TEMA 3.

eN UN PROICESO DE MICROBIOLOGIA INDUTRIL TENEMOS 3 GRANDES FASES.

La primera fase se llama upstream ( antes), proeso de crecienmiento y procesado

downstream.

Upstream: que es lo que tenemos que hacer antes del proceso de crecimiento. Los
pasoso son los siguientes: lo primero que hay que hacer es buscar un
microorganismo que nos produzca el producto que queremos, lo aislamos. Y ahora
debemos mejorar el microorganismo ( medio de cultivo, condiciones fisiolgicas
de crecimiento) viendo que requerimientos nutricionales tiene y vamos a
optimizarlos segn las necesidades del organismo, oxigeno puesto que la mayora
sern aerobios, temperatura segn el tipo. Ahora el reactor que dispone de un eje
rotacional con unas aspas para mezclar su contenido. Este reactor tienen unos
determinados materiales, con lo cual hay que ver que tipo de reactor hay que
utilizar para nuestro microorganismo, es decir cuantas RPM le damos, de que
material estar hecho ( ejemplo vidrio para microorganismos que necesitan
luz).Tambin los materiales que componen el medio de cultivo los tenemos que
tratar, esterilizar para aadirlos al medio. Incluso el propio reactor puede usarse
como autoclave. Tambin hay que controlar diferentes parmetros del reactor,
como la temperatura, oxigenacin, evitar la produccin de espuma.

El crecimiento, donde tenemos que tener en cuenta el tipo de biorreactor a usar.

Tambin es importante la cintica del crecimiento y conocer los parmetros ( tasa
especifica de crecimiento, rendimiento)

Procesado dowstream, se aplican unas tcnicas para recuperar el producto que

necesitemos. Algunas de estas tcnicas son la cristalografa, centrifugacin. Otras
mas comunes son tcnicas de centrifugacin que depende del microorganismo y su
tamao. Tambin dependiendo de que es lo que queremos del microorganismo, las
tcnicas vana a variar. Por ejemplo si qeuremos algo que esta dentro se ha de
romper la membrana.

Proceso fermentativo: cinetica de crecimiento

No hay que predecir sin conocimeinto previo, sino hay que conocer los
parametroa, como la tasa de generacin Todo eso interesa por los costes.

Los tres tipos de cultivo microbiano atendiendo a su cintica que existen son:

Cultivo discontinuo o bach, que es el mas sencillio de conrtolar, de amplio uso

insustrial.

Cultivo continuo, que representa muy bien lo que ocurre en un medio natural.
Sistema cerrado: matraz de laboratorio, se abre para perimitir entrada de oxigeno,
pero no hay entrada ni salida de productos disuelos o clulas. Tenmos el rector lo
llenamos y esterilizamos y aladimos el estrter y lo cerramos. Hayuna svalvlas de
seguridad en cada una de las entradas. Ahora s eempiexa a darle el oxigeno,
temperatura y presiom que necesita. No ENTRA NADA NI SALE NADA SALVO
QWEU SE PRODUZCAESPUNA Y HAYA QUE ROPMEROLA, O HAYA UE EVITAR
ACIDIFICACIONES.

lAS VENTAJEAS ( POwer)

inconvenientes: el downsteream es complejo debido a que acada vez que acabaos

el proceso tenemos que vaciar todo el reactor y limpiarlo. Al tiwmpo qu se pierde
haciendo eso se llama tiempo muerto. sI TENEMOS VARIOS REACTORES EN BACH,
cuadno acabae el uni el dos y tres estn funcionando pero eso es caro.
Cultivo continuo

Es un sistema abierto en el sntodp de que

continuamente entra sustrat ( medio fresco) y
continuamente estamos sacando producto disuelto y
clulas. Ademas el sustrato que entra es esteril.

Las ventajsa que tiene son: tiene un funcionamiento

interrumpido ( funcionan sin tener que parar para
limpiar), con lo cual los tiempos muertos son pequeos (
es decir que no se emplea mucho tiempo en limpiar). El proceso doen stream es
fcil, porque no paramos el proceso sino que recuperamos volumen poco a poco y
no manejamos vulumenes tan grandes, con lo cual el proceso se hace mas fcil. Por
otro lado entra susutrato rpidamente, y los microorganismos lo consumen
rapidaemnte, entonces no habr acumulacin de toxicos.

