Centro de Estudios Tecnolgicos Industrial y de Servicios No. 81 Gral.

Jos Domnguez Cota

Practica No. 1

Conocimiento y Manejo del Microscopio

Equipo: ___________ Grupo: ____________ Fecha: ______________

Objetivo

El alumno conocer las partes del microscopio, su funcin y, al manejarlo, comprender la

importancia de su uso en el campo de las ciencias biolgicas.

Introduccin

El microscopio es un instrumento de precisin que se utiliza para observar objetos tan pequeos
que no pueden ser examinados a simple vista. El ojo humano no es capaz de distinguir objetos
menores a 0.07 mm.

La importancia del microscopio en el desarrollo de las ciencias biolgicas ha sido fundamental.

Gracias a su invencin y perfeccionamiento se descubrieron las clulas, sus estructuras internas,
como se lleva a cabo la divisin celular, donde se lleva a cabo determinadas funciones celulares,
etc. En suma, este instrumento de observacin le ha permitido al ser humano asomarse al mundo
microscpico.

Los microscopios pticos pueden ser simples o compuestos; los simples constan de una sola lente
(como la lupa) y los compuestos poseen dos o ms lentes. Estos microscopios requieren luz, ya sea
la solar o la proveniente de un foco.

Muestras Material y Equipo Reactivos / Soluciones

Cabellos Portaobjetos Aceite de inmersin
Peridico Cubreobjetos
Aguja de diseccin
Microscopio
Frasco con gotero
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Procedimiento (Conocimiento del Microscopio)

1.- Examina el microscopio que tienes en tu mesa de trabajo y anota los valores indicados en los
objetivos y en los oculares.

2.- Determina el aumento total de una combinacin ptica: obtener el producto del nmero
marcado en el ocular por el nmero marcado en el objetivo que se est usando. Por ejemplo:
cuando se examina una preparacin con el objetivo de x 100 y el ocular de x 10, en realidad lo que
est haciendo es aumentar 1000 veces sus dimensiones.

3.-Realiza ste procedimiento con todos los objetivos y oculares que tenga el microscopio

4.- Elabora un esquema de tu microscopio y nombra cada una de las partes que lo componen, e
investiga la funcin que desempean.

Sistema Mecnico

1. Base o pie

2. Columna o brazo

3. Platina

4. Tornillos de enfoque

5. Revolver

6. Pinza(s)

Sistema ptico

7. Oculares

8. Objetivos

Sistema de Iluminacin

9. Condensador

10. Diafragma

11. Lmpara
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Procedimiento (Manejo del Microscopio)

1. Sobre el portaobjetos coloca el recorte de peridico agrega una gota de agua y coloca el
cubreobjetos con ayuda de la aguja de diseccin para evitar que se formen burbujas, elimina el
exceso de agua.

2. Coloca tu preparacin sobre la platina del microscopio, mueve el tornillo macromtrico para
alejar la platina del objetivo y fija tu preparacin con las pinzas.

3. Enciende el microscopio y asegrate de que el material quede en el centro del orificio de la

platina.

4. Coloca el objetivo 10X en posicin vertical, regula el paso de luz con el diafragma y desplaza la
platina para acercarlo lo ms posible al objetivo.

5. Observando por el ocular, enfoca la imagen de la preparacin moviendo nicamente el tornillo

micromtrico.

6. Mueve tu preparacin en distintas direcciones y observa en que direccin se mueve en el

campo del microscopio

7. Sin mover el tornillo macromtrico gira el revlver para enfocar el objetivo 40X, afina la imagen
con el tornillo micromtrico.

8. Apaga el microscopio, separa la platina del objetivo y retira la preparacin.

9. Repite el mismo procedimiento con cada una de las muestras y realiza dibujos de cada una de
tus observaciones

Esquemas y Observaciones

Peridico Cabellos
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Cuestionario

Cul es el aumento total de la imagen, de las siguientes combinaciones pticas?

Ocular: 10x Objetivo: 10x Aumento Total: _____________

Ocular: 10x Objetivo: 40x Aumento Total: _____________

Ocular: 10x Objetivo: 100x Aumento Total: _____________

Por qu es necesario tener bien centrada la muestra antes de observar con el objetivo 40X?

Por qu consideras que es importante el uso del microscopio para el estudio de la biologa?

Para que sirve el aceite de inmersin?

