PRT 023 PDF

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Agosto de 2002
PROCEDIMIENTO RECUENTO AEROBIOS Revisin: 9
EN PLACA METODO BAM ONLINE 2001
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Seccin Microbiologa PRT-712.02-023 Pgina 1 de 33
Alimentos y Agua
1. OBJETIVO
Conocer el nmero de microorganismos aerobios mesfilos que contiene un alimento. Este
mtodo es uno de los indicadores microbiolgicos de calidad mas utilizado.
2. CAMPO DE APLICACIN Y ALCANCE

Aplicar este procedimiento a alimentos congelados, enfriados, precocidos o preparados con
excepcin de los productos fermentados o madurados tales como queso, ciertos tipos de
embutidos, yogurt, etc.
3. FUNDAMENTO
Este en un mtodo de recuento en placa y siembra en profundidad.
Los resultados de este anlisis permiten:
Verificar efectividad de los procedimientos de limpieza y desinfeccin.
Determinar si las temperaturas aplicadas en los procesos fueron las adecuadas.
Determinar el origen de la contaminacin durante los procesos de elaboracin de los
alimentos.
Verificar condiciones ptimas de almacenamiento y transporte.
Obtener informacin acerca de la vida til de los alimentos.
Indicar alteracin incipiente en ciertos alimentos.
4. REFERENCIAS
4.1 Bacteriological Analytical Manual. Online Enero 2001.
4.2 Standard Methods for the Examination of Dairy Products.15 ed. 1992. (Para clculo de
resultados)
4.3 PRT-712.01-001 "Procedimiento de Recepcin de las muestras".
4.4 PRT-712.01-002 "Procedimiento de procesamiento de muestras de alimentos y agua"
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5. TERMINOLOGA
No Aplica
6. MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS

6.1 MATERIALES Y EQUIPOS
6.1.1 Placas Petri estriles de vidrio o de plstico de 90-100 mm de dimetro.
6.1.2 Frascos de dilucin de 160 mL de vidrio borosilicato con tapa rosca.
6.1.3 Tubos de 16 x 160 mm marcados en 9 y 10 mL, que contengan 9 mL de solucin
diluyente estril.
6.1.4 Pipetas bacteriolgicas estriles de 1, 5 y 10 mL graduadas en 0,1 Ml
6.1.5 Incubadora regulada a 35 1C, y para muestras de leche regulada a 32 1C
6.1.6 Bao de agua termorregulado a 47 2 C.
6.1.7 Agitador de tubos
6.1.8 Contador de colonias, tipo Quebec de campo oscuro o equivalente
6.2 MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS

6.2.1 AGUA RECOMENDADA PARA USO EN MICROBIOLOGIA
Para preparar medios de cultivo, reactivos y blancos de dilucin slo se debe usar agua que ha
sido tratada por el desionizador Barnstead, para dejar libre de trazas de metales disueltos y
componentes bactericidas e inhibitorios.
6.2.2 DILUYENTE: Agua dilucin fosfato buferada de Butterfield pH 7.2 0.1 distribuida
en volmenes de 9 mL en tubos de tapa rosca.
6.2.3 AGAR PARA RECUENTO EN PLACA: Agar Plate Count Agar o Standard Methods
Agar estril, pH 70.1, distribuido en frasco Schott con 200 mL. (Anexo N 3)
7. DESARROLLO
7.1 REQUISITOS "RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESFILOS
VIABLES" (Ver Anexo N 1)
7.2 PRECAUCIONES "RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESFILOS
VIABLES" (Ver Anexo N 2)
7.3 DILUCIONES Y SIEMBRA DE LA MUESTRA
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7.3.1 Recibir en el Laboratorio de Recuentos, las muestras procesadas en el Laboratorio de

Recepcin de Muestras de esta seccin y dejar constancia de ello en el registro cdigo
RG-712.00-037. Estas muestras son procesadas segn el PRT-712.01-001 de
"Procedimiento de Recepcin de las muestras" y el PRT-712.01-002 de "Procedimiento
de procesamiento de muestras de alimentos y agua".
7.3.2 Anotar en cuaderno de inscripcin, la clave y nmero de las muestras a sembrar.
7.3.3 Verificar que el volumen de cada tubo de dilucin contengan 9 mL.
7.3.4 Preparar diluciones decimales de 10, 10 , etc. a partir del homogeneizado de la
muestra o de muestra lquida directa. (Ver Anexo N 6). Para ello transferir 1 mL a un
frasco con 9 mL de diluyente. Agitar y proceder de igual forma para las diluciones
siguientes.
7.3.5 Identificar las placas Petri con clave, nmero de la muestra y dilucin.
7.3.6 Sembrar 1 mL por duplicado de cada dilucin en placas estriles previamente
identificadas. Sembrar como mnimo dos diluciones consecutivas. (Anexo N 4 Diagrama
Anlisis Recuento de microorganismos aerobios mesfilos).
7.3.7 Verter en cada placa Petri aproximadamente 12-15 mL de agar previamente fundido y
mantenido en bao de agua a 47C 2 C.
7.3.8 Mezclar el inculo con el medio fundido, inclinando y girando las placas. La forma
adecuada de llevar a cabo esta operacin sera la siguiente:
a) Mover la placa con movimientos de vaivn 5 veces en una direccin,
b) hacerla girar 5 veces en el sentido de las agujas del reloj,
c) mover con movimientos de vaivn en una direccin que forme ngulo recto con la
primera y
d) hacerla girar 5 veces en el sentido contrario a las agujas del reloj.
7.3.9 Una vez solidificado el agar, invertir las placas rpidamente para prevenir el crecimiento
de colonias invasivas por acumulacin de humedad. Incubar a 35 C durante 48 horas 2
horas.
Con el fin de validar los resultados se recomienda realizar controles de: ambiente,
esterilidad del medio de cultivo, esterilidad del diluyente
7.4 LECTURA Y RECUENTO DE COLONIAS

7.4.1 LECTURA DE LAS PLACAS
7.4.1.1 Luego de cumplir el perodo de incubacin realizar la lectura de las placas.
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7.4.1.2 Si no es posible leerlas prontamente, guardarlas a 4C por no ms de 24 horas, pero

esto no hay que hacerlo de rutina.
7.4.1.3 Realizar el recuento con un contador de colonias modelo Quebec de campo oscuro.
7.4.1.4 Examinar las muestras dudosas con mayor aumento para distinguir las colonias de
materias extraas.
7.4.1.5 Evitar la fatiga ocular que puede causar imprecisiones.
7.4.1.6 Anotar la dilucin usada y el nmero de colonias contadas en cada placa en el registro
cdigo RG-712.00-023.
7.4.1.7 Anotar los resultados de los controles realizados en los siguientes registros segn
corresponda: RG-.712.00-001, RG-712.00-009 y RG-712.00-010.
7.4.2 RECUENTO DE COLONIAS Y REGISTRO (Anexo N 5 Casos, lectura, registro

clculo e informes de resultados)
El recuento de colonias en placa se realiza de acuerdo al siguiente esquema:
7.4.2.1 Placas normales (25 - 250 colonias):

