INTRODUCCION

Una metdica y cuidadosa necropsia, el tipo de muestra, la forma en que se la toma, conserva,
acondiciona y enva al laboratorio, son los primeros pasos a considerar para llegar a un diagnstico
preciso. De la habilidad y cuidados con que se realicen los pasos antes citados para la obtencin de
la muestra, dependern en gran medida los resultados que se obtengan en el laboratorio. Una
muestra autoltica, contaminada o mal fijada, anular todo el trabajo anterior, acarreando una
sensacin de frustracin al colega de campo y al laboratorista ante la falta de resultados confiables
que faciliten el diagnstico, generndose a veces situaciones de desconfianza e incomodidad. De all
la importancia de que el colega que realiza su trabajo en el medio rural, conozca exactamente las
condiciones de muestreo y acondicionamiento de muestras para su envo al laboratorio. Es
importante que toda muestra que se enve al laboratorio, est identificada y acompaada de una
anamnesis, antecedentes, datos clnicos, lesiones observadas, tratamientos efectuados y el
diagnstico presuntivo al que se arrib.

Debido a que el tiempo transcurrido entre la toma de la muestra y su llegada al laboratorio es muy
importante, es conveniente avisar al laboratorio con la suficiente antelacin, que da y por que
medio de transporte se enviarn las muestras, aclarando que tipo de anlisis o informacin se desea
obtener del material que se enva.
MUESTREO PARA BIOQUIMICA CLINICA

Es importante conocer algunas precauciones que deben tomarse, a fin de que las muestras sean
debidamente extradas, identificadas, conservadas y enviadas para su anlisis.

Al detectar animales enfermos conviene extraer muestras de sangre a dichos animales y a un grupo
de animales del mismo lote que se consideren sanos a fin de poder comparar resultados. Las
muestras de sangre deben extraerse si es posible sin el uso de jeringa, haciendo que la sangre corra
directamente de la aguja por sobre la pared del tubo para evitar hemlisis, ya que esta hace variar
los valores de algunas determinaciones bioqumicas (fundamentalmente enzimas). Son causas de
hemlisis:

Aspiracin vigorosa con jeringa

Jeringa, aguja o tubo mojados

Tubos mal lavados y/o mal enjuagados

Tubos muy fros

Agitacin del tubo con la sangre

Las determinaciones con sangre entera (hemograma), deben realizarse dentro de las 24 hs de
extrada la muestra, si sta fue mantenida refrigerada.

Preparacin del material

Todo el material de vidrio y/o plstico debe estar perfectamente limpio. Para el lavado
recomendamos dejar el material en remojo por un da en lavandina, luego enjuagar con agua y
detergente, enjuagar varias veces con agua de canilla hasta que no queden restos de detergente
(espuma) y si fuera posible dar un ltimo enjuague con agua destilada. Dejar escurrir los tubos boca
abajo en una gradilla. Una vez secos, dar un secado final llevando a estufa hasta que no queden
rastros de humedad. De no contar con ste ltimo equipo, se puede utilizar el horno de una cocina
domstica. Una vez totalmente secos, colocar tapn de goma y rotular con etiqueta autoadhesiva o
cinta de enmascarar. Materiales y mtodos para la obtencin de suero Para sangrar, usar agujas 50
x 20 bien afiladas, tomando la muestra de la vena yugular.

Lo ideal es recolectar la sangre en tubos cnicos para centrfuga. De no contar con estos tubos,
cualquier tubo puede ser de utilidad. Antes de tomar la muestra, anotar en el tubo y en planilla la
identificacin del animal. Llenar el tubo de sangre en sus 2 (dos) tercios y evitando movimientos
bruscos, colocar en gradilla de tecno por o madera, para evitar un enfriado brusco del tubo y la
sangre extrada. Si el clima es muy fro y no se dispone de un ambiente templado donde dejar
reposar la sangre para que libere el suero, se puede colocar la gradilla dentro de una caja de tecno
por donde se coloca una bolsa de agua caliente. Tras unas horas de reposo a temperatura ambiente
(20C), en que el suero ya se ha separado, trasvasar este ltimo mediante una pipeta a un tubo de
5, 10 15 ml., copiar los datos identifica torios, congelar lo antes posible a -20 C (en freezer) si
fuera posible o sino a -5 C en congelador de heladera familiar. Si algn tubo no dio suero o el mismo
est turbio o sanguinolento, se puede obtener suero o clarificar el mismo, centrifugando el tubo a
1500/2000 rpm por 15 minutos. Entre un animal y otro, enjuagar la/las agujas con una solucin
desinfectante diluida en agua. Se recomiendan los productos a base de Iodo-povidona o Amonios
cuaternarios. Para un enjuague efectivo, acoplar una jeringa y realizar varias aspiraciones de la
solucin, y expirar con fuerza para lograr el arrastre de restos de sangre coagulada y/o fibrina en el
interior de la aguja. Luego realizar la misma operacin, pero slo con aire para producir el secado
interior de la aguja.

