refletir as especificidades biolgicas da fauna
edfica tropical, bem como as propriedades fsicas, qumicas e
mineralgicas de substratos pedolgicos tropicais. Sob esse
contexto, possvel verificar a existncia de uma
complementaridade entre as perspecivas analticas em
geoqumica ambiental e em ecotoxicologia. Dessa forma, a
anlise reflexiva demonstra que a integrao metodolgica
entre as referidas abordagens de suma importncia ao
estabelecimento de valores referncia de qualidade ambiental
e de indicadores de sustentabilidade de solos para regies
tropicais para, com isso, dar suporte tomada de deciso em
medidas de sade pblica e de controle ambiental.

Palavras-chave
Geoqumica ambiental, ecotoxicologia, bioensaios, solos.
ABSTRACT
Metal contamination has become an important topic for the
scientific community due to the potential occurrence of serious
damages to soil ecosystem. In this sense, the present work
presents a reflexive analysis on some frequently concepts and
methods used by geochemists and ecotoxicologists to evaluate
impacts from contamination events. Some examples from the
literature were also presented. The results revealed the
existence of some challenges for soil ecotoxicology area,
especially those related to the stardardization of bioassays
adapted to tropical edaphic fauna and to the physical, chemical
and mineralogical properties of tropical soils. In this context, a
complementarity was identified between the geochemical and
ecotoxicological perspectives of analysis. Thus, the
methodological integration between such approaches is
extremely important to stablish sustainable indicators and
reference values of environmental quality, and to decision-
makers in actions of public health and environmental control.

Keywords
Environmental geochemistry, ecotoxicology, bioassays, soils.
(Eco)toxicologia de metais em solos... 9

1 | ECOTOXICOLOGIA: UMA ABORDAGEM CONCEITUAL


A ecotoxicologia o ramo da toxicologia ambiental que trata do
estudo dos efeitos nocivos provocados biota decorrentes da
exposio a agentes txicos. Entretanto, comum empregar o
termo toxicologia ambiental para se referir somente aos efeitos
causados a humanos, enquanto o termo ecotoxicologia mais
frequentemente utilizado para os estudos focados nos demais
seres vivos. Rand et al. (1995 apud Chasin e Azevedo, 2004)
ainda definem a ecotoxicologia como o estudo do destino e
dos efeitos das substncias qumicas sobre o ecossistema,
com base em mtodos de laboratrio e campo, considerando
suas inter-relaes no ecossistema e atuao nos organismos.

A partir dos pressupostos fundamentais da toxicologia clssica


(Tabela 1), a proposta de avaliao da toxicidade sob o vis
ecotoxicolgico consiste no prognstico de potenciais efeitos
adversos sade dos ecossistemas terrestre e aqutico. Neste
sentido, a ecotoxicologia de solos dedica-se ao entendimento
dos mecanismos de ao de agentes txicos presentes no solo
sobre o ecossistema, visando manuteno da sade da biota
edfica e da flora terrestre.
10 Cesar, R. G. et alii

Tabela 1. Diferenas entre a Toxicologia Clssica e a Ecotoxicologia.

Tpico Toxicologia Clssica Ecotoxicologia


Objetivos Objetivo: proteger populaes
Objetivo: proteger os seres
e comunidades de diferentes
humanos da ao de
espcies da ao de
substncias txicas em
substncias txicas em
concentraes que esto ou
concentraes que podem
podem estar associadas a
estar associadas a efeitos
efeitos adversos.
adversos.
Pode utilizar as prprias
Utiliza animais de
Modelos biogicos espcies em questo (embora
experimentao como
possa haver muitas incertezas
modelos. Em alguns casos, h
sobre a propriedade das
dados disponveis acerca de
mesmas como sendo o melhor
doses vs efeitos adversos em
indicador de efeito ou de
humanos (informaes
suscetibilidade)
oriundas de acidentes
envolvendo contaminaes).
Espcie-alvo Impossvel conhecer e testar
A espcie-alvo conhecida todas as espcies a serem
(homem); maior preciso na protegidas; grau de
extrapolao de dados. extrapolao incerto. Em
alguns casos, o alvo pode ser
poucas espcies (depende da
abrangncia da avaliao de
risco).
Dose vs Exposio A exposio se d pelas
A dose da substncia
concentraes da substncia
administrada pode ser medida
no meio e a dose absorvida s
com preciso e tambm podem
determinada por meio de
ser estabelecidas as vias de
experimentos de
exposio.
bioacumulao e metabolismo.
Doses de referncia A nfase se d na medio do
H dados disponveis sobre
txica efeito txico, com vistas ao
pesquisa bsica na elucidao
estabelecimento de dados de
dos mecanismos de ao
concentraes-limite para
txica.
cumprir exigncias obrigatrias.
Arcabouo Os mtodos de avaliao de
Os ensaios utilizados so
metodolgico toxicidade so bem
relativamente novos, sendo
estabelecidos no que tange a
alguns deles padronizados.
certezas e limites.

Fonte: Adaptado de Rand et al. (1995 apud Azevedo e Chasin, 2004).


(Eco)toxicologia de metais em solos... 11

Embora a base terico-metodolgica da ecotoxicologia esteja


fortemente fundamentada nas premissas da toxicologia
humana, esses campos do saber diferem basicamente no
objeto de estudo. A avaliao da sade de um ecossistema
deve englobar, por excelncia, receptores ecolgicos de
diferentes nveis trficos, bem como organismos de distintas
complexidades biolgicas. Assim, enquanto a toxicologia
humana est preocupada com uma nica espcie
(a humana), a ecotoxicologia trata de distintos receptores, de
suas interaes ecolgicas e com os diversos compartimentos
e processos biogeoqumicos inerentes ao meio em que vivem.
Dessa forma, a avaliao de risco ecolgico tende a se tornar
muito mais complexa e abrangente se comparada anlise de
risco sade humana.

A presente publicao trata de conceitos e procedimentos


aplicveis a solos que apresentam, ou no, anomalias naturais
e/ou contaminaes geradas a partir da disposio inadequada
de contaminantes sobre o continente (seja na forma de dejetos,
resduos ou efluentes). Estes procedimentos so essenciais
para a avaliao de risco em stios perigosos associados
contaminao por metais e outras substncias, sobretudo em
reas urbano-industriais e de minerao. Ainda, eles so
importantes na fase de planejamento e/ou de avaliao da
viabilidade tcnico-econmica-ambiental-social da possvel
necessidade de disposio de rejeitos em solos.
12 Cesar, R. G. et alii

2 | SADE HUMANA E AMBIENTAL EM GEOCINCIAS


A incorporao de aspectos associados sade humana e
ambiental clssica em diversos campos do saber
geocientfico. Dentre esses, a geografia mdica (ou geografia
da sade) talvez seja o mais clssico e consolidado desses
ramos (Lacaz et al. 1972; Bonfim e Medeiros, 2008), tratando
da avaliao de padres espaciais na ocorrncia de patologias.
Por outro lado, a maioria das pesquisas em geografia mdica
esteve fortemente focada na sade humana, sendo escassos
os estudos sobre a sade da biota. De fato, um dos mais
importantes e clssicos estudos de geografia mdica, intitulado
Geografia da Fome (do mdico e gegrafo Josu de Castro),
expressa de forma clara a nfase atribuda aos estudos de
sade humana (Bonfim e Medeiros, 2008), em detrimento
sade ambiental.

Dentro do contexto das cincias atmosfricas, a


biometeorologia humana e a bioclimatologia aparecem como
campos clssicos de interface entre fatores geoambientais e
sade. Esses ramos do saber se dedicam, basicamente, ao
estudo da influncia de variveis meteorolgicas (temperatura,
precipitao, presso atmosferica, ventos, etc.) e climticas
(mais sazonais) sobre a sade e o bem-estar humano. Neste
sentido, a influncia de aerssois atmosfricos (incluindo
plens de plantas) sobre o sistema respiratrio, e pesquisas no
mbito do conforto trmico so temticas, por exemplo,
frequentemente abordadas por esses pesquisadores. Mais
recentemente, biometeorologistas e bioclimatologistas tm
tambm se dedicado ao impacto local e regional da poluio
atmosfrica e das mudanas climticas sobre a proliferao de
doenas. Por exemplo, Campos (2009), ao estudar as
(Eco)toxicologia de metais em solos... 13

ocorrncias de dengue no interior do Estado de So Paulo,


props um modelo (calcado em mtodos estatsticos e redes
neurais artificiais) para explicar sua distribuio e densidade,
utilizando variveis meteorolgicas.
A partir da dcada de 70, com o advento dos estudos
ambientais, a geologia e a geoqumica ambiental adquirem
considervel importncia no contexto das cincias ambientais.
At ento, boa parte das pesquisas em geologia estava
fortemente calcada em aspectos da geologia econmica e/ou
da geoqumica de prospeco, sobretudo o mapeamento de
jazidas minerais. O paradigma ambiental em geocincias
possibilitou a emergncia de um ramo promissor no mbito da
geoqumica: a geoqumica mdica - cujo enfoque principal era
o estudo da influncia do ambiente geoqumico sobre a sade
humana e ambiental (Vasconcellos, 2011), inclusive com foco
na exposio a metais. A geoqumica mdica possibilitou a
ampliao dos estudos multidisciplinares em geoqumica,
agregando conhecimentos oriundos da ecologia, toxicologia e
farmacologia s geocincias.
A partir do arcabouo terico-metodolgico da geoqumica
mdica, consolida-se mais recentemente outro campo
multidisciplinar e mais sistematizado em geocincias, cujo
interesse recai sobre a interface entre ambiente e sade: a
geologia mdica. De acordo com Sellinus (2004), a geologia
mdica trata do estudo dos fatores geolgicos sobre a sade
humana e dos animais. Neste sentido, o termo sade dos
animais parece restringir o campo de atuao da geologia
mdica (j que "animais" no incluem plantas ou
microorganismos), quando na verdade o termo biota poderia
ser mais apropriado. Uma vez que se trata de um campo
emergente, a conceituao de geologia mdica poder ainda
14 Cesar, R. G. et alii

sofrer alteraes que melhor expressem sua proposta de


atuao como cincia. A geologia mdica, ao propor o estudo
da influncia dos fatores geolgicos na sade ambiental,
frequentemente interage com a ecotoxicologia, sobretudo no
que diz respeito predio e estudo de riscos de efeitos
txicos de elementos e/ou substncias qumicas presentes
naturalmente na crosta terrestre.

2.1 | Mapeamento Geoqumico de Baixa Densidade


Em 2003, o Servio Geolgico do Brasil (CPRM) deu incio ao
Programa Nacional de Pesquisa em Geoqumica Ambiental e
Geologia Mdica (PGAGEM) (Silva, 2008), com base no
mapeamento geoqumico multi-elementar de baixa densidade.
Este programa de pesquisa est fortemente baseado nos
mapeamentos pioneiros realizados na regio setentrional da
Europa (coordenados por grupos finlandeses de pesquisa),
incluindo o projeto Kola Ecogeochemistry (1992-1996)
(Reimman e Garret, 2005; Reimann et al. 2008); o Baltic Soil
Survey (Reimann et al. 2003); e o Barents Ecogeochemistry
(1999-2003; Salminen et al. 2004). No Brasil, os primeiros
mapeamentos geoqumicos associados identificao de
potenciais efeitos adversos sade humana envolveram: (i) o
Estado do Paran, com a identificao de anomalias de flor
associadas ocorrncia de fluorose dentria (Licht et al. 1996);
e (ii) o Vale do Ribeira (SP), com a verificao de anomalias de
chumbo e arsnio (Paoliello et al. 2002; Moraes et al. 2004;
Figueiredo et al. 2007), incluindo, em alguns estudos, a
avaliao epidemiolgica da exposio.
De fato, mesmo em ambientes naturais e sem impactos
antropognicos, a distribuio espacial de metais e outros
elementos-traos varia substancialmente na superfcie
(Eco)toxicologia de metais em solos... 15

terrestre, e afeta de maneira bastante efetiva a ocorrncia de


patologias decorrentes da intoxicao por elementos txicos ou
deficincia de elementos-traos essenciais (Sellinus, 2004).
Caussy et al. (2003) apontam, por exemplo, para a existncia
de reas deficientes em iodo e selnio, na Amrica do Norte e
na China, bem como regies geogrficas com teores
excessivos de As na sia Meridional; associando esta ltima ao
aumento do nmero de casos de cncer. Oruc (2008) ainda
reporta a existncia de reas com excesso de flor na Turquia,
e aumento de casos de fluorose dentria em decorrncia do
consumo de gua contaminada.

Alm das implicaes mdicas, o mapeamento das


concentraes e anomalias de metais em escala nacional de
fundamental importncia na determinao de backgrounds
geoqumicos regionais, bem como na definio de indicadores
regionais de sustentabilidade e de teores de referncia de
qualidade ambiental - necessidade requerida pela legislao
brasileira atravs da Resoluo 420 do CONAMA (2009). Neste
sentido, tais mapeamentos se tornam imprescindveis a
qualquer tipo de planejamento ou tomada de deciso em
medidas de sade pblica e de controle ambiental (incluindo
aes de remediao, gerenciamento de bacias hidrogrficas,
zoneamento ecolgico, explorao mineral, urbanizao,
planejamento da agricultura e pecuria, entre outros). Alm
disso, estudos de carter regional so altamente promissores
na medida em que no somente servem de base para
trabalhos futuros, mas tambm contribuem para a
compreenso da distribuio espacial desses elementos
atravs da interpretao integrada de dados de uso da terra,
clima, geomorfologia, pedologia, geologia e informaes
relacionadas ao bioma.
16 Cesar, R. G. et alii

3. ECOTOXICOLOGIA E GEOQUMICA: CONCEITOS


ESSENCIAIS

A ecotoxicologia e a geoqumica ambiental compartilham de


alguns conceitos bsicos, tais como: a geodisponibilidade,
biodisponibilidade e bioacessibilidade. Sob os primas da
geoqumica ambiental e da ecotoxicologia, tais conceitos so
metodologicamente explorados de formas diferentes, mas suas
percepes so complementares e transcendem a
muldisciplinaridade fundamental aos estudos ambientais.