Seleccionar las placas libres de crecimiento invasivo.
Contar todas las colonias incluyendo aquellas de tamao muy pequeo.
Anotar por dilucin, el nmero de colonias contadas en cada placa.
7.4.2.2 Casos especiales

Si no se tienen placas que cumplan con el requisito anterior, proceder de la siguiente manera:
7.4.2.2.1 Placas sobrepobladas (mas de 250 colonias):

a1)-Anotar los recuentos de placas sobrepobladas como muy numerosos para contar (MNPC)
cuando disponga de placas normales.
a2) Si no dispone de placas normales en las diluciones sembradas, contar las colonias en
porciones de la placa si su distribucin es homognea y calcular el recuento estimado en placa
(RPES).
Si hay menos de 10 colonias por cm, contar las colonias en 12 cuadrados, seleccionar 6
cuadrados consecutivos horizontales de la placa y 6 cuadrados consecutivos formando ngulo
recto, contar cada cuadrado slo una vez
Si hay ms de 10 colonias por cm contar las colonias en cuatro de tales porciones.
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En ambos casos, multiplicar el nmero promedio de las colonias contadas por cm por el rea
de la placa usada para estimar el nmero de colonias por placa. Cada laboratorio debe
determinar el rea en cm de las placas usadas. Registre los valores obtenidos e indique como
recuento estimado.
Si hay mas de 100 colonias por cm, registrar como >100 col / cm.
7.4.2.2.2 Placas con menos de 25 colonias (< 25 colonias)

Cuando las placas de las diluciones tienen menos de 25 colonias cada una, registre los valores
obtenidos e indique como recuento estimado.
7.4.2.2.3 Placas sin desarrollo de colonias

Cuando ninguna de las placas presente desarrollo de colonias, registrar como sin desarrollo en la
dilucin correspondiente (SD) o < 1 por la correspondiente dilucin ms baja e indique como
recuento estimado.
7.4.2.2.4 Crecimiento invasivo

Las colonias invasivas son generalmente de tres tipos:
a1) El primer tipo son las colonias en cadenas, que al parecer son causadas por desintegracin de
un grupo de bacterias cuando la placa Petri es rotada para mezclar el agar con la alcuota
analizada. Si solamente existe una de tales cadenas contar como una colonia . Si una o mas
cadenas parecieran originarse de fuentes distintas, contar cada fuente como una colonia. No
contar cada crecimiento individual de tal cadena como una colonia.
a2) El segundo tipo de colonia invasora es la que se desarrolla en una pelcula de agua entre el
agar y el fondo de la placa Petri.
a3) El tercer tipo es la que se forma en una pelcula de agua en el costado o en la superficie del
agar.
Estos dos ltimos tipos revelan una acumulacin de humedad en el punto en el cual se origina el
crecimiento invasivo. Cuando la alcuota de siembra es uniformemente distribuida en el medio,
las bacterias raramente desarrollan colonias invasivas.
a4) Si en las placas seleccionadas se presenta invasin, realizar recuento de colonias solamente:
Si el rea invadida no excede la mitad de la placa.
Si las colonias estn bien distribuidas fuera del rea invadida.
Si no se cumple lo anterior, registrar como crecimiento invasivo o accidente de laboratorio.
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Los laboratorios con un 5 % de placas cubiertas con ms de 1/4 de las placas con crecimiento
invasivo, deberan tomar medidas inmediatas, para eliminar este problema (reducir la humedad
ambiente en la cmara o estufa de incubacin y mezclar cuidadosamente el agar con la siembra).
7.4.2.2.5 Accidente de laboratorio o inhibidores de crecimiento bacteriano.

Cuando una placa presenta contaminacin u otra condicin insatisfactoria registrar como
"Accidente de Laboratorio". Especificar.
El analista puede sospechar la presencia de sustancias inhibidoras en las muestras que estn
siendo analizadas, cuando las placas no tienen crecimiento o tienen proporcionalmente menos
crecimiento en las diluciones mas bajas. Tal resultado no debera ser interpretado como
evidencia de inhibidores hasta confirmar la presencia de ellos en el producto
7.5 EXPRESION DE RESULTADOS
7.5.1 Clculo y registro de resultados ( Ver Anexo N 5)

Para los clculos del Recuento Standard en placa considerar slo los dos primeros dgitos.
Si el tercer dgito es 6, 7, 8 o 9 adicionar una unidad al segundo dgito. Si el tercer dgito es 1, 2,
3 o 4 considerar solamente los dos primeros dgitos. Cuando el tercer dgito es 5, agregar una
unidad al segundo dgito si este es impar y mantener el segundo dgito si este es par.
Usar ceros para los dems dgitos hacia la derecha.
Ejemplo
Lectura calculada RAM
12.700 13.000
12.400 12.000
15.500 16.000
14.500 14.000
7.5.2 Placas normales

7.5.2.1 Cuando los recuentos de los duplicados de placas de slo una de las diluciones caen
dentro del rango 25 a 250 colonias:
- Utilizar para el clculo los recuentos obtenidos en placas normales
- Sacar promedio y multiplicar por el factor de dilucin.
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7.5.2.2 Si los recuentos de las placas de dos diluciones consecutivas caen dentro del rango
25-250 colonias calcular el RAM segn la siguiente frmula:
N= C
[ ( 1 x n1 ) + ( 0.1 x n2 ) ] x d
donde :
N = nmero de colonias por ml o g de producto
C = suma de todas las colonias contadas en todas las placas
n1 = nmero de placas contadas de la menor dilucin.
n2 = nmero de placas contadas de la dilucin consecutiva.
d = dilucin de la cul fu obtenido el primer recuento
Ejemplo
1 : 100 1 :1000
232 y 244 33 y 28
N = 232 + 244 + 33 + 28
[( 1 x 2 )+( 0.1 x 2 )] x 0,01
= 537
0.022
= 24.409 = 24000
7.5.2.3 Cuando los recuentos de las placas en duplicado caen tanto dentro como fuera del
rango 25-250 colonias, usar slo aquellos recuentos que estn dentro de este rango.
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7.5.3 Todas las placas con menos de 25 colonias.

