Volumen 2

BIOQUMICA
Libro de Texto con Aplicaciones Clnicas

TERCERA EDICIN

Thomas M. Devlin
Editorial Revert, S.A.
 CAP TULO

17
SNTESIS DE PROTENAS: TRADUCCIN Y
MODIFICACIONES POSTRADUCCIN

Dohn Glitz
t Antgeno VP2

VP3

ori
T Antgeno

VP1

17.1 VISIN GENERAL 714 La distribucin hacia otros orgnulos tambin requiere seales
especficas 742
17.2 COMPONENTES DEL APARATO DE TRADUCCIN 714
El RNA mensajero es el portador de la informacin presente 17.6 OTRAS MODIFICACIONES POSTRADUCCIN DE LAS
en el DNA 714 PROTENAS 743
La biosntesis de protenas se realiza en los ribosomas 715 La biosntesis de la insulina implica un proceso de protelisis
El RNA de transferencia acta como molcula traductora bilinge 717 parcial 743
El cdigo gentico emplea un alfabeto nucleotdico de cuatro La protelisis conduce a la activacin de zimgenos 743
letras 718 Los aminiocidos pueden ser modificados tras su incorporacin a
Los codones del mRNA son palabras de tres letras 718 las protenas 744
Puntuacin 719 La biosntesis del colgeno precisa muchas modificaciones
Las interacciones codnanticodn permiten la lectura del mRNA 719 postraduccin 746
Descifrado del cdigo gentico 720 Formacin del procolgeno en el retculo endoplasmtico
Mutaciones 721 y aparato de Golgi 746
La aminoacilacin del RNA de transferencia activa los aminocidos Maduracin del colgeno 747
para la sntesis de protenas 721
Especificidad y fidelidad de las reacciones de 17.7 REGULACIN DE LA TRADUCCIN 748
aminoacilacin 722
17.8 DEGRADACIN Y RECAMBIO DE PROTENAS 750
17.3 BIOSNTESIS DE PROTENAS 724 La digestin intracelular de algunas protenas tiene lugar en
La traduccin es direccional y colineal con el mRNA 724 los lisosomas 750
El inicio de la sntesis de protenas es un proceso complejo 725 La ubiquitina es un marcador en la protelisis dependiente de ATP 751
El alargamiento es un proceso secuencial de formacin de enlaces
peptdicos 727 BIBLIOGRAFA 753
La terminacin de la sntesis polipeptdica require un codn de
terminacin 733 PREGUNTAS 754
La traduccin tiene un coste energtico significativo 733 RESPUESTAS 755
La sntesis proteica en la mitocondria difiere ligeramente de la
sntesis citoplasmtica 733 APLICACIONES CLNICAS
Algunos antibiticos y toxinas inhiben la biosntesis de protenas 733 17.1 Mutacin sustitutiva: hemoglobina 721
17.4 MADURACIN DE LAS PROTENAS: MODIFICACIN, 17.2 Enfermedades de los codones terminadores 722
SECRECIN Y DESTINO A LOS ORGNULOS 735 17.3 Talasemia 722
Las protenas para exportacin siguen la ruta secretora 735 17.4 Mutaciones en el RNA ribosmico mitocondrial causan la
La glucosilacin de protenas tiene lugar en el retculo sordera inducida por antibiticos 734
endoplasmtico y en el aparato de Golgi 736 17.5 Enfermedad de las clulas I 740
17.6 Hiperproinsulinemia familiar 743
17.5 BIOGNESIS DE ORGNULOS Y MARCAJE DE DESTINO 17.7 Ausencia de modificaciones postraduccin: deficiencia
DE CIERTAS PROTENAS 739 mltiple de sulfatasas 746
La distribucin de las protenas destinadas a los lisosomas 17.8 Defectos en la sntesis de colgeno 749
tiene lugar en la ruta secretora 739 17.9 Delecin de un codn, modificacin postraduccin
La importacin de protenas por la mitocondria requiere seales incorrecta y degradacin prematura de la protena:
especficas 742 la fibrosis qustica 752

713
728  17: SNTESIS DE PROTENAS: TRADUCCIN Y MODIFICACIONES POSTRADUCCIN

GTP EF-1

E P A
(Paso 1) Met

3
5

GDP EF-1

E P A
(Paso 2) Met

3
5

E Met P A
(Paso 3)

EF-2 GTP
3
5

EF-2 GDP + Pi

E Met A
P

(Paso 4)