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Practica No. 2

La Clula: Eucariontes y Procariontes

Equipo:__________ Grupo: ____________ Fecha: ______________

Objetivo

El alumno confirmar que independientemente de la complejidad y diversidad en los diseos

anatmicos, la unidad estructura y funcional de los seres vivos es la clula.

Introduccin

La clula es la unidad fundamental de estructura y funcionamiento de los seres vivos. Esta unidad
es un sistema complejo, organizado y dinmico, formado por biomolculas. Adems, es capaz de
tomar materia y energa de su medio para realizar sus funciones.

Todos los seres vivos estn constituidos por clulas. La diversidad de formas vivientes va desde las
microscpicas, como las bacterias, hasta los enormes organismos pluricelulares, como el hombre.

Muestras Material y Equipo Reactivos / Soluciones

Raspado de mucosa bucal Portaobjetos Azul de metileno 3%
Epidermis de cebolla Cubreobjetos Lugol
Yogurt natural Pinzas Cristal violeta
Navaja Etanol 95%
Palillos de dientes
Aguja de diseccin
Frasco con gotero
Papel absorbente
Mechero
Microscopio

a) Clula eucariota animal

1. Coloca una gota de agua sobre un portaobjetos.

2. Con un palillo de dientes, raspa suavemente el interior de tu mejilla para obtener clulas
epiteliales y coloca las clulas obtenidas en el agua del portaobjetos dando vuelta al palillo.

3. Con el mismo palillo extiende la gota de agua con clulas sobre el portaobjetos.
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4. Toma el extremo del portaobjetos con una pinza y pasa la preparacin por la flama del mechero
para evaporar el exceso de agua y para que las clulas queden fijadas en el portaobjetos.

*Ten cuidado de no calentar demasiado el vidrio, para ello ser necesario que muevas la
preparacin sobre la flama, la temperatura del vidrio no debe quemarte si lo tocas.

5. Coloca sobre la preparacin una gota de azul de metileno y deja reposar por 1 minuto.

6. Escurre el exceso de colorante y agrega un poco de agua para quitar el exceso de colorante.

7. Agrega una gota de agua y coloca el cubreobjetos.

*Si hay exceso de agua absrbelo con papel.

8. Observa al microscopio con el objetivo 10X, busca una zona con clulas y colcala en el centro
de tu campo visual y cambia el objetivo al de 40X.

9. Elabora un esquema de lo que observaste. Dibuja solo 2 o 3 clulas e identifica las partes ms
sobresalientes de ellas.

b) Clula eucariota vegetal

1. Tomar la epidermis de la cebolla.

2. Coloca un pequeo fragmento de la epidermis sobre un portaobjetos y coloca una gota de agua
y una de azul de metileno.

3. Estira la epidermis para que no quede con dobleces. Coloca el cubreobjetos y si hay exceso de
agua absrbela con papel.

4. Observar al microscopio, enfocar a 40X. Observa con atencin el grosor de la pared que recubre
a las clulas.

5. Elabora un esquema de lo que observaste. Dibuja solo 2 3 clulas e identifica las partes ms
sobresalientes de ellas.

c) Clula procariota

1. Poner una gota de agua en un portaobjetos y agregar una pequea muestra de yogurt natural.

2. Extenderlo sobre un portaobjetos y dejar secar.

3. Pasar el portaobjetos por la llama de un mechero para fijar la preparacin.

*Tener cuidado de no sobrecalentar la muestra.

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4. Agregar unas gotas de cristal violeta y esperar 30 segundos. Lavar con agua hasta remover el
exceso de colorante.

5. Cubrir con lugol y dejar actuar 30 segundos y lavar suavemente. Agregar 4 gotas de etanol al
95% y dejar reposar 30 segundos. Lavar con agua.

6. Teir con safranina durante 30 segundos. Lavar y dejar secar.

7. Observar al microscopio, enfocar a 40X. Agregar una gota de aceite de inmersin sobre la
preparacin y colocar el objetivo 100X para hacer la observacin.

8. Dibuja lo que has observado y determina si puedes observar ncleo en las clulas
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Practica No. 3

smosis en eritrocitos
Equipo:___________ Grupo: ____________ Fecha: ______________

Objetivo

El alumno observar al microscopio los eritrocitos en suspensin isotnica y los cambios producidos
al ponerlos en contacto con soluciones hipo e hipertnicas de cloruro de sodio.

