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Mtodo quantitativo para a montagem do caritipo de

Tetragonisca fiebrigi
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Adelir Lazaroto , Wagner M. S. Sampaio Alexandro Cezar Faleiro e Anderson Fernandes
1
Universidade do Estado de Mato Grosso, Departamento de Cincias Biolgicas, CPEDA-Lab de
2
Biologia Geral, Tangar da Serra, MT. Universidade Federal de Viosa, Ps-Graduao em Biologia
Animal, Viosa, MG.

Resumo: A metodologia proposta neste trabalho tem por finalidade aprimorar o


pareamento entre os cromossomos homlogos da espcie de abelha sem-ferro,
Tetragonisca fiebrigi, por meio da utilizao do programa de anlise de imagens
Image-Pro Plus, obtendo medidas refinadas dos comprimentos totais dos
cromossomos e de seus braos eucromticos. Este procedimento possibilitou um
pareamento mais refinado e harmonioso entre os homlogos.

Introduo: A Citogentica uma cincia que estuda a estrutura cromossmica


relacionada com a sua morfologia, organizao, funo, replicao, evoluo e
variao (GUERRA, 1988). uma ferramenta utilizada em estudos evolutivos, sobre
variabilidade gentica (SUMNER, 2003) e para auxiliar na taxonomia das espcies
(MARIANO et al., 2001).
Para assegurar confiabilidade aos dados citogenticos, importante o uso de
tcnicas que assegurem boa caracterizao dos caritipos como as tcnicas de
colorao e bandamentos, as quais, no s possibilitam a obteno do nmero
cromossmico e um pareamento preciso dos homlogos, como tambm a deteco
de pequenas variaes estruturais (GUERRA, 1988).
H 10 anos considerava-se que as abelhas sem-ferro do gnero
Tetragonisca estavam representadas, no Brasil, por duas espcies: Tetragonisca
weyrauchi Schwarz, (1943) e Tetragonisca angustula Latreille, (1811) sendo que a
ltima se subdividia em duas subespcies: Tetragonisca angustula fiebrigi e
Tetragonisca angustula angustula (SILVEIRA et al., 2002) (Figura 1). Todavia,
estudos recentes apontam para a elevao taxomnia das duas sub-espcies para
espcies (Tetragonisca fiebrigi e Tetragonisca angustula), indicando um isolamento
reprodutivo entre elas (OLIVEIRA et al., 2004; BARTH, 2006). Um estudo preliminar
realizado por Barth (2006), inferiu a existncia de diferenas citogenticas entre as
espcies T. angustula e T. fiebrigi. Neste estudo foi verificada a presena de um
cromossomo B apenas para colnias de T. fiebrigi.
Este trabalho, apesar de preliminar, tem como objetivo desenvolver uma
metodologia de cunho quantitativo para auxiliar o pareamento entre os homlogos
da espcie Tetragonisca fiebrig, tendo em vista que um pareamento mais refinado
possibilitar uma melhor comparao entre esta espcie e a T. angustula, bem como
auxiliar na elaborao de hipteses sobre a origem do cromossomo B.

Materiais e Mtodos: Os cromossomos foram obtidos a partir da retirada do gnglio


cerebral de larvas ps-defecantes de T. fiebrigi, seguindo metodologia proposta por
Imai et al. (1988). As larvas foram provenientes da colnia MZT91, localizada na
cidade de Tangar da Serra (14 04' 38'' S e 57 03' 45'' W). Aps terem sido
confeccionadas, as lminas foram submetidas colorao com Giemsa (2 ml de
Giemsa e 15 ml de tampo Srensen) por 20 minutos.
Uma metfase foi capturada por meio de uma cmera CCD (OPTRONICS,
modelo DEI-470) conectada a um microscpio Olympus BX60 com objetiva de
imerso com aumento de 100x. As imagens foram processadas e analisadas
utilizando-se o programa de anlise de imagem Image-Pro Plus, verso 3.1 (Media
Cybernetics, 1998). Os cromossomos foram classificados (Figura 2) e os caritipos
foram montados seguindo disposio proposta por Imai (1991), a qual leva em
considerao a distribuio da heterocromatina e ordenao dos cromossomos do
maior brao eucromtico para o menor.

Figura2 - Nomenclatura cromossmica


Figura 1 - A) Subespcie T. angustula, seta indicando o mesepisterno
propostas por Imai (1991).
de colorao preta e B) subespcie T. fiebrigi seta indicando o
mesepisterno de colorao amarela. Adaptado de BARTH, 2006.