Cuando las placas de ambas diluciones tienen menos de 25 colonias cada una, informar el
recuento como menor de 25 por el recproco del factor de dilucin menor.
Ejemplo
1 : 100 1 : 1.000 R A M ( mL o g )
18 2 < 2.500 recuento en placa estimado (RPES)
0 0 < 2.500 recuento en placa estimado (RPES)
7.5.4 Todas las placas con mas de 250 colonias

Cuando las placas de ambas diluciones tienen ms de 250 colonias cada una (pero menos de
100 por cm) contar las placas ms cercanas a 250, sacar promedio y multiplicar por el
recproco de la dilucin.
Ejemplo
1 :100 1 : 1.000 R A M ( mL o g )
MNPC 640 640.000 recuento en placa estimado (RPES)
( MNPC = Muy numeroso para contar )
7.5.5 Todas las placas con ms de 100 colonias promedio por cm.
Estimar que el R A M es mayor de 100 veces la mayor dilucin sembrada, por el rea de placa
utilizada y por el recproco de la dilucin.
Ejemplo
1 : 100 1 : 1.000 R A M ( mL o g )
TNPC 7.150* > 6.500.000 * ( RPES )
TNPC 6.490** >5.700.000 **( RPES )
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* basado en un rea de placa de 65 cm ( 9 cm )

** basado en un rea de placa de 57 cm ( 8,5 cm )
7.5.6 Todas las placas con crecimiento invasivo, presencia de inhibidores o accidente
de laboratorio.
Informar segn corresponda.
7.6 INFORME DE RESULTADOS (Anexo N 5)
7.6.1 Informar el recuento de aerobios mesfilos (RAM) en unidades formadoras de colonias

(ufc) por mililitro o gramo segn corresponda.
Expresar el Resultado con slo un nmero entero y un decimal multiplicado por 10 elevado
a la potencia correspondiente. Ej 2.400 2,4 x 103 ufc / g o mL.
7.6.2 Siempre que se utilice el mtodo de recuento en placa para decidir si una partida de
alimentos se acepta o se rechaza, debe considerarse nicamente recuentos realizados dentro
del rango 25-250 colonias y nunca los recuentos estimados. Desde el punto de vista de un
Organismo Oficial, el recuento estimado es slo til como una aproximacin inicial para
valorar la calidad bacteriolgica de un alimento.
7.6.3 En el caso de que se utilice el recuento en placa para establecer si un alimento determinado
cumple una norma microbiolgica, debe tomarse en cuenta los planes de muestreo
especificados para ese alimento
7.7 REPRODUCIBILIDAD Y ERROR PERSONAL

El resultado obtenido al contar por segunda vez las colonias de una placa determinada debe
presentar:
7.7.1 Una diferencia mxima del 5% en el caso de que este recuento lo realice la misma persona.
7.7.2 Una diferencia mxima del 10% en el caso de que este recuento lo haya realizado otra u
otras personas.
Cuando la diferencia entre ambos es superior a estos lmites, puede deberse a defectos
visuales, a la dificultad de reconocer las colonias muy pequeas o lo que es mas frecuente,
a la incapacidad para diferenciar las colonias de las partculas ms pequeas
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7.8 CONTROLES
7.8.1 Chequear esterilidad de:
- Agua de dilucin
- Agar para recuento en placa (Plate Count o agar Standard Methods)
- Pipetas
- Placas Petri
7.8.2 Control de ambiente por mtodo de sedimentacin en placa :
- Mesn de siembra
- Flujo laminar
7.8.3 Control de temperatura de incubadora diariamente.
7.8.4 Control temperatura bao termorregulado cada vez que se siembre muestras
8. REGISTROS
Identificacin Almacenamiento Proteccin Recuperacin Tiempo retencin

del registro y disposicin
Registro control Archivador verde Acceso restringido a Papel 5 aos y
de ambiente, Registros personal Seccin disposicin en
RG-712.00-009. Laboratorio N346 Microbiologa. basura normal
Seccin partidos en trozos.
Microbiologia
Alimentos y Agua.
Registro control Archivador verde Acceso restringido a Papel 5 aos y
de esterilidad de Registros personal Seccin disposicin en
medios de Laboratorio N346 Microbiologa. basura normal
cultivo Seccin partidos en trozos.
utilizados en el Microbiologia
anlisis Alimentos y Agua.
Laboratorio
346, RG-
712.00-010.
Registro Archivador azul Acceso restringido a Papel 5 aos y
anlisis de Registros de personal Seccin disposicin en
muestras de Lecturas e informes Microbiologa. basura normal
alimentos y de resultados partidos en trozos.
agua Laboratorio
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Identificacin Almacenamiento Proteccin Recuperacin Tiempo retencin

del registro y disposicin
Laboratorio de Recuento aerobios
Recuentos RG- mesfilos, S.aureus,
712.00-023. Mohos y levaduras
Seccin
Microbiologia
Alimentos y Agua.
Registro de Archivador rojo Acceso restringido a Papel 5 aos y
entrega diaria Registro entrega personal Seccin disposicin en
de muestras a diaria Laboratorio Microbiologa. basura normal
los laboratorios 340. partidos en trozos.
RG-712.00-037.
9. TABLA DE MODIFICACIONES
Revisin N Pg. Motivo del cambio Fecha

Modificada Aprobacin
8 1 Se elimina formato pgina 1 por cambio en
formato de documento institucional.
8 1 a 31 Se cambia el formato del encabezado de 11/02/2008
pgina a todo el documento.
Se corrige PRT-702.02-023 por PRT -712.02-