3.1 | Geodisponibilidade

O conceito de geodisponibilidade amplamente difundido em


geoqumica, e trata da concentrao total do elemento no meio
geolgico (gua, ar, solos ou sedimentos) (Cortecci, 2013).
Trata-se de um conceito consagrado pela geologia econmica,
e comumente aplicado aos estudos de prospeco mineral,
sobretudo na identificao e mapeamento de anomalias
geoqumicas economicamente explorveis (Cortecci, 2013).
De fato, no contexto do conceito de geodisponibilidade e dos
pressupostos do mapeamento geoqumico de baixa de
densidade que esto calcados os estudos de geologia mdica.
Alm disso, a noo de geodisponibilidade tambm muito
empregada na gerao de ndices de poluio em geoqumica
(Mller, 1979).

Em geoqumica ambiental, o conceito de contaminao


aparece intrinsecamente ligado noo de geodisponibilidade.
Dessa forma, o termo contaminao concebido como
qualquer anomalia da concentrao (total) do metal que excede
(Eco)toxicologia de metais em solos... 17

o nvel de base (background) da geologia regional. A partir


dessa noo de contaminao que emerge o termo pontos-
quentes (hot-spots), i.e., localidades do espao geogrfico que
apresentam concentraes de metais acima do que
habitualmente encontrado para a geoqumica regional.

Em ecotoxicologia, considera-se que, embora o pior cenrio


seja a completa disponibilidade da concentrao total do metal
no compartimento abitico, este cenrio muitas vezes de
baixa probabilidade e, portanto, no reflete a real
disponibilidade ao ecossistema. Neste contexto, anomalias
geoqumicas no obrigatoriamente representam riscos sade
da biota, mas servem de alerta para futuras investigaes
visando o detalhamento da toxicidade potencial.

3.2 | Biodisponibilidade

Em geoqumica ambiental, o conceito de biodisponibilidade de


metais sempre esteve muito ligado noo de presena na
frao dissolvida, como on e, portanto, com mobilidade
geoqumica. Dessa forma, fraes geoqumicas solveis e de
alta mobilidade so frequentemente concebidas como aquelas
potencialmente biodisponveis. O fracionamento geoqumico de
metais comumente realizado atravs do emprego de mtodos
de extraes sequenciais e/ou seletivas (Tessier et al. 1979;
Gleyses et al. 2002; Amir et al. 2005; Cesar et al. 2011). Alm
desses mtodos, ensaios de batelada e de coluna tambm so
usualmente utilizados na avaliao da mobilidade e da
biodisponibilidade potencial (Alamino et al. 2007;
Demuelenaere, 2010).
18 Cesar, R. G. et alii

Em ecotoxicologia, a noo de biodisponibilidade est


associada frao geoqumica (disponvel no meio abitico)
incorporada pelo organismo (Cassaret e Doll's, 1999). Dessa
forma, a noo de biodisponibilidade adquire uma perspectiva
mais abrangente, requerendo a compreenso no somente dos
mecanismos que controlam a mobilidade geoqumica do
contaminante, mas tambm o papel da biologia do organismo
sobre os processos de absoro do contaminante. Sob esta
perspectiva, a noo de biodisponibilidade deve ponderar,
sobretudo, o binmio agente txico-biota exposta. Para tanto,
deve considerar diversos aspectos, como as propriedades
fsico-qumicas do xenobionte, as caractersticas e
diferenciaes individuais das espcies estudadas, vias de
exposio, e durao e frequncia da exposio (Cassaret e
Doll's, 1999). Deve-se tambm considerar a possibilidade da
co-existncia de diversas formas qumicas dos contaminantes e
suas caractersticas fsico-qumicas que influenciam na
absoro por membranas biolgicas.

Meyer (2002) prope uma discusso importante a respeito do


emprego dos termos biodisponibilidade e frao
biodisponvel. Segundo o autor, frao biodisponvel deve
compreender, por excelncia, a integrao de processos
ecolgicos, toxicolgicos e geoqumicos. Dessa forma, a
determinao quantitativa desta componente se torna
extremamente difcil e complexa, uma vez que depende
diretamente da biologia e vias de exposio de todos os
receptores ecolgicos envolvidos na anlise de risco.
(Eco)toxicologia de metais em solos... 19

3.3 | Bioacessibilidade

O conceito de bioacessibilidade diz respeito frao


biodisponvel do metal que de fato absorvida pelos processos
metablicos (Bosso, 2007). Neste sentido, processos de
biotransformao interna de metais (em especial, na valncia
desses elementos) adquirem papel de suma relevncia na
reduo/aumento da toxicidade e no stio de ao do
xenobionte no organismo. Alm disso, deve-se considerar
tambm os efeitos sinrgicos, aditivos e antagnicos da ao
de contaminantes sobre o metabolismo. Em suma, nem todo
metal geodisponvel est biodisponvel e, por sua vez, nem
toda frao biodisponvel est necessariamente bioacessvel
(Figura 1).

Em geologia mdica, a bioacessibilidade de metais em solos


tem sido explorada atravs de extraes qumicas capazes de
simular a solubilizao do material no sistema digestivo. Dessa
forma, so utilizados extratores cidos que remetem s
condies gastro-intestinais (Bosso, 2007). Portanto, essa
abordagem analtica privilegia a via oral de exposio ao
contaminante, em detrimento inalao e via dermal. Alguns
autores ainda empregam o termo "biodisponibilidade oral" para
se referir "frao da dose administrada que atinge a
circulao sangunea a partir do trato gastro-intestinal" (Bosso
e Enzweiller, 2008). Em geologia mdica, boa parte destas
pesquisas ainda est fortemente focada em sade humana - a
exemplo da pesquisa executada na regio do Vale do Ribeira
(SP) por Bosso (2007) sendo ainda muito escassos os
estudos voltados sade da fauna edfica e aqutica.

Os estudos de bioacessibilidade em ecotoxicologia terrestre


so extremamente promissores no sentido de proporcionar um
20 Cesar, R. G. et alii

conhecimento mais consolidado a respeito da ecotoxicidade do


solo. Para tanto, o conhecimento da biologia do organismo e
das vias da exposio so de fundamental importncia,
sobretudo no que se refere determinao frao geoqumica
do contaminante que pode ser de fato solubilizada, assimilada
e/ou biostransformada pelo metabolismo animal. Uma vez que
o ecossistema contempla organismos de distintas
complexidades biolgicas, esta tarefa torna-se difcil e
extremamente desafiadora, e pode requerer a colaborao de
profissionais de reas diversas, incluindo biologia, farmcia,
medicina veterinria e zootecnia.

Em termos operacionais, a geodisponibilidade e, sobretudo, a


biodisponibilidade tm sido mais frequentemente exploradas na
avaliao do risco ecotoxicolgico. De fato, a realizao de
prognsticos acerca da frao bioacessvel ao metabolismo
animal muito complexa. Por outro lado, o conhecimento mais
detalhado da biologia dos receptores ecolgicos envolvidos na
anlise de risco pode ajudar bastante nesta tarefa.

Figura 1. Bioacessibilidade e suas relaes com as disponibilidades


biolgica e geolgica.
(Eco)toxicologia de metais em solos... 21

4. | ABORDAGEM GEOCIENTFICA

4.1 | Suportes Geoqumicos


Suportes geoqumicos so indicadores-chave do
comportamento de metais e outros contaminantes em solos e
sedimentos. Via de regra estes suportes so minerais e matria
orgnica. A presena desses suportes no ambiente pode
alterar de maneira bastante efetiva a mobilidade e a
biodisponibilidade de elementos ou substncias txicas no
ecossistema e, dessa forma, sua identificao extremamente
relevante em avaliaes de risco ecolgico. Em outras
palavras, a resultante da atuao simultnea desses suportes
determina os teores potencialmente biodisponveis no solo,
cuja assimilao bitica depender das vias exposio e da
biologia do organismo.

4.1.1 | Propriedades do Solo e Indicadores Geoqumicos

O pH, ao assumir valores cidos, favorece a oxidao,


solubilizao e mobilizao de metais no ambiente (Rodrigues-
+
Filho e Maddock 1997). O aumento da disponibilidade de H no
meio pode provocar instabilidade na eletrosfera dos metais,
favorecendo sua partio para a frao positivamente
carregada, dissolvida, complexada ou coloidal. A partir dessa
premissa e com base nas condies ideais da termodinmica,
algumas informaes sobre a mobilidade dos metais podem ser
obtidas considerando sua solubilidade e suas formas qumicas
predominantes em funo das condies de pH-Eh (Garrels
and Christ, 1965; Drever, 1997; Brookins, 1986; Rodrigues-
Filho e Maddock, 1997).
22 Cesar, R. G. et alii

O potencial de oxi-reduo (Eh), indicador do grau de


disponibilidade de eltrons no ambiente, afeta diretamente o
estado de oxidao dos elementos no ambiente (Garrels e Christ,
1965; Krauskopf, 1967; Drever, 1997; Rodrigues-Filho e Maddock
1997), influenciando, assim, sua solubilidade, forma qumica e
toxicidade. A slica, o alumnio e o ferro so elementos que
possuem baixa solubilidade sob condies de pH-Eh no-
anmalas e so muito utilizados na normalizao de dados
geoqumicos, especialmente em ambientes tropicais (Aloupi e
Angelidis, 2001). A slica, por exemplo, um excelente indicador
de qualidade de solos e sedimentos aquticos em reas
impactadas por drenagem cida de minas, devido sua baixa
solubilidade sob condies cidas. Castilhos et al. (2010), por
exemplo, encontraram correlaes inversas entre os teores totais
de slica e o somatrio das concentraes de Fe e Al em
sedimentos fluviais afetados por drenagem cida de minas no
sudeste de Santa Catarina, sugerindo que enquanto o Fe e Al
alteravam sua mobilidade em funo do pH, enquanto a slica
permanecia menos mvel nos sedimentos.
A quantificao dos teores totais de ferro total tambm pode
fornecer informaes valiosas sobre o comportamento de metais
no ambiente. Metais pesados possuem forte afinidade com oxi-
hidrxidos de ferro (abundantes em solos tropicais), sendo o Fe
total um bom indicador da abundncia dessas assembleias
minerais (Roulet e Lucotte, 1995; Hylander et al. 2000; Cesar et al.
2011). Neste sentido, a abundncia de goethita (FeOOH) e
hematita (Fe2O3) (principalmente) podem diminuir
significativamente a biodisponibilidade e a toxicidade de metais
em solos. As limonitas (FeO(OH)nH2O), hidrxidos de ferro
amorfos, podem tambm exercer papel fundamental nestes
processos.
(Eco)toxicologia de metais em solos... 23

Experimentos de laboratrio propem ordens preferenciais de


adsoro de metais pela hematita (Pb>Cu>Zn>Co>Ni>Mn)
(McKenzie, 1989) e pela goethita (Pb>Cu>Zn>Co>Ni>Cd)
(Fischer et al. 2007). De fato, Rodrigues-Filho e Maddock
(1997), ao estudarem a mobilidade potencial de mercrio em
solos de uma rea degradada pela minerao de ouro,
encontraram relaes positivas e significativas entre os teores
totais de Fe e Hg total, atribuindo aos oxi-hidrxidos de Fe
papel fundamental na reduo da mobilidade e da
biodisponibilidade. Wasserman et al. (2001) e Wasserman et al.
(2003) tambm apontam os oxi-hidrxidos de ferro como
importantes carreadores geoqumicos de Hg no ambiente
amaznico (Figura 2), os quais seriam capazes de diminuir sua
mobilidade e biodisponibilidade.

Fonte: Wasserman et al. (2001).

Figura 2. Modelo esquemtico do ciclo biogeoqumico do mercrio na


Amaznia, com destaque para o papel dos xidos e hidrxidos de
ferro na reteno mercurial.
24 Cesar, R. G. et alii

Outra fase mineral relevante nos mecanismos de mobilidade de


metais em solos a gibbsita [(Al(OH)3)]. A gibbsita possui forte
afinidade com metais pesados (Hylander et al. 2000; Cesar et
al. 2011), e possui papel relevante na mobilidade de metais em
ambientes submetidos a intenso intemperismo. De acordo com
Hsu (1989), os hidrxidos de Al possuem a seguinte ordem
preferencial para adsoro de metais: Cu>Pb>Zn>Co>Ni>Mn.
Cesar et al. (2011), por exemplo, ao avaliar a mobilidade
potencial de cobre em uma rea de garimpo de ouro
abandonada, detectaram relaes positivas e significativas
entre as concentraes totais de Cu e de Al em solos
(Figura 3). Naquele estudo, os autores atriburam a abundncia
de gibbsita (associada presena de depsitos de bauxita)
para a explicar a baixa mobilidade e biodisponibilidade do
metal. Weerasooriya et al. (2003) tambm descrevem alguns
mecanismos de adsoro de arsnio em gibbsita, sugerindo
que o referido mineral desempenha papel vital na fixao do
metal e decrscimo da biodisponibilidade.

Fonte: Adaptado de Cesar et al. (2011).

Figura 3. Relao positiva de dependncia entre as concentraes


totais de cobre, e os percentuais totais de alumnio em solos oriundos
de rea contaminada no municpio de Descoberto (MG). A linha
tracejada representa o intervalo de 95% de confiana.
(Eco)toxicologia de metais em solos... 25

A presena diferenciada de argilominerais constitui outro


atributo de suma importncia na interpretao dos processos
de reteno de elementos-traos no ambiente, sendo a
determinao de Al total um indicador da abundncia dessas
assembleias minerais. Sabidamente, argilominerais 2:1
possuem maior potencial de adsoro e de troca de ctions
quando comparados a minerais de argila do tipo 1:1. Neste
sentido, Triegel (1980) apresenta a seguinte srie de
preferncia de adsoro de ctions divalentes em funo de
distintos minerais de argila: (i) caulinita:
Cd<Zn<Mg<Cu<Ca<Pb; (ii) ilitas: Mg<Cd<Ca<Zn<Cu<Pb; (iii)
esmectitas: Zn<Cd<Mg<Cu<Pb<Ca. A abundncia dessas
assembleias minerais est fortemente associada ao grau de
intemperizao ao qual o material foi submetido, sendo
abundante a presena de caulinita em solos tropicais
(geralmente mais intemperizados). A presena de
argilominerais expansivos pode alterar significativamente os
processos de disponibilizao de ctions para a soluo do
solo e, consequentemente, para organismos fortemente
dependentes dessa fase aquosa, como plantas ou oligoquetas
(Cesar et al. 2014a; Cesar et al. 2014b).

