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Ann Biol Clin 2007 ; 65 (4) : 385-91

Les effets toxiques des nitrates :


tude biologique chez lhomme et chez lanimal
Toxicological effects of nitrate: biological study in human and animal

S. Boukerche Rsum. Afin dvaluer les effets de la toxicit des nitrates, une tude a t
W. Aouacheri ralise sur 45 employs dun complexe de stockage et distribution des engrais
agricoles, exposs aux drivs nitrats. Une autre tude exprimentale a t
S. Saka
effectue au laboratoire sur des rats mles de genre Albinos wistar. Ces der-
Laboratoire de biochimie niers ont subi un traitement au nitrate dammonium (NH4NO3) introduit par
et microbiologie applique, Dpartement
de biochimie, Facult des sciences, gavage trois concentrations croissantes 200, 400 et 600 mg/kg de poids
Universit Badji Mokhtar, Annaba, Algrie corporel pendant 3 semaines. Les rsultats biochimiques et hmatologiques sur
<sakasaad@hotmail.com> les employs ont montr quaucune intoxication na t signale au sein de ce
complexe, malgr lobservation dinflammations urinaires chez environ 50 %
de la population. Le traitement chimique des rats provoque une variation dans
les paramtres biochimiques et biologiques : une augmentation du rapport
hpato-corporel surtout chez les rats traits par des doses importantes. De plus,
la concentration srique en glucose, cholestrol, cratinine, lactate dshydrog-
nase et en transaminases (TGO, TGP) a t augmente significativement par
rapport au tmoin chez tous les rats traits. Enfin, les rsultats obtenus mettent
en vidence le potentiel dtoxifiant exprim par la diminution du taux de
glutathion au niveau des diffrents organes tels que le foie, les reins, la rate, les
intestins et les testicules. la lumire de nos rsultats on peut conclure que :
1) lorganisme vivant peut sadapter aux faibles doses de nitrates pendant une
longue dure, ceci est observ chez les travailleurs exposs aux diffrents
drivs de nitrates ; 2) les fortes doses de nitrates entranent des variations
biologiques importantes mme si la dure dexposition est courte, ceci est
prouv chez les animaux de laboratoire.
Mots cls : nitrate dammonium, homme, rat, toxicit, glutathion

Abstract. In order to evaluate the effects of the nitrates toxicity, a study has
been carried out on 45 workers of storage and distribution agricultural manu-
res, exposed to nitrate derivatives. Another experimental study has carried out
in laboratory on male Albinos wistar rats. These latter were treated with
ammonium nitrate (NH4NO3) introduced by gavage with three increasing
concentrations 200, 400 and 600 mg/kg of body weight during three weeks.
The biochemical and hematological results on workers showed that no poiso-
ning was announced within this complex, in spite of the observation of kidneys
inflammations among about 50% of the population. The chemical treatment of
the rats causes a variation in the biochemical and biological parameters: an
increase of the hepato-somatic ratio especially in the rats treated by important
doses. Moreover, the serum concentration in glucose, cholesterol, creatinin,
doi: 10.1684/abc.2007.0136

lactate dehydrogenase and in transaminases (GOT, GPT) was increased signifi-


cantly compared to the witness in all the treated rats. At the end, the results
Article reu le 15 mars 2007, obtained highlight the detoxifier potential expressed by the reduction in the
accept le 24 avril 2007 glutathione level in the deferent organs such as the liver, the kidneys, the

Tirs part : S. Saka

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spleen, the intestines and the testicles. According to the obtained results, it can
be concluded that: (1) living organism can adapt to the lows doses of nitrate for
a long time. This is observed in the workers exposed to deferent derivatives of
nitrates; (2) high nitrate amounts involve important biological variations even
if the exposure time is short. This is proven in the laboratory animals.
Key words: ammonium nitrate, human, rat, toxicity, glutathione