Introduccin

Los eritrocitos son clulas anucleadas que contienen protenas transportadoras de oxgeno,
conservan las enzimas de la gliclisis y generalmente mantienen una forma de disco bicncavo que
facilita su funcin de intercambio, por presentar una amplia superficie de exposicin, para un
volumen determinado. Los eritrocitos tienden a agruparse en pilas de discos, o rollos, los cuales
pueden observarse cuando la concentracin de los mismos es elevada. La forma y el volumen de
los eritrocitos cambia cuando vara la cantidad de agua contenida dentro de su membrana,
pudiendo tomar una forma estrellada o espinosa (crenacin) o bien inflndose hasta adquirir la
forma de una esfera (esferocitos). Cuando la clula no puede resistir la carga de agua que recibe,
la membrana se rompe (hemlisis) y se libera la hemoglobina. La hemlisis es un proceso que
ocurre en una poblacin mixta de clulas por lo que no ocurre en un solo punto y a la misma
velocidad en todos los casos.

Muestras Material y Equipo Reactivos / Soluciones

Sangre Portaobjetos Solucin de NaCl al 0.7%
Cubreobjetos Solucin de NaCl al 1.5%
Lancetas Agua destilada
Microscopio Etanol 75%
Algodn
Aguja de diseccin
3 Frascos con gotero
Papel absorbente
Pipeta Pasteur
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Procedimiento

1. Homogenice suavemente, por inversin, la suspensin de eritrocitos al 4% y con una

pipeta Pasteur coloque una gota en un portaobjetos limpio, cbrala con el cubreobjetos y
con cuidado pngala en la platina del microscopio.

2. Encienda la luz del microscopio, ajuste la distancia de los oculares y la posicin del
diafragma.

3. Cercirese que la platina del microscopio est alejada de los objetivos, ponga en el
revlver el objetivo de ms bajo poder (10X), y con el enfoque macromtrico acerque
lentamente la preparacin al objetivo. Observe el aspecto general del campo a bajo poder,
cerca de un borde y seleccione una parte en la que se encuentren las clulas dispersas
pero abundantes.

4. Enfoque con el objetivo 40X; ajuste ligeramente con el enfoque micromtrico. Observe el
aspecto de las clulas presentes (la morfologa general). Dibuje un eritrocito. Compare las
dimensiones del eritrocito con el dimetro del campo.

5. Desplace lentamente la preparacin hacia uno de los bordes del cubreobjetos. Coloque
unas gotas de la solucin de NaCl al 1.5% en el borde del cubreobjetos. Espere a que cese
el flujo hidrulico. Observe la apariencia de los eritrocitos ahora en el medio hipertnico.
(Dibuje).

6. Aada con una pipeta Pasteur una gota de agua destilada junto al mismo borde del
cubreobjetos. Proceda a observar los eritrocitos en estas condiciones. (Dibuje).
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Practica No. 4

Cromatografa en papel de pigmentos fotosintticos

Equipo:____________ Grupo: ____________ Fecha: ______________

Objetivo

El alumno realizar la extraccin de pigmentos fotosintticos a partir de tejidos vegetales, y

separar e identificar dichos componentes por cromatografa en papel.

Introduccin

Los detalles moleculares de un proceso bioqumico no pueden ser completamente dilucidados

hasta que las molculas involucradas hayan sido aisladas y caracterizadas. Por lo tanto, nuestra
comprensin de los principios bioqumicos ha incrementado en la medida del desarrollo de las
tcnicas de separacin e identificacin de biomolculas. Uno de estas tcnicas es la
cromatografa, la cual ha sido y continuar siendo una de las ms efectivas para el aislamiento y
purificacin de todo tipo de biomolculas. Adems, es usada ampliamente como una herramienta
analtica para medir propiedades cuantitativas.

Todos los tipos de cromatografa se basan en un principio muy sencillo. La muestra a ser
examinada interacta con dos entidades fsicamente distintas: una fase mvil y una fase
estacionaria. La fase mvil, la cual puede ser un gas o un lquido, permitir que se desplace la
muestra a travs de un medio slido o lquido (fase estacionaria). Durante el desarrollo de este
proceso en el sistema cromatogrfico, los distintos componentes de la muestra se irn separando
en funcin de su solubilidad, de su tamao o de su peso molecular con la fase mvil o en funcin
de su afinidad con la fase estacionaria, permitiendo la separacin e identificacin de los
componentes de una muestra.