A matria orgnica crucial na fixao de metais e poluentes


orgnicos no ambiente, sendo a quantificao do COT
(carbono orgnico total) o seu principal indicador (Yin et al.
1996; Cesar et al. 2011a). As molculas de matria orgnica,
uma vez em dficit eletrnico, so capazes de sequestrar
ctions metlicos em soluo, formando complexos estveis
(Figura 4). Neste sentido, importante assinalar que a
geoqumica da matria orgnica possui papel importante
nesses processos, sendo que os cidos hmicos possuem
geralmente afinidade mais forte com metais do que as
26 Cesar, R. G. et alii

substncias flvicas. Em solos, Yin et al. (1996) propem a


seguinte ordem de afinidade para alguns metais:
Zn>Cu>Pb>Hg. De fato, zinco e cobre so bons indicadores
de contaminao por esgoto domstico, estando dessa forma
bem correlacionados com a abundncia de matria orgnica
(Cesar et al. 2011; Cesar et al. 2013).

A presena e distribuio de matria orgnica no ambiente ,


em geral, fortemente controlada pela textura do solo ou
sedimento, visto que a matria orgnica no forma complexos
com partculas grosseiras, a exemplo dos complexos argilo-
hmicos (Windmller et al. 2007). De fato, Cesar et al. (2011a),
ao realizarem a determinao granulomtrica e a quantificao
dos teores de matria orgnica em sedimentos de corrente na
bacia do Rio Piabanha (RJ), detectaram correlaes positivas e
significativas entre os referidos parmetros. Em solos e
sedimentos, a matria orgnica capaz de indisponibilizar
ctions metlicos em soluo, reduzindo sua biodisponibilidade
e a mobilidade potencial atravs de lavagem qumica
(lixiviao) (Figura 4).

Fonte: Young et al. (1992 apud Maia, 2004).

Figura 4. Modelo esquemtico de complexao de metais pesados


por uma molcula orgnica.
(Eco)toxicologia de metais em solos... 27

2+ 2+
A condutividade eltrica trata da concentrao de Mg , Ca ,
- 2- - -
Cl , SO4 , CO3 e HCO3 no ambiente. Variaes na
condutividade eltrica podem promover a formao de distintos
complexos inicos e minerais (Rodrigues-Filho e Maddock
1997), alterando os mecanismos de precipitao, solubilidade e
disponibilidade de metais no solo. Os cloretos e carbonatos,
por exemplo, possuem forte afinidade com metais,
principalmente em solos salinos, onde geralmente predomina o
intemperismo fsico. Neste sentido, Barrow e Cox (1992 apud
Yin et al 1996) atentaram tambm para a importncia de ons
cloretos na soluo do solo, que podem desempenhar papel
importante nos processos de adsoro de mercrio, sobretudo
na faixa de pH entre 4,0 e 6,0 unidades.

4.2 | Metais Traos: Aspectos Ambientais e


(Eco)toxicolgicos

As fontes de metais pesados podem ser geognicas


(i.e., naturais) ou antropognicas. As fontes antrpicas de
contaminao esto usualmente atreladas ao emprego desses
elementos na gerao de energia, nas indstrias siderrgicas,
metalrgicas, de produo de frmacos e cosmticos,
petroqumicas, atividades de minerao e aplicao de
agroqumicos.
As fontes geolgicas de contaminao esto frequentemente
associadas a processos supergnicos de enriquecimento, ou
presena de depsitos hidrotermais na geoqumica regional
(Reimman e Garret, 2005), ou seja, regies geogrficas que
sofreram intenso metamorfismo e que contam com a presena
de depsitos de sulfetos metlicos, tais como esfarelita (sulfeto
28 Cesar, R. G. et alii

de zinco), calcopirita (sulfeto de cobre), galena (sulfeto de


chumbo), cinbrio (sulfeto de mercrio) e arsenopirita (sulfeto
de arsnio). O intemperismo dessas assembleias minerais
pode liberar os metais sob formas ionizadas para o ambiente,
estimulando sua incorporao pela biota. Rodrigues-Filho et al.
(2004), ao estudarem os nveis de contaminao mercurial em
uma ilha vulcnica (Sulawesi) na Indonsia, relatam a origem
multi-fontes de contaminao (i.e., fontes geolgicas e fontes
antrpicas associadas minerao), sendo as fontes
geognicas atreladas ao intemperismo de minerais sulfetados
presentes na geologia regional.

No Brasil, pesquisas recentes sobre a biogeoqumica do


arsnio e suas consequncias sade humana foram
executadas no Quadriltero Ferrfero (Minas Gerais), Regio do
Vale do Ribeira (So Paulo) e Amaznia (Matschullat et al.
2000; Mello et al. 2006; Figueiredo et al. 2007; Matschullat
et al. 2007; Deschamps e Matschullat 2008). A toxicidade deste
metaloide est fortemente associada sua forma qumica,
+3
sendo a espcie trivalente (As ) mais txica que as formas
+5
pentavalente (As ) e metilada (Figueiredo et al. 2007; Peakall
e Burger 2003; Planer-Friedrich et al. 2007; Rabieh et al. 2008).

Embora o mercrio (Hg) no possua funo biolgica


conhecida para nenhum organismo, sua forma orgnica
(metilmercrio MeHg) facilmente bioacumulada. A principal
via de exposio humana ao MeHg est associada ao
consumo de pescado contaminado, com danos irreversveis ao
sistema neurolgico (WHO 1990). Alguns autores ainda
reportam a existncia de fenmenos de bioacumulao e
biomagnificao na cadeia trfica aqutica, com srios
prejuzos sade desses ecossistemas (Castilhos et al. 2001;
Ohriel et al. 2008). Em solos, Burton e Shedd (2006) sugere
(Eco)toxicologia de metais em solos... 29

que concentraes baixas de MeHg, compondo cerca de 0,5 a


1,5% dos teores totais. No caso da Amaznia, a contaminao
decorrente do uso de Hg nos garimpos representa um
problema particular, j que o pescado consiste na principal
fonte de protenas para as comunidades ribeirinhas (Castilhos
et al. 1998).

De modo semelhante ao As, a toxicidade do cromo (Cr) est


atrelada ao seu estado de oxidao, sendo a forma
+6
hexavalente (Cr ) carcinognica e, portanto, mais txica que a
+3
espcie trivalente (Cr ) (Katz e Salem 1993). O Cr um metal
no essencial para as plantas e micro-organismos edficos
(Cervantes et al. 2001), porm a forma trivalente considerada
essencial para humanos e mamferos, e sua deficincia pode
causar distrbios ao metabolismo da glicose (Katz e Salem
1993). As principais fontes de poluio esto associadas aos
rejeitos de indstrias metalrgicas, fabricao de fungicidas,
manufatura de pigmentos e curtume de couro (Zaso et al.
2008).

O cdmio (Cd) um metal no essencial, carcinognico,


+2
teratognico e sua forma divalente (Cd ) facilmente
acumulada pelos rins, com severos danos ao sistema excretor
(Peakall e Burger 2003). Na cadeia trfica aqutica, Jensen e
Bro-Rasmussen (1992 apud Peakall e Burger 2003) apontam
para a ausncia de evidncias de fenmenos de
biomagnificao, bem como para a escassez de dados com
relao ao estudo da toxicidade deste metal em ecossistemas
terrestres. As fontes de poluio esto comumente atreladas ao
emprego do metal em revestimentos metlicos, pigmentos e
fabricao de produtos eletrnicos.
30 Cesar, R. G. et alii

No Brasil, estudos recentes sobre o comportamento


biogeoqumico do chumbo (Pb) e seus efeitos sade humana
foram executados na Regio do Vale do Ribeira (So Paulo)
(Paoliello et al. 2002; Moraes et al. 2004). O Pb um metal
neurotxico, no-essencial e capaz de causar srios efeitos
ictiofauna, aves, mamferos e microorganismos (Landmeyer
et al. 1993). Embora no possua qualquer funo biolgica
para oligoquetas edficas, alguns autores reportam a elevada
capacidade desses animais em acumularem altas
concentraes do metal (Suthar and Singh 2008; Carbonell
et al. 2009; Nahmani et al. 2009).

O zinco (Zn) e o cobre (Cu) so considerados micro-nutrientes


essenciais e desempenham papel importante no metabolismo
de diversos organismos. No entanto, em elevadas
concentraes podem causar srios efeitos adversos ao meio
bitico, sobretudo aos vegetais e macro-fauna edficas
(Peakall e Burger 2003; Lukkari et al. 2005). Em oligoquetas
terrestres, o Zn desempenha papel importante no crescimento,
desenvolvimento e regenerao dos tecidos desses animais,
enquanto o cobre participa no transporte de substncias entre
as clulas e os tecidos (Lukkari et al. 2005). As principais
fontes de poluio esto relacionadas aos rejeitos de indstrias
qumicas e metalrgicas, bem como aplicao de pesticidas,
herbicidas e fertilizantes, os quais comumente contm elevadas
concentraes de sais de Zn e arsenatos de Cu (Gimeno-
Garca et al. 1996; Sharma et al. 2007).

Para a maioria dos metais traos (e at mesmo para os


elementos txicos supracitados elementos relativamente bem
estudados), ainda existem lacunas importantes no que se
refere ao entendimento dos seus ciclos biogeoqumicos e seus
efeitos txicos sobre a sade do ecossistema terrestre. Neste
(Eco)toxicologia de metais em solos... 31

sentido, estudos integrados entre geoqumica ambiental e


ecotoxicologia se tornam extremamente promissores na
medida em que no somente servem de base para o
estabelecimentos de valores orientadores de qualidade
ambiental, mas sobretudo possibilitam/otimizam, de forma mais
efetiva, a compreenso dos riscos associados sade humana
e ambiental.

4.3 | ndices de Poluio

4.3.1 | ndice de Geocumulao (Igeo)


O ndice de Geoacumulao (Igeo) uma ferramenta de
monitoramento criada pelo pesquisador German Mller (Mller,
1979), da Universidade de Heidelberg (Alemanha), e foi
inicialmente idealizado para mapear as concentraes de
metais pesados ao longo da bacia do Rio Reno. O Igeo
consiste em uma escala logartmica a partir da qual possvel
classificar a intensidade da contaminao por metais em
sedimentos. Embora, a priori, tenha sido concebido para
avaliao da contaminao por metais, o Igeo tambm pode
ser utilizado na avaliao de qualquer outro contaminante de
carter conservativo, i.e., que possua elevado tempo de
residncia no ambiente (tais como pesticidas organoclorados
ou hidrocarbonetos aromticos policclicos de cadeia longa).
O clculo do ndice baseado na concentrao do elemento
obtido no solo ou sedimento e no respectivo teor mdio
determinado no folhelho mdio (folhelho padro) (Equao 1;
Tabela 2). Um fator de 1,5 tambm inserido na equao de
forma a atenuar variaes naturais da geoqumica regional.
32 Cesar, R. G. et alii

Tabela 2. Concentraes de alguns metais txicos no folhelho mdio


(folhelho padro) e nveis de base naturais em sedimentos.

Hg Zn Cu Ni Pb
Nvel de base
(mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg)

Folhelho mdio 0,04 120 39 68 23

Mdia mundial
0,073 95 33 52 19
em sedimentos

Fonte: Adaptado de Turekian e Wedepohl (1961) e Jonasson e Boyle, 1979


apud Rodrigues-Filho, 1995).

IGEO = Log2 Me / BG x 1,5 [1]

Onde,

Me: Concentrao do metal no solo ou sedimento;


BG: Background geoqumico do metal no folhelho mdio
(folhelho padro).

A utilizao dos valores de background obtidos em folhelhos


decorre do fato destas rochas serem abundantes, de terem
origem sedimentar, apresentarem textura fina e elevado teor de
matria orgnica i.e., trata-se de uma rocha que rene
atributos que favorecem a fixao de metais. Mller (1979)
tambm recomenda a utilizao de backgrounds regionais ou
locais no-contaminados da rea de estudo. No caso do
emprego dos folhelhos, Mller (1979) sugere o emprego da
concentrao obtida na frao fina do solo ou sedimento, uma
vez que remetem mais efetivamente s interaes com
suportes geoqumicos e textura fina dos folhelhos.

O IGEO tradicionalmente utilizado por diversos outros autores


(Rodrigues-Filho e Maddock, 1997; Cesar et al. 2011) e, dessa
(Eco)toxicologia de metais em solos... 33

forma, os dados consistem em um bom parmetro de


comparao. Cesar et al. (2011), ao aplicar o IGEO em uma
antiga rea de minerao de ouro na poro meridional do
estado de Minas Gerais, foi capaz de mapear anomalias
geoqumica de mercrio, zinco e cobre em sedimentos fluviais.
Naquele trabalho, a abundncia de oxi-hidrxidos de ferro e
alumnio parece desempenhar papel importante na reteno
desses metais. O ndice pode ser agrupado em 7 classes (de 0
a 6), as quais descrevem o incremento do metal em relao ao
background e os respectivos graus de poluio (Tabela 3).
Tabela 3. ndice de Geoacumulao (Igeo) de metais pesados nos
sedimentos do Rio Reno (Alemanha).

Acumulao no
Intensidade da Poluio Classe IGEO
Sedimento (Igeo)
Muito fortemente poludo >5 6
Forte a muito fortemente poludo >4-5 5
Fortemente poludo >34 4
Moderado a fortemente poludo >23 3
Moderadamente poludo > 1 -2 2
Pouco a moderadamente poludo >01 1
Praticamente no poludo <0 0

Fonte: Adaptado de Mller (1979).