Resultados e Discusso: O primeiro caritipo foi obtido com o auxlio do programa


de anlise de imagem Image-Pro Plus e apresentou os homlogos pareados apenas
pelo critrio de tamanho total (Figura 3).

Figura 3 Cromossomos organizados aos pares levando-se em conta apenas seus comprimentos
totais.

Observou-se que o pareamento sugerido pelo programa, levando-se em conta


apenas tamanho total do cromossomo apresentou alguns problemas. O
cromossomo nmero 5 classificado como cromossomo B e no apresenta
homlogo nesta metfase, logo seu pareamento como o cromossomo 6
inapropriado. Por conseqncia no foi possvel encontrar homlogo para o
cromossomo 35. Outro problema foi observado no pareamento dos cromossomos 19
e 20 que apresentou, desta forma um grande heteromorfismo na regio de
eucromatina. O mesmo problema foi encontrado no pareamento dos cromossomos
27 e 28.
A fim de promover um pareamento entre os homlogos mais seguro, o
procedimento seguinte foi obter duas medidas de cada cromossomo: o comprimento
do brao eucromtico e o comprimento total (Figura 4). Estes valores foram
transformados em dois grficos (Grfico 1A e B).
Figura 4 Obteno dos comprimentos totais e dos braos eucromticos de todos os cromossomos.

A)

B)

Grfico 1- A) Comprimento do brao eucromtico de cada cromossomo. B) Comprimento total de


cada cromossomo.

Utilizando os valores obtidos nos grficos, em especial os comprimentos dos


braos eucromticos, foi possvel montar outro caritipo (Figura 5) que apresentou
pareamentos entre homlogos mais harmnicos que o anterior (Figura 4). Optou-se
por manter a numerao original dos cromossomos para proporcionar uma melhor
comparao entre os dois caritipos.
Figura 5 Caritipo montado utilizando os parmetros fornecidos pelas medidas dos comprimentos
dos braos eucromticos e medidas totais dos cromossomos.

Os problemas apresentados pelo primeiro pareamento foram solucionados,


bem como, foi possvel constatar um heteromorfismo de tamanho entre os braos
heterocromticos dos cromossomos 14 e 16, uma caracterstica que ainda no havia
sido descrita na literatura.
necessrio ressaltar que alguns ajustes ainda devem ser feitos a esta
metodologia, como, por exemplo, estabelecimento de critrios para a escolha das
metfases que sero trabalhadas. todavia percebemos nela uma poderosa
ferramenta para promover um pareamento mais preciso entre homlogos e para o
diagnstico de heteromorfismos.

Apoio Financeiro: Fundao de Amparo Pesquisa de Mato Grosso (FAPEMAT).

Referncias Bibliogrficas
Barth, A. 2006. Cromossomo B em Tetragonisca angustula LATREILLE, 1811
(HYMENOPTERA, APIDAE, MELIPONINA): Auxlio Taxonomia do Gnero.
Monografia apresentada ao departamento de Cincias Biolgicas da Universidade
do Estado de Mato Grosso UNEMAT.
GUERRA, M. S. 1988. Introduo a citogentica. Pernambuco: Guanabara
Koogan, 139 p.
IMAI, H.T. Mutability of constitutive heterochromatin (C-bands) during
eukaryotic chromosomal evolution and their cytological meaning. Japanese Journal
of genetics, v. 66, p 635-661, 1991.
IMAI, H.T.; TAYLOR, R.W.; CROZIER, R.H. 1988. Modes of spontaneous
chromosomal mutation and karyotipe evolution in ants with reference to the minimun
interacion hypothesis. Japanese Journal of Genetics, v. 63, p. 159 185,.
MARIANO, C.F.S. et al. 2001. Estudos cariotpicos de algumas espcies
neotropicais de Camponotus Mayr (Hymenoptera, Formicidae). Revista Brasileira de
Entomologia, v.45, p. 267-274.
SILVEIRA F.A; MELO, G.A.R; ALMEIDA, E.A.B. 2002.Abelhas brasileiras
sistemtica e identificao. 1 ed. Belo Horizonte: IDM Composio e Arte, 253 p.
SUMNER, A. T. 1990. Cromossome banding. London: Unwin Hyman, 434 p.

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