UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEAR

CENTRO DE CINCIAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA E BIOLOGIA MOLECULAR

BACHARELADO EM BIOTECNOLOGIA

Biofsica

Prtica 1: Dilise e Osmose

Alex Martins

Ana Leticia

Camila Sillos

Samuel Castro

Victor Gabriel

FORTALEZA

2017
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I. Introduo

A osmose a modalidade de transporte passivo, na qual, o solvente transportando do meio de

maior concentrao para o meio menos concentrado. Um exemplo bem simples para entendermos
a osmose observar a ao do acar sobre o morango. Quando colocado em contato com o
morango, o acar recebe a gua contida nesta fruta. Os fenmenos da osmose s ocorrero
quando a membrana for semipermevel. Se a membrana for permevel, deixando passar soluto e
solvente, no h fenmeno de natureza osmtico.

Querendo impedir que a osmose ocorra, preciso exercer uma presso sobre o sistema no
sentido inverso ao da osmose e de intensidade mnima presso que o solvente faz para
atravessar a membrana semipermevel. A essa presso, capaz de impedir o fenmeno da osmose,
d-se o nome de presso osmtica.

J a dilise consiste num mtodo pelo qual molculas grandes, como o caso do amido e das
protenas, e de molculas pequenas, como o caso da glicose e dos aminocidos, em soluo,
podem ser separadas por difuso seletiva atravs de uma membrana semipermevel. Nesta
tcnica, as molculas pequenas (at 15.000 de PM) passam livremente atravs de uma membrana,
enquanto que as molculas grandes (de PM mais elevado) ficam retidas.

Cientificamente esta ponderao muito simplificada, porque tanto grupos especficos como
cargas existentes nas molculas afetam a velocidade de difuso, particularmente com molculas de
tamanho intermedirio. No entanto, o processo de dilise ocorre nos sistemas biolgicos a todo o
momento, sendo de extrema importncia e baseando-se nos diferentes ndices de difuso dos
componentes da mistura.

II. Objetivos

Osmose atravs de membranas

Avaliar, por meio da tcnica de dilise, os eventos de osmose e difuso em um gradiente de
concentrao com solues cidas e bsicas, na presena do indicador de pH antocianina (cor lils)
por meio uma membrana semi permevel.
Efeito do meio sobre membranas celulares (Eritrcitos de coelho)
Analisar o efeito da concentrao de sais (meios hipertnico, isotnico e hipotnico) sobre a
morfologia da clula sangunea por meio de um microscpio ptico.

III. Materiais

Sacos de dilise;
Bquer de 500ml com gua destilada;
Soluo de NaCl 3,0 M e 0,15M;
Placas de Petri;
Folhas de repolho roxo (Brassica oleracea);
cool 70%;
Soluo cida de HCl 1,0 M;
Soluo bsica de NaOH 0,1 M;
7 tubos de ensaio de 5 mL;

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3 lamnulas e 3 lminas para microscopia;

Pipetas de 200 L ;
Ponteiras P200;
Sangue de coelho;
Heparina.

IV. Metodologia

1 parte

Dispondo de uma proveta graduada, preparou-se uma soluo de 10 mL de NaCl 3 M. A partir

dessa soluo, transferiu-se de 5 mL para outra proveta. Em seguida, adicionou-se 5 mL da soluo
de NaOH 0,1 M (previamente preparada) na primeira proveta e separou-se, com auxilio de um
pipeta automtica, 1 mL desta soluo num pequeno tubo de ensaio. O restante da soluo contida
na segunda proveta, foi adicionado 5 mL de HCl 0,1M e, novamente, separou-se, com auxilio de um
pipeta automtica, 1 mL desta soluo em outro pequeno tubo de ensaio. Os procedimentos foram
repetidos para o HCl, trocando NaOH pelo cido.

Aps o preparo das solues, estas foram introduzidas em dois sacos de dilise previamente
umedecidos. As membranas foram bem fechadas e colocadas em bqueres com gua destilada,
assim sofreram uma agitao constante provocada por um movimentador magntico a fim de
acelerar o processo de dilise, que ocorreu em uma hora.

Terminada a dilise, retiraram-se as solues das membranas e aferiram-se os volumes finais,

com o auxlio de provetas. Alm disso, mais 1 mL de cada soluo foi retirado para reservar em
pequenos tubos de ensaio, os quais foram devidamente nomeados.

Em cada um dos quatro tubos de ensaio reservados, pr-dilise e ps-dilise, foi adicionado 1
mL do indicador de antocianina (preparado pelos monitores) e, desse modo, observou-se os
resultados.

2 parte

Diluiu-se a soluo de NaCl 3,0M a uma soluo de 5mL de NaCl 0,15M, por meio do auxlio da
formula C1V1=C2V2. Em seguida adicionar 10-4L das solues de NaCl 0,15M; NaCl 3,0M e de
gua em cada tubo de ensaio, para que possa ser adicionada 10-4L da soluo de hemcias em
cada tubo. Aps 15min, pingar 25x10-6L do contedo de cada tubo em uma lmina e posicionar a
lamnula sobre a gota formada na lmina para que possa ser feita a observao no microscpio.
Proporcionado assim duas situaes cujos ambientes possuem concentraes diferente, sendo
uma maior e outra menor que a concentrao de NaCl dentro da clula estudada.