023
Se cambia el nmero de revisin 8 por 9 y el

total de pginas.
8 2 En los puntos 4.3 y 4.4 se corrige PRT- 11/02/2008
702.01-001 y PRT-702.01-002 por PRT-
712.01-001 y PRT-712.01-002
respectivamente.
8 2 Se deja pie de pgina slo en pgina 1 y se 11/02/2008
actualizan los cargos.
8 3 En el punto 6.6 se cambia 45C 2 C por 47 11/02/2008
C 2C.
8 3 En tem Medios de Cultivo y Reactivos en el 11/02/2008
segundo prrafo Diluyente se cambia por:....9
mL en tubos tapa rosca y se elimina: Para
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muestras de leche distribuida en frasco con 99
mL 2 mL.
8 3 En el punto 7.1 se corrige N por N 11/02/2008
8 3 En el punto 7.3.1 se corrige la codificacin de 11/02/2008
RG-702.00-037 por RG-712.00-037, PRT-
702.00-001 por PRT-712.01-001 y PRT-
702.01-002 por PRT-712.01-002.
8 3 En el punto 7.3.3 se cambia por:...tubo....9 mL. 11/02/2008
8 4 En el punto 7.3.4 se cambia por:...1 mL...9 11/02/2008
mL...
8 4 En el punto7.3.7 se cambia 48C por 47C 11/02/2008
2C.
8 4 En el punto 7.3.11 en los prrafos 6 y 7 se 11/02/2008
corrige RG -702.00-XXX por RG-712.00-
XXX.
8 5 En el punto 7.4.2 en el prrafo 7 se agrega al 11/02/2008
final de la frase despus del punto seguido:
Registre los valores obtenidos e indique
como recuento estimado.
8 5 En el punto 7.4.2.b) en segundo prrafo se 11/02/2008
elimina: ....., proceder como punto 1 y se
agrega: registre los valores obtenidos e
indique como recuento estimado.
8 5 En el punto 7.4.2 c), en segundo prrafo se 11/02/2008
agrega:... o < 1 por la correspondiente
dilucin ms baja e indique como recuento
estimado.
8 8 En el punto 7.5.3 en el ejemplo se agrega a la 11/02/2008
derecha de < 2.500: recuento en placa
estimado (RPES).
8 9 En el ejemplo del punto 7.5.4 se agrega al lado 11/02/2008
derecho del valor RAM: ...recuento en
placa...
8 11 Se cambia el punto 8.0 Responsables por 11/02/2008
Tabla registro por cambio de formato a nivel
institucional.
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8 11 Se cambia el punto 9.0 Distribucin por Tabla 11/02/2008
de modificaciones por cambio de formato a
nivel institucional
8 11 Se cambia el punto 10.0 Registros por Anexos 11/02/2008
por cambio formato a nivel institucional.
8 12 En la tabla Anexo 1 se reemplaza BOTELLAS 11/02/2008
DE DILUCIN por:TUBOS DE DILUCION:
Deben tener una capacidad aproximada de 20
mL, de vidrio de borosilicato con tapa de
rosca. Verificar que los tubos contengan la
cantidad adecuada. Se recomienda tubos
marcados indeleblemente a 9 mL y 10 mL
0,1 mL.
8 14 En la fila octava de la tabla se cambi 50C 11/02/2008
por 47C 2C.
8 15 En el Anexo N 2, en el prrafo nueve se 11/02/2008
cambi 48C 1C por 47 C 2C.
8 17 En el esquema del anexo N 4 se cambia 99 11/02/2008
mL de Agua peptonada 0,1 % por: 450 mL
de Solucin de Butterfield.
Se cambia 11 g por 50 g.
Se cambia 9 mL se agua peptonada 0,1% por

Solucin de Butterfield.
8 20 En los casos 1 y 2 a), b),c) se agrega RPESa 11/02/2008
los puntos mencionados en la columna
INFORME.
8 21 En el punto b), en la columna INFORME se 11/02/2008
agrega (RPES).
En el punto c), en la columna CALCULO Y

REGISTRO se agrega: < 1,0 x por el
recproco de dilucin menor y en al columna
Informe se cambia <1,0 x 10^3 por < 2,5 x
10^3 (RPES).
10. ANEXOS
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10.1 Anexo N 1 Requisitos Recuento de microorganismos aerobios mesfilos viables.

10.2 Anexo N 2 Precauciones Recuento de microorganismos aerobios mesfilos viables.
10.3 Anexo N 3 Caractersticas del agar Standard.
10.4 Anexo N4 Recuento de microorganismos aerobios mesfilos: Tcnica Recuento en placa
siembra en profundidad.
10.5 Anexo N 5 Recuento de microorganismos aerobios mesfilos.
10.6 Anexo N 6 Tabla de diluciones segn anlisis realizado en el lab. 346.
10.7 Anexo N 7 RG-712.00-023 "Registro de resultados anlisis RAM, S. aureus, Mohos y
Levaduras en alimentos y agua
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ANEXO N 1
REQUISITOS "RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESFILOS

VIABLES"
AUTOCLAVE : El autoclave debe ser de tamao suficiente para prevenir el
amontonamiento de material en su interior y ser construido de
forma que provea temperaturas uniformes. Este equipo debe
constar de un termmetro registrador de temperatura.
HORNO De tamao suficiente para evitar que se amontone el material en su
ESTERILIZADOR : interior, que provea una temperatura uniforme. Debe tener
termmetro registrador de temperatura.
BALANZA : Con sensibilidad de 0,1 g capacidad de 200 g de carga. Es
preferible de un slo plato.
CONTADOR DE Se prefiere el modelo "Quebec" o uno que tenga aumento y
COLONIA : visibilidad equivalente.
TUBOS DE DILUCION: Deben tener una capacidad aproximada de 20 mL, de vidrio de
borosilicato con tapa de rosca. Verificar que los tubos contengan
la cantidad adecuada. Se recomienda tubos marcados
indeleblemente a 9 mL y 10 mL 0,1 mL.
INCUBADORA : La temperatura dentro de la incubadora no debe variar mas de 35
1 C.
La temperatura dentro de la incubadora se determina cuando est

llena a su capacidad mxima.
Las placas deben llegar a la temperatura de incubacin dentro de 2

horas. Evitar la humedad excesiva dentro de la incubadora, para
reducir la tendencia de crecimiento de colonias invasivas. Prevenir
el desecamiento excesivo del medio, controlando la ventilacin y
circulacin de aire.
El agar de las placas incubadas no debe perder mas del 15 % del

peso durante las 48 horas de incubacin.
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VIABLES"
La incubadora debe cargarse de manera que quede no menos de
2,5 cm de espacio entre los grupos de placas o entre las placas y
las paredes del incubador.
Las incubadoras deben estar aisladas, equipadas con unidades bien
distribuidas de calefaccin y deben tener una circulacin mecnica
de aire.
Las incubadoras deben mantenerse en salas donde la temperatura
tenga un rango de 16 - 27 C.
La temperatura de la estufa o cmara de incubacin debera
chequearse dos veces al da; una antes de sacar el material en la
maana y otra en la tarde al finalizar la jornada trabajo. Esto debe
ser realizado con termmetros de registro de temperatura mxima
y mnima.
Los termmetros deben ser sumergidos en un recipiente con agua
hermticamente cerrado. La temperatura del aire no es un buen
ndice de la temperatura real del agar.
HOMOGENIZADOR Warring blender con vaso de vidrio o de acero inoxidable.

MECANICO:
STOMACHER: De capacidad 400 g.
PLACAS PETRI: Los fondos de las placas Petri deben tener por lo menos 85 mm de
dimetro interior y una profundidad de 12 mm con superficies
interiores y exteriores libres de burbujas, rayaduras u otros
defectos. Pueden ser de vidrio o desechables.
CONTENEDORES DE De acero inoxidable o aluminio, con tapa.