3
5

FIGURA 17.8
Pasos del alargamiento en la sntesis de protenas eucariticas.
(a) Se muestra el primer ciclo de alargamiento. El paso 1 muestra el complejo de inicio completo con el metionil tRNAMet i en el sitio P del 80S. En el
paso 2 se ha colocado un aminoacil tRNA en el sitio A ribosmico con la participacin de EF-1. El cambio en la forma de EF-1 es un reflejo del cam-
bio de conformacin despus de la hidrlisis del GTP. En el paso 3 se ha formado ya el primer enlace peptdico, el nuevo peptidil tRNA ocupa una
sitio hbrido A/P en el ribosoma y el brazo aceptor desacilado del tRNAMet
i es desplazado al sitio E de la subunidad grande.
 17.4 MADURACIN DE LAS PROTENAS: MODIFICACIN, SECRECIN Y DESTINO A LOS ORGNULOS  735

la traduccin y conduce a la liberacin de peptidil-puromicina. El cloranfenicol inhibe NH2

directamente a la peptidil transferasa por unin al centro activo; no se da transferencia, N
y el peptidil-tRNA permanece unido al ribosoma. La etapa de translocacin constituye N
tambin una diana potencial. El antibitico macrlido eritromicina interfiere con la
N N
translocacin en ribosomas procariticos. La translocacin eucaritica se ve inhibida
por una toxina proteica de Corynebacterium diphterial (toxina diftrica), a travs de un tRNA O CH2 O
mecanismo mediante el cual la toxina se une a la membrana celular, y una subunidad
penetra en el citoplasma y cataliza la ADP-ribosilacin e inactivacin del EF-2, tal como
O OH
muestra la reaccin siguiente:
H2N CH C

EF-2 + NAD+ ADP-ribosil EF-2 + nicotinamida + H+ O

CH2
(activo) (inactivo)

La unin de la fraccin ADP-ribosa al EF-2 se efecta sobre una histidina especfica

modificada en una etapa postraduccin, conocida como diftamida. La prxima seccin
trata los acontecimientos postraduccin. OH
Existe un tercer grupo de toxinas que atacan al rRNA. La ricina (del ricino) y varias Extremo 3' del tirosil tRNA
toxinas relacionadas son N-glucosidasas que cortan una nica adenina en el rRNA de la CH3 CH3
subunidad mayor. El ribosoma se inactiva por este dao aparentemente menor. Una
N
toxina, la -sarcina, corta el rRNA de la subunidad mayor en un nico punto e inactiva
N
de forma parecida al ribosoma. Algunas cepas de E. coli atacan a otras bacterias mediante N
la produccin de toxinas extracelulares, como la colicina E3, que es una ribonucleasa
que corta el RNA 16S en un nico punto cercano a la secuencia de unin al mensajero N N

y la regin de descodificado; de esta forma inactiva la subunidad e interrumpe la O

HOCH2
sntesis proteica en clulas competidoras.

NH OH
17.4 MADURACIN DE LAS PROTENAS: MODIFICACIN, SECRECIN Y DESTINO A
H2N CH C
LOS ORGNULOS
O
CH2
Algunas protenas emergen del ribosoma preparadas para ejercer inmediatamente su
funcin. Muchas otras, sin embargo, deben experimentar una gran variedad de modifi-
caciones postraduccin. Tales modificaciones pueden dar lugar a su conversin en
una forma funcional, su traslado a un compartimiento subcelular especfico, su secre-
OCH3
cin al exterior de la clula o a una alteracin en su actividad o estabilidad. La informa-
Puromicina
cin que determina el destino postraduccin de una protena reside en su estructura, es
FIGURA 17.11
decir, la secuencia de aminocidos y la conformacin polipeptdica determinan si una La puromicina (derecha) interfiere con la
protena servir como sustrato para un enzima modificador o la identifican para ser sntesis de protenas al funcionar como
trasladada a una localizacin subcelular o extracelular. un anlogo del aminoacil-tRNA, en este
caso tirosil-tRNA (izquierda) en la reac-
cin de la peptidiltransferasa.
Las protenas para exportacin siguen la ruta secretora