Inconvenientes: la productividad es mas baja que en bach. No se alcanaz la fase

estacionaria, estamossiempre e la fase exponencial o logartmica, trabajando a u
(mu)mxima, es de cir que si queremos recueperr un metabolito que s produce al
final de la fase logartmica ( en fase estacionaria), aqu no lo vamos a tener, es decir
que metabolitos segundarios no hay. Luego hay riesgos de
contamienacion porque hay un conducto por donde entra el
sustrato, no se contamina porque hay una valvula de control
pero es un riesgo. Tambien puede ocurir mutacion de la cepa,
porque como este cultivo lo vamos a mantener durante mucho
tiempo, lalcepa puede cambiar o mutar. El control es comlejo,
porque tiene que entrar y salir lo mismo en cuato a cantdad,
porque sino s epodria vaciar el reactor o desbordarse con lo cual
el volumen de salida y entrada ha de ser el mismo. La tasa de
dilucin ha de ser constante. Otro inconveniente es que es
menos empleado que el bach.

Cultivo Fed Bach

Es un sistema inteermedio entre uno continuo y batch. Lo que ocurre es qwue se

llena el reactoer con el medio fersco mas los productos necesarios para iniciar el
proceso, pero el susrato se ade en poca cantidad pero elevada concentracin y
poco a poco se va aadiendo mas sutrato. ES DECIR QUE lo nico que entra es
sutrato (S), y se aade por etapas donde al principio la concentracin de S es baja y
luego aumenta. Tenemos que S limitante, es el sustrato que limita el crecimiento
del microorganismo, sirve para hacer los clculo. Lo que ocurre en la realidad es
que tenemos muchos sustratos, pero para simplificarlo se simula un sustrato fcil
como la glucosa.

Ventajas: mejora la fermentacin de batch, la fase expoencial se alarga auqneu no

llega a ser continua. Entonces podemos conseguir una gran cantidad de biomasa
hasta tener un 50% de concentracin de clulas (X) del volumen total del reactor (
si aumenta mucho interfiere con el crecimiento pero con esto se cosigue.). EL
PROCESADO DOWN STREAM SE MEJORA DEBIDO AL VOLJUEN MENOR.
Inconvenientes: Elevada concentraiccn de toxicos
debido a que solo esta entrando sustrato y hay mucha
biomasa. Eso puede paraqr el reactor. El control del
reactor es difcil, se hace por metoos indirectos como
por ejejmplo monitorizar el ph.

Tenemos tres fases: la de adaptacin, estacionaria y exponencial.

1)FASE DE LATENCIA O ADAPTACION ( LAG PHASE).

Si tenemos un microorganismo que esta en fase de latencia en un cultivoy lo

inoculo en u nn gran volumen. Una vez inoculado este microorganismo deber
adapatarse a la nuevas condiciones, cosa la fase de adaptacin depender varias
cosas: tamao del microorganismo, el tipo, la composicin, las condiciones de
creciemito como temperatura y ph, las condiciones fisiolgicas del inoculo.

aqu tenemos el tiempo en fase

lag con un determinado volumen
de inoculo o un determinado
numero de clulas.

A,B,C son parmetros que no vamos a evaluar. Lo que vamso a ver es como varia el
T (tiempo) lag en funcin del volumen del inoculo (Vo) y numero de celulass del
inculo (No). Si partimos de inoculos que estn en fase logartmica, con un gran
numero de clulas porque estn en su mximo mu, por tanto el tiempo de
adaptacin ser mas lento. Si tenemos un inoculo en fase estacionaria, nuemro de
clulas mas grande pero mas viejas y otras muetas, tenemos mas clulas muertas
(N menos) y por tanto tiempo de adaptacin mayor.
Para volmenes, depende del volumen de inoculo ( en laboratorio se acerca mas a
2% y en industria al 10%.). Por tan to con volmenes grandes da tiempos d
elaqtencia pequeos.

Simplemente controlando la edad del inoculo ( que seria el nuemro de clulas) y el

volumen del inoculo se puede modificar la fase de latencia.

2)FASE EXPONENCIAL (LOG PHASE).

El tiempo que tarda la celula en duplicarse en numero o aumentar la biomasa

celular ( engorde) por unidad de tiempo.

En periodo de crecimiento exponencial es donde ocurre la variacin de biomasa

(biomasa=X) respecto al timpo. Esta depende de
Ahora esa mu (u) va a depender de varios factores:

En cuanto al tipo de microorganismo, dos tipos diferentes de microorganismos

tendrn mu diferentes para un mismo sustrato.

Vamos a ver cada uno de estos factores por separado (tablas):

-Con respecto a las condiciones de crecimientoen un microorganismo como

asperguilus a 20 grados vemos una tasa de crecimiento (u) pero con 25 aumenta.
Con lo cual respecto a la condicin temperatura hay cambios.

-En cuanto al tipo de sustrato vemos que hay diferencias puesto que con glucosa
hay una tasa especifica de crecimiento ( u) pero con maltotriosa una menor.