PLACAS PETRI.:
PIPETAS: Para este anlisis se usan pipetas de 1 mL 0,25 mL, la que debe
entregar su contenido en mximo 4 segundos.
Usar slo pipetas intactas, taponadas, de material no torcido,
calibradas para uso bacteriolgico y en conformidad con las
especificaciones de APHA.
Fecha emisin:
Agosto de 2002
Fecha revisin:
11/02/2008
Alimentos y Agua

VIABLES"
PROPIPETAS O PIPETAS
AUTOMATICAS .
CONTENEDOR DE De acero inoxidable.

PIPETAS:
REFRIGERADOR : Debe mantener las muestras a una temperatura de 0 -4.4 C hasta

ser analizadas. Se debe chequear la temperatura diariamente.
ESPACIO DE Libre de polvo e insectos y adecuados para guardar material.

ALMACENAJE:
TERMOMETROS Los termmetros deben tener un rango de -1,1 a 55 C. La

graduacin no debe exceder de 1 C. Los termmetros deben ser
chequeados con un termmetro certificado por lo menos una vez al
ao.
AREA DE TRABAJO: Debe ser un mesn nivelado, con amplia superficie de trabajo,
limpio, iluminado. El laboratorio debe tener buena ventilacin,
libre de polvo y de corrientes de aire. El nmero de
microorganismos (bacterias, levaduras y hongos) en el aire del
rea de trabajo no debe exceder de 15 colonias por placa expuesta
durante 15 minutos.
BAO DE AGUA De dimensiones adecuadas, con control termosttico para

TERMORREGULADO: mantener el medio a 47C 2C.
Fecha emisin:
Agosto de 2002
Fecha revisin:
11/02/2008
Alimentos y Agua
ANEXO N 2
PRECAUCIONES
"RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESFILOS VIABLES"
Al realizar las siembras usar propipeta. No pipetear con la boca.
Al retirar una pipeta estril de su contenedor evite contaminar la punta con las superficies
exteriores del envase.
No flamear pipetas estriles.
Introducir la pipeta no ms de 2,5 cm. dentro del homogeneizado de la muestra o dilucin.
Extraer un volumen ligeramente mayor a la alcuota deseada. Retirar la pipeta por sobre el
nivel del lquido y enrasar tocando con la punta de sta la pared interior del tubo o frasco
de dilucin.
Al inocular las diluciones, mantener la pipeta en un ngulo de 45 , y con la punta de sta

tocar el fondo de la placa Petri o la pared interior del envase de dilucin.
Levantar la tapa de la placa Petri lo necesario para introducir la pipeta. El tiempo que debe
transcurrir para que la pipeta entregue el volumen de 1 mL es de 2-4 segundos. Tocar un
punto seco de la placa manteniendo la pipeta en posicin vertical.
No expulsar la gota que queda en la punta de la pipeta.
Fundir la cantidad de medio de cultivo necesario para ser usada en un perodo de 3 horas y
mantenerlo en bao de agua a 47 C 2C.
Evitar exposiciones prolongadas del medio a altas temperaturas.

Fecha emisin:
Agosto de 2002
Fecha revisin:
11/02/2008
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ANEXO N 3
CARACTERSTICAS DEL AGAR STANDARD
Si el medio de cultivo es preparado por ingredientes stos deben tener las siguientes
especificaciones:
1-Casena pancretica: debe ser de calidad USP dada en la U.S. Pharmacopoeia, 1975 XIX p. 744.
2-Extracto de levadura: conforme a normas dadas por la U.S. Pharmacopoeia, 1975 XIX p. 758.
3-Glucosa: segn normas de U.S. Pharmacopoeia XIX p. 128. Debe ser anhidra.
4- Agar: conforme a las siguientes especificaciones.
a) Caractersticas generales:
El material seco debera ser granulado o en escamas, de color blanco cremoso. Una cantidad de 2 g
suspendida en 100 mL. de agua destilada fra. Debera disolverse completamente en 5 minutos
a 100 C. Despus de autoclavar esta solucin debe estar libre de materias extraas o
partculas en suspensin las cuales pueden interferir en la lectura. El pH de esta solucin al
2% no debe ser menos de 6,0.
b) Temperatura de gelificacin y fundido

La gelificacin de solucin acuosa caliente al 1.5% no debera ser sobre 43 C y no menor de 33
C. Luego de solidificado el medio no debera fundirse a menos de 70C.
c) Recuento de esporas viables

Este recuento no debera ser superior a 50.
A 2 g de agar agregar 100 mL. de caldo soya y autoclavar la mezcla a 121 C por 15 minutos.
Luego enfriar a 45 C y distribuir en 3 o 4 placas estriles. Incubar las placas por 48 horas a
35 C y contar las colonias. El total de colonias dividido por 2 no debera ser superior a 50.
CARACTERISTICAS FISICAS DEL AGAR STANDARD
1- Debera ser preparado con ingredientes que tengan las caractersticas anteriormente mencionadas.
2- El polvo debe ser beige claro o amarillo plido.
3- El contenido de humedad no debera ser menos del 5 %.
4- Debe ser soluble la solucin al 2,35 % al hervir 1 a 2 minutos. Esta solucin debe ser clara y libre
de precipitados.
5- Debe tener un pH final 7 0,2 a 25 C, despus de ser esterilizado a 121 por 15 minutos.
6- No debe presentar precipitado cuando es mantenido a 50-56 C, por 2 hrs. despus de ser
esterilizado.
Fecha emisin:
Agosto de 2002
Fecha revisin:
11/02/2008
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ANEXO N 4
RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESOFILOS
Tcnica Recuento en placa siembra en profundidad
1 mL
HOMOGENEIZADO:
450 mL de Solucin de
Butterfield 9 mL de
Solucin de Butterfield
50 g muestra
Dil 10 -1 10 -2 10 -3
SIEMBRA :
1 mL 1 mL 1 mL
1 mL 1 mL 1 mL
Agar Plate Count
INCUBACION: 35 C +-0,5C por 48 horas
LECTURA PLACAS : Leer placas Petri segn anexo N 5
CALCULO : Realizar los clculos segn anexo N 5
INFORME : Informar como N de UFC/g o mL de producto