Materiales y Mtodos para obtencin de sangre entera

La forma de obtener la sangre es la misma que para el caso anterior, pero usamos en este caso un
frasquito de vidrio del tipo de los usados para antibiticos, o tubito plstico de 5 o 10 ml. con tapa,
al cual le hemos colocado previamente 1 2 gotas de anticoagulante. Una vez cargado el tubito o
frasco, le colocamos la tapa y lo invertimos varias veces, muy suavemente, para que se mezclen
adecuadamente la sangre con el anticoagulante. La muestra as obtenida debe mantenerse
refrigerada hasta su procesamiento.

Anlisis en el laboratorio El anlisis en laboratorio se realiza con las muestras ya reunidas. En el caso
de microorganismos sospechosos, se utilizan diferentes caldos o cultivos para identificar a los
agentes patgenos. Posteriormente, se procede al examen conocido como antibiograma, para
determinar que antibitico usaremos para atacar al microorganismo, siempre tomando en cuenta
que a veces los resultados in vitro no son los mismos que los resultados in vivo. Diversos anlisis se
pueden realizar para la deteccin de parsitos en los cerdos, como el examen directo, flotacin,
cultivo de Harada-Mori, etc. Estos exmenes son necesarios para la deteccin y reconocimiento de
los parsitos que nos puedan causar problemas. Se debe tener material preparado para que las
muestras lleguen en buenas condiciones hasta el laboratorio (sin contaminacin y lo ms rpido
posible) para un buen anlisis. Al respecto, el Profesor Principal de la Facultad de Zootecnia de la
UNALM, Dr. Carlos Vilchez Perales, en el caso de la alimentacin, existen varios anlisis que se
pueden realizar en las muestras de comidas. Los exmenes son, generalmente,
qumiconutricionales. Uno de los ms comunes, es el Anlisis Qumico- Proximal (Weende) de los
Alimentos. Otros anlisis ms detallados, pueden ser los de minerales (por espectrofotometra de
absorcin atmica), cidos grasos (por cromatografa de gases), aminocidos (por High Presuure
Liquid Chromatography - HPLC), etc. Por ltimo, para la estimacin del contenido nutricional de un
ingrediente a alimento completo, se utiliza el NIR (Near Infrared Spectroscopy). Una vez obtenidos
los resultados de los diferentes anlisis, estos pueden ser utilizados en la formulacin de las dietas.
La respuesta productiva de los animales se va ver afectada, si es que la dieta no est formulada
apropiadamente para el tipo o clase de cerdo (destetado, de crecimiento, etc).
I.- SELECCION DE MUESTRAS

A) Animales vivos:

Debern ser seleccionados los que sean representativos del problema observado. En el caso de aves
se recomienda enviar un mnimo de 5 aves adultas y 10 aves jvenes por cada clave o parvada. En
el caso de cerdos u otras especies puede enviarse 1 2 ejemplares. Los animales enviados para
anlisis bacteriolgicos no debern haber recibido tratamientos con antibiticos, en caso contrario
se deber notificar al laboratorio. Los animales de desecho son en general malos ejemplares para
fines diagnsticos casi siempre enmascaran y confunden el problema real. El envo de animales vivos
al laboratorio est justificado en los siguientes casos:

a) Para certificacin de parvadas en las campaas zoosanitarias de la SAGARPA, en el caso de

requerirse muestras de rganos.

b) Cuando el laboratorio est cercano y no sea factible la toma de muestras en la explotacin.

c) Cuando no se tenga una idea clara de la etiologa y se requiera un estudio completo.

d) Cuando el aislamiento del agente etiolgico sea delicado y laborioso, por ejemplo: Pneumovirus,
Haemophilus, etc.

En los casos de enfermedades altamente contagiosas y de difusin rpida (ejem. Influenza aviar) se
debern enviar rganos para evitar la movilizacin de los animales, por el riesgo que significa en
estos casos.

