Laboratorio de la columna de winogradsky.

Guzmn, Andrs; Rincn, Helen; Cruz, Guadalupe; Tarazona, Carlos

Fundacin Universitaria Internacional Del Trpico Americano UNITRPICO

RESUMEN

La columna de Winogradsky es un micro hbitat acutico el cual cumple la funcin de recrear lo que los microorganismos
requieren para desarrollarse y poder vivir, crea tres capas que regulan la presencia o ausencia de oxigeno que es un factor
determinante para la presencia de microorganismos de cada tipo. Muestra cmo diferentes microorganismos desarrollan sus
ciclos, y la interdependencia que llega a existir entre ellos, es un sistema completo y autnomo de reciclamiento, mantenido
slo por la energa dela luz.

En el presente trabajo, el objetivo fue evaluar las relaciones de diferentes tipos de microorganismos en comunidades mixtas
por medio de dos columnas en diferentes ambientes, realizando seguimiento durante tres semanas ante los cambios
presenciados. Formamos dos columnas de Winogradsky con los mismos materiales, una se almacen en un sitio ausente de
luz y la segunda estuvo 24 horas en contacto con una fuente lumnica, a lo largo del tiempo transcurrido pudimos observar
cambios en cuanto a color, consistencia y formacin de capas creadas por los mismos microorganismos.

PALABRAS CLAVE: Aerobia, Anaerobia, Columna de Winogradsky, Ecosistema, Micro hbitat, Microorganismos.

ABSTRACT

Winogradsky's column is an aquatic habitat which fulfills the function to recreate what the microorganisms need to develop
and to be able to live, believe three caps that regulate the presence or absence of oxygen that is a determinant factor for the
presence of microorganisms of every type. It shows how different microorganisms develop his cycles, and the interdependence
that manages to exist between them, is a complete and autonomous system of recycling, supported only by the lights energy.

In the present study, the aim was to evaluate and to identify the relations of different types of microorganisms in mixed
communities by means of two columns in different environments, realizing follow-up for three weeks before the attended
changes. We form two Winogradsky's columns with the same materials and one was stored in a site where the light was not
coming to him and other one was 24 hours in touch with a light source, throughout the pass of time we could observe changes
as for color, consistency and formation of caps created by the same microorganisms.

KEY WORDS: Aerobic, Anaerobic, Column of Winogradsky, Ecosystem, Microhabitat, Microorganisms.