A Tabela 4 indica valores mximos de classes de IGEO de


zinco e cobre para diferentes localidades brasileiras. Ambos
elementos so indicadores de poluio por esgoto domstico, o
que justifica a obteno de mais elevados valores de IGEO
para o Rio Piabanha (RJ) (bacia hidrogrfica altamente
impactada por efluentes domsticos) e o Canal do Cunha (RJ),
que compe a bacia da baa de Guanabara. Descoberto (MG)
34 Cesar, R. G. et alii

e Pocon (MT) so/foram reas de minerao artesanal de


ouro. As anomalias geoqumicas de zinco e cobre, em geral
mais baixas e de menor biodisponibilidade, esto associadas
ao processo de concentrao gravtica, capaz de concentrar
assembleias minerais de alta densidade (incluindo sulfetos,
xidos e minerais ferro-magnesianos) que comumente contem
altos teores associados de zinco e cobre.

Tabela 4. Comparao entre os valores mximos de classes de ndice


de geoacumulao (IGEO) para zinco e cobre, obtidos em distintas
localidades brasileiras.

Fontes Classe Classe


Localidade Autores
Potenciais IGEO (Zn) IGEO (Cu)
Rio Piabanha Esgoto e Cesar et al.
2 3
(RJ) indstrias (2011a)
Canal do Cunha Esgoto e Cesar et al.
3 4
(RJ) indstrias (2014a)
Crrego Rico Minerao Cesar et al.
1 1
(Descoberto, MG) de ouro (2011)
Minerao
Crrego Bento Rodrigues-Filho e
e fontes 1 2
(Pocon, MT) Maddock (1997)
litognicas

4.3.2 | ndice Geoqumico de Distribuio Granulomtrica


(IGDG)

O ndice Geoqumico de Distribuio Granulomtrica (IGDG)


expressa o percentual da concentrao total do metal fixado
frao fina do solo ou sedimento (Equao 2). Valores de IGDG
maiores do que 60% indicam que o elemento est
preferencialmente fixado na frao fina. Valores entre 40 e 60%
(Eco)toxicologia de metais em solos... 35

apontam para a ausncia de fixao preferencial. Valores de


IGDGs abaixo de 40% indicam que o elemento est
preferencialmente concentrado na frao grosseira. O IGDG
tem sido empregado na avaliao da mobilidade de metais em
ecossistemas terrestres, bem como em investigaes da
biodisponibilidade potencial em sistemas fluviais (Santos et al.
2002).

IGDG = C(fino) x 100 / C(fino) + C(grosseira) [2]

Onde,
C(fino) = concentrao do elemento na frao fina (0,075 mm);

C(grosseira) = concentrao do elemento na frao grosseira


(1,7 0,075 mm).

A Tabela 5 indica valores de IGDG de mercrio determinados


em diferentes reas afetadas pela poluio. O mais elevado
valor de IGDG indicado (86%) decorre da abundncia de
matria orgnica na frao fina desses sedimentos, cuja textura
predominantemente arenosa, fazendo com que o mercrio
esteja preferencialmente complexado pela frao fina do
material. No caso de Descoberto (MG) e Paracatu (MG),
tratam-se de reas impactadas por antigas atividades de
minerao artesanal e que, sobretudo no caso de Descoberto,
contam com elevados teores de mercrio metlico. Essa forma
qumica do mercrio eletronicamente estvel e, dessa forma,
no precisa se ligar a suportes geoqumicos (principalmente
argilominerais, matria orgnica e oxi-hidrxidos de Fe e Al)
para adquirir a estabilidade eletrnica. Portanto, o mercrio fica
livre no ambiente, sem apresentar fixao preferencial entre
fraes granulomtricas.
36 Cesar, R. G. et alii

No caso do CENTRES (Centro Tecnolgico de Resduos, em


Queimados, RJ), uma rea impactada pela disposio
inadequada de resduos de indstrias diversas, os valores de
IGDG de metais (majoritariamente entre 40-60%) aponta para a
ausncia de fixao preferencial entre as fraes
granulometricas fina e grosseira. Neste caso, apesar da textura
arenosa e dos baixos teores de matria orgnica no solo,
possivelmente a ocorrncia de argilominerais expansivos no
solo (p. ex., vermiculita e ilita com elevada capacidade de
troca catinica) afetou de maneira bastante efetiva os
processos de adsoro de ons metlicos.

O caso da Ilha Sulawesi (Indonsia) extremamente


interessante na medida em que a ilha conta com depsitos
hidrotermais de cinbrio (HgS) e, simultaneamente, com reas
impactadas por garimpos de ouro utilizando mercrio metlico
(Tabela 2). Naquele caso, no muito improvvel que a
ocorrncia de assembleias minerais sulfetadas (ainda no
intemperizadas) na frao grosseira dos solos esteja
favorecendo a fixao do mercrio para frao grosseira.
Tabela 5. Valores mdios de ndice geoqumico de distribuio
granulomtrica (IGDG) para mercrio, obtidos em sedimentos fluviais
para diferentes localidades.

Localidade IGDG (%) Autores


Sedimentos do Rio Piabanha (RJ) 86 Cesar et al. (2011a)
Solos de Descoberto (MG) 35 Cesar et al. (2011)
Solos de North Sulawesi Adaptado de Rodrigues-
40
(Indonsia) Filho et al. (2004)
Senderowitz e Cesar
Solos de Paracatu (MG) 72
(2011)
Solos do CENTRES (RJ) 40-60 Cesar et al. (2013b)
(Eco)toxicologia de metais em solos... 37

4.4 | Extraes: Sequencial e Seletiva


Em pedologia, o fracionamento geoqumico de metais
tradicionalmente realizado atravs de extraes seletivas.
Neste sentido, extraes utilizando solues salinas (MgCl2,
KCl, dentro outros), cidos fracos (p. ex. cido actico)
oucidos fortes diludos (p. ex. HCl 0.05M) so amplamente
conhecidas na literatura (Rodrigues-Filho e Maddock, 1997;
Gleyzes et al. 2002, Amir et al. 2005; Cesar et al. 2011).

Durante as ltimas dcadas, sobretudo sob influncia das


escolas canadense e alem de geoqumica ambiental,
pesquisadores brasileiros tm empregado mtodos de extrao
sequencial para avaliao da biodisponibilidade de metais.
Esses mtodos consistem em extraes sucessivas de uma
mesma amostra, utilizando diferentes extratores (Gleyzes et al.
2002). Um mtodo pioneiro de extrao sequencial de metais,
inicialmente idealizado para identificao de fraes
geoqumicas de distintas mobilidades, foi proposto por Tessier
et al. (1979). Boa parte dos mtodos de extrao sequencial
atualmente propostos so adaptaes deste mtodo.

Tessier et al. (1979) propuseram o emprego de cinco diferentes


extratores e a identificao de cinco fases geoqumicas: (i)
solvel (extrada com uma soluo salina); (ii) trocvel ou
adsorvida (extrada com o emprego de um cido fraco); (iii)
ligada matria orgnica (extrada com um oxidante forte); (iv)
ligada aos xi-hidrxidos de Fe, Al e Mn (extrada com
reagente redutor); e (v) residual (inerente composio
geoqumica e cristalografia do gro). As primeiras fraes
extradas correspondem quelas de maior mobilidade e
biodisponibilidade, enquanto a frao residual consiste na
frao menos biodisponvel.
38 Cesar, R. G. et alii

Sob o vis da ecotoxicologia, os mtodos de extrao


sequencial adquirem considervel relevncia. De acordo com a
biologia do organismo e das vias de exposio ao
contaminante, possvel associar o aumento das
concentraes de fraes geoqumicas especficas com o
incremento da toxicidade. No caso dos solos, por exemplo, as
fraes solvel, trocvel e ligada matria orgnica possuem
considervel relevncia ao se analisar o risco ecolgico
associado fauna de oligoquetas edficas, considerando que
as principais vias de exposio desses organismos so
epiderme e a ingesto (Vijver et al. 2003).

4.5 | Ensaios de Batelada


Os ensaios de batelada consistem na extrao lquida de uma
amostra slida (neste caso, solos deformados) durante
perodos variados de tempo, possibilitando a obteno de
coeficientes de partio slido:lquido (razo entre o teor do
metal no solo pela concentrao determinada no
sobrenadante) para os tempos testados (Figura 5). Em geral,
as extraes so efetuadas com gua deionizada em distintas
faixas de pH, de modo a investigar a influncia deste parmetro
sobre a lixiviao potencial de metais.
Estes ensaios permitem avaliao da capacidade total de
adsoro de metais (e outros contaminantes) frente atuao
simultnea de todos os suportes geoqumicos presentes no
solo (matria orgnica, argilominerais, oxi-hidrxidos de ferro e
alumnio, etc.), possibilitando inferncias acerca dos
mecanismos de mobilidade e possveis adsores preferenciais
de metais. As isotermas de adsoro e as equaes de
Freundlich e de Langmuir so usualmente empregadas na
modelagem da mobilidade potencial de metais.
(Eco)toxicologia de metais em solos... 39

Fonte: Demuelenaere (2010).

Figura 5. Extrao lquida seguida de centrifugao do sobrenadante


em ensaios de batelada com solo.

4.6 | Ensaios de Coluna


O ensaio de coluna um procedimento que permite entender
os mecanismos de transporte e de interao de uma soluo
com o solo, sob condies controladas de laboratrio. Com
este ensaio, pode-se estudar o fluxo do fluido e de seus
componentes e suas interaes com o meio ambiente, com
nfase no detalhamento do comportamento do contaminante
em subsuperfcie (Figura 6). Tais ensaios so usualmente
empregados por pedlogos e geolgos/geotcnicos
ambientais, alm de serem consagrados pela pedologia e
engenharia ambiental.
40 Cesar, R. G. et alii

So diversos os fenmenos que controlam o transporte de


contaminantes em meios porosos, nos quais o contaminante
considerado a massa de alguma substncia dissolvida,
movendo-se no meio fluido, ou com este (gua) nos vazios do
meio poroso (solo) seja ele saturado ou no (Nobre, 1987).

O movimento de poluentes no depende apenas do fluxo do


fluido no qual essas substncias esto dissolvidas, mas sim de
mecanismos que, por sua vez, dependem de processos fsicos,
qumicos e biolgicos. Os processos fsicos compreendem os
fenmenos da adveco e disperso hidrodinmica, enquanto
os processos qumicos englobam as diversas reaes qumicas
que podem ocorrer entre a soluo contaminada e o solo.
A Tabela 6 expressa os processos fsicos e qumicos na
migrao de contaminantes
Tabela 6. Processos fsicos e qumicos na migrao de poluentes
(adaptado de Nobre, 1987).

Processos Fisicos Processos Quimicos


Adveco Adsoro-Dessoro
Disperso ou Disperso Precipitao-Dissoluo
Hidrodinmica
Atividade Biologica
- Dispero Mecnica
Oxido-Reduo
- Dispero Molecular
Formao de complexos e quelao

Fonte: (adaptado de Nobre, 1987).

O transporte de poluentes no solo pode ser influenciado por


alteraes em trs variveis: o solo, o poluente e o meio
ambiente. As alteraes em uma dessas variveis ocasionam
modificaes nas outras. As principais alteraes, segundo
Elbach (1989), so:
(Eco)toxicologia de metais em solos... 41

(i) variveis do solo - tipo de solo, mineralogia, distribuio


granulomtrica, estrutura do solo, capacidade de troca
inica, tipo de ons adsorvidos e tipo e teor de matria
orgnica presente;
(ii) variveis do poluente - tipo de poluente, concentrao do
poluente e outras substncias presentes, densidade,
viscosidade, pH, polaridade, solubilidade, demanda
bioqumica de oxignio e demanda qumica de oxignio;

(iii) variveis do ambiente - condies hidrogeolgicas,


condies aerbicas/anaerbias, temperatura, micro-
organismos presentes, potencial de xido-reduo

O transporte e a reteno de contaminantes no solo podem ser


estudados pela percolao de solues atravs de colunas
com solos (ensaios de coluna de percolao), que simulam as
condies de fluxo no meio poroso e as interaes do
contaminante com o meio, obtendo a concentrao do
contaminante na frao slida da coluna (solo) e na frao
lquida (lixiviado).

Nesse ensaio, determina-se a reteno do contaminante pelo


solo e, por conseguinte, a diminuio da velocidade da frente
de contaminao. Este fenmeno chamado de retardamento
da frente de contaminao, e quantificado pelo fator de
retardamento (R). A taxa de reteno de substncias pelo solo
vai diminuindo com o tempo, at tornar-se nula, atingindo,
asim, sua capacidade de reteno. A rea atingida pelo
contaminante, bem como a maneira pela qual ele se desloca
no subsolo, caracteriza a chamada pluma de contaminao.
42 Cesar, R. G. et alii

Fonte: Alamino (2010).

Figura 6. Modelo esquemtico do ensaio de lixiviao em coluna


executado por Alamino (2010). (1) reservatrio superior, (2)
reservatrio inferior, (3) vazadouro, (4) colunas de solo (5) funis e (6)
provetas para recolhimento do percolado.
(Eco)toxicologia de metais em solos... 43

5. | ECOTOXICOLOGIA TERRESTRE, ATRIBUTOS


GEOQUMICOS E INTERFACE COM A LEGISLAO
AMBIENTAL BRASILEIRA
No Brasil, a execuo de bioensaios para avaliao da
qualidade de guas uma exigncia da legislao (Resoluo
357 do CONAMA, 2005), demonstrando uma clara
preocupao em associar aspectos hidrogeoqumicos e
ecotoxicolgicos. O Brasil conta com alguns grupos
consolidados na realizao de bioensaios com organismos
aquticos, o que facilita o atendimento da legislao por parte
das empresas, principalmente.
No Brasil, os valores orientadores para qualidade de solos
esto descritos na Resoluo 420 do CONAMA de 2009.
O documento baseado nos dados propostos por CETESB
(2005), para qualidade de solos do Estado de So Paulo.
A referida resoluo sugere que o valor de referncia deve
ser estabelecido com base no background pedogeoqumico de
cada estado da federao, devido a caractersticas inerentes
geologia e pedologia regional. Dessa forma, a cartografia
pedogeoqumica do Brasil se torna questo de prioridade para
o pas e, sob essa perspectiva, a concepo de mapeamento
geoqumico de baixa densidade, proposta da geologia mdica,
adquire grande relevncia. Os valores de preveno e
interveno, propostos pela Resoluo CONAMA 420, esto
baseadas em avaliao de risco ecolgico e sade humana,
respectivamente.