-Hay diferencias entre los microorganismos.

Si seguimos con las ecuaciones, la diferencia con la biomasa con respecto al

tiempo, si la integramos obtenemos el tiempo de generacin.:

Tenemos otro parmetro ( Umax): en el creciemoito exponencial de un

microorganusmo el valor de U es constante y alcanza un mximo valor para cada
microorganismo.

Esta Umax depender de: la concentracin de sustrato (S) limitasnte. De forma que
sio hay muchos sutratos realizamos Umax solo para uno de ellos para simplificar.
Depende de Umax. Y por ultimo de la Ks ( constante de monod) que es una
constante para un sustrato y un microorganismo dado.

Estos tres parmetros se relacionan mediante la ecuacin de monod:

Esta ecuacin la vamos a usar
para determinar a
concentracin de sustrato
en el reservorio.
Ahora si representamos grficamente esta ecuacin
viendo como varia U con respecto a la concentracin
de sustrato, veremos que U aumenta rpidamente y
despus se hac asinttica a un tiempo determinado.
La concentracin de sustrato en la cual se alcanza U
mxima eso se define como Ks. Se suele alcanzar muy
rpido, por tanto tiene unas unidades de
concentracin de sustrato muy bajas. Y llega un
momento en que el sustrato por mucho que aumete ya
no es limitante y la veliocidad de crecimiento ya no
aumenta. Podemos decir que U es mxima cuando es
10 veces Ks.

Vamos a ver las propiedades de Ks y que valor fisio tiene esa constante: Ks es la
concentracin de S a la cual se alcanza la mitad de Umax.

Propiedades: tiene valores bajos y se alcanza rpido. Refleja la capacidad de de un

microorganismo para mantener la concetracion de sustrato intracelular mucho
mayor que la concentracin del medio. La diferencia entre las dos concentraciones
es la concentracin de sustrado que es capaz de metabolizar la celula. Por tanto
refleja la afinidad que tiene un microorganismo por el sustrato. Cuata mas afinidad
tenga el microorganismo por es sustratp mas conseguir meter dentro de el, y por
tanto Ks pequea indicaran mayor afinidad. Vamos, que a concentraciones mas
bajas de sustrato enseguida alcanza de U. Atendiendo a eso nos interesa Ks
pequea ( que quiere decir que mi microorganismo es muy afin por el sustrato)
sino es asi se cambia el sustrato.
Por ejemplo para coli tenemos
una determinada Ks: 0,7 (
mayor afinidad porque es mas
bajo) cuando el sustrato es
glucosa pero si es iones fofato
11,6.

Qu pasa si hay varios sustratos limitantes ? Se modifica la ecuacin de monod de

forma que podemos trabajar con varios sustratos.

Aun asi hay veces que el sustrato (S) intracelular es muy bajo, en tal caso lo que se
hace es aplicar otros modelos ceineticos que son variaciones de la ecuacin de
monod. Nosotros trabajaremos con un sustrato solo, por el cual nuestro
microorganismo sea muy afn y por tanto todo el sustrato que hay en el medio sea
ingerido por el microorganismo.

Por tanto lo ideal es que en el reactor la concentracin de sustrato sea baja, que
tienda a cero.

FASE ESTACIONARIA.

En esta fase compleja ya no vamos a tener metabolitos primarios sino que

tendremos los secundarios como polisacridos y protinas.

En este periodo es en el cual se relantiza el crecimiento o se para totalemente. Aqu

se dan reacciones difciles de controlar. Puede pasar el el sustrato se haya
metabolizado por completo porque, aumenta la concentracin de toxicos, se
pueden producir compuestos nuevos y lisis celular. Por lo general se evita llegar a
esta fase.

Se dfine una nueva magnitud: Y ( rendimiento, y es adimensional). El rendiemitno (

Y) es siempre menor que uno ( uno seria que todo el sstrato se transforma en
celualas. Que lo usasn todo).

Tenemos diferentes expresiones:

Yx/s: rendimiento de gramos biomasa producida en funcin del sustrato

consumido. El rendiemitno ( Y) es siempre menor que uno ( uno seria que todo el
sstrato se transforma en celualas. Que lo usasn todo).

Se ha despejado X y se ha tenido en ceunta dos sustratos. So es el sustrato, que en

el caso del cultivo continuo, esta en el reservorio. Y S que es el sustarto wqeu hayb
en cada momento del reactor. Entoces con esta formula de aqu, conociendo la
biomasa o el rto y sustrato que poenemos en el reactor, podemos predecir que
sustrato tengo que poner paraq conseguir una determinada biomasa.

En un cultivo en bach donde n o hay reservorio S0 es 0.