INTRODUCCIN
La columna de Winogradsky es un sistema acutico en el que se ayuda a los
microorganismos a establecerse en regiones diferenciadas segn su metabolismo,
y constituye un modelo de ecosistema, similar a los tapetes microbianos que se
hallan en aguas dulces o saladas, donde proliferan microorganismos del medio
acutico y delos sedimentos.
Esta tcnica fue desarrollada inicialmente por el microbilogo ruso Serge
Winogradsky (1856-1953), quien us la columna para estudiar los microorganismos
del suelo. La columna de Winogradsky es un sistema que permite observar en el
laboratorio el proceso evolutivo de los microorganismos, es decir, el proceso de
adaptacin a los diferentes ambientes empleando diferentes estrategias para la
obtencin de energa .Una vez que se prepare la columna y se exponga a la luz
solar, se desarrollar una sucesin de comunidades bacterianas interrelacionadas
metablicamente, de un modo similar a lo que ocurre en la naturaleza, que se
podrn observar fcilmente por su distinta coloracin. Adems, la columna es un
sistema anxico en miniatura que puede usarse como suministro a largo plazo de
bacterias para cultivos de enriquecimiento.
1. ZONAS DE LA COLUMNA DE WINOGRADSKY:
Zona aerbica
- Esta es la parte de la columna ms rica en oxgeno y ms pobre en azufre.
El agua de la parte superior de la columna contiene abundantes poblaciones de
microorganismos aerobios, que aparecen normalmente en hbitats acuticos ricos
en materia orgnica (estanques poco profundos, arroyos, etc.). Suelen ser
microorganismos flagelados, lo que les permite moverse y establecerse en nuevas
reas, as como microorganismos fotosintticos: algas (diatomeas) y cianobacterias
filamentosas. El oxgeno que producen estos productores primarios difunde desde
la superficie, creando condiciones similares a las que existen en un lago con
sedimentos ricos en nutrientes.
Zona microaerfila
- Es la zona en la que solapan ambos gradientes, el de oxgeno y el de sulfuro de
hidrgeno. Aparecen bacterias oxidadoras del azufre como Beggiatoa, Thiothrix o
Thiobacillus, que usan como fuente de carbono la materia orgnica, y oxidan el H2S
que llega por difusin desde las capas inferiores a azufre elemental.
Zona anaerbica
Esta zona contiene H2S (procedente del fondo), en la zona anaerbica superior
predominan las bacterias fotosintticas anaerobias, y en la columna se observan
una serie de bandas de colores rojo y verde.
- Bacterias rojas no del azufre: Rhodospirillum, Rhodomicrobium o
Rhodopseudomonas, son bacterias anaerobias fotoorgantrofas, que slo pueden
realizar la fotosntesis en presencia de una fuente de carbono orgnico. Forman una
capa de color rojo-anaranjado. Las bacterias verdes no del azufre son termfilas y,
por lo tanto, no crecen en la columna a temperatura ambiente.
- Bacterias rojas del azufre (Chromatium, Thiospirillum, Thiocapsa, forman una capa
de color rojo-prpura) y bacterias verdes del azufre (Chlorobium, Pelodyctium).
Estas bacterias son fotolittrofas y realizan una fotosntesis anoxignica.
Estos microorganismos aparecen como zonas decrecimiento en el lodo de la
columna, pero tambin pueden desarrollarse en el agua si los fottrofos oxignicos
son escasos.
En la zona anaerobia ms profunda, de color negro intenso, aparecen
microorganismos capaces de realizar respiracin anaerbica y fermentacin.
- Bacterias reductoras del sulfato (BRS): Desulfovibrio, Desulfobacter ,
Desulfotomaculum Desulfomonas. Usan el sulfato, u otras formas parcialmente
oxidadas de azufre como el tiosulfato, y generan grandes cantidades de H2S en el
proceso.
- Bacterias fermentadoras: utilizan la celulosa del papel aportado como fuente
primaria para su metabolismo, aparecen las bacterias del gnero Clostridium. Son
anaerobias estrictas, y no empiezan a crecer hasta que el oxgeno desaparece del
sedimento. Estas bacterias degradan la celulosa hasta residuos de glucosa y, a
continuacin, fermentan la glucosa para obtener la energa que necesitan,
produciendo una serie de compuestos orgnicos simples (etanol, cido actico,
cido lctico, cido succnico, etc.) como productos finales de esa fermentacin.
Estos compuestos orgnicos sern, a su vez, respirados por las bacterias
reductoras del sulfato. Cuando la celulosa se agote, usarn la materia orgnica
producida por el resto de bacterias.
Objetivo general:

Establecer un microhbitat con sedimentos de ambientes naturales,

mediante la construccin de una Columna de Winogradsky.
Objetivo especfico

Reconocer los diferentes estratos de la Columna de Winogradsky, en base

a su micro biota colonizadora y sus interacciones.

Materiales y mtodos:

En la prctica de laboratorio para la elaboracin de la columna de Winogradsky se

utilizaron los siguientes materiales:

- 2 envases transparentes de botellas 3 L

- 1 embudo
- 1 plato desechable 1 vaso desechable
- Sulfato de calcio
- Carbonato de calcio
- Arena
- Agua de charco
- Papel peridico
- Restos de hojas
- aserrn
- Esptula
- Balanza

Se realiz el experimento en dos columnas, una de las cuales sirvi como testigo.
As mismo tomamos una esptula para tomar una muestra de sedimento y pesamos
300 g, despus se cortaron trozos pequeos de papel peridico. Tambin
mezclamos la muestra de sedimento con 1 g de sulfato de calcio y 1g de carbonato
de calcio, restos de hojas, plantas, ramas, aserrn. Agregamos la mezcla al fondo
de la botella, as de este modo agregamos arena a un volumen de partes y
llenamos la botella con la muestra de agua.
A las tapas se les abri un hueco en la mitad de las tapas para dejar una fuente de
oxgeno entrante en ambas botellas, se incubo el testigo bajo condiciones de
oscuridad, la otra botella fue expuesta en presencia de luz continuamente en una
ventana; Luego realizamos observaciones de las columnas cada semana tomando
nota de los datos y cambios observados en las dos columnas.