Fecha emisin:
Agosto de 2002
PROCEDIMIENTO RECUENTO AEROBIOS EN Revisin: 9
PLACA METODO BAM ONLINE 2001
Fecha revisin:
11/02/2008
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ANEXO N 5
LECTURA, REGISTRO, CALCULO E INFORME DE RESULTADOS RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESOFILOS
Lic. T.M. Mariana Fernndez C. Instituto de Salud Pblica de Chile
1-Placas normales CASOS LECTURA Y REGISTRO CALCULO Y REGISTRO INFORME
25-250 colonias ufc /g o mL
a) Cuando los recuentos de los -Utilizar para el clculo los recuentos
duplicados de placas de slo obtenidos en placas normales.
una de las diluciones caen
dentro del rango 25-250
colonias Ej 2 10= 301 y 289 -Si el tercer dgito es 6 , 7, 8 , o 9 adicionar
10= 244 y 232 1 unidad al segundo dgito 2,4 x 10 ^5
Ej 1 = 238 x 1000 = 238.000
= 240.000
Ej 2 10= 301 y 289 -Si el tercer dgito es 1, 2 , 3 , o 4 slo

10= 203 y 199 considerar los dos primeros dgitos 2,0 x 10 ^5
Ej 2 = 201 x 1000 = 201.000
= 200.000
Ej 3 10= 301 y 289 - Si el tercer dgito es 5, agregar 1 unidad al

10= 210 y 220 segundo dgito si ste es impar y 2,2 x 10 ^5
mantener el segundo dgito si ste es par
Ej 3 = 215 x 1000 = 215.000
= 220.000
Fecha emisin:
Agosto de 2002
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Continuacin CASOS LECTURA Y REGISTRO CALCULO Y REGISTRO INFORME

ufc /g o mL
b) Si los recuentos de las placas de Ej 10= 232 Calcular segn la siguiente frmula:
dos diluciones consecutivas 244
caen dentro del rango 25 - 250
colonias 10= 33 N= ____________ C___________ 2,4 x 10^4
28
[ ( 1x n1 ) + ( 0,1 x n2 ) ] x d
N= 232 + 244 + 33 + 28
[ ( 1x 2 ) + ( 0,1 x 2 ) ] x 0,01
N= 24.409
c) Cuando los recuentos de las Ej 10= 238 =238 x 100 = 23.800 2,4 x 10^3
placas en duplicado caen tanto 263 =24.000
dentro como fuera del rango 25
- 250 colonias , usar slo 10= 15
aquellos recuentos que estn 17
dentro de este rango .
N =Nmero de colonias / g o mL
C = Suma de todas las colonias contadas en todas las placas
n1 =Nmero de placas contadas de la menor dilucin
n2 =Nmero de placas contadas de la dilucin consecutiva
d =dilucin de la cual fue obtenido el primer recuento
Fecha emisin:
Agosto de 2002
Fecha revisin:
11/02/2008
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2- Casos especiales CASOS LECTURA Y REGISTRO CALCULO Y REGISTRO INFORME

ufc / g o mL
a) Placas sobrepobladas 1- Mas de 250 colonias y disponga > 250 MNPC
( > 250 colonias ) de placas normales (RPES)
2- Si no dispone de placas
normales en las diluciones
sembradas y las placas
sembradas presentan mas de
250 colonias contar las mas
cercanas a 250 :
Contar 6 cuadrados 5+7+8+3+5+6++6+7+3+4+4+5=63 3,4 x 10^5
a) < 10 colonias / cm . consecutivos horizontal y 6 63 / 12 x 65*x 1000 = 341000 (RPES)
consecutivos vertical
Ej
10 horiz.5, 7, 8, 3, 5, 6
Vert. 6, 7, 3, 4, 4, 5
Contar las colonias en 77+46+38+67 = 288

b) > 10 colonias / cm cuatro de stos cuadrados 288 / 4 x 65*x 1000 = 3705000 3,7 x 10^6
Ej (RPES)
10 77 , 46 , 38 , 67
Registrar como >100/cm

Ej 10 MNPC > 100 x 65*x 1000 = > 6.500.000 >6,5 x 10^6
c) >100 colonias / cm . 10 >100 col / cm . (RPES)
* Basado en un rea de 65 cm ( 9 cm de dmetro.) MNPC = Muy numeroso para contar RPES = Recuento en placa estimado
Fecha emisin:
Agosto de 2002
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Continuacin. CASOS LECTURA Y REGISTRO CALCULO Y REGISTRO INFORME

ufc / g o mL
b) Todas las placas con Placas de las diluciones sembradas Ej 10 10 y 15 < 25 x el recproco del factor de dilucin < 2,5 x 10^3
menos de 25 colonias presentan menos de 25 colonias 10 3y5 menor (RPES)
cada una .
c) Placas sin desarrollo Ninguna de las placas presenta Ej 10 0y0 < 1,0 x por el recproco de dilucin menor < 2,5 x 10^3
de colonias desarrollo de colonias 10 0y0 (RPES)
d) Crecimiento invasivo Tipos de crecimiento invasivo : Slo contar s : Crecimiento

Invasivo
a) Colonias en cadenas - El rea invadida no
excede la mitad de la
b) Colonia entre el agar y fondo de placa.
la placa Petri
- Si las colonias estn bien
c) Colonia en una pelcula de agua distribuidas fuera del rea
en el costado o en la superficie invadida.
del agar
- Si no , registrar como
crecimiento invasivo (CI )
Fecha emisin:
Agosto de 2002
Fecha revisin:
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Continuacin CASOS LECTURA Y REGISTRO CALCULO Y REGISTRO INFORME

ufc / g o mL
e) Accidente de Accidente de laboratorio :

laboratorio o
inhibidores de - Presencia de contaminacin u Especificar Accidente de
crecimiento otra condicin insatisfactoria. laboratorio
bacteriano
- Presencia de inhibidores Cuando las placas no tienen No informar

bacterianos crecimiento o tienen hasta confirmar
proporcionalmente menos su presencia
crecimiento en las
diluciones mas bajas
REF: Standard Methods for the Examination of Dairy Products.15 ed. 1992. (Para clculo de resultados)
Fecha emisin:
Agosto de 2002
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ANEXO N 6
TABLA DE DILUCIONES SEGN ANLISIS REALIZADO EN EL LAB 346
Los anlisis que aparecen marcados en negrita, estn estipulados en el Reglamento sanitario de los Alimentos
Suubgrupo CLAVE RTO AEROBIOS RTO O NMP S. aureus RTO MOHOS Y

Reglamento MESOFILOS (RAM) LEVADURAS
Agar Plate Count. RTO : Agar Baird Parker Agar OGY
1 mL en profundidad en 0,3 - 0,3 y 0,4 mL 1 mL en profundidad en
placas en duplicado de cada sembrado en 3 placas en placas en duplicado de cada
superficie dilucin
dilucin
NMP serie 3-3-3-: Caldo
soya tripticasa con 10 %
NaCl 1% piruvato de
sodio.
1 mL en cada tubo de
cada dilucin
1.1 Leche cruda 2 placas dil 10-3 y 10-4 No No
1.2 Leche y crema pasteurizada 2 placas dil 10-2 y 10-3 Rto dil 10-1 No
1.3 Leche y crema en polvo 2 placas dil 10-2 y 10-3 NMP dil 10-1, 10-2 y 10- No
3
1.4 Leche y crema UHT (previa incubacin a 2 placas directo No
35 C por 10 das)
1.5. Leche evaporada y crema esterilizada No No No