B) Organos y tejidos:

Al tomar muestras para virologa, bacteriologa o histopatologa se debern tomar de preferencia

de rganos o tejidos que muestren lesiones representativas del problema observado, y de acuerdo
a los rganos y tejidos recomendados en este manual (consultar seccin de envo de muestras). Los
rganos y tejidos tomados para anlisis bacteriolgicos debern tomarse de aves que no hayan
recibido tratamiento con antibiticos preferentemente (ver parte II. Toma de muestras).

C) Animales muertos:

Siempre es aconsejable enviar animales muertos cuando en el problema que se presente haya
mortalidad. De preferencia estos animales no debern tener ms de 1 hora de muertos.
II.- TOMA DE MUESTRAS

A) Muestras de rganos y tejidos para Bacteriologa:

a) Se debern tomar las muestras en condiciones aspticas, de ser posible en un lugar cerrado, con
mechero de alcohol, pinzas y tijeras flameadas. En caso de no reunir las condiciones anteriores, lo
ms aproximado a lo descrito es aconsejable.

b) Las muestras debern tomarse de animales de mortalidad reciente o bien, sacrificados con el
propsito de colectar muestras ya que mientras ms tiempo transcurra, existir mayor riesgo de
contaminacin con grmenes de la micro flora orgnica. En caso de tener que tomar muestras de
animales muertos de ms de una hora, asegrese de incluir muestras de mdula sea.

c) Las muestras podrn tomarse en frascos o bolsas estriles diferentes para cada rgano o tejido
incluyendo trozos que muestren las lesiones caractersticas o bien mediante la toma con hisopos
estriles especialmente diseados para enviarlos al laboratorio en un medio de transporte
(disponibles previa solicitud de nuestros clientes). En caso de tomar trozos de rganos o tejidos, las
muestras debern conservarse en refrigeracin (evitar su congelacin).

d) En el caso de no contar con un mechero, es fundamental utilizar por lo menos torundas con
alcohol con las que se pueda empapar las tijeras y pinzas de diseccin, precio a cualquier corte,
cuidando que el alcohol no toque las superficies de los tejidos.

e) Cuando se requieran muestras para aislamiento de Haemophilus paragallinarum, debern

enviarse las cabezas de aves afectadas envueltas en toallas de papel y dentro de bolsas de plstico
en forma individual.
B) Muestras de rganos y tejidos para Virologa:

a) Se debern tomar las muestras en condiciones de la mayor asepsia posible aunque los factores
de contaminacin no son tan crticos como para las muestras de bacteriologa.

b) Se tomarn rganos y tejidos tanto de animales muertos como recin sacrificados. Es

conveniente tratar de incluir muestras de animales en la fase aguda de la infeccin ya que el
aislamiento de algunos virus nicamente se puede realizar durante las fases iniciales de la
enfermedad (ejemplo EDS76). Las muestras se tomarn en frascos o bolsas estriles incluyendo
rganos o tejidos distintos en frascos diferentes . Las muestras debern conservase en refrigeracin
o congelacin o en caso de no contar con estos elementos en una solucin de glicerina al 50%.

c) Para el envo de vacunas se debern tomar al menos 2 viales con sus diluentes respectivos y
conservados conforme a los requerimientos del laboratorio productor.
C) Muestras de rganos y tejidos para Histopatologa:

a) Se debern tomar las muestras de animales muertos recientemente (1 hora mximo) o bien
sacrificados para este fin, ya que al transcurrir el tiempo se presentan cambios autolticos, que
impiden la apreciacin de las lesiones.

b) Las muestras debern tomarse de preferencia de rganos y tejidos que muestren lesiones.

c) Se debern cortar trozos de aproximadamente 1 cm. cbico para asegurar una adecuada
penetracin de la solucin fijadora.

d) Las muestras se debern incluir en una solucin fijadora adecuada (ver cuadro 1) de preferencia
una solucin de formalina amortiguada (disponible previa solicitud de nuestros clientes) empleando
un recipiente de boca ancha y tapa que selle adecuadamente. Algunos recipientes plsticos
empleados para comercializar antibiticos funcionan muy bien.

e) Se deber mantener una relacin de 1 volumen de muestra por 9 volmenes de la solucin

fijadora.
E) Muestras para Serologa:

a) Se debern tomar de 12 a 15 muestras por clave de identificacin en el caso de las aves. En el

caso de cerdos y bovinos se sugiere tomar al menos 5 muestras representativas de animales en
distintas etapas de produccin o de distintas edades.