A Resoluo CONAMA 420 no exige o emprego de


bioensaios com organismos de solo na avaliao do grau de
poluio, mas deixa implcita, sobretudo atravs de seus
valores de preveno, a importncia e relevncia destes
44 Cesar, R. G. et alii

ensaios. De fato, existe uma carncia muito grande de grupos


brasileiros consolidados capazes de executar bioensaios com
organismos de fauna de solo e, por conseguinte, a legislao
ainda no pode requerer a execuo destes tipos de ensaios
de forma rotineira. importante destacar que a ecotoxicologia
(e em especial, a ecotoxicologia de solos) recente no Brasil,
sendo a adequao de procedimentos s condies tropicais
ainda um grande desafio.

A Resoluo 454 do CONAMA (2012) estabelece as diretrizes


para a disposio de sedimentos de dragagem no Brasil,
incluindo a sua disposio terrestre, i.e., em solos. Trata-se do
nico documento deliberando sobre a qualidade de sedimentos
no Brasil. Esta resoluo est baseada em ensaios de
ecotoxicidade e permite a classificao do sedimento com base
na probabilidade de baixa ou alta ocorrncia de efeitos
adversos biota (i.e., risco ecolgico). Esta resoluo
baseada na legislao canadense, para dragagem de
sedimentos porturios (Canadian Council, 2001). Dessa forma,
os dados foram gerados para materiais e organismos de clima
temperados e, sendo assim, no refletem as especificidades
dos ecossistemas tropicais.

A orientao de Canadian Council (2001) para teores de metais


pesados em sedimentos baseada na toxicidade destes
contaminantes para a biota bentnica. De acordo com
Canadian Council (2001), em decorrncia da complexa
composio qumica e mineralgica dos sedimentos fluviais e
das suas inter-relaes com o substrato aquoso, o mais
prudente para efeitos de diagnstico ambiental a associao
de aspectos sedimentolgicos/geoqumicos e bioindicadores
aquticos. Sendo assim, as concentraes de referncia de
Canadian Council (2001) e de CONAMA 454/2012 foram
(Eco)toxicologia de metais em solos... 45

determinadas de acordo com ensaios ecotoxicolgicos em


sedimentos de gua doce enriquecidos de substncias-teste,
utilizando organismos bentnicos.

Um aspecto importante que quando se trata de aes


envolvendo sedimentos (p.ex., dragagens) os critrios a serem
utilizados so os da Resoluo CONAMA 454/2012 e no caso
dos solos, os critrios da Resoluo CONAMA 420/2009.
Portanto, no caso da disposio continental de materiais
dragados - seja da atividade porturia e outras na zona
costeira, seja de projetos de saneamento ambiental envolvendo
a limpeza de canais e outros -, devem ser utilizados os critrios
da Resoluo 420. A razo disso que a disposio terrestre
envolve possveis misturas solo: sedimento sobre o continente
(os quais deveriam ser tratados como solos construdos,
mesmo no caso da disposio ficar confinada). Com o tempo,
podemos considerar a evoluo destes materiais como
seguindo uma tendncia de transformaes pedolgicas.
Neste sentido, a execuo de bioensaios (utilizando
organismos edficos) com misturas solo: sedimento de
fundamental importncia para a determinao de doses
potencialmente txicas ao ecossistema terrestre.

Este cenrio cada vez mais forte: a necessidade de


recuperao de corpos aquosos degradados, o custo do
transporte na composio dos custos globais de dragagem e
as crticas da disposio de dragagem em reas distantes no
contaminadas de corpos hdricos, levem tendncia da
disposio em reas continentais prximas, com a
possibilidade de utilizao das misturas solo: dragagem na
retificao de terreno e outras aes.
46 Cesar, R. G. et alii

6. | ABORDAGEM ECOTOXICOLGICA: MTODOS E


APLICAES
A maior parte dos estudos geoambientais em solos est
tradicionalmente baseada em anlises qumicas totais,
extraes sequencias e/ou seletivas e especiao geoqumica.
Contudo, embora extremamente importantes, essas
abordagens analticas no levam em considerao a
ecotoxicidade decorrente da atuao simultnea de distintos
agentes txicos no ambiente (sinergia de contaminantes), bem
como seus efeitos ecolgicos sobre a fauna terrestre ou
aqutica (Selivanovskaya e Latypova 2003). De fato, estudos
ambientais calcados no emprego de ensaios ecotoxicolgicos
como ferramenta na avaliao do grau de poluio comearam
a ser realizados com maior frequncia a partir da dcada de 90
(Nepper, 2000) e, sobretudo no caso dos solos, ainda so
escassos.

A abordagem ecotoxicolgica, focada na interao biota-solo,


pode complementar os resultados da geoqumica analtica
atravs do monitoramento de efeitos letais e subletais em
organismos-teste, tais como mudanas morfolgicas,
comportamentais, fisiolgicas, bioqumicas, citogenticas e de
fertilidade (Straalen et al. 2005), fornecendo informaes
importantes acerca da biodisponibilidade potencial de
contaminantes e, at mesmo, da amplificao de efeitos ao
longo da cadeira trfica. Tais dados so de fundamental
importncia definio de quaisquer aes de remedio ou
de planejamento ambiental e, dessa forma, podero fornecer
suporte fundamental a futuras avaliaes de risco ecolgico, ao
estabelecimento futuro de indicadores de sustentabilidade e
tomada de deciso em programas de sade ambiental,
humana e controle da poluio.
(Eco)toxicologia de metais em solos... 47

Nesta seo, sero apresentadas, de maneira breve, alguns


mtodos, perspectivas metodolgicas futuras e desafios que
envolvem o uso de ferramentas ecotoxicolgicas, com especial
ateno s necessidades das regies e solos tropicais.
O processo de avaliao de risco ambiental, conduzida sob os
pressupostos da avaliao de risco ecolgico, nortear as
temticas a serem discutidas. Neste contexto, sero tambm
fornecidas informaes acerca da metodologia de avaliao de
risco ecolgico proposta por USEPA (1998).

6.1 | Avaliao de Risco Ecolgico


A metodologia de avaliao de risco sade humana, proposta
pela US EPA (1989) e adaptada para avaliao do risco
ecolgico (US EPA, 1998), consiste na gerao de ndices ou
quantificaes do risco com base em modelos biolgicos e
estatsticos. Desta forma, a avaliao de risco, em geral,
fornece estimativas numricas da segurana do ambiente em
termos da ocorrncia de eventuais efeitos adversos sade
humana ou biota. Estas abordagens analticas vo alm dos
padres ou valores de referncia de qualidade ambiental, visto
que estes valores genricos no consideram as condies
especficas do local, tais como os tipos de pessoas (idade, uso
da terra, peso, hbitos alimentares, etc.) e a diversidade de
receptores ecolgicos. Alm disso, esses padres de qualidade
ambiental nem sempre esto disponveis para todos os
contaminantes de interesse.

Essas metodologias de avaliao de risco ecolgico e sade


humana esto baseadas nos princpios de toxicologia
ambiental, no conhecimento das propriedades fsico-qumicas
dos agentes txicos e no seu comportamento no ambiente,
48 Cesar, R. G. et alii

alm de extensamente utilizada e reconhecida por agncias


reguladoras e pela comunidade cientfica. Os mtodos e
procedimentos tm estado disponveis h muitos anos,
sobretudo na Europa e Estados Unidos. Os resultados de uma
avaliao de risco so a identificao dos
compostos/elementos qumicos de interesse, zoneamento do
risco e a delineao de reas crticas com risco potencial
sade humana e ambiental. Estas informaes so de suma
importncia tomada de deciso em programas de sade
pblica e de gerenciamento dos recursos naturais,
especialmente quando existem vrias alternativas de
remediao e quando os recursos para reduo do risco so
limitados.
A avaliao de risco ecolgico consiste em um processo lgico
para a avaliao da probabilidade de ocorrncia de efeitos
adversos sade dos ecossistemas terrestres e aquticos,
incluindo a flora, fauna ou qualquer outro receptor ecolgico
(US EPA, 1998). Os fatores de estresse ambiental podem estar
associados a atividades antropognicas ou naturais, tais como
contaminao, degradao fsica (eroso, assoreamento, etc.),
introduo de espcies no-nativas, ou catstrofes naturais.
A avaliao de risco ecolgico, proposta pela US EPA (1998),
engloba basicamente as etapas demonstradas na Figura 7, as
quais sero resumidamente descritas a seguir:

1) Formulao do problema: Esta etapa contempla definio


dos agentes txicos de interesse (em geral,
substncias/elementos de maior toxicidade), os receptores
ecolgicos e as vias de exposio associadas aos
diferentes organismos. Outro aspecto importante a
definio de componentes de alta relevncia ecolgica, tais
como habitats raros e extremamente sensveis a mudanas
(Eco)toxicologia de metais em solos... 49

ambientais. A integrao destes atributos definir o


planejamento e o escopo que estabelece os objetivos e
foco da anlise, cujos resultados bsicos sero: a seleo
dos objetivos da avaliao - endpoints (atributos dos
ecossistemas a serem protegidos), a elaborao do modelo
conceitual (construo dos meios hipotticos atravs dos
quais as atividades humanas induzem efeitos nos
endpoints) e o plano de anlises (incluindo dados,
parmetros e mtodos necessrios para a conduo da
fase de anlise);

2) Avaliao da exposio: Nesta etapa realizada a


estimativa da taxa de incorporao dos contaminantes de
interesse pelos organismos. A definio dessas taxas
depende diretamente da concentrao dos agentes txicos
(no ar, gua, solo, sedimento, rocha), das vias de
exposio consideradas (taxas de ingesto, inalao,
hbitos alimentares, biomassa, contato drmico)
e do comportamento biogeoqumico dessas
substncias/elementos no ambiente. Essas taxas so
frequentemente estimadas atravs da realizao de
bioensaios, utilizando organismos-teste de interesse, ou de
reviso bibliogrfica detalhada. interesse ressaltar o
enfoque sistmico desta abordagem, uma vez que a
preocupao ao nvel de populaes que compem o
ecossistema, enquanto na avaliao de risco sade
humana, o enfoque recai sobre o indivduo;
50 Cesar, R. G. et alii

3) Avaliao da toxicidade: Nesta etapa determina-se a


dose ou concentrao aceitvel para receptores
especficos que podem estar expostos nas condies
atuais (antes da implementao do empreendimento) sem
risco ou com um risco mnimo de desenvolvimento de
efeitos adversos;

4) Caracterizao do risco: Nesta etapa comparam-se os


resultados da avaliao da exposio com os da avaliao
da toxicidade e determina-se o potencial das substncias
qumicas provenientes do local de causar risco sade dos
receptores ecolgicos. O risco determinado pela razo
entre a exposio especfica do local e o nvel de
exposio aceitvel. Se essa razo, chamada de quociente
de perigo (ou razo de exposio), for menor do que uma
unidade, no h risco. Por outro lado, se o quociente de
perigo for maior do que uma unidade, h uma possvel
indicao de risco inaceitvel. E, neste caso, os resultados
devem ser reavaliados, de acordo com o grau de
conservadorismo aplicado na avaliao e na magnitude do
quociente de perigo.
(Eco)toxicologia de metais em solos... 51

PLANEJAMENTO

FORMULAO DO PROBLEMA

Integrao das informaes disponveis

Compartimentos-alvo Modelo conceitual

Formular o plano de anlise

AVALIAO DA EXPOSIO / EFEITOS

Anlises do ecossistema receptor

Anlises de exposio Anlises de efeito

Anlises dos dados de exposio Anlises das respostas ecolgicas

Retrato da exposio Retrato das respostas biolgicas

CARACTERIZAO DO RISCO

Estimao do risco Descrio do risco

COMUNICAO DOS RESULTADOS PARA O RGO GESTOR E


PARA A SOCIEDADE

Fonte: Rodrigues (2006) adaptado de US EPA (1998).

Figura 7. Modelo de avaliao de risco ecolgico proposto pela


Agncia Nacional de Proteo Ambiental Americana.
52 Cesar, R. G. et alii

6.2 | Bioensaios como Ferramenta de Monitoramento


Durante as ltimas dcadas, vem crescendo o interesse pelo
uso de bioindicadores (biomonitoramentos e/ou bioensaios) na
avaliao do potencial txico de substncias e/ou elementos
qumicos presentes em materiais geolgicos, sobretudo metais
pesados e hidrocarbonetos de petrleo (Svendsen e Weeks,
1996; Peredney and Williams, 2000; Fountain and Hopkin et al.
2004; Chelinho et al. 2011; Van-Gestel et al. 2011). Para
avaliar de maneira sistemtica os efeitos adversos de
contaminantes em ecossistemas terrestres, so utilizados
bioensaios, que se baseiam na anlise dos efeitos adversos
provocados a bioindicadores expostos contaminao em
experimentos controlados de laboratrio (Lanno et al. 2003).
A avaliao da toxicidade e da biodisponibilidade geralmente
realizada atravs da observao de efeitos letais e subletais
("endpoints"), tais como mudanas morfolgicas,
comportamentais, fisiolgicas, citogenticas e de fertilidade
(Figura 8).
(Eco)toxicologia de metais em solos... 53

Fonte: Adaptado de McLaughlin et al. (2010).

Figura 8. Tipos de endpoints toxicolgicos e seus limiares de


relevncia ecolgica.

Ensaios ecotoxicolgicos esto comumente associados ao


entendimento das inter-relaes entre concentraes, efeitos
txicos e possveis alteraes que influenciam a qualidade
ambiental dos ecossistemas. Diversos tipos de organismo
(algas, vertebrados e invertebrados aquticos e terrestres) so
utilizados na avaliao da toxicidade, bem como no estudo da
distribuio espacial e temporal de contaminantes em sistemas
fluviais, marinhos e solos (Zagatto e Bertoletti, 2006). No caso
dos solos, minhocas (Eisenia andrei, foetida), colmbolos
(Folsomia candida), enquitredeos (Enchytraeuds crypticus;
albidus), caros predadores (Hypoaspis aculeifer) e nematides
54 Cesar, R. G. et alii

(Caernorhabditis elegans) tm sido amplamente utilizados


como organismos-teste em bioensaios (Crouau et al. 1999;
Peredney and Williams, 2000; Fountain and Hopkin et al. 2004;
Natal-da-Luz et al. 2008; Chelinho et al. 2011; Van-Gestel et al.
2011; Cesar et al. 2014a; Cesar et al. 2014b; Cesar et al.
2014c). Organimos aquticos, tais como microcrustceos
(Daphnia similis; magna, Ceriodaphnia dubia), algas clorofceas
(Pseudokirchineriella subcaptata), tambm tm sido usados em
bioensaios, sobretudo na simulao de cenrios de risco onde
contaminantes possam ser lixiviados dos solos a partir da ao
intemprica das guas pluviais (Maxam et al. 2000; Fjllborg
et al. 2005; Cesar et al. 2010), contaminando, assim, os
sistemas aquticos vizinhos.