E para a preparao do sangue de coelho para a observao dos efeitos da osmose sobre as
hemcias do sangue, primeiro retira-se o sangue do coelho utilizando uma agulha estril, sendo
coletado e colocado em um frasco contendo heparina. Logo aps feita a lavagem do sangue em
NaCl 0,15M umas 4 vezes, seno feita a adio de aproximadamente 10mL de soluo salina (NaCl
0,15M) em cada tubo contendo o sangue entre as lavagens. Aps as lavagens deve-se centrifugar o
sangue por 5min a 2000 rpm (rotaes por min), retirando o sobrenadante e repetindo o
procedimento at que o sobrenadante esteja clarificado.

Ademais, com o auxilio de uma pipeta, colocaram-se duas gotas em cada lmina e uma
lamnula em cima para a posterior visualizao no microscpio ptico a fim de observar o efeito
cada concentrao nas clulas.

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Figura 1. Clulas sanguneas de coelho em diferentes concentraes salinas e suas respectivas lminas.

V. Resultados e discusso

1 parte

Os resultados obtidos, de incio, so referentes aos volumes das solues. Os volumes iniciais
de cada soluo nas membranas eram de 10 mL. Os volumes finais observados foram: 9,25 mL
para o NaOH, e 14 mL para o HCL. O que se pode concluir acerca da osmose sofrida entre as
membranas anlogo ao discutido na segunda parte.

Quanto ao uso do indicador de pH de antocianina (cor lils), os tubos de ensaios, reservados

inicialmente, obtiveram coloraes bem especficas aps sua adio. O tubo com NaOH apresentou
uma colorao verde forte, enquanto o tubo com HCl apresentou cor rosa bem escuro, antes da
dilise. As cores apresentadas esto coerentes com o padro desse indicador em pHs cidos e
bsicos, validando a qualidade do indicador.

Imagem 1. Tubos pr-dilise contendo 1 mL de cada soluo + 1 mL do indicador de antocianina.

Ao compararmos com os tubos reservados aps a dilise, foi possvel observar que, ao
adicionar-se o indicador, as cores obtidas em cada tubo apresentaram um tom de verde
gua para o NaOH e um rosa escuro no tubo para o HCl (Imagem 2).

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Imagem 2. Comparao dos tubos pr e ps-dilise das duas solues aps adio do indicador.

Um dos erros em nossos resultados, provavelmente, se deu uma vez que as solues nas
membranas sofreram difuso incompleta durante a dilise, no perdendo todos os seus ons para a
gua (H+ e OH-). Isso pode ter acontecido devido no ter ocorrido troca de gua que no meio do
processo e pela influncia do tempo minimizado. Ademais, apesar de procedimentos incorretos, os
resultados podem ser avaliados de forma eficaz.

Logo, houve reteno de substncias de peso maior pela membrana semipermevel, enquanto
substncias de peso menor tm livre passagem, na prtica foi exemplificado por ons.

2 parte
Aps observar as clulas no microscpio, foi possvel identificar diferenas morfolgicas entre
elas. As clulas com soluo de NaCl na concentrao de 3 M apresentaram-se menores e com
formato desfigurado, caractersticas de clulas crenadas; enquanto isso, as clulas com soluo de
NaCl na concentrao de 0,15 M apresentaram-se em tamanho e formato considerados normais. J
as clulas na presena apenas de gua, mostraram-se aparentemente hemolisadas.
Desse modo, percebe-se que isso pode ter sido causado pela diferena na concentrao salina,
no meio em que as clulas estavam presentes. Na soluo com maior concentrao de sal, meio
hipertnico, as clulas entraram em processo de plasmlise, perdendo gua para o meio por
osmose, diminuindo de tamanho e alterando sua conformao. Para clulas sanguneas, houve o
processo de cremao, onde ocorrendo a sada excessiva de gua, a clula murcha, dando origem
a danos reversveis clula que podem lev-la a morte.
Na soluo com baixa concentrao de sal, meio isotnico, as clulas conseguem manter o
equilbrio osmtico e no sofrem alteraes visveis, permanecendo com suas caractersticas
normais de formato e tamanho.
Por fim, as clulas na presena apenas de gua entram em turgescncia porque o meio tem
concentrao salina mnima, sendo chamado hipotnico. No caso do experimento feito, as clulas
adquiriram gua suficiente em seu interior para inchar e romper. Para clulas sanguneas, esse
rompimento chamado hemlise.

Figura 3. Clulas normais, clulas crenadas e clulas hemolisadas, respectivamente.

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VI. Concluso

O experimento trouxe equipe, ainda que detentora desses conceitos j familiares, uma
possibilidade de constatar empiricamente esses conceitos e ainda aprimor-los. Ademais, trouxe a
possibilidade do exerccio de um pensamento de mudana conceitual, de refutao de uma teoria
base para outras teorias, que buscam descrever o comportamento da clula em diversos meios. O
experimento redigido conseguiu de forma clara, atentar para tais objetivos da prtica de maneira a
fornecer um modo mais interessante de estudo, demonstrando a eficincia da prtica.

Referencias bibliogrficas

Roteiro das prticas 2017.2

http://www.ufrrj.br%2Finstitutos%2Fib%2Fdcf%2Fbiof%2Fprat%2Fdialise.html.doc&ved

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