Resultados:

Elaboracin de las columnas:

CUADRO 1. OBSERVACIONES FISICAS DE LAS COLUMNAS

Columna con fuente lumnica

Semana Zona de la Caracteristicas Observadas: Sedimentacion, Color,

Columna Presencia de bandas

Agua color ligeramente oscuro

1 Consistencia algo turbia

En la superficie observamos una capa de

sedimentos

Fase aerobia: agua con aspecto claro

2
Consistencia turbia

delgada capa verde en la fase micro aerobia.

 Agua de color naranja
3
Capa sedimentaria con bacterias rojas

Capa de sustrato con produccin de CO2

Columna sin fuente lumnica

Semana Zona de la Caracteristicas Observadas: Sedimentacion, Color,

Columna Presencia de bandas

Fase aerobia: agua con aspecto claro

1 delgada capa verde en la superficie. (algas)

Sin presencia de sedimentos suspendidos

Agua de color oscuro por exceso de azufre

2
desaparicin de la capa verde

Consistencia turbia y con sedimentos suspendidos

Fase aerobia, agua turbia por exceso de azufre.

3
Sin presencia de capas o bandas

desechos de procesos de oxido reduccin

OBSERVACINES MICROOSCOPICAS

En la columna sin fuente lumnica no observamos presencia de microorganismos.

 organismos en la columna con fuente lumnica capa aerobia

- Protozoos
- Diatomeas
- Algas

DIATOMEA

ALGAS
Desmidiales Melosira

Thalassiosirales Desmidiales

Tomando como referencia la informacin de otro estudio de la columna de

Winogradsky realizado por Johana Martnez Torres (Torres, 2013), a continuacin,
estarn expuestos los resultados que se deben esperar, microorganismos que
deben estar presentes en cada capa de la columna y la explicacin de cada
proceso.

Zona anaerbica
En el fondo de la columna, dependiendo del tipo de barro utilizado, puede
aparecer una capa formada por bacterias prpura del azufre portadoras de
vesculas de gas.
Al cabo de unas semanas, y utilizando la carga de celulosa aportada por los restos
incorporados en el sedimento como fuente primaria para su metabolismo,
aparecen las bacterias del gnero Clostridium.
Las bacterias reductoras del azufre, pueden utilizar estos subproductos de la
fermentacin para su respiracin anaerobia, usando sulfato, u otras formas
parcialmente oxidadas de azufre como el tiosulfato, generando grandes
cantidades de sulfuro de hidrgeno en el proceso.
Este sulfuro de hidrgeno reaccionar con cualquier compuesto frrico presente
en el sedimento, produciendo sulfuro ferroso, que da color negro. Es por esto que
los sedimentos acuticos son frecuentemente negros.
Amoebobacter:

- Desolfuvibrio
- Clostridium

No todo el sulfuro de hidrgeno es utilizado, sino que ciertas cantidades difunden

hacia arriba a lo largo de la columna de agua y son utilizados por otros organismos
que crecen en las zonas superiores.
Este crecimiento se visualiza bajo la forma de una banda brillantemente coloreada
por encima del sedimento, bacterias verdes del azufre donde procesan los sulfatos
a azufre y aparecen en una franja verdosa.

- Chlorobium
- Prosthecochloris aestaurii
- Pelodyction clatharatiforme

Un poco ms arriba, algo ms alejadas por tanto de las altas concentraciones de

sulfuro de hidrgeno se desarrolla una zona de bacterias prpuras del azufre,
como, caracterizada por su color rojo-prpura.

- Chromatium
- Thiospirillum jenense
- Thiopedia rosea

Un poco por encima, nos encontramos una franja de bacterias prpuras no

del azufre, que adquiere un color rojo-anaranjado. Su mayor o menor
abundancia depender de la cantidad de sulfuro de hidrgeno que se haya
 producido y la cantidad no utilizada por otros microorganismos

- Rhodospirillium
- Rhodopseudomonas

Zona aerbica
La parte superior de la columna de agua puede contener abundantes poblaciones
de bacterias de diferentes tipos. Son organismos aerobios que se encuentran
habitualmente en los hbitats acuticos ricos en materia orgnica

Suelen ser flagelados, lo que les permite moverse y establecerse en nuevas

reas. Puede desarrollarse tambin microorganismos fototrficos variados
procedentes directamente del agua o del barro utilizado inicialmente

Esta es la parte de la columna ms rica en oxgeno y ms pobre en azufre.