6.2.1 | Bioensaios em ecotoxicologia de solos: alguns


desafios
Em termos tericos, um dos maiores desafios e tendncias em
ecotoxicologia de solos diz respeito insero de uma
perspectiva mais ecolgica ecotoxicologia de solos. De fato,
Filser (2008), em seu paper intitulado "Ecological theory meets
soil ecotoxicology: a challenge and chance", alerta para a
necessidade de desenvolvimento de mtodos que busquem
mensurar os danos ao nvel do ecossistema do solo para,
dessa forma, fornecer um suporte mais slido modelagem
dos efeitos ecolgicos decorrentes da exposio. Neste
sentido, os ensaios ao nivel de microcosmos e mesocomos
emergem como ferramentas promissoras de monitoramento em
ecotoxicologia de solos. Os micro e mesocosmos consistem em
ensaios que visam modelagem do ecossistema terrestre.
Tratam-se de ensaios de semicampo e que contam com o
emprego de distintas espcies-teste. A principal diferena entre
(Eco)toxicologia de metais em solos... 55

estes ensaios que o microcosmos no permite a troca de


indivduos e de materiais abiticos com o ambiente externo,
enquanto o mesocosmos possibilita a troca de materiais
abiticos (porm, com a limitao da insero de uma barreira
fsica).

Em termos de bioensaios, uma tendncia relativamente recente


em ecotoxicologia de solos diz respeito execuo de ensaios
que visam a modelar, ainda sob um vis mais ecolgico, o
comportamento dos efeitos de contaminantes frente ao
ecossistema do solo: os TMEs (Terrestrial Model Ecosystems -
i.e., modelos de ecossistemas terrestres) (Kuperman et al.
2009). Neste sentido, uma gama variada de diferentes
organimos-teste exposta a colunas contaminadas de solo
inderfomado, em gradientes de concentrao e sob condies
controladas de laboratrio. Ao final do ensaio, alm de alguns
dos tradicionais endpoints toxicolgicos (Figura 8), possvel
avaliar os efeitos sobre a abundncia e diversidade das
espcies-teste.

Outro grande desafio para a ecotoxicologia de solos consiste


na adequao de procedimentos laboratorais (i.e. bioensaios)
s condies tropicais. Neste sentido, a maior parte das
espcies-teste terrestres atualmente empregadas foram
padronizadas para atender s demandas de regies
temperadas, fato que ainda limita a emisso de prognsticos
mais consolidados acerca do risco ecolgico em solos tropicais.
Recentemente, alguns autores tem tentado preencher esta
lacuna, detalhando o ciclo de vida e a sensibilidade de
espcies-teste tropicais a alguns contaminantes, sobretudo os
orgnicos (Buch, 2010). No entanto, muito ainda precisa ser
realizado.
56 Cesar, R. G. et alii

Alm disso, a definio da composio de um solo artificial


tropical (SAT) tambm se traduz em um desafio
ecotoxicologia de solos tropicais. O SAT deve compreender
no somente caractersticas que atendam s demandas
bsicas da biologia do organismo-teste, mas tambm s
caractersticas fsicas, qumicas e mineralgicas de solos
tropicais, dado que tais caractersticas desempenham papel
fundamental na biodisponibilidade de contaminantes e,
consequentemente, na sua ecotoxicidade potencial. Neste
contexto, a contribuio terica de geoqumicos de solo torna-
se de fundamental importncia.

Atualmente, o SAT utilizado basicamente composto por 70%


de areia de quartzo ("esqueleto" do solo), 20% de caulim (para
simulao da frao argila) e 10% de turfa ou casca de coco
(para simulao da matria orgnica) (ISO, 2008). Sabe-se
que, por exemplo, a geoqumica da matria orgnica tem
influncia na biodisponibildade de metais e, dessa forma,
diferenas nas origens das turfas podem causar discordncias
nos resultados analticos. Alm disso, a maior parte dos solos
tropicais possuem baixos teores de matria orgnica
(a exemplo dos latossolos, com teores geralmente abaixo de
3%). Por fim, a definio de uma composio mineralgica
padro para o caulim, bem como a incluso de elementos
capazes de representar os oxi-hidrxidos de ferro e alumnio
(suportes geoqumicos abundantes em solos tropicais e de
suma importncia na reteno e fixao de metais) ainda
consistem em lacunas a serem preenchidas.
(Eco)toxicologia de metais em solos... 57

6.3 | Bioensaios com Oligoquetas (Eisenia andrei)

6.3.1 | Cultivos dos Organismos


Os procedimentos apresentados aqui esto baseados nas
recomendaes de Cesar (2014) e Cesar (2009). Dessa forma,
os autores supracitados recomendam que os animais devem
ser criados em caixas plsticas contendo uma mistura de
musgo sphagnum e esterco de cavalo (previamente congelado
para desfaunagem) (Figura 9). Antes de os organismos serem
introduzidos no substrato, o pH do substrato ajustado at a
faixa de 6-7 unidades por adio de carbonato de clcio
(CaCO3). O substrato deve ser renovado e hidratado (com
gua destilada) a cada dois meses. Aveia moda deve ser
cozida em micro-ondas e servida como alimento uma vez por
semana. Os organismos utilizados nos ensaios devem estar
sexualmente maduros (com clitelo totalmente desenvolvido) e
com peso entre 250 e 600 mg.

Fonte: Cesar (2013).

Figura 9. Estante de cultivo de Eisenia andrei no Laboratrio de


Ecologia e Ecotoxicologia de Solos da Universidade de Coimbra
(Portugal).
58 Cesar, R. G. et alii

6.3.2 | Bioensaio Agudo


O procedimento laboratorial para o bioensaio agudo com
oligoquetas da espcie Eisenia andrei (Figura 10) est baseado
nas recomendaes de ASTM (2004). Sendo assim, so
utilizadas 600g de mistura-teste e de solo artificial para o
controle (massa suficiente para a execuo do ensaio em
quadruplicata), sendo a umidade ajustada para 40-60% da
capacidade de reteno de gua. O monitoramento da
umidade efetuado por gravimetria (24 horas em estufa a
o
105 C). A constituio do solo artificial segue as
recomendaes de OECD (1984) (70% de areia, 20% de
caulim e 10% do musgo Sphagnum), e deve funcionar como
grupo controle do ensaio.

Fonte: Cesar (2009).

Figura 10. Aspecto de oligoqueta adulto da espcie Eisenia andrei


( esquerda); bioensaio agudo com oligoquetas ( direita) no
Laboratrio de Ecotoxicologia do CETEM.

Antes de introduzir o total de 10 oligoquetas adultos de pesos


semelhantes (i.e., animais com clitelo bem desenvolvido e peso
variando entre 250 e 600mg; Figura 10) em cada rplica, os
organismos so deixados sobre papel de filtro umedecido com
gua destilada em um recipiente de polietileno, durante 24
(Eco)toxicologia de metais em solos... 59

horas, para o purgamento do contedo intestinal. Durante os


14 dias de exposio, os oligoquetas so mantidos sem
alimentao, temperatura de 22C e com iluminao
constante (ASMT, 2004). Ao final do ensaio, os oligoquetas
sobreviventes so novamente deixados para o esvaziamento
do contedo intestinal por 24 horas (conforme o procedimento
anteriormente descrito), e posteriormente enviados para a
anlise qumica.

A biodisponibilidade potencial de metais para os oligoquetas


sobreviventes avaliada atravs do clculo dos fatores de
bioconcentrao (FBCs), expresso pela razo entre a
concentrao total do metal no organismo e o teor total do
metal no solo (Liu et al., 2005).

6.3.3 | Bioensaio Agudo Utilizando Papel de Contato


O procedimento apresentado para este ensaio est em OECD
(1984). O ensaio consiste na exposio de oligoquetas adultos
a papis de filtro umedecidos com uma soluo-teste, a fim de
avaliar a biodisponibilidade potencial atravs de contato
drmico. O preparo da soluo-teste (elutriato) consiste na
extrao da mistura-teste (solo: lodo ou solo: sedimento) com
gua destilada, na proporo 1:4 (solo:gua), por 2 horas.

O ensaio realizado com 10 rplicas. Cada rplica contm um


organismo (Figura 11). Antes de serem usados nos ensaios, os
animais devem ser deixados sobre papel absorvente contendo
gua destilada, por 2 horas, para o purgamento do contedo
intestinal. O experimento realizado na ausncia de luz e
2
temperatura de 22 2C. O papel de filtro (5 x 10 cm ) foi
umedecido com 2mL de substncia-teste, enquanto ao controle
adiciona-se somente gua destilada. Um pedao deste papel
60 Cesar, R. G. et alii

deve ser acomodado s paredes de um bquer de 50mL, e em


seguida os organismos so introduzidos. De modo a evitar o
escapamento dos animais, os bqueres so vedados com
plstico fino contendo pequenos orifcios. Aps 72 horas de
exposio, verifica-se o nmero de oligoquetas sobreviventes.

Fonte: Cesar (2013).

Figura 11. Aspecto do bioensaio agudo com papel de contato,


utilizando oligoquetas (Eisenia andrei) no Laboratrio de
Ecotoxicologia do CETEM.

6.3.4 Teste de Fuga ou Ensaio de Comportamento


O procedimento apresentado para o ensaio de comportamento
ou fuga (avoidance test) est baeado nas recomendaes de
ISO (2008). Para a execuo do ensaio, so utilizados 600g de
solo-teste e de solo no contaminado como controle, com
umidade ajustada para 40-60% da capacidade mxima de
reteno de gua. Recipientes plsticos (20cm de
comprimento, 12cm de altura, e 5cm largura) so divididos em
duas sees de mesma rea, com o auxlio de um carto
plstico (Figura 12). Uma das sees preenchida com solo-
teste, e a outra com a mesma quantidade de solo controle
(Eco)toxicologia de metais em solos... 61

(solo natural no contaminado). Os experimentos so


conduzidos com cinco rplicas.

Aps a remoo do carto plstico, 10 indivduos adultos de


peso semelhante so colocados sobre a linha que divide os
solos (Figura 12). Antes de serem introduzidos nos solos, os
oligoquetas so condicionados por 24 horas em solo artificial.
Durante as 48 horas de exposio, os oligoquetas so
mantidos sob temperatura de 22C em incubadora, com ciclos
de luz e escurido de 16:8h. Ao final do ensaio, verifica-se a
porcentagem de oligoquetas presentes no solo-teste e no solo
controle. Quando menos de 20% dos organismos so
encontrados no solo-teste, considera-se que o solo possui
funo de habitat limitada (ISO, 2008). Para validao do
ensaio, recomenda-se a realizao de um dual-control test, i.e.,
ambas sees preenchidas com solo-controle e verificao da
homogeneidade de distribuio dos organismos via anlise
utilizando o Fisher Exact Test (Two Tailed).

Fonte: Cesar (2013).

Figura 12. Aspecto do teste de fuga com Eisenia andrei: recipientes-


teste com o divisor plstico (a esquerda); e recipiente com minhocas
recm-introduzidas (a direita) (Laboratrio de Ecotoxicologia do
CETEM).
62 Cesar, R. G. et alii

6.3.5 | Ensaio de Reproduo


O procedimento apresentado para o ensaio de reproduo com
Eisenia andrei est baseado em ISO (1998). A priori, a
umidade dos solos (misturas-teste de solo: sedimento) deve ser
ajustada para 40-60% da capacidade de reteno de gua.
O ensaio conduzido em recipientes cilndricos contendo 500g
de solo-teste (equivalente em peso seco) (Figura 13) e 10
oligoquetas adultos de peso semelhante por rplica (4),
conforme ISO (1998). Os oligoquetas so condicionados em
solo artificial por 24 horas antes de serem usados nos ensaios.
O experimento executado a 20 2C e ciclos de luz:
escurido (16:8h) (Figura 13). No incio do ensaio, 15 g de
esterco de cavalo finamente modo devem ser servidos como
alimento. Uma vez por semana os recipientes-teste so abertos
(para aerar os sistemas), momento em que mais comida
adicionada (quando necessrio) e a umidade ajustada
(por diferena de peso e subsequente adio de gua
destilada).

Aps 28 dias de exposio, os animais adultos so


manualmente coletados e pesados. Os solos-teste so
incubados por mais 28 dias para permitir a ecloso dos casulos
(Figura 13). Aps essa etapa, os organismos jovens so
contados atravs de aquecimento da base do recipiente-teste,
utilizando banho-maria a 60C.
(Eco)toxicologia de metais em solos... 63

Fonte: Cesar (2013).

Figura 13. Aspecto do ensaio de reproduo com Eisenia andrei


(a esquerda) e de incubadora utilizada para ensaios (a direita) na
Universidade de Coimbra (Portugal).

6.3.6 | Ensaio de Bioacumulao


O procedimento apresentado para este experimento est
baseado nas recomendaes de ASTM (2004). O ensaio
composto de duas etapas: bioacumulao e depurao, ambos
com durao de 28 dias. O ensaio realizado com 3600 g de
solo-teste e 90 organismos adultos de peso semelhante (para
garantir populaes mais homogneas) por rplica (3) (total de
270 indivduos) (Figura 14). A umidade das amostras
ajustada para 40-60% da capacidade mxima de reteno de
64 Cesar, R. G. et alii

gua do solo. Os recipientes-testes so vedados com um


plstico fino, contendo pequenos orifcios, de modo a impedir a
fuga dos animais. Durante a etapa de bioacumulao, 10
organismos so retirados de cada rplica em dias previamente
definidos (4, 7, 14, 21, 28 dias), e enviados para a
determinao de metais pesados (vide item 2.3.1). Os fatores
de bioconcentrao (FBC) so calculados com base na razo
entre o teor do contaminante em tecido animal pela
concentrao no solo.