b) Las muestras de sangre pueden ser tomadas en frascos de vidrio de 5 a 30 ml y debern colectarse
lo ms aspticamente posible.

c) Una vez obtenida la cantidad deseada, se retira la aguja de la jeringa para depositar la sangre en
un recipiente y evitar la hemlisis. Dicho recipiente debe colocarse horizontalmente hasta que la
sangre coagule y se separe el suero; de esta forma las muestras debern ser enviadas el mismo da.
Si las muestras van a ser enviadas por mensajera y el traslado es por ms de 24 horas, se sugiere
transvasar los sueros en recipientes limpios o en viales de 1 a 5 ml y desechar el cogulo. Enviar
exclusivamente el suero. Si los sueros no van a ser enviados el mismo da, se deber refrigerarlos
hasta el momento del envo, y enviarlos en cajas trmicas con refrigerantes. Tambin pueden
utilizarse popotes de plstico flexible y transparente, se deber sellar perfectamente de un extremo
para poder vaciar la muestra de sangre sellando el extremo libre, una vez el suero se ha separado
del cogulo se deber cortar el popote a la mitad procurando que en una parte quede el cogulo y
en la otra el suero sellando esta ultima parte. Enviar exclusivamente el suero. Asegrese que el
frasco o popote se encuentre perfectamente sellado. Los sueros deben ser conservados en
refrigeracin.

NOTA : No se deber congelar ni refrigerar las muestras de sangre antes de que se separe el suero
de lo contrario ser muy difcil o imposible obtener el suero de la muestra.
Volumen de Suero Requerido

a) A continuacin se proporciona una estimacin del suero requerido para cada anlisis. Se deber
enviar una cantidad proporcional a las pruebas que solicite segn la informacin contenida en el
siguiente cuadro.

III.- PREPARACION Y ENVIO DE MUESTRAS

A) Historia clnica:

Deber incluirse especialmente para los anlisis histopatolgicos solicitados as como en el caso de
ingresar muestras para un caso clnico completo y de acuerdo al formato anexo (F1).

B) Identificacin: Debern especificarse claramente el tipo de muestras enviadas, los estudios

solicitados, as como los datos de la empresa a quien se factura y los datos de la persona a quien
se le enviar el resultado incluyendo No. de telfono y fax (ver formato F1).

C) Preparacin: Las muestras debern prepararse para su envo de la siguiente forma:

a) Muestras para bacteriologa, serologa, virologa (a excepcin de las muestras enviadas en

glicerina al 50%), agua y aves muertas, debern enviarse en refrigeracin en una caja trmica con
refrigerantes que ocupen al menos una cuarta parte del volumen de la caja. El transporte al
laboratorio no deber ser de ms de 48 hrs.

b) Los animales vivos debern transportarse con una adecuada ventilacin y protegidos en lo
posible de la luz solar directa. Si el viaje es prolongado es aconsejable proporcionar una fuente de
agua.

c) El resto de las muestras pueden enviarse en cajas a temperatura ambiente y adecuadamente

protegidas en el caso de tratarse de muestras frgiles.
D) Envo: Las muestras pueden enviarse de alguna de las siguientes formas:

a) Por medio de un representantes de ventas o servicio tcnico.

b) En forma personal ingresarlas al laboratorio.

c) Por medio del algn sistema de mensajera

Identificacin de las muestras

La identificacin de las muestras es de primordial importancia para el laboratorio y debe estar

acompaada de la siguiente informacin:

Nombre, direccin, E-mail, telfono y fax del mdico veterinario.

Nombre, direccin, E-mail, telfono y fax del propietario.

Nombre de la explotacin pecuaria.

RUC o nmero de cdula del propietario o de la hacienda

Ubicacin: provincia, cantn y parroquia.

Especie, raza, sexo, edad e identificacin o nombre del animal o animales. Nmero de
animales de la explotacin

Porcentaje de morbilidad (enfermos) y mortalidad (muertos).

Sintomatologa

Tiempo de evolucin de la enfermedad.

Tratamiento efectuado.

Vacunas aplicadas (tipo y fechas).

En caso de necropsia, descripcin de hallazgos o lesiones macro.

Tipo de muestra, fecha y hora de la toma.

Sistema de conservacin utilizado.

Diagnstico presuntivo.

Observaciones