(Torres, 2013)

CIANOBACTERIAS
DIATOMEAS
PROTOZOOS

CUESTIONARIO

1. Investigue las principales reacciones de oxidacin y reduccin que se

presentan en las zonas de la columna indicando la clase de microorganismos
zona aerbica: esta es la parte de la columna ms rica en oxgeno y ms pobre en
azufre. El agua de la parte superior de la columna contiene abundantes
poblaciones de microorganismos aerobios, que aparecen normalmente en hbitats
acuticos ricos en materia orgnica (estanques poco profundos, arroyos, etc.).
Suelen ser microorganismos flagelados, lo que les permite moverse y establecerse
en nuevas reas, as como microorganismos fotosintticos: algas (diatomeas) y
cianobacterias filamentosas. El oxgeno que producen estos productores primarios
difunde desde la superficie, creando condiciones similares a las que existen en un
lago con sedimentos ricos en nutrientes.

Zona microaerfila: es la zona en la que solapan ambos gradientes, el de oxgeno

y el de sulfuro de hidrgeno. Aparecen bacterias oxidadoras del azufre como
Beggiotoa, Thiothrix oThiobacillus, que usan como fuente de carbono la materia
orgnica, y oxidan el H2S que llega por difusin desde las capas inferiores a
azufre elemental. La reaccin qumica que se lleva a cabo es la siguiente
(Bunsen): O2+ H2S H20 + S0. Son, por lo tanto, microorganismos mixtrofos.
Estos gneros acumulan grnulos de azufre en sus citoplasmas por oxidacin del
H2S. Si se deja evolucionar el sistema, cuando la concentracin de H2S es muy
baja, los grnulos de azufre elemental intracitoplasmtico presentes en estas
bacterias empiezan a desaparecer por oxidacin total a sulfato (H2S S0
SO42).
Zona anaerbica: esta zona contiene H2S (procedente del fondo), en la zona
anaerbica superior predominan las bacterias fotosintticas anaerobias, y en la
columna se observan una serie de bandas de colores rojo y verde:

- Bacterias rojas no del azufre: Rhodospirillum, Rhodomicrobiumo

Rhodopseudomonas, son bacterias anaerobias fotoorgantrofas, que slo pueden
realizar la fotosntesis en presencia de una fuente de carbono orgnico. Forman
una capa de color rojo anaranjado. Las bacterias verdes no del azufre son
termfilas y, por lo tanto, no crecen en la columna a temperatura ambiente.

- Bacterias rojas del azufre: (Chromatium, Rhodospirillum, Thiocapsa, forman

una capa de color rojo-prpura) y bacterias verdes del azufre (Chlorobium,
Pelodyctium). Estas bacterias son fotolittrofas y realizan una fotosntesis
anoxignica, no producen oxgeno ya que no utilizan H2O como elemento reductor
sino H2S, generando en este proceso sulfatos (SO42 ). La reaccin que tiene
lugar es la siguiente: 2 H2S + CO2 [CH2O] + H2O + 2 S0. Estos
microorganismos aparecen como zonas decrecimiento en el lodo de la columna,
pero tambin pueden desarrollarse en el agua si los fottrofos oxignicos son
escasos.

En la zona anaerobia ms profunda, de color negro intenso, aparecen

microorganismos capaces de realizar respiracin anaerbica y fermentacin.

- Bacterias reductoras del sulfato (BRS): Desulfovibrio, Desulfobacter,

Desulfotomaculum Desulfomonas. Usan el sulfato, u otras formas parcialmente
oxidadas de azufre como el tiosulfato, y generan grandes cantidades de H2S en el
proceso. La reaccin de reduccin bacteriana del sulfato es la siguiente: SO42 +
8 H+H2S + 2 H2O + 2 OH . Este H2S reaccionar con el hierro presente en el
sedimento, produciendo sulfuro de hierro (II), que precipita y da el color negro. Es
por esto que, en la naturaleza, los sedimentos acuticos son frecuentemente
negros. La reaccin sera la siguiente: SO42 H2S (sulfuro de hidrgeno) (in
sulfato) Fe2+SFe (Sulfuro de hierro) Precipitado negro

Sin embargo, no todo el H2S reacciona con el hierro (II), parte de ste difunde
hacia arriba a lo largo de la columna de sedimentos y es utilizado por las bacterias
verdes y rojas del azufre que crecen en las zonas superiores.