Aps a etapa de bioacumulao, os organismos restantes so


transferidos para um solo artificial no contaminado, onde
permanecem por 28 dias (fase de depurao). Novamente, 10
organismos so retirados de cada rplica em dias previamente
estabelecidos (7, 14, 21, 28 dias) e enviados para a
quantificao dos teores de metais pesados, de forma a
mensurar o potencial de eliminao desses elementos pelos
organismos.

Fonte: Cesar (2013).

Figura 14. Aspecto do ensaio de bioacumulao de metais com


Eisenia andrei no Laboratrio de Ecotoxicologia do CETEM.
(Eco)toxicologia de metais em solos... 65

6.3.7 | Estudo de Caso


CESAR, R.G., COLONESE, J., SILVA, M.B., BERTOLINO,
L.C., CASTILHOS, Z.C., EGLER, S.G., POLIVANOV, H.,
BIDONE, E.D., PREZ, D.V. 2010. Avaliao da ecotoxicidade
de mercrio em trs tipos de solos utilizando ensaios
ecotoxicolgicos com oligoquetas. Geochimica Brasiliensis,
v. 24, p. 3-12.
No presente estudo, os autores investigaram (alm de outros
atributos) a influncia potencial das propriedades de trs
classes de solo (latossolo amarelo, latossolo vermelho e
chernossolo) sobre a ecotoxicidade aguda associada
contaminao por mercrio. Para tanto, os solos foram
artificialmente contaminados por uma soluo de Hg divalente,
utilizando uma soluo mercurial da Merck. Aps 24 horas de
contaminao, a ecotoxidade foi avaliada com o emprego de
bioensaios agudos com Eisenia andrei, conforme os
procedimentos descritos em ASTM (2004). A Tabela 6
demonstra as concentraes letais a 50% dos organismos
expostos (CL50), estimadas com o auxlio do Software
Trimmed Spearman Karbet.

Os resultados apontam para a influncia clara das


propriedades dos solos estudos sobre a ecotoxicidade do Hg
sendo o maior nvel de toxicidade atrbudo ao latossolo
amarelo (Tabela 7). No foi possvel constatar uma diferena
significativa entre os valores de CL50 determinados para
chernossolo e latossolo vermelho, sendo a CL50 estimada em
chernossolo ligeiramente maior.

Os latossolos vermelhos possuem altos teores de matria


orgnica e de oxi-hidrxidos de ferro; suportes geoqumicos
que favorecem o sequestro de metais, com consequente
66 Cesar, R. G. et alii

reduo da ecotoxicidade. Os chernossolos possuem


abundncia de argilominerais expansivos, capazes de adsorver
metais e de diminuir sua concentrao na soluo do solo.
Os latossolos amarelos, por outro lado, contam com uma
mineralogia composta basicamente de caulinita e possuem
teores baixos de matria orgnica - fato que pode explicar a
obteno da mais baixa CL50 entre as classes de solo
estudadas (Tabela 7).
Tabela 7. Concentrao letal a 50% dos organismos (CL50 mg/kg
de Hg) e intervalos de 95% de confiana obtidos para as classes de
solos estudadas.

Solo Limite Inferior CL50 Limite Superior


Artificial 15,27 15,86 16,48
Latossolo
18,63 19,51 20,44
Vermelho
Chernossolo 15,42 16,07 16,74
Latossolo
6,5 7,03 7,59
Amarelo

Fonte: Cesar et al (2010a).

6.4 | Bioensaios com Colmbolos (Folsomia candida)

6.4.1 | Cultivos dos Organismos


O procedimento apresentado para o cultivo dos colmbolos
(Folsomia candida) est descrito em Cesar (2014). Os animais
devem ser cultivados em potes plsticos arredondados
contendo um substrato composto de carvo ativado, gua e
gesso (Figura 15; Figura 15). A umidade do substrato
ajustada trs vezes por semana. Organismos adultos so
(Eco)toxicologia de metais em solos... 67

deixados para produo de casulos por dois dias, aps a


adio de alimento (fermento modo/granulado). Aps essa
etapa, os casulos so separados dos animais adultos, e
inoculados separadamente para substratos de cultura recm
preparados, de forma a sincronizar a idade. Somente
organismos jovens com 10-12 dias de idade so utilizados nos
experimentos. A cultura de Folsomia candida e os bioensaios
so executados em incubadora a 20 2C e foto-perodo de
16:8h (luz:escurido) (Figura 15).

Fonte: Cesar (2013).

Figura 15. Aspecto das culturas de Folsomia candida no Laboratrio


de Ecotoxicologia e Ecologia de Solos da Universidade de Coimbra
(Portugal): Em incubadora (A) e organismos em detalhe em substrato
de cultura (B).

6.4.2 | Teste de Fuga ou Ensaio de Comportamento


O procedimento apresente para o ensaio de fuga com Folsomia
candida est descrito em ISO (2007). Dessa forma, o ensaio
realizado em caixas plsticas cilndricas (11cm de dimetro e
4cm de altura) dividas em duas sees de tamanhos iguais
(Figura 16), com o auxlio de um carto plstico (ISO, 2007).
Uma seo preenchida de solo no-contaminado, e a outra
68 Cesar, R. G. et alii

com a mesma quantidade de solo-teste. A umidade do solo


deve ser ajustada para 40-60% da capacidade de reteno de
gua. O carto plstico removido e 10 animais so dispostos
na interface dos solos (ISO, 2007). Aps 48 horas de
exposio, o nmero de animais verificado em cada seo
por adio de gua aos recipientes-teste, a exemplo do
descrito no item 3.6.1.8. Quando menos de 30% dos animais
so encontrados no solo-teste, considera-se que o solo tinha
"funo de habitat limitada" (ISO, 2007).

Fonte: Cesar (2013).

Figura 16. Aspecto do ensaio de fuga (avoidance test) com Folsomia


candida na Universidade de Coimbra (Portugal).

6.4.3 | Ensaio de Reproduo


Os ensaios de reproduo com colmbolos so conduzidos
com cinco (5) rplicas contendo dez (10) animais e 30 g de
solo-teste (equivalente em peso seco) (ISO, 1999) (Figura 17).
A umidade dos solos ajustada para 40-60% da capacidade
de reteno de gua. Os recipientes-teste so semanalmente
(Eco)toxicologia de metais em solos... 69

abertos para aerar o sistema e ajustar a umidade (compensada


por repesagem de cada recipiente-teste). Cerca de 25mg de
fermento granulado servido como alimento no incio do
ensaio. Quando necessrio, mais alimento fornecido aps o
14 dia de ensaio. Aps 28 dias de experimento, os recipientes-
teste so preenchidos com gua, sendo adicionadas algumas
gotas de tinta azul (Figura 17). Aps boiarem sobre a superfcie
da gua (por tenso superficial), os organismos adultos
(sobreviventes) e jovens so contados (Figura 17).

Fonte: Cesar (2013).

Figura 17. Aspecto do ensaio de reproduo com Folsomia candida


na Universidade de Coimbra ( esquerda); Contagem dos organismos
em gua, aps 28 dias de exposio ( direita).

6.4.4 | Ensaio de Inibio da Alimentao


O ensaio de inibio da alimentao de Folsomia candida
baseado na observao de contedos escuros dentro do trato
intestinal dos animais (Domene et al. 2007), tendo em vista que
esses animais so de cor branca. Por esse motivo, este ensaio
somente realizado em solo artificial, sendo que, neste caso,
no deve ser utilizada a turfa do musgo sphagnum, visto que
70 Cesar, R. G. et alii

ela pode interferir na vizualizao dos contedos intestinais.


O ensaio consiste na exposio de 15 organismos a 30g de
solo-teste, com umidade ajustada para 40-60% da capacidade
de reteno mxima de gua. Aps 48 horas de exposio, os
recipientes-teste so preenchidos com gua (Figura 18), de
forma a permitir que os organismos flutuem (por tenso
superficial). A observao direta do contedo intestinal
realizada com o emprego de uma lupa (Figura 18), sendo
verificado o nmero de organismos com contedos escuros
(i.e., alimentados) no trato intestinal.

Fonte: Cesar (2013) e Domene et al. (2007)

Figura 18. Aspecto dos recipientes-teste utilizados no ensaio de


inibio da alimentao de Folsomia candida na Universidade de
Coimbra (Portugal) ( esquerda); Aspecto de organismos com
contedo intestinal (abdmen escurecido), visto lupa ( direita).
Fonte: ADAPTADO DE DOMENE et al. (2007).

6.4.5 | Estudo de Caso


CESAR, R. G., NATAL-DA-LUZ, T., BIDONE, E. D., CASTILHOS,
Z. C., POLIVANOV, H., SOUSA, J. P. F. A. 2014. Disposal of
dredged sediments in tropical soils: ecotoxicological evaluation
(Eco)toxicologia de metais em solos... 71

based on bioassays with springtails and enchytraids. Environmental


Science and Pollution Research, in press.

Neste trabalho, os autores apresentaram os resultados obtidos


atravs da execuo de ensaios de reproduo e de fuga
(avoidance) em solos tratados com sedimentos dragados,
visando simulao da disposio continental do material.
Para tanto, foram amostrados latossolos, chernossolos e uma
amostra composta de sedimento dragado oriundo do Canal do
Cunha (Bacia da Baa de Guanabara, RJ). Os bioensaios
agudos e de reproduo com Folsomia candida em misturas de
diferentes propores solo-dragado foram executados
conforme as recomendaes da ISO. Cinco concentraes-
teste foram testadas: 1,5; 2,5; 5; 10; e 20%.
Os ensaios de reproduo indicaram que a adio de
sedimento dragado foi capaz de incrementar a reproduo dos
animais em doses baixas de aplicao do resduo no solo.
O sedimento dragado estudado possui altos teores de matria
orgnica (oriundo majoritariamente de esgoto domstico), para
ter funcionado como fonte de alimento para os animais,
especialmente em latossolo, cuja fertilidade muito baixa.

Os teste de fuga (avoidance) indicaram a ocorrncia de efeitos


mais significativos para misturas de latossolo, em detrimento
aos tratamentos de chernossolo. Os autores sugerem que essa
observao est relacionada abundncia de argilominerais
expansivos em chernossolos, capazes de reduzir a
biodisponibilidade de metais para a soluo do solo.
72 Cesar, R. G. et alii

6.5 | Bioensaios com Enquitredeos (Enchytraeuds


crypticus)

6.5.1 | Cultivo dos Organismos


O procedimento apresentado para o cultivo de Enchytraeuds
crypticus est descrito em Cesar (2014). Os animais so
cultivados em placas de petri contendo meio de agar-agar
(Figura 19). Aproximadamente 0,5 g de aveia finamente moda
servida como alimento uma vez por semana. A cada dois
meses, os organismos so transferidos para um novo substrato
de agar-agar, com o auxlio de gua destilada. A cultura de
Enchytraeuds crypticus e os ensaios so mantidos a 20 2C e
foto-perodo de 16:8h (luz:escurido). Os organismos utilizados
nos ensaios devem ser sexualmente maduros (i.e., com clitelo
bem desenvolvido) (Figura 19). Alternativamente, o cultivo de
E. crypticus pode tambm ser realizado em solos naturais.

Fonte: Cesar (2013).

Figura 19. Aspecto de organismos adultos (clitelados) da espcie


Enchytraeuds crypticus (A); Aveia moda ( esquerda) e aspecto da
cultura de Enchytraeuds crypticus em meio de agar-agar ( direita) na
Universidade de Coimbra (Portugal) (B).
(Eco)toxicologia de metais em solos... 73

6.5.2 | Ensaio de Reproduo

O ensaio de reproduo com Enchytraeuds crypticus


conduzido com 20g (equivalente em peso seco) e 10
enquitredos adultos por rplica (5), conforme ISO (2004).
A umidade dos solos ajustada para 40-60% da capacidade
de reteno de gua. Os recipientes-teste so abertos uma vez
por semana para ajustar a umidade e aerar os sistemas.
No incio do experimento, aproximadamente 25 mg de aveia
finamente moda servida como alimento. Quando necessrio,
mais alimento adicionado aps o 14 dia de exposio. Aps
28 dias de exposio, os organismos so eutanasiados e
fixados por adio de 5mL de etanol, vermelho de bengala e
gua ao solo (ISO, 2004) (Figura 20). Cerca de 24 horas aps
terem sido fixados, o nmero de organismos jovens contado
com o auxlio de uma lupa (Figura 20).

Fonte: Cesar (2013).

Figura 20. Enquitredeos fixados em vermelho de bengala ao final do


ensaio de reproduo ( esqueda) na Universidade de Coimbra
(Portugal); lupa utilizada na contagem dos organismos jovens (
direita).
74 Cesar, R. G. et alii

6.5.3 | Estudo de Caso

CHELINHO, S., DOMENE, X., CAMANA, P., NATAL-DA-LUZ,


T., SCHEFFCZYK, A., RMBKE, J., ANDRS, P., SOUSA,
J.P. 2011. Improving ecological risk assessment in the
mediterranean area: selection of reference soils and evaluating
the influence of soil properties on avoidance and reproduction
of two oligochaete species, Environmental Toxicology and
Chemistry, v. 30(5), p.10501058

Neste trabalho, os autores investigaram (alm de outros


atributos) a influncia potencial de solos de caractersticas
diversas sobre a reproduo de E. crypticus, como suporte ao
estabelecimento de um solo-padro capaz de refletir as
condies mediterrneas de solo e clima. Para tanto, foi
realizada uma ampla amostragem de solos superficiais em
distintas localidades de Portugal, Espanha e Itlia. Os ensaios
de reproduo com E. crypticus foram efetuados de forma a
avaliar eventuais efeitos sobre a reproduo desses animais.

