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VERANO CIENTÍFICO

JULIO-AGOSTO 2010

SINTETIZAR HIDROXAPATITA, PRUEBAS DE

BIOACTIVIDAD IN VITRO Y CORROSIÓN DE ACERO.

PRESENTA: LILIANA CORONA PÉREZ

INVESTIGADORA: DRA. GEORGINA CARVAJAL DE

LA TORRE

JULIO-AGOSTO2010
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El término biomaterial designa a aquellos materiales, naturales (de origen animal o

humano) o artificiales (hechos por el hombre), utilizados en la fabricación de dispositivos
que interactúan con los sistemas biológicos y que se aplican en diversas especialidades de
la medicina ya sea para aumentar o reemplazar un tejido, órgano o una función del
organismo. 1



 


Las características más importantes que influyen en un biomaterial dado son:

AY Biocompatibilidad
AY Requisitos físicos
AY Requisitos químicos.

a

   

La propiedad trascendental en la interacción biomaterial±cuerpo humano es la

biocompatibilidad, o sea, la ausencia de una reacción fisicoquímica perniciosa del
biomaterial implantado con los tejidos y los fluidos biológicos corporales, también
llamados soluciones fisiológicas.









Tener un diseño de ingeniería perfecto; esto es, el tamaño y la forma del implante deben ser
los adecuados.

Tener una resistencia mecánica adecuada, tener un tiempo de fatiga adecuado y tener
densidad y peso adecuados.




 



No ser tóxico, ni carcinógeno y ser químicamente estable e inerte. 2







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Y

  
  

Según su composición química, los biomateriales se clasifican en metálicos, poliméricos,
cerámicos y compuestos. La tabla siguiente muestra las propiedades de estos biomateriales
y algunas de sus aplicaciones.

a
 
 
 



 



Alta densidad, resistencia Implantes y fijaciones


 
 
 mecánica ortopédicas con tornillos,


  
 al desgaste, impacto, placas, alambres, varillas,
   



  tensión clavos, implantes
 
 y compresión, baja dentales
biocompatibilidad,
resistencia a la corrosión



 Se corroe en el útero Dispositivos
anticonceptivos.

 Biocompatibles con saliva Implantes dentales y


 
 reparaciones.

 


 Biocompatibles con sangre Reparación de venas y

 


 arterias



Baja densidad y resistencia Suturas, sustitución de


 
 mecánica, facilidad de arterias y venas,

  
 fabricación, formación de restauración maxilofacial:

 
 
 biopelículas. nariz, oreja, mandíbula,
 

 dientes; tendón artificial.
Cirugía plástica estética

  
 Hilos de suturas

 


 

Buena biocompatibilidad, Caderas protésicas,


 

 resistencia a la corrosión, dientes cerámicos,
   inertes, alta resistencia a la cementos
 
   compresión, alta densidad y
      dureza, dificultad de


  maquinado y fabricación
   
  







Buena compatibilidad, Implantes ortopédicos
 

 inertes, reforzados con fibras de
  
 alta resistencia a la corrosión carbono, válvula artificial

  


 ya cardiaca, restauración de
  

 la tensión. Falta de articulaciones

  consistencia
en la fabricación del material

3
!Tipos de biomateriales según su composición propiedades y aplicaciones. 


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Y

  
     
   
 

Y a
 




Estos materiales son aceptados por el cuerpo ya que son biológicamente inertes y
además pueden resistir largos periodos en un entorno altamente corrosivo, como es
la presencia de fluidos corporales.

Y a
 
 


Y
Los materiales bioactivos, al verse expuestos a los fluidos corporales reaccionan
químicamente, dando lugar a la formación de un fuerte enlace interfacial entre el
implante y el tejido huésped.

Y a
 


 

Y
Los materiales biodegradables o bioreabsorbibles, se diseñan para degradarse y de
esta manera poder ser remplazados por el tejido huésped. Los constituyentes de
estos materiales degradados deben ser aceptados por el organismo y es necesario un
ajuste de la razón de la biodegradación del material con la razón de formación del
nuevo tejido.3



   
La hidroxiapatita es un biomaterial y básicamente es un compuesto cristalino integrado por
tres moléculas de fosfato de calcio y de una molécula de hidróxido de calcio. El
concentrado de la hidroxiapatita es la matriz de calcio de la proteína encontrada en el hueso
sin procesar. Esta sustancia natural contiene aproximadamente 14% la proteína del
colágeno y 4% de otras proteínas y aminoácidos pequeños (hidroxiprolina, glicina y ácido
glumático). El calcio abarca entre el 24-30% de la matriz de la hidroxiapatita y junto con
varios minerales (zinc, potasio, silicio, magnesio, fierro) forma un conjunto biodispensable
activo de calcio. 4

La hidroxiapatitafosfocálcica con fórmula Ca10(PO4)6(OH)2 pertenece a la familia

cristalográfica de las apatitas, compuestas por isomorfos que poseen una misma estructura
hexagonal. Este compuesto, es el fosfato de calcio más utilizado como biomaterial.

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Y

    
   
Se utilizan varias vías mayores para la preparación de las apatitas: la precipitación en vía
acuosa, la reacción sólido-sólido (vía seca), la reacción en sales fundidas, el procedimiento
sol-gel y la vía de los cementos. 5







Las síntesis en fase acuosa se realizan mediante dos procedimientos diferentes:

El método por doble descomposición y el método por neutralización. 

Estos procedimientos se utilizan actualmente para la producción de apatita.

El método por doble descomposición consiste en agregar, de manera controlada, una

solución de sal de catión Me en una solución de sal del anión XO4. Posteriormente, se lava
y seca el precipitado. Esta técnica permite obtener apatitas mixtas (que contienen dos
cationes diferentes) con control de la relación Me1/Me2. Los cationes se introducen
simultáneamente en el reactor con la relación Me1/Me2 deseada. Lo anterior permite evitar
la segregación durante la precipitación. Los principales inconvenientes de este método se
deben a su práctica, que requiere de mucho equipo, así como de su velocidad de síntesis
que más bien es lenta.

El método por neutralización consiste en neutralizar una solución de lechada de cal

agregándole una solución de ácido fosfórico. Esta reacción permite obtener rápidamente
grandes cantidades de hidroxiapatitafosfocálcica con poco equipo. También es posible
sintetizar fluorapatitas. 6





 

La síntesis por reacción sólido-sólido consiste en calentar una mezcla reactiva que consta
de diversas sales de cationes y de aniones, en una relación Me/XO4 igual a 1.67. Esta
mezcla debe ser perfectamente homogénea para permitir una reacción total. Un ejemplo
sería la síntesis de fluorapatitafosfocálcica a partir de fosfato tricálcico y de fluoruro de
calcio, según la siguiente reacción:

3Ca3 (PO4)2 + CaF2 Ca10 (PO4)6F2

Esta reacción se efectúa a 900 °C durante varias horas.

En el caso de una reacción sólido/gas, el gas procede de la sublimación de una sal sólida
contenida en la mezcla reactiva, por lo que la síntesis se puede realizar en un sitio cerrado,
o de una aportación externa, por ejemplo en forma de barrido del gas reactivo.7


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Y




 


Este método permite acercarse a las condiciones de síntesis de algunas apatitas naturales.
De esta manera se han preparado fosfatos metálicos de estructura apatítica. Se obtuvieron
así cristales mezclados la mayor parte del tiempo con el exceso de reactivos de inicio.7








El procedimiento sol-gel se basa en la polimerización de precursores organometálicos de

tipo alcóxidosM(OR)n. Después de una hidrólisis controlada de este alcóxido en solución,
la condensación de los monómeros conduce a puentes oxo y después a un óxido orgánico.
La polimerización progresiva de estos precursores forma oligómeros y después polímeros
que aumentan así la viscosidad. Estas soluciones poliméricas conducen a gel que permiten
elaborar materiales con facilidad (películas densas y transparentes, polvos ultra finos,
cerámicas con múltiples aplicaciones tecnológicas.

 


 





Los cementos fosfocálcicos son cementos hidráulicos minerales que fraguan gracias a
reacciones ácido-básicas entre fosfatos de calcio de tipo ácido y fosfatos de calcio de tipo
básico para dar una hidroxiapatitafosfocálcica en fase única.7




La corrosión se define como el deterioro de un material a consecuencia de un ataque
electroquímico por su entorno. De manera más general, puede entenderse como la
tendencia general que tienen los materiales a buscar su forma más estable o de menor
energía interna. Siempre que la corrosión esté originada por una reacción electroquímica
(oxidación), la velocidad a la que tiene lugar dependerá en alguna medida de la
temperatura, de la salinidad del fluido en contacto con el metal y de las propiedades de los
metales en cuestión. Otros materiales no metálicos también sufren corrosión mediante otros
mecanismos.

 

Y
Se clasifican de acuerdo a la apariencia del metal corroído, las más comunes son:

Corrosión uniforme, corrosión galvánica, corrosión por picaduras, corrosión intergranular y

corrosión por esfuerzo.8

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  ! 

Sintetizary caracterizar hidroxapatita, pruebas de bioactividad in vitro y corrosión de acero.

 !  

Sintetizar y caracterizar hidroxapatita por medio de la técnica de precipitación.

Realizar fluido corporal simulado para pruebas de bioactividad en un material compuesto

in vitro.

Aplicar la técnica potensiodinámica y técnicas de impedancia electroquímica sobre acero.

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A partir de ácido fosfórico H3PO4, hidroxilo de calcio Ca (OH)2 y agua desionizada. Se
calcularon cantidades estequiometricas de acuerdo a la reacción9:

10 Ca (OH)2 + 6 H3PO4 Ca10 (PO4)6 (OH)2+ H2O

Para obtener 5 gramos de hidroxiapatita, se prepara una solución de 3.687 gramos de

Ca(OH)2 en un volumen de 50 mililitros de agua desionizada y una solución de 4 mililitros
de H3PO4 al 85% de concentración en 58.75 mililitros de agua desionizada que se muestra
en la figura 1.

 !. a) Muestra las dos soluciones ya preparadas, b) Síntesis por precipitación para obtener
hidroxiapatita.

c
 
 
 

  
Y
La segunda solución se coloca en una bureta y se gotea sobre de la primera como se
muestra en la figura 1, de 30 a 35 gotas por minuto de manera constante.

Se registra el pH obtenido inicialmente y se deja envejecer por el tiempo necesario para

alcanzar un pH de 8.5, o bien se deja en agitación constante por 20 horas. Una vez que se
alcanza el pH o termina el periodo de agitación se obtiene hidroxiapatita.

Opcionalmente se calcina por una hora 800 °C después de filtrar y lavar.

  

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Un microscopio electrónico de transmisión (TEM, por sus siglas en inglés, o MET, en
español) es un microscopio que utiliza un haz de electrones para visualizar un objeto,
debido a que la potencia amplificadora de un microscopio óptico está limitada por la
longitud de onda de la luz visible. Lo característico de este microscopio es el uso de una
muestra ultra fina y que la imagen se obtenga de los electrones que atraviesan la muestra.

Los microscopios electrónicos de transmisión pueden aumentar un objeto hasta un millón

de veces.10, 11




Debido a que los electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la luz
visible, pueden mostrar estructuras mucho más pequeñas.

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El Microscopio electrónico de barrido o SEM (ScanningElectronMicroscopy), es aquel que
utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz para formar una imagen. Tiene una
gran profundidad de campo, la cual permite que se enfoque a la vez una gran parte de la
muestra. También produce imágenes de alta resolución, que significa que características
espacialmente cercanas en la muestra pueden ser examinadas a una alta magnificación. La
preparación de las muestras es relativamente fácil pues la mayoría de SEMs sólo requieren
que estas sean conductoras.

En el microscopio electrónico de barrido la muestra es recubierta con una capa de carbón o

una capa delgada de un metal como el oro para darle propiedades conductoras a la muestra.
Posteriormente es barrida con los electrones acelerados que viajan a través del cañón. Un
detector mide la cantidad de electrones enviados que arroja la intensidad de la zona de

c
 
 
 

 !
Y
muestra, siendo capaz de mostrar figuras en tres dimensiones, proyectados en una imagen
de TV o una imagen digital. Su resolución está entre 3 y 20 nm, dependiendo del
microscopio. 12,13

‘ 
 

 
Espectroscopia infrarroja (Espectroscopia IR) es la rama de la espectroscopia que trata con
la parte infrarroja del espectro electromagnético. Esta cubre un conjunto de técnicas, siendo
la más común una forma de espectroscopia de absorción. Así como otras técnicas
espectroscópicas, puede usarse para identificar un compuesto e investigar la composición
de una muestra.

Para medir una muestra, un rayo de luz infrarroja atraviesa la muestra, y se registra la
cantidad de energía absorbida en cada longitud de onda. Esto puede lograrse escaneando el
espectro con un rayo monocromático, el cual cambia de longitud de onda a través del
tiempo, o usando una transformada de Fourier para medir todas las longitudes de onda a la
vez. A partir de esto, se puede trazar un espectro de transmitancia o absorbancia, el cual
muestra a cuales longitudes de onda la muestra absorbe el IR, y permite una interpretación
de cuales enlaces están presentes.15, 14


 
$%
El fenómeno de la difracción de Rayos X consiste básicamente en un proceso de
interferencias constructivas de ondas de rayos X que se produce en determinadas
direcciones de espacio. Significa que las ondas tienen que estar en fase, lo que ocurre
cuando su diferencia de trayectoria es cero o un múltiplo entero de longitudes de onda.

La identificación de fases cristalinas constituye uno de los campos de aplicación más

importantes del método de polvo cristalino.16, 17

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?&?'? ‘&'(‘()"*
‘+,-?(
',? 

La identificación de una fase cristalina por este método se basa en el hecho de que cada
sustancia en estado cristalino tiene un diagrama de rayos X que le es característico. Estos
diagramas están coleccionados en fichas, libros y bases de datos del
JointCommitteeonPowderDifractionStandards y agrupados en índices de compuestos
orgánicos, inorgánicos y minerales. Se trata, por lo tanto, de encontrar el mejor ajuste del
diagrama problema con uno de los coleccionados.

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Para poder llevar a cabo la difracción de rayos X se empleó un difractómetro
 Y×,
voltaje de 30 kV, de 15 a 55 ° y una velocidad de barrido de 0.6 grado/min, para preparar
la muestra, Lo obtenido de la síntesis se molió con un mortero y pistilo, se utilizó un porta
muestras de alúmina mostrado en la figura 2.

  .a) Muestra lista para meter al equipo para su análisis y b) muestra dentro del equipo.

& 

Para comprobar la bioactividad sobre el material compuesto se utilizó una estrategia
biomimética, que consiste en preparar una solución semejante al del plasma del cuerpo
humano, esta solución salina se denomina Fluido Fisiológico Simulado (FFS) y se mantiene
a una temperatura de 37°C y un pH de 7.4 (condiciones semejantes al del cuerpo humano).
Para preparar el FFS se mezcla los reactivos de la tabla 2 en la cual se muestra en orden y
las cantidades requeridas en 700 ml de agua desionizada, se debe tener en cuenta que no
deben mezclarse los reactivos de manera simultánea ya que se provocara precipitación.

Ya adicionado todos los reactivos del 1 al 6 se adiciona el número 7 en el cual se debe dejar
agitar el tiempo necesario para su adecuada disolución, se agrega el siguiente; al legar al
tris se debe agregar hasta tener un pH de 7.42 y agregar nuevamente hasta un pH de 7.45 y
bajar a 7.42 con la solución de HCl al 1 M y de manera sucesiva hasta que se termine el tris
a una temperatura de 36.5 °C exactamente se debe ajustar el pH hasta 7.40, el proceso se
ilustra en la figura 3.

La solución obtenida se completa hasta un litro y se deja enfriar.18

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Y
 Orden Reactivo Cantidad Pureza Peso formula
!Y  NaCl 8.035 g 99.5 58.4430
Y  NaHCO3 0.355 g 99.5 84.0068
Y  6Cl 0.225 g 99.5 74.5515
âY  MgCl2-6H2O 0.231 g 99.0 228.2220
>Y  62HPO4-H2O 0.311 g 98.0 203.3034
'Y  1.0M-HCl 39 ml - -
lY  CaCl2 0.292 g 95.0 110.9848
]Y  Na2SO4 0.072 g 99.0 142.0428
šY  Tris 6.118 g 99.0 121.1356
!"Y 1.0M-HCl 0-5 ml - -

 Orden del proceso cantidades, pureza y peso formula.

 . Proceso de preparación de fluido fisiológico simulado

'   

Se coloca aproximadamente 30 ml dentro del fluido fisiológico simulado en un vaso donde
la muestra se debe de encontrar de manera vertical para que el fluido interactúe de manera
adecuada con el material compuesto como se muestra en la figura 4.

 â. Muestra el material de forma horizontal dentro del fluido fisiológico simulado.

c
 
 
 

 
Y
La aplicación del fluido fisiológico simulado se realizó a baño maría y dentro de la mufla
eléctrica a una temperatura similar a la del cuerpo humano aproximadamente a 37 °C como
se muestra en las figuras 5 y 6.

 >. Muestra la aplicación del fluido dentro de baño maría.

 '. Muestra la aplicación del fluido corporal simulado dentro de la mufla eléctrica a 37 °C.

Las muestras obtenidas se analizaron con SEM.



  

Se utilizó una celda electroquímica típica el electrodo de referencia, un electrodo de
sulfatos saturado y una barra de grafito.
La celda utilizada fue un recipiente de acrilico con una capacidad de 50 ml. El electrodo de
trabajo utilizado fue acero obtenido de filtros que se encuentra en contacto con aguas
contaminadas con un pH de 8.5.






c
 
 
 

 
Y

  . 
+
# 
Una vez establecido el hecho de que habrá regiones con distinto potencial, se debe
comprender qué tendencia seguirán dichos potenciales cuando se establece un circuito
cerrado entre ellos. Pues bien, igual que cuando mezclamos en un recipiente agua a distinta
temperatura el sistema tiende a homogeneizar la temperatura del agua a una que será
intermedia, cuando dos regiones con distinto potencial consiguen un medio (electrólito)
para intercambiar sus iones, cierran un circuito a través del cual el sistema acabará teniendo
un potencial común intermedio a los valores previos. La representación de los potenciales
normales de ánodo y cátodo, junto que el valor final de corrosión, frente a la corriente es
conocida como diagrama de Evans que se muestra en la Figura 7.

 l Diagrama de Evans.


, 
!  
 
Y
El proceso de polarización que sigue un metal es de difícil caracterización. Una técnica
sencilla que aporta bastante información, es la potenciodinámica. En ella, trazamos una
curva en la que representamos potencial (E) frente a corriente en escala logarítmica (log I)
(Figura 8). 19


 ]Curva de Tafel de una representación potenciodinámica

c
 
 
 

 
Y
Esta técnica consiste en esperar a que el metal estabilice, es decir, que alcance un potencial
constante en el que las semirreacciones anódica y catódica están compensadas, para
aplicarle después unos pocos milivoltios que le alejen del potencial de equilibrio y registrar
la respuesta en corriente. La figura que obtenemos es la llamada curva de Tafel, que
muestra de una forma bastante clara los procesos de intercambio de electrones que se
producen en las inmediaciones del metal. Esta polarización pasa por tres fases por
activación, resistencia y concentración.

+
#   ! 

Referente al número de electrones que son capaces de abandonar la superficie anódica,

superando la energía de activación, y generando a su vez cationes metálicos. En la curva de
Tafelaparece representada como una línea casi recta en las proximidades al potencial de
corrosión. Trazando una tangente a cada una de estas secciones, se consiguen las rectas con
las que luego se obtendrá la corriente de corrosión.

+
#  
  

Se origina como consecuencia de cualquier caída óhmica en la inmediata vecindad del

electrodo.
Y
+
#   


Es la que representa la variación en el potencial como consecuencia de los cambios de

concentración que se producen en la inmediata vecindad del electrodo. Este proceso puede
ser por difusión, convección o migración.
La aparición de alguno de los dos últimos procesos, provoca que la representaciónsufra un
19
marcado cambio de pendiente.


       
/ 

La impedancia electroquímica usualmente se obtiene aplicando un potencial de corriente
alterna a una celda electroquímica y midiendo la corriente a través de la celda como se
muestra en la figura 9. La respuesta a este potencial sinusoidal de excitación es una señal de
corriente alterna que puede ser analizada como la suma de funciones sinusoidales (series de
Fourier).
Otro concepto a tener presente es el de la capacidad o capacitancia, la cual expresa la
habilidad de un capacitor para almacenar carga eléctrica. 20

c
 
 
 

 
Y
  š. (A) Configuración típica de dos electrodos para la medición de impedancia (B) Circuito
equivalentesimplificado para un sistema de dos electrodos. Cdl - Impedancia del electrodo; Rs- Resistencia
del electrodo. (C) Curva de impedancia vs. Frecuencia

 
En la síntesis de hidroxiapatitapor precipitación vía acuosa utilizando el método de
neutralización, se obtuvo la fase de hidroxiapatita utilizando difracción de rayos X como se
muestra en el difractograma de la figura10.

  !"Difractograma obtenido con difracción de rayos x donde se aprecia la presencia de la fase
hidroxiapatita.

c
 
 
 

 
Y
Se logró obtenerfluido fisiológico simulado, sin precipitación en el proceso, los resultados
de la aplicación del fluido fisiológico simulado sobre el material compuesto obtenida por
SEM se muestra en la figura 11, en las micrografías se muestra el crecimiento
hidroxiapatita sobre el material compuesto y los elementos obtenidos por EDS sobre la
superficie, después de un día de aplicación

 !!. Muestra el crecimiento de hidroxiapatita sobre el material compuesto y los elementos existentes
sobre la superficie.

En cuanto a la corrosión de acero se realizó latécnica potenciodinámica y técnica de

impedancia electroquímica.

En la primera se observó picaduras y en la segunda no se observaban picaduras con lo que

se puede obtener el tiempo de vida medio para el acero que se encuentra en contacto con el
agua residual.

c
 
 
 

 
Y
 a
 
1.Y williams D. Definitions in Biomaterials. Amsterdam: Elsevier, 1987.
2.Y Brown, Lemay, Bursten. §
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Y