Las protenas destinadas a ser exportadas se sintetizan en ribosomas unidos a la membrana

del retculo endoplasmatico rugoso (figura 17.12). El ribosoma no es capaz de identificar a
la protena que va a ser sintetizada, con lo que el inicio y alargamiento comienzan en ribo-
somas libres en el citosol. Las protenas de la ruta secretora tienen un un pptido seal
hidrfobo, normalmente en el extremo amino o cerca de l. No existe una nica secuencia
de pptido seal, aunque sus caractersticas incluyen un extremo N cargado positiva-
mente, un ncleo hidrfobo con 812 aminocidos hidrfobos y un segmento C-terminal
ms polar que finalmente sirve como lugar de corte para la escisin del pptido seal.
El pptido seal de 1530 aminocidos emerge del ribosoma al principio de la
sntesis polipeptdica. A medida que surge del ribosoma, se une a una partcula de
reconocimiento de seal (SRP) citoplasmtica (vase figura 17.13). La SRP es una par-
tcula alargada compuesta por seis protenas distintas, ms una molcula de RNA
pequea (7S) que sirve de armazn. La unin de la SRP detiene la sntesis de la protena
y el ribosoma se desplaza hacia el retculo endoplasmtico. All la SRP reconoce y se
une a un receptor de SRP o protena de anclaje localizada en la cara citoplasmtica
de la membrana del retculo endoplasmtico, mediante una reaccin que requiere la
 17.4 MADURACIN DE LAS PROTENAS: MODIFICACIN, SECRECIN Y DESTINO A LOS ORGNULOS  737

TABLA 17.9 Glucosiltransferasas de las clulas eucariticas.

Azcar transferido Abreviatura Dadores Glucosiltransferasas

Manosa Man GDP-Man Manosiltransferasa

Dolicol-Man
Galactosa Gal UDP-Gal Galactosiltransferasa
Glucosa Glc UDP-Glc Glucosiltransferasa
Dolicol-Glc
Fucosa Fuc GDP-Fuc Fucosiltransferasa
N-Acetilgalactosamina GalNAc UDP-GlcNAc N-Acetilgalactosaminiltransferasa
N-Acetilglucosamina GlcNAc UDP-GlcNAc N-Acetilglucosaminiltransferasa
cido N-acetilneuramnico NANA o NeuNAc CMP-NANA N-Acetilneuraminiltransferasa
( o cido silaco) SA CMP-SA (Sialitransferasa)

protenas o clulas. La glucosilacin de protenas puede implicar la adicin de unos

pocos residuos de glcidos, o la formacin de grandes cadenas de oligasacridos ramifi-
cados. Los sitios y tipos de glucosilacin vienen determinados por la presencia de
aminocidos y secuencias apropiados sobre la superficie de la protena, y por la disponi-
bilidad de enzimas y sustratos para llevar a cabo las reacciones de glucosilacin.
La glucosilacin de protenas se realiza por medio de una gran variedad de glucosil-
transferasas, algunas de las cuales se encuentran en la tabla 17.9. Un centenar de enzi-
mas distintos pueden catalizar esta reaccin, aunque el mecanismo bsico es similar
para todos: un azcar es transferido desde un sustrato dador activado hasta un receptor
apropiado, generalmente otro residuo de azcar que forma parte de un oligosacrido
que est siendo construido. Los enzimas pueden mostrar tres tipos de especificidad: por
el monosacrido transferido, por la estructura y secuencia de la molcula aceptora, y
por el sitio y configuracin del enlace formado.
Una clase de glucoprotenas posee azcares unidos al nitrgeno de los grupos amida
de residuos de asparagina, por un proceso conocido como N-glucosilacin. El antibi-
tico tunicamicina, que impide la N-glucosilacin, ha sido una herramienta valiosa
para la elucidacin de la ruta biosinttica. La formacin de oligosacridos con enlaces
N empieza en la luz del retculo endoplasmtico, y contina despus con el transporte
de la protena al aparato de Golgi. Se requiere una secuencia especfica de glucosilacin,
Asn-X-Thr (o Ser), en la que X puede ser cualquier aminocido, excepto prolina o cido
asprtico, para llevar a cabo la N-glucosilacin. No todas las secuencias Asn-X-Thr/Ser
son glucosiladas, ya que algunas de ellas pueden no estar disponibles debido a la con-
formacin adoptada por la protena.
La biosntesis de los oligosacridos con enlace N empieza con la sntesis de un inter-
mediario unido a un lpido (fig. 17.14). El fosfato de dolicol (estructura en la pg.
350), situado en la superficie citoplasmtica de la membrana del retculo endoplasm-
tico sirve como aceptor glucosilo de la N-acetilglucosamina. El GlcNAc-pirofosforil
dolicol es un aceptor para la glucosilacin secuencial y la formacin de un (Man)5(Glc-
NAc)2-pirofosforil dolicol ramificado en la cara citoplasmtica de la membrana. Tras la
reorientacin de este intermediario hacia la superficie luminal de la membrana del ER,
se aaden secuencialmente cuatro manosas y tres residuos de glucosa adicionales para
generar el intermediario completo. Este oligosacrido finalizado es transferido desde su
transportador dolicol a un residuo de asparagina del polipptido a medida que este
ltimo surge de la membrana del retculo endoplasmtico. As, la N-glucosilacin se
lleva a cabo cotraduccionalmente, es decir, a medida que la protena es sitentizada, y
de ah que pueda afectar al plegamiento de la protena.
La modificacin de oligosacridos por la glucosidasas implica la eliminacin de
algunos residuos de azcar de la estructura recin transferida. Dentro de la luz del ret-
culo endoplasmtico rugoso, los residuos de glucosa, requeridos para la transferencia
del oligosacrido desde su transportador dolicol, son secuencialmente eliminados, as
como un residuo de manosa. Tales alteraciones marcan a la glucoprotena para ser
transportada hacia el aparato de Golgi, donde puede sufrir cortes posteriores por gluco-
sidasas. Tambin pueden aadirse azcares adicionales por una gran variedad de gluco-