- Bacterias fermentadoras: utilizan la celulosa del papel aportado como

fuente primaria para su metabolismo, aparecen las bacterias del gnero
Clostridium. Son anaerobias estrictas, y no empiezan a crecer hasta que el
oxgeno desaparece del sedimento. Estas bacterias degradan la celulosa hasta
residuos de glucosa y, a continuacin, fermentan la glucosa para obtener la
energa que necesitan, produciendo una serie de compuestos orgnicos simples
(etanol, cido actico, cido lctico, cido succnico, etc.) como productos finales
de esa.

2. Porque se forman manchas negras en el fango?

Porque las bacterias reductoras de sulfato. Usan el sulfato, u otras formas
parcialmente oxidadas de azufre como el tiosulfato, y generan grandes cantidades
de H2S en el proceso. Este H2S reaccionar con el hierro presente en el
sedimento, produciendo sulfuro de hierro (II), que precipita y da el color negro. Es
por esto que, en la naturaleza, los sedimentos acuticos son frecuentemente
negros.

3. En que posicin se encuentran las bacterias verdes azufradas. Por que?

Las bacterias correspondientes a este esta caracterstica realizan fotosntesis

anoxignica.
Estas bacterias son Gram negativas y se encuentran en zonas anaerobias de los
lagos por tal motivo en la columna de winogradsky se encuentran el la zona
inferior por la mitad de la zona porque depende de la cantidad de H2S generada
por los microorganismos sulfato reductores la fotosintesis anoxigenica se da
globalmente por la siguiente reaccin
2H2S + CO2 [CH2O] + H2O + 2 S

4. Si el H2S de la columna no es completamente utilizado. Cual secuencia de

eventos se puede predecir?

El gradiente de sulfuro aumentara, inhibiendo el crecimiento de los

microorganismos que son sensibles a este gradiente, de igual manera esto puede
posibilitar el crecimiento de otro microorganismos que puedan desarrollarse dentro
de estas condiciones
5. Por qu se adiciona el sulfato de calcio a la muestra de sedimento?

Porque el Sulfato de Calcio acta como Fuente de calcio, azufre sulfato y tampn
respectivamente en el suelo, evitando la filtracin de burbujas de aire u oxgeno en
la capa anaerobia.

6. Cul es la funcin de los restos de hojas, plantas, ramas. etc. en la

columna?

La materia orgnica acta y cumple su papel como proveedores de una fuente de

carbono orgnico para los organismos que lo requieran ya sea para alguna
funcin, metabolismo o respiracin

7. Por qu razn la columna testigo se mantiene en la oscuridad durante el

transcurso del experimento?

Obviamente y como se mencion anteriormente los microorganismos tienes

necesidades diferentes para poder desarrollarse y el xito de la columna depende
de la fuente lumnica, por esto la segunda columna permanecer en un ambiente
sin contacto a la luz para poder ejercer y observar claramente la diferencia de
crecimiento y formacin de capas u otros fenmenos en cada columna, sta al no
tener contacto con la luz no podrn desarrollarse los mismos microorganismos que
en la otra columna s.

8. Qu tipo de interacciones simbiticas se presentan?

Inexistentes: (neutralismo o amensalismo)

Positivas: (comensalismo, sinergismos, mutualismo)

Negativas: (competencia, parasitismo, predacin, antagonismo

BIBLIOGRAFA

Dirzo, R., Almeida, A., Morales, L., & Quispe, C. (2010). Ecosistemas
Terrestres. Recuperado el 22 de Mayo de 2016, de Mono colorado / Mono
araa : http://www.inogo.info/ecoterr/especies-indicadores/mono-colorado
Lpez, J. P. (12 de Noviembre de 2007). google. Recuperado el 25 de
Mayo de 2016, de google:
http://rodin.uca.es/xmlui/bitstream/handle/10498/10325/Lopez_Perez_2008.
pdf?sequence=1

Torres, J. M. (03 de Noviembre de 2013). MICROORGANISMOS DE LA

COLUMNA DE WINOGRADSKY. Recuperado el 29 de Mayo de 2016, de
Prezi: https://prezi.com/-wcoxzq05jw5/microorganismos-de-la-columna-de-
winogradsky/