Le dveloppement rapide des diverses activits technolo- nitrates, en fonction du degr de pollution des eaux souter-
giques, agricoles et industrielles est responsable de la dis- raines par les engrais nitrats.
smination de substances varies (organiques, inorgani- Les nitrates absorbs avec la nourriture sont rduits en
ques, mtalliques, radioactives) qui ont chacune un impact partie dans la salive en nitrites par des bactries, nitrites
diffrent dans lenvironnement. La pollution par ces subs- qui parviennent finalement dans le tube digestif [2]. Dans
tances menace latmosphre, le sous-sol et les ocans, le milieu gastrique acide, les nitrites peuvent ragir avec
ainsi que les espces qui y vivent. Il est donc ncessaire, des amines et des amides et former des composs
pour la protection des cosystmes, de dtecter rapide- N-nitross comme les nitrosamines et les nitrosamides,
ment les polluants et de dterminer leurs effets toxiques. qui sont ventuellement cancrognes [3]. Les nitrates et
Parmi toute une srie de xnobiotiques polluants, il se les nitrites sont eux-mmes des produits du mtabolisme
trouve que les nitrates occupent une place privilgie de lorganisme humain et se forment principalement lors
compte tenu de leurs nocivits particulires sur lenviron- de la transformation de lacide amin arginine. Chez les
nement et la sant publique. adultes, 65 70 % des nitrates ingrs sont passivement
Lion nitrate (NO3-) est constitu dazote et doxygne, il excrts par voie rnale, cependant chez les nourrissons,
rsulte de la dissociation de lacide nitrique. La plupart lexcrtion urinaire des nitrates est de 80 100 % [4, 5].
des sels de nitrate (dammonium, de potassium, de La toxicit aigu du nitrate de sodium est faible. Le nitrite
sodium) sont trs solubles dans leau. Dans dautres en revanche est toxique car il se fixe sur lhmoglobine
conditions, notamment en milieu acide, des nitrites (NO2-) pour donner la methmoglobine qui ne remplit alors plus
sont naturellement forms partir des nitrates. Les nitrates son rle de transporteur doxygne [6]. La methmoglo-
se trouvent dans tous les types dindustries : pharmaceuti- bine est rduite rversiblement en hmoglobine grce
ques, alimentaires, et galement dans lindustrie chimi- lintervention denzymes rythrocytaires : la NADPH-
que, soit comme agents oxydants dans les explosifs, soit metHb rductase et la NADH-metHb rductase avec la
comme engrais minraux massivement utiliss en agricul- participation des ractions redox du glutathion et de
ture [1]. lacide ascorbique [7]. Le glutathion rduit (GSH) est un
puissant dtoxifiant qui protge lhmoglobine et les lipi-
Les nitrates sont des nutriments importants pour les plan-
des membranaires contre les effets toxiques des diffrents
tes qui les emmagasinent. De tout temps, lhomme les a
xnobiotiques tels que les mtabolites des nitrates [8].
absorbs en consommant diffrents types de lgumes. De
nos jours, la plus grande partie des nitrates absorbs quoti- Lobjectif de ce travail a t dvaluer les effets toxiques
diennement, en moyenne de 50 100 mg (de 200 des nitrates sur certains paramtres physiologiques, bio-
400 mg pour les vgtariens) provient des lgumes, le chimiques et hmatologiques en deux parties : lune rali-
reste de leau (et dautres boissons), puis de la viande et se sur des employs de lunit de stockage et de distribu-
dautres produits carns (poissons). La quantit prsente tion des engrais nitrats et lautre tude exprimentale
dans les lgumes est fonction de lespce vgtale, de la mene au laboratoire sur des rats blancs.
quantit dengrais nitrats reue, et du moment de la
rcolte. Depuis des sicles, les nitrates se trouvent gale-
ment dans les produits dorigine animale car ils servent Matriel et mthodes
dagents conservateurs et sont utiliss, avec le sel de cui-
sine, pour le traitement des produits carns. Les sels nitra- La premire partie de cette recherche a t effectue au
ts empchent la prolifration dagents pathognes bact- sein du laboratoire central du complexe de stockage et
riens, comme les salmonelles, les staphylocoques ou distribution des engrais agricoles, sur 45 travailleurs de
lagent de botulisme. Ils contribuent de plus ce que la sexe masculin gs de 35 55 ans, dont la dure de travail
viande garde sa couleur rouge, mme aprs cuisson. Les est comprise entre 15 et 20 ans. Lanalyse des paramtres
boissons peuvent parfois apporter des quantits leves de hmatologiques a t effectue laide dun coulter

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Les intoxications par les nitrates

(T 540), le dosage des paramtres sriques a t fait par un Tableau 1. Dosage des paramtres biochimiques et
automate (BP 144). Cependant, celui des paramtres uri- hmatologiques chez les travailleurs exposs aux drivs
nitrats (chaque valeur reprsente la moyenne DS de 45
naires a t effectu en utilisant des bandelettes (TC Teco personnes).
diagnostics).
La deuxime partie de cette recherche est exprimentale et Paramtres m SD Normes
a t ralise sur 24 rats mles de la souche Albinos wis- Glucose (g/L) 0,88 0,05 0,6-1,10
tar, provenant de lInstitut Pasteur dAlger. Ils sont nour- Triglycerides (g/L) 0,60 0,03 < 1,5
ris selon un rgime alimentaire prpar daprs Upreti et Cholestrol (g/L) 1,78 0,06 < 2,0
al. [9]. Les rats ont t traits quotidiennement per os par Ure (g/L) 0,31 0,027 0,15-0,45
trois doses diffrentes de nitrate dammonium (200, 400 et Cratinine (mg/L) 8,38 0,22 6,4-10
600 mg/kg) pendant 3 semaines. Ces animaux ont t Acide urique (mg/L) 41,08 1,09 35-72
rpartis en 4 lots : 3 lots traits et un autre tmoin. Le Bilirubine (mg/L) 6,57 0,25 3-10
prlvement du sang et des organes a t fait aprs la TGO (U/L) 24,15 1,43 0-38
dcapitation des rats la fin du traitement. Les dosages TGP (U/L) 19,80 1,91 0-40
biochimiques et hmatologiques sont raliss en utilisant PAL (U/L) 135,59 4,72 98-279
des kits de commerce prts lemploi (des kits Spinreact Globules rouges (106/L) 5,023 0,06 3,80-6,20
sont utiliss pour les dosages du glucose, de la cratinine, Globules blancs (103/ L) 7,13 0,20 4-10
Lymphocytes (103/ L) 2,50 0,08 1,50-4,50
de la LDH et des transaminases ; cependant, les kits Bio-
Plaquettes (103/ L) 258,76 6,71 150-500
systems sont utiliss pour les dosages des triglycrides, du
Hmoglobine (g/dL) 13,88 0,20 11-18
cholestrol et de lure). Le glutathion tissulaire est dos
Volume Globulaire Moyen (fL) 86,60 0,65 80-95
par spectrophotomtrie selon la mthode de Weeckbeker
et Cory [10] (les ractifs proviennent de la firme Sigma).
Les rsultats sont reprsents sous forme de Tableau 2. Pourcentage de lapparition du sang, des leucocytes,
moyenne cart-type (m SD), laide du test t de Stu- du glucose et des protines dans les urines des travailleurs
dent, grce au logiciel de Minitab. exposs aux drivs nitrats (n = 45 personnes).

Paramtres Sang Leucocytes Protines Glucose


Rsