DISCUSIN

Aqu, hemos demostrado que la interaccin de Sec61 y Sec62 como se revel

por reticulacin es altamente sensible a la presencia y ausencia de ribosomas.
En contraste al ncleo heterotrmero de Sec61, se ha mostrado que el complejo
heptamrico Sec de la levadura es incapaz de unirse a los ribosomas.
Consistente con esto las estructuras por microscopa crioelectrnica de baja
resolucin del complejo Sec revelan una densidad adicional sobre la cara
citoplasmtica del ncleo heterotrmero de Sec61, el cual probablemente
ocupara una posicin similar como el ribosoma y por consiguiente, la unin
oclusiva. Esto concuerda con la observacin que la reticulacin entre Sec62 y
Sec61b de mamferos es fuertamente inducido por la eliminacin de ribosomas
del RM y es inhibida por su readicin. Adems, se mostraron previamente que
las reticulaciones entre Sec62 y Sec61b estn exclusivamente ausentes de la
fraccin proteica de la membrana asociada a ribosomas, tras la solubilizacin
con detergente.

El hecho de que ms del 50% de Sec62 pueda ser reticulado a Sec6, tras la
eliminacin de ribosomas, sugiere que la interaccin de estos componentes
est fuertemente favorecida si los ribosomas estn ausentes. Adems, si el
complejo Sec libre es incapaz de interactuar con los ribosomas, esto genera la
pregunta de cmo los ribosomas pueden posteriormente readherirse a tales
complejos. Aqu, encotramos que SR es capaz de desestabilizar la interaccin
entre Sec62 y Sec61, el cual lo detectamos como una prdida de la reticulacin
entre Sec62 y Sec61b y como un bloqueo en la translocacin de los sustratos
dependientes de Sec62.

Est bien establecido que SR cataliza la transferencia de complejos de cadena

entrantes nacientes de ribosomas desde SRP al translocon Sec61. Por
consiguiente, la habilidad de SR para interactuar con Sec61 y desplazar o
reposicionar Sec62, sugiere de manera inmediata un mecanismo por el cual el
complejo Sec pueda ser reorganizado para permitir el siguiente atraque del
complejo de cadena naciente del ribosoma (fig.6) adems, el intermediario
reclutara preferentemente complejos de cadena naciente del ribosoma unidos
a SRP, brindando de forma potencial un paso adicional donde la fidelidad de
marcaje pueda ser potenciada. Adicionalmente, esto tambin racionalizara la
observacin previa que las cadenas nacientes del ribosoma unidas a SRP
puedan entrar en un pool de Sec61 al cual los ribosomas son incapaces de
unirse.

Un estudio reciente mostr que al arrestar la translocacin de un sustrato

cotraduccional usando un dominio pequeo plegado fuertemente en el lado
luminal del translocn, condujo al reclutamiento estable de Sec62 (ref. 55). Por
consiguiente, aunque dispensable para la translocacin cotraduccional de la
mayora de sustratos, un subgrupo de cadenas nacientes pueden requerir
Sec62 para facilitar los pasos posteriores de su translocacin. Tales cadenas
nacientes pueden poseer caractersticas particulares, las cuales inician la
reorganizacin del complejo ribosoma-translocn y por ende exponer un sitio
de unin estable para Sec62.

Nuestros experimentos revelaron que la reticulacin de SRa con Sec61b fue

mucho ms fuerte con PKRMs como se compar con RMs. Hau todava una
cantidad baja de SRa para la reticulacin de Sec61b en RM, racionalizado por
el hecho de que aprox. El 80 a 90% de los translocones estn an disponibles
para unirse a SR.

SR tambin tuvo poco efecto en el perfil de reticulacin total de Sec61b con

RMs como se compar con PKRMs. Esto sugiere que una vez que el ribosoma
est completamente comprometido con el translocon, es probable que el
acceso de SR, sea fuertemente dificultoso. Esto es racionalizado por
estructuras de microscopa crioelectrnica de los complejos ribosoma-Sec61 y
ribosoma-SRP-SR, los cuales predicen un potencial fuerte de solapamiento de
densidad en el tnel de salida ribosomal. La eliminacin completa del dominio
del linker condujo a la formacin de una reticulacion innovadora entre SR y
Sec62. Esto tambin es observado con el dominio CtSRaNG, indicando que
esta interaccin apartir del dominio NG aparece conservada. Los dominios NG
humanos y Chaetomiun, ambos contienen mltiples cistenas, pero solo uno de
estos est conservada y localizada en la hlice 3 del dominio N, por
consiguiente, este es un fuerte candidato para estar involucrado en la
reticulacion con Sec62.

El FtsY de E. coli, al cual le falta el dominio del linker, es conocido por

interactuar con el loop 5 citoplasmtico de SecY, mediante su dominio NG. Por
ello, en ausencia del linker, SRa puede tambin unirse al complejo Sec61 de
una forma similar, posicionando el dominio NG cerca de Sec62. Si el linker est
an presente, pero es incapaz de desplazar a Sec62, como con CtSRa de
amplia extensin, esto puede interferir con la unin del dominio NG.

Adems de interactuar con el translocon, SRa tambin se une al ribosoma.

Nuestro estudio caracteriza un tramo largo de residuos cargados positivamente
en la regin linker del SRa eucaritico de funcin no conocida previamente.
Identificamos dos distintos elementos dentro del linker y mostramos que la
unin al ribosoma requiere el segundo elemento (RBR) que est conservado
entre los hongos y mamferos. Notablemente, un gran nmero de factores que
actan en el polipptido naciente usa el tnel de salida como un ncleo de
interaccin. Aunque estos factores no estn relacionados en trminos de
estructura y funcin, parecen usar un mecanismo comn para la interaccin
con el ribosoma que involucra un tramo de residuos cargados positivamente.
El RBR identificado en este estudio dentro de la regin del linker de SRa
probablemente acte mediante el mismo mecanismo.

El primer elemento (CBR) que es nico en eucariotas superiores y rico en

residuos de lisina es necesario y suficiente para el desplazamiento de Sec62
por SRa. Sec62 contiene muchas regiones cargadas positivamente tambin
ricas en residuos de lisina. Por consiguiente, es probable que el linker de SRa y
Sec62 compitan por la unin del translocon Sec mediante interacciones
electrostticas. De hecho, Sec63 tiene un C terminal cargado muy
negativamente, y por ello podra contribuir bien al sitio de unin exclusivo
mutuamente. A tal efecto, CBR y Sec62 podran tambin competir por la unin
a Sec63.

De manera interesante, el Sec62 de mamferos difiere de sus homlogos en la

levadura por la presencia de una regin adicional cargada positivamente en la
regin N-terminal (fig. suplementaria 6). Esto podra representar un nivel extra
de regulacin en los eucariotas superiores, y explicar por qu la regin
adicional cargada positivamente (CBR) dentro del dominio del linker del SR
humano es requerida para desplazar Sec62 de Sec61. Tomados juntos, hemos
identificado dos motivos de interaccin distintos en SR y hemos mostrados que
uno de ellos tiene una funcin que es distinta del RBR eucaritico cannico al
regular la asociacin de Sec62 con Sec61 en la membrana del ER. Las clulas
bajo diferentes condiciones fisiolgicas pueden expresar diferentes niveles de
SR. En combinacin con nuestros descubrimientos, esto puede brindar un
mecanismo para modular de forma diferente el flujo de sustratos a travs de
dos rutas de translocacin de ER, permitiendo que las clulas respondan
eficientemente a perfiles cambiantes de sustratos secretorios con distintas
propiedades bajo diferentes condiciones fisiolgicas.