Muestras Material y Equipo Reactivos / Soluciones

Hojas de acelga o espinaca Papel absorbente ter de petrleo
Tubo de ensayo EDTA
Embudo Agua destilada
Vaso de precipitado Etanol 95%
Gasa / Colador
Mortero /Pistilo
Caja Petri / Cristalizador
Papel filtro
Pipeta Pasteur
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Procedimiento

1. Lavar los tejidos vegetales solicitados (hojas de acelga o espinaca).

2. Secar perfectamente las hojas con papel.

3. Cortar en trozos pequeos las hojas, procurando que no haya nervaduras (conjunto y
disposicin de nervios).

4. Triturar los trozos de tejido en un mortero, aadiendo unos 50 ml de etanol y una

pequea cantidad de EDTA. Seguir triturando hasta que el disolvente tenga el mismo color
que el tejido vegetal.

5. Filtrar el triturado en una coladera y posteriormente con papel filtro.

6. Colocar parte del filtrado en una caja Petri (cristalizador o vaso de precipitado hasta que
alcance unos 2 o 3 cm de altura y situar sobre el filtrado una hoja de papel filtro (para
cromatografa) doblada previamente en V, de forma que se mantenga vertical.

7. Permitir que se desarrolle el proceso (durante 20 min) en el sistema cromatogrfico para

que los diferentes pigmentos se vayan separando conforme avanza la fase mvil (etanol)
sobre la hoja de papel filtro (fase estacionaria). Los pigmentos que se pueden identificar
son:

a. Clorofila a (verde limn)

b. Clorofila b (verde azulado)
c. B caroteno (rojo)
d. Xantofila (amarillo)

8. En un tubo de ensayo, colocar la parte restante del filtrado (llenado la mitad del tubo) y
agregarle aproximadamente 5 ml de ter de petrleo y enseguida agregarle 5 ml de agua
destilada. Mezclar por inmersin y dejar reposar durante 5 min. Realice sus observaciones.
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Practica No. 5

Cultivo y Observacin de Protozoarios

Equipo:____________ Grupo: ____________ Fecha: ______________

Objetivo

El alumno cultivar e identificar protozoarios de vida libre dulceacucolas y en funcin de las

posibilidades podr reconocer algunos de los procesos reproductivos propios de dicho reino.

Introduccin

Los protozoos son seres unicelulares eucariticos de nutricin hetertrofa, que necesitan vivir en
un medio hmedo. Algunos son parsitos y producen enfermedades como el paludismo,
enfermedad del sueo, etc. Con vida libre los hay dulceacucolas y marinos, y forman parte del
plancton.

El ciclo de vida de los protozoarios, consiste de 2 estadios: trofozoitos y cistos (quistes). La fase
donde los protozoarios llevan a cabo su actividad principal (nutricin y crecimiento) es en la fase
de trofozoito. En esta fase no pueden soportar los efectos de diferentes sustancias qumicas,
deficiencias de comida, cambios drsticos en temperatura, pH y otros factores ambientales. Para
contrarrestar estos factores adversos forman cistos o quistes.

El cisto es la fase del ciclo de vida de los protozoarios donde es resistente a diferentes condiciones
ambientales. Los cistos se encuentran en estado latente o metablicamente inactivo. Esta fase es
importante para la dispersin de los organismos.

Para desplazarse pueden emplear pseudpodos, cilios o flagelos. Los ciliados dulceacucolas
poseen una vacuola pulstil con funcin excretora y osmoreguladora.

Su reproduccin ms frecuente es la asexual, por biparticin, aunque algunos presentan una

reproduccin sexual muy caracterstica, denominada conjugacin.

Muestras Material y Equipo Reactivos / Soluciones

Recipiente de vidrio Portaobjetos Aceite de inmersin
Hojarascas Cubreobjetos Rojo Neutro
Papel absorbente
Microscopio
Frasco con gotero
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Procedimiento

--Cultivo--

Coloca dentro del recipiente de vidrio unos trozos de hojas exteriores de hortalizas, heno u
hojarasca. Aade agua hasta la mitad del recipiente.

Deja reposar el cultivo unos 15 das a temperatura ambiente.

--Observacin--

1. Toma una muestra del cultivo de protozoarios y deposita una gota de la misma sobre el
portaobjetos.

2. Tpala con el cubreobjetos y observa la preparacin detenidamente.

3. Coloca en uno de los bordes del cubreobjetos una gota de rojo neutro y absorbe por el
otro extremo con papel de filtro. Podrs comprobar como los protozoos que observaste se
van tiendo de rojo y siguen movindose.