Fecha emisin:
Agosto de 2002
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1.6 Leche condensada azucarada y manjar No No 2 placas dil 10-1 y 10-2
(dulce de leche) marcadas con rojo
1.7 Yogurt y productos lcteos fermentados o No No 2 placas dil 10-1 y 10-2

acidificados marcadas con rojo
1.8 Postres lcteos envasados no acidificados 2 placas dil 10-2 y 10-3 Rto dil 10-1 2 placas dil 10-1 y 10-2
marcadas con rojo
1.9 Quesillo No Rto dil 10-1 No
Queso fresco chacra y queso de suero
1.10 Queso madurado y rallado No Rto dil 10-1 No
1.11 Queso no madurado, queso suave y queso No Rto dil 10-1 No

crema
1.12 Queso procesado (fundido y en polvo) 2 placas dil 10-2 y 10-3 Rto dil 10-1 No
2.1 Helados base leche simples 2 placas dil 10-2 y 10-3 Rto dil 10-1 No
2.2 Helados base leche complejos con otros 2 placas dil 10-2 y 10-3 Rto dil 10-1 No
ingredientes
2.3 Helados de agua No No No
2.4 Mezclas para helados deshidratadas 2 placas dil 10-2 y 10-3 No No
3.1 Mantequilla y margarina 2 placas dil 10-2 y 10-3 Rto dil 10-1 No
Fecha emisin:
Agosto de 2002
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4.1 Caldos, sopas, cremas y mezclas No Rto dil 10-1 No
deshidratadas instantneas
4.2 Caldos, sopas, cremas y mezclas No Rto dil 10-1 No

deshidratadas que requieren coccin
4.3 Mezclas en seco de uso instantneo 2 placas dil 10-2 y 10-3 No No

(Refrescos, jaleas, gelatinas, budines,
cremas)
4.4 Mezclas en seco que requieren coccin 2 placas dil 10-2 y 10-3 No No
(budines, flanes)
5.1 Harinas y almidones No No 2 placas dil 10-1 y 10-2

marcadas con rojo
5.2 Pastas frescas 2 placas dil 10-2 y 10-3 Rto dil 10-1 No
5.3 Fideos y pastas rellenas desecadas No Rto dil 10-1 2 placas dil 10-1 y 10-2
marcadas con rojo
5.4 Cereales para desayuno 2 placas dil 10-1 y 10-2 No No
6.1 Azcar 2 placas dil 10-1 y 10-2 No No
6.2 Miel No No No
7.1 Productos de cacao y chocolate No No No

Fecha emisin:
Agosto de 2002
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7.2 Confites de azcar y frutos secos No No 2 placas dil 10-1 y 10-2
marcadas con rojo
8.1 Pan y masas horneadas sin relleno No No 2 placas dil 10-1 y 10-2
marcadas con rojo
8.2 Masas horneadas con relleno y/o cobertura 2 placas dil 10-2 y 10-3 Rto dil 10-1 No
8.3 Productos farinceos para cctel (snacks) No No 2 placas dil 10-1 y 10-2
marcadas con rojo
9.1 Leches en polvo , frmulas para lactantes, 2 placas dil 10-1 y 10-2 NMP dil 10-1, 10-2 y 10- No
productos en base a cereales y 3
preparaciones infantiles
9.2 Alimentos y frmulas de uso infantil No No No

esterilizadas
9.3 Preparaciones infantiles listas para consumo 2 placas dil 10-1 y 10-2 NMP No
que requieren calentamiento Lquidas: Directo, 10-1 y
10-2
Slidas: dil 10-1, 10-2 y
10-3
9.4 Formulas lcteas con cereales 2 placas dil 10-2 y 10-3 NMP No
Lquidas: Directo, 10-1 y
10-2
10.1 Carne de res cruda 2 placas dil 10-4 y 10-5 No No
Fecha emisin:
Agosto de 2002
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10.2 Carne de ave cruda 2 placas dil 10-4 y 10-5 No No
10.3 Cecinas cocidas 2 placas dil 10-2 y 10-3 Rto dil 10-1 No
10.4 Cecinas crudas frescas y hamburguesas 2 placas dil 10-4 y 10-5 Rto dil 10-1 No
10.5 Cecinas crudas maduradas No Rto dil 10-1 No
10.6 Cecinas crudas acidificadas 2 placas dil 10-3 y 10-4 Rto dil 10-1 No
11.1 Moluscos bivalvos frescos 2 placas dil 10-3 y 10-4 No No
11.2 Pescados y mariscos crudos congelados 2 placas dil 10-3 y 10-4 NMP dil 10-1, 10-2 y 10- No
3
11.3 Pescados y mariscos precocidos o cocidos 2 placas dil 10-3 y 10-4 NMP dil 10-1, 10-2 y 10- No
congelados 3
11.4 Pescados y mariscos ahumados 2 placas dil 10-3 y 10-4 NMP dil 10-1, 10-2 y 10- No
3
12.1 Huevo pasteurizado, lquido, congelado, 2 placas dil 10-2 y 10-3 No No
deshidratado
12.2 Huevo fresco 2 placas dil 10-2 y 10-3 No No
13.1 Mayonesa y otras salsas en base a huevo 2 placas dil 10-2 y 10-3 Rto dil 10-1 No
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Agosto de 2002
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13.2 Ketchup, salsa y condimento de mostaza, No No 2 placas dil 10-1 y 10-2
salsa de tomate pasteurizada y/o preservada, marcadas con rojo
salsa de aj y aderezos
13.3 Especias y condimentos 2 placas dil 10-3 y 10-4 No 2 placas dil 10-1 y 10-2
marcadas con rojo
14.1 Frutas y verduras frescas No No No
14.2 Frutas y verduras congeladas 2 placas dil 10-2 y 10-3 No No
14.3 Frutas y verduras desecadas o deshidratadas No No 2 placas dil 10-1 y 10-2

marcadas con rojo
14.4 Frutas y verduras en vinagre, aceite, No No 2 placas dil 10-1 y 10-2

salmuera o alcohol, productos fermentados marcadas con rojo
14.5 Mermeladas, jaleas, crema de castaas, No No 2 placas dil 10-1 y 10-2

fruta confitada, preparados de frutas y marcadas con rojo
verduras (incluida la pulpa)
15.1 Comidas y platos preparados listos para 2 placas dil 10-2 y 10-3 Rto dil 10-1 No
consumo
15.2 Comidas y platos preparados que No Rto dil 10-1 y 10-2 No

necesariamente requieren coccin
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Agosto de 2002
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11/02/2008
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16.1 Bebidas analcohlicas carbonatadas 2 placas directo dil 10-1 2 placas dil 10-1 y 10-2
marcadas con rojo
16.2 Bebidas analcohlicas no carbonatadas * 2 placas dil 10-1 y 10-2 No No