APLICACIN CLNICA
Defectos en la sntesis de colgeno
Sndrome de EhlersDanlos, tipo IV
El sndrome de EhlersDanlos es un grupo de al menos 10 enferme-
dades que son distinguibles por criterios clnicos, genticos y bioqu-
micos, pero que tienen todas ellas en comn sntomas de debilidad
estructural en el tejido conjuntivo. Los problemas comunes estn
relacionados con fragilidad e hiperextensibilidad de la piel, y con
hipermovilidad en las articulaciones. Esta debilidad es resultado de
defectos en la estructura del colgeno. Por ejemplo, el sndrome de
EhlersDanlos del tipo IV est causado por defectos en la estructura
del colgeno del tipo III, que es particularmente importante en la
piel, arterias y rganos huecos. Entre las caractersticas se cuenta una
piel fina y transparente, a travs de la cual se ven fcilmente las
venas, morados marcados y, a veces, una apariencia de envejeci-
miento en las manos y en la piel. Los problemas clnicos surgen a
partir de una rotura arterial, perforacin intestinal y ruptura del
tero durante el embarazo o el parto. El tratamiento quirrgico es
difcil debido a la fragilidad tisular. El defecto bsico del sndrome de
EhlersDanlos tipo IV parece ser debido a cambios en la estructura
primaria de las cadenas de tipo III. Esto es el resultado de una muta-
cin puntual que conduce a la sustitucin de los residuos de glicina
y a la alteracin de la triple hlice del colgeno, adems de ignorarse
algunos exones, lo que da lugar a un acortamiento del polipptido y
resulta en una secrecin ineficiente, en una disminucin de la estabi-
lidad trmica del colgeno y en una formacin anormal de las fibri-
llas de colgeno del tipo III. En algunas ocasiones el colgeno tipo III
se acumula en el retculo endoplasmtico rugoso, se modifica en
exceso y se degrada muy lentamente.
Superti-Furga, A., Gugler, E., Gitzelmann, R., y Steimann, B. EhlersDanllos
syndrome type IV: a multi-exon deletion in one of the two COL3A1 alleles
affecting structure, stability, and processing of type III procollagen. J. Biol.
Chem. 263:6226, 1988.
Osteognesis imperfecta
La osteognesis imperfecta es un grupo de al menos cuatro enferme-
dades distinguibles por criterios clnicos, genticos y qumicos, que
se caracteriza por fracturas mltiples que dan lugar a deformaciones
seas. Existen diversas variantes que resultan de mutaciones que dan
lugar a cadenas (I) modificadas. En el ejemplo ms claro, una muta-
cin por delecin causa la ausencia de un grupo de 84 aminocidos
en la cadena 1(I). Estas cadenas 1(I) acortadas logran sintetizarse
gracias a que la mutacin conserva el marco de lectura original. Las
cadenas cortas 1(I) se asocian con cadenas 1(I) normales y con
cadenas 2(I) impidiendo de esta manera la formacin normal de la
triple hlice, lo que da lugar a la degradacin de todas las cadenas,
un fenmeno que bien podra llamarse suicidio proteico. Tres
cuartas partes de las molculas de colgeno tienen al menos, una
cadena corta (defectiva) de colgeno 1(I), amplificndose el efecto
de este gen en heterocigosis. Otras formas de osteognesis imperfecta
son el resultado de mutaciones puntuales que sustituyen una de las
glicinas por algn aminocido. Ya que la glicina tiene que encajar en
el interior de la triple hlice de colgeno, estas sustituciones desesta-
bilizan esta hlice.
Barsh, G. S., Roush, C. L., Bonadio, J., Byers, P. H., y Gelinas, R. E. Intron media-
ted recombination causes an (I) collagen deletion in a lethal form of osteoge-
nesis imparfecta. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:2870, 1985.