Os resultados revelaram que nenhuma das amotras testadas


foi capaz de inibir a reproduo dos enquitredeos ao ponto de
invalidar os ensaios. Embora a anlise estatstica aponte para
a ausncia de diferenas significativas entre as amostras,
possivel notar claramente a existncia de variabilidades
espaciais na reproduo dos animais, sendo esta
aparentemente controlada pela variao de pH - com reduo
da reproduo para ambientes mais cidos. Ainda, os
resultados demonstraram maior tolerncia de E. crypitcus a
distintas propriedade do solo, quando comparado a
Enchytraeuds albidus (outra espcie-teste de enquitredeo
padronizada para uso em bioensaios).
(Eco)toxicologia de metais em solos... 75

6.6 | Bioensaios com Microcrustceos (Daphnia similis)

6.6.1 | Cultivo dos Organismos


O cultivo de Daphnia similis (Figura 21) mantido em meio de
cultura MS, adaptado para a espcie (CETESB, 2005), com pH
entre 7,00 e 7,6, dureza total entre 40 - 48 mg CaCO3/L., e
oxignio dissolvido na faixa de 60 100% de saturao.
Os organismos devem ser acondicionados em bqueres de
2000 mL, com densidade de 25 fmeas adultas ou 30 filhotes
por litro e manipulados com pipetas de 10 mL, evitando contato
com o ar no momento da liberao sempre abaixo da linha
dgua. Os bqueres so mantidos em cmara de germinao
com foto-perodo de 16 horas de luz (500 1000 lux) e
temperatura de 20C 2C. Diariamente, realizada uma
limpeza em todos os bqueres do cultivo (Figura 19) para
retirada e contabilizao dos filhotes, e remoo de carapaas
e depsitos no fundo. Uma vez por semana realizada a troca
total de gua de todos os bqueres do cultivo, preparando-se
um novo lote de gua de cultivo e transferindo-se os
organismos para novos bqueres devidamente identificados.
Todo o cultivo alimentado diariamente com alimento algceo
(suspenso algcea de P. subcaptata). O volume de alimento
adicionado a cada bquer varia conforme a densidade de
clulas de alga na suspenso, respeitando-se o quantitativo de
6
1 a 5 x 10 clulas por organismo, conforme determinado pela
norma ABNT 12713/04.
76 Cesar, R. G. et alii

Fonte: Cesar (2013).

Figura 21. Aspecto de Daphnia similis ( esquerda); Bquer de cultivo


de Daphnia similis ( direita) no Laboratrio de Ecotoxicologia do
CETEM.

6.6.2 | Bioensaio Agudo


O bioensaio agudo com microcrustceos da espcie Daphnia
similis (Figura 21) est baseado na exposio de fmeas de
seis a 24 horas de idade a lixiviados (elutriatos) de misturas de
diferentes propores solo: LE, por um perodo de 48 horas
(ABNT NBR 12713/2004). O ensaio realizado com quatro
rplicas, contendo cinco organismos cada.
O procedimento adotado para a preparao dos elutriatos est
fundamentado nas recomendaes de Baun et al. (2002), que
prope a agitao orbital (200 rpm) de uma mistura composta
de solo-teste: gua (1:8) durante um perodo de 24 horas
(Figura 21). Aps essa etapa, a mistura centrifugada, sendo o
sobrenadante filtrado e posteriormente congelado para a
avaliao ecotoxicolgica. Os elutriatos so preparados com o
(Eco)toxicologia de metais em solos... 77

emprego do meio de cultivo de D. similis, meio M. S., conforme


ABNT NBR 12713/2004. O emprego de elutriatos na avaliao
ecotoxicolgica de solos tratados com LE amplamente
conhecido na literatura cientfica, e os resultados gerados
consistem em bons parmetros para futuras comparaes
(Maxam et al. 2000, Fjllborg et al. 2005, Carbonell et al. 2009).

Fonte: Cesar (2013).

Figura 22. Aspecto da montagem de bioensaio agudo com Daphnia


similis ( esquerda) no Laboratrio de Ecotoxicologia do CETEM;
Elutriatos em agitao para ensaio com Daphnia similis ( direita).

6.6.3 | Estudo de Caso


CESAR, R.G.; LVARO, T.T.; SILVA, M.B.; COLONESE, J.;
PEREIRA, C.; POLIVANOV, H.; EGLER, S.G. ; BIDONE,
E.D.; CASTILHOS, Z.C. 2010. Biodisponibilidade de
contaminantes em solos brasileiros tratados com lodo de
esgoto: uma abordagem ecotoxicolgica utilizando bioensaios
com organismos aquticos e edficos. Geochimica Brasiliensis,
v. 24, p. 41-49.
78 Cesar, R. G. et alii

O presente trabalho tratou (dentre outros atributos) a avaliao


da toxicidade potencial de latossolos e chernossolos
acrescidos de lodo de esgoto em um cenrio em que os
referidos materiais pudessem sofrer lixiviao (via ao
intemprica de guas pluviais) e, dessa forma, solues txicas
atingissem ecossistemas aquticos vizinhos.
As concentraes-teste de lodo variaram de aproximadamente
6 a 33%. Lixiviados (elutriados) dos solos-teste foram
prepadados com o prprio meio M. S. para o cultivo de D.
similis, respeitando a proporo de 1:8 (solo:meio cultivo).
Os ensaios agudos com D. similis foram realizados com os
lixiviados.

O resultados indicaram a ocorrncia de nveis maiores de


toxicidade para as misturas de latossolo, em detrimento ao
chernossolo. Os chernossolos possuem abundncia de
argilominerais minerais expansivos, capazes de adsorver
ctions metlicos e outros contaminantes positivamente
carregados - fato ao qual os autores atribuem para justificar a
ocorrncia de nveis menores de toxicidade para os
tratamentos de chernossolo.

6.7 | Bioensaios com Algas Clorofceas (Pseudokirchneriella


subcaptata)

6.7.1 | Cultivo dos Organismos


O cultivo de Pseudokirchneriela subcaptata (Figura 22)
mantido em meio LC Oligo slido, utilizando-se placas de Petri
(Figura 23) previamente esterilizadas em autoclave e mantidas
sob refrigerao a 4C por at trs meses.
(Eco)toxicologia de metais em solos... 79

A cada 15 ou 30 dias, conforme a necessidade, feita uma


renovao do estoque de clulas, transferindo-se em meio
estril (fluxo laminar) e com auxlio de uma ala de metal
tambm estril, uma parte das clulas para uma nova placa
contendo meio LC Oligo slido recm-preparado.

Para o preparo do alimento dos cladceros, as clulas em meio


slido so transferidas para erlenmyer contendo meio LC Oligo
lquido e mantidas em luz e temperatura constantes e aerao
estril por 7 (sete) a 10 dias. Aps esse perodo, o erlenmyer
totalmente vedado com papel alumnio por at 3 (trs) dias
para que as clulas decantem e o excesso de meio de cultura
possa ser retirado. Aps a centrigugao, o concentrado de
clulas restante ressuspendido em Meio de Cultura MS e
armazenado sob refrigerao a 4C por at 3 (trs) meses.
A contagem das clulas realizada em Cmara de Neubauer.

Fonte: Cesar (2013).

Figura 23. Aspecto de Pseudokirchneriella subcaptata ( esquerda);


Raspagem do cultivo de Pseudokirchneriella subcaptata ( direita) do
Laboratrio de Ecotoxicologia do CETEM.
80 Cesar, R. G. et alii

6.7.2 | Ensaio de Reproduo


O bioensaio crnico de reproduo com Pseudokirchneriella
subcapitata est baseado na avaliao do crescimento da
populao de algas expostas a elutriatos de solos
contaminados. Os ensaios so realizados sob temperatura de
23 2 C, iluminao contnua de 3500 lux ( 10%) e
o

velocidade de agitao orbital de 100 a 175 rpm. Os elutriatos


so preparados com o meio de cultura utilizado no cultivo das
algas, meio L. C. Oligo (ABNT NBR 12648/2005) (Figura 24),
utilizando o mesmo procedimento descrito para Daphnia similis.
Aps 96 horas de exposio, procede-se com a contagem
celular de modo a verificar possveis anomalias no crescimento
da populao de algas (Figura 24). As biomassas iniciais so
subtradas daquelas obtidas aps 96 horas, e o resultado
expresso em porcentagem de inibio de crescimento (ABNT
NBR 12648/2005).

Fonte: Cesar (2013).

Figura 24. Elutriatos em agitao para ensaio com algas


(Pseudokirchneriella subcaptata) ( esquerda) no Laboratrio de
Ecotoxicologia do CETEM.; Lmina de Neubauer ( direita).
(Eco)toxicologia de metais em solos... 81

6.7.3 | Estudo de Caso


CESAR, R.G.; LVARO, T.T.; SILVA, M.B.; COLONESE, J.;
PEREIRA, C.; POLIVANOV, H.; EGLER, S.G. ; BIDONE,
E.D.; CASTILHOS, Z.C. 2010. Biodisponibilidade de
contaminantes em solos brasileiros tratados com lodo de
esgoto: uma abordagem ecotoxicolgica utilizando bioensaios
com organismos aquticos e edficos. Geochimica Brasiliensis,
v. 24, p. 41-49.

Neste estudo, bioensaios com P. subcaptata foram utilizados


para a avaliao da ecotoxicidade crnica associada a solos
tratados com lodo de esgoto. As concentraes-teste foram
baseadas nos resultados dos ensaios agudos com Daphnia
similis e, dessa forma, foram somente testados elutriatos cujos
nveis de imobilidade no eram significativamente diferentes do
controle. Dessa forma, as doses variaram entre
aproximadamente 6 e 14%.

De modo anlogo ao observado para D. similis, nveis menores


de ecotoxicidade foram observados para o chernossolo - fato
que pode estar atrelado abundncia de argilominerais
expansivos em sua composio. Alguns indivduos algceos
tambm apresentaram visveis deformaes morfolgicas,
possivelmente ocasionadas pela exposio a elevadas
concentraes de matria orgnica.
82 Cesar, R. G. et alii

7. | CONSIDERAES FINAIS
As propriedades dos solos e variaes espaciais das classes
pedolgicas desempenham papel fundamental na
ecotoxicidade e na biodisponibilidade potencial de metais para
os organismos de fauna edfica. Os estudos mostrados no
decorrer deste livro indicam que a abundncia de
argilominerais expansivos, de oxi-hidrxidos de ferro e
alumnio, de matria orgnica e altos nveis de fertilidade so
capazes de reduzir a ecotoxicidade de solos impactados por
resduos orgnicos (contendo esgoto domstico) e/ou
contaminados por metais.

Os estudos ecotoxicolgicos servem de base para o


estabelecimento de valores orientadores de qualidade
ambiental: no somente no que se refere ao risco ecolgico,
mas tambm orientam o gerenciamento do risco sade
humana, tendo em vista os diversos servios ecossistmicos
prestados pelo solo manuteno das atividades humanas
(p. ex., agricultura, alimentos, produtos medicinais, controle de
pragas, ecoturismo, etc.). A resoluo CONAMA 420 de 2009,
deliberando sobre a qualidade de solos, no exige a realizao
destes ensaios, devido, sobretudo, carncia de especialistas
em ecotoxicologia de solos no Brasil e necessria
padronizao de ensaios. Entretanto, trata-se de uma lacuna
essencial a ser preenchida pela legislao, e requer um esforo
na consolidao de grupos de pesquisa especializados nesses
ensaios.

Especificamente, no caso da necessidade da disposio de


material dragado em reas continentais com misturas de solo:
sedimento dragados, a execuo de ensaios ecotoxicolgicos
(Eco)toxicologia de metais em solos... 83

ser de fundamental importncia determinao de doses (no


caso, as quantidades de material dragado) potencialmente
txicas sade do ecossistema terrestre. Estes esforos
devem contemplar a execuo de ensaios com diferentes tipos
de solos e sedimentos dragados de origens diversas
(porturios, p.ex., nas reas de portos do Estado do Rio de
Janeiro com sedimentos contaminados por esgoto domstico
e/ou impactados por metais pesados; saneamento ambiental
em reas com rios e canais contaminados), de modo a atender
s especificidades e caractersticas dos solos e ecossistemas
tropicais brasileiros.

Neste contexto, espera-se que a presente publicao possa


contribuir para o entendimento efetivo dos processos que
regulam a disponibilidade de contaminantes para a biota do
solo, com nfase em substratos pedolgicos tropicais. Tais
processos devem ser compreendidos luz da presena de
suportes pedogeoqumicos capazes de diminuir a mobilidade
de contaminantes, e das vias de exposio consideradas para
os distintos receptores ecolgicos envolvidos na anlise do
risco ecotoxicolgico.
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SRIES CETEM
As Sries Monogrficas do CETEM so o principal material de
divulgao da produo cientfica realizada no Centro. At o
final do ano de 2010, j foram publicados, eletronicamente e/ou
impressos em papel, mais de 200 ttulos, distribudos entre as
seis sries atualmente em circulao: Rochas e Minerais
Industriais (SRMI), Tecnologia Mineral (STM), Tecnologia
Ambiental (STA), Estudos e Documentos (SED), Gesto e
Planejamento Ambiental (SGPA) e Inovao e Qualidade (SIQ).
A Srie Iniciao Cientfica consiste numa publicao eletrnica
anual.

A lista das publicaes poder ser consultada em nossa


homepage. As obras esto disponveis em texto completo para
download. Visite-nos em http://www.cetem.gov.br/series.

ltimos nmeros da Srie Tecnologia Ambiental

STA-68 Recuperao de metais contidos em


catalisadores de craqueamento cataltico
esgotados. Flvio Lemos e Ivan Ondino Masson,
2013.

STA-67 Logstica Reversa: Instrumento da Gesto


Compatilhada na Atual Poltica Nacional de
Resduos Slidos. Eraldo Jos Brando e Luis
Gonzaga Santos Sobral., 2012.

STA-66 Solubilizao Biolgica de Potssio. Diego


Valentim Crescente Cara, Daniele Leonel da
Rocha, Cludia Duarte da Cunha, Andra
Camardella de Lima Rizzo, Eliana Flvia
Camporese Srvulo, 2012.
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CETEM Centro de Tecnologia Mineral
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Se voc se interessar por um nmero maior de exemplares
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A misso do Centro de Tecnologia Mineral - CETEM desenvolver
tecnologia para o uso sustentvel dos recursos minerais brasileiros.

O CETEM
O Centro de Tecnologia Mineral - CETEM um instituto de pesquisas,
vinculado ao Ministrio da Cincia, Tecnologia e Inovao - MCTI,
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