4. Identifica, nombra y dibuja a los diferentes protozoarios que hayas observado en tu

preparacin.

5. Busca campos donde haya protozoarios que se encuentren reproducindose. En caso de

encontrar alguno, describe el proceso de manera breve.
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Practica No. 6

Extraccin de ADN
Equipo: ____________ Grupo: ____________ Fecha: ______________

Objetivo

El alumno realizar la extraccin de ADN a partir de tejido vegetal e identificar, en funcin de sus
caractersticas fisicoqumicas, la molcula portadora de la informacin gentica.

Introduccin

Por qu estudiar los cidos nucleicos?

La herencia es un fenmeno discernible para cualquier observador, pero su base qumico -
biolgico no fue disertado hasta pocas recientes. Aunque desde principios de siglo se estudiaban
preparaciones biolgicas con la idea de identificar sustancias responsables de sus significantes
cualidades, no fue sino hasta 1944 que los investigadores Oswald Avery, Colin McLeod y Maclyn
McCarty sugirieron, cautelosamente que el material hereditario podra estar contenido en el cido
nucleico del tipo desoxirribosa.

Durante los siguientes aos, trabajando con sistemas de separacin y anlisis, los
investigadores del campo de la gentica bioqumica demostraron, de manera inequvoca, que el
cido nucleico es el material hereditario.

En 1953, James Watson y Francis Crick dedujeron la estructura tridimensional del ADN e
inmediatamente interpretaron su mecanismo de replicacin. Este descubrimiento ha sido uno de
los ms significativos en la historia de la biologa y para entender su funcin biolgica, debemos
conocer sus caractersticas estructurales.

Extraccin de ADN
El ADN genmico puede ser aislado de clulas por la ruptura del tejido y entonces explotar
las diferencias en las propiedades entre el ADN, las protenas y otros constituyentes. Se ha podido
extraer ADN empleando su: insolubilidad en soluciones diluidas de NaCl, solubilidad en soluciones
concentradas de NaCl, insolubilidad en alcohol, y puede disociarse de las protenas por
tratamiento con fenol y/o detergentes.

Un problema encontrado durante la manipulacin, es que el ADN es inevitablemente

esquilado (cortado), lo cual no es sorprendente considerar que los cromosomas, en los cuales esta
contenido el ADN, varan en tamao de 0.3 a 200 pares de megabases. El cuidadoso manejo de la
muestra es requerido a lo largo del proceso. Cuando el ADN es precipitado con etanol, este debe
estar frio para evitar el esquilado y extraerlo. El ADN precipitado puede entonces ser enrollado de
la solucin usando un palillo de madera.
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Muestras Material y Equipo Reactivos / Soluciones

3 Fresas Soporte para embudo Jabn lavatrastes
Embudo NaCl
Gasa o colador Agua embotellada o destilada
Bolsa resellable Etanol al 75%
2 vasos de precipitado
Picadientes o palillo de
madera

Procedimiento

--Preparativos--

1. Almacena el etanol al 75% en el congelador 40 minutos antes de llevar a cabo la extraccin.

2. Solucin de extraccin: 1 cucharadita de NaCl + de taza de agua embotellada o destilada + 1

cucharada de jabn lavatrastes.

3. Remover las hojas de las fresas.

4. Colocar en la parte superior del embudo, la gasa o en su defecto emplear un colador.

--Extraccin de ADN--

1. Coloca las fresas en el interior de una bolsa resellable y extrae todo el aire posible. Sella la bolsa.

2. Macera la fruta con los dedos, durante 5 minutos.

3. Enseguida, agrega 3-5 cucharadas de la solucin de extraccin. Saca todo el aire de la bolsa y
sllala.

4. Aplasta las fresas con la solucin hasta obtener una mezcla homognea (1min).

5. Vierte la mezcla en el embudo para que el material orgnico no macerado quede atrapado en la
gasa o en el colador. Colectar el filtrado en un vaso de precipitado.

6. Una vez obtenido el filtrado, inclinar el vaso de precipitado y verter lentamente sobre la pared
del recipiente el alcohol fro, hasta tener una capa de alcohol de 2 cm.

Nota: Evitar que la fase del filtrado se mezcle con la fase de alcohol

7. Despus de 3 minutos, examina la mezcla. Qu se observa?

8. Mete un picadientes o un palillo de madera entre la fase de alcohol y la fase del filtrado, e
intenta enrollar el material blanquecino y pegajoso.