Escorbuto y sntesis de hidroxiprolina
El escorbuto se produce por deficiencias de cido ascrbico en la
dieta. La mayor parte de los animales pueden sintetizarlo a partir de
17.7 REGULACIN DE LA TRADUCCIN  749
17.8
la glucosa, pero el ser humano ha perdido este mecanismo enzim-
tico. Entre otros problemas, la deficiencia en cido ascrbico causa
una disminucin de la sntesis de hidroxiprolina debido a que la pro-
lil hidroxilasa requiere cido ascrbico. La hidroxiprolina propor-
ciona tomos adicionales capaces de formar puentes de hidrgeno
que estabilizan la triple hlice de colgeno. El colgeno con una can-
tidad insuficiente de hidroxiprolina pierde estabilidad trmica resul-
tando menos estable que el colgeno normal a la temperatura
corporal. Las manifestaciones clnicas resultantes son evidentes y
comprensibles: supresin del crecimiento seo ordenado en los
nios, una cicatrizacin ineficiente y una fragilidad capilar elevada
con el resultado de hemorragias, particularmente en la piel. La defi-
ciencia grave de cido ascrbico conduce en segundo lugar a una dis-
minucin en la velocidad en la sntesis de colgeno.
Crandon, J. H., Lund, C. C., y Dill, D. B. Experimental human scurvy. N. Engl. J.
Med. 223:353, 1940.
Deficiencia de lisil hidroxilasa
En el sndrome de EhlersDanlos tipo IV existe una deficiencia en la
lisil hidroxilasa. El resultado es la sntesis de los colgenos de tipo I y
III de la piel con un menor contenido de hidroxilisina, con lo que el
entrecruzamiento entre las fibrillas de colgeno es menos estable.
Aunque puede producirse un cierto grado de entrecruzamiento entre
lisina y al-lisina, ste no es lo suficientemente estable y no madura
tan rpidamente como lo hacen los entrecruzamientos entre
hidroxilisinas. Adems, se aaden residuos de glcidos a la hidroxili-
sina, aunque la funcin de los mismos es desconocida. Las caracters-
ticas clnicas incluyen una marcada hiperextensibilidad de la piel y
las articulaciones, cicatrizacin difcil, y deformidades msculo-
esquelticas. Algunos pacientes con esta forma del sndrome de
EhlersDanlos tienen una forma mutante de lisil hidroxilasa con una
constante de Michaelis para el cido ascrbico mayor que el enzima
normal. En consecuencia estos pacientes responden a dosis elevadas
de cido ascrbico.
Pinnell, S. R., Krane, S. M., Kenzora, J. E., y Glimcher, M. J. A heritable disorder
of connective tissue: Hydroxilysine-deficient collagen disease. N. Engl. J. Med.
286:1013, 1972.
Sndrome de EhlersDanlos, tipo VII
En el sndrome de EhlersDanlos tipo IV la piel se magulla fcil-
mente y es hiperextensible, pero las manifestaciones ms importan-
tes son la dislocacin de las principales articulaciones como la
cadera y la rodilla. La laxitud de los ligamentos es debido a la elimi-
nacin incompleta del propptido amino terminal de las cadenas de
procolgeno. Una variante de esta enfermedad es el resultado de la
deficiencia de la procolgeno N-proteasa. Una deficiencia similar se
observa en la enfermedad autosmica recesiva llamada dermatopa-
raxis del ganado bovino y ovino y gatos, en la que la fragilidad de la
piel es tran extrema que puede llegar a ser letal. En otras variantes las
cadenas de pro1(I) y pro2(I) pierden los aminocidos del sitio de
corte debido a un salto en un exn de los genes. Esto impide la
rotura normal por la procolgeno N-proteasa.
Cole, W. G., Chan, W., Chambers, G. W., Walker, I. D., y Bateman, J. F. Deletion
of 24 amino acids from de pro(I) chain of type I procollagen in a patient with
the EhlersDanlos syndrome type VII. J. Biol. Chem. 261:5496, 1986.
(contina)