(zumos y nctares pasteurizados y
productos concentrados en su envase
original)
16.3 Agua potable, aguas minerales y hielo 2 placas directo y dil 10-1 Rto directo y dil 10-1 No
16.4 Zumos, nectares y bebidas a base de frutas * 2 placas dil 10-2 y 10-3 ( No * 2 placas dil 10-1 y 10-2
y verduras no pasteurizados marcadas con rojo
17.1 Caf y sucedneo de caf No No No
17.2 T y hierbas para infusiones 2 placas dil 10-1, 10-2 y 10-3 No No

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Agosto de 2002
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OTROS TIPOS DE MUESTRAS, NO ESTIPULADOS EN EL REGLAMENTO SANITARIO

CLAVE RTO AEROBIOS MESOFILOS S. AUREUS RTO MOHOS Y LEVADURAS
(RAM)
Agar Plate Count RTO : Agar Baird Parker Agar OGY
1 mL en profundidad en placas en 0,3 - 0,3 y 0,4 mL sembrado en 3 placas 1 mL en profundidad en placas en
duplicado de cada dilucin en superficie duplicado de cada dilucin
NMP serie 3-3-3-:Caldo soya tripticasa

con 10 % NaCl 1% piruvato de sodio
1 mL en cada tubo de cada dilucin
Leche materna 2 placas dil 10-2 y 10-3 Rto directo No
Agua de dilisis 2 placas directo, dil 10-1 y 10-3 Rto directo 2 placas directo, dil 10-1 y 10-3
marcadas con azul e incubadas a 25 C marcadas con rojo
2 placas directo, dil 10-1 y 10-3

marcadas con negro e incubadas a 35
C
Aguas contaminadas 2 placas directo, dil 10-1 y 10-3 Rto directo No
Intoxicaciones Segn tipo de muestra Rto 2 placas dil 10-1 y 10-2

-1,
dil 10 dil 10 -3 y dil 10-5 marcadas con rojo
* En las muestras que han sido tamponadas con buffer pH 7, para realizar la dilucin 10-1 es necesario tomar 2 mL de muestra diluida 1:2 y agregar a un tubo
con 8 mL de agua pertonada 0,1

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2. CAMPO DE APLICACIN Y ALCANCE

6. MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS

6.2 MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS

7.3.1 Recibir en el Laboratorio de Recuentos, las muestras procesadas en el Laboratorio de

7.4 LECTURA Y RECUENTO DE COLONIAS

7.4.1.2 Si no es posible leerlas prontamente, guardarlas a 4C por no ms de 24 horas, pero

7.4.2 RECUENTO DE COLONIAS Y REGISTRO (Anexo N 5 Casos, lectura, registro

7.4.2.1 Placas normales (25 - 250 colonias):

7.4.2.2 Casos especiales

7.4.2.2.1 Placas sobrepobladas (mas de 250 colonias):

7.4.2.2.2 Placas con menos de 25 colonias (< 25 colonias)

7.4.2.2.3 Placas sin desarrollo de colonias

7.4.2.2.4 Crecimiento invasivo

7.4.2.2.5 Accidente de laboratorio o inhibidores de crecimiento bacteriano.

7.5 EXPRESION DE RESULTADOS

7.5.1 Clculo y registro de resultados ( Ver Anexo N 5)

7.5.2 Placas normales

7.5.3 Todas las placas con menos de 25 colonias.

7.5.4 Todas las placas con mas de 250 colonias

* basado en un rea de placa de 65 cm ( 9 cm )

7.6 INFORME DE RESULTADOS (Anexo N 5)

7.6.1 Informar el recuento de aerobios mesfilos (RAM) en unidades formadoras de colonias

7.7 REPRODUCIBILIDAD Y ERROR PERSONAL

Identificacin Almacenamiento Proteccin Recuperacin Tiempo retencin

Identificacin Almacenamiento Proteccin Recuperacin Tiempo retencin

Revisin N Pg. Motivo del cambio Fecha

Se corrige PRT-702.02-023 por PRT -712.02-

Se cambia el nmero de revisin 8 por 9 y el

Revisin N Pg. Motivo del cambio Fecha

Revisin N Pg. Motivo del cambio Fecha

Se cambia 9 mL se agua peptonada 0,1% por

En el punto c), en la columna CALCULO Y

10.1 Anexo N 1 Requisitos Recuento de microorganismos aerobios mesfilos viables.

REQUISITOS "RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESFILOS

La temperatura dentro de la incubadora se determina cuando est

Las placas deben llegar a la temperatura de incubacin dentro de 2

El agar de las placas incubadas no debe perder mas del 15 % del

REQUISITOS "RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESFILOS

HOMOGENIZADOR Warring blender con vaso de vidrio o de acero inoxidable.

STOMACHER: De capacidad 400 g.

CONTENEDORES DE De acero inoxidable o aluminio, con tapa.

REQUISITOS "RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESFILOS

CONTENEDOR DE De acero inoxidable.

REFRIGERADOR : Debe mantener las muestras a una temperatura de 0 -4.4 C hasta

ESPACIO DE Libre de polvo e insectos y adecuados para guardar material.

TERMOMETROS Los termmetros deben tener un rango de -1,1 a 55 C. La

BAO DE AGUA De dimensiones adecuadas, con control termosttico para

Al realizar las siembras usar propipeta. No pipetear con la boca.

No flamear pipetas estriles.

Introducir la pipeta no ms de 2,5 cm. dentro del homogeneizado de la muestra o dilucin.

Al inocular las diluciones, mantener la pipeta en un ngulo de 45 , y con la punta de sta

No expulsar la gota que queda en la punta de la pipeta.

Evitar exposiciones prolongadas del medio a altas temperaturas.

b) Temperatura de gelificacin y fundido

c) Recuento de esporas viables

CARACTERISTICAS FISICAS DEL AGAR STANDARD

Agar Plate Count

INCUBACION: 35 C +-0,5C por 48 horas

LECTURA PLACAS : Leer placas Petri segn anexo N 5

CALCULO : Realizar los clculos segn anexo N 5

INFORME : Informar como N de UFC/g o mL de producto

Ej 2 10= 301 y 289 -Si el tercer dgito es 1, 2 , 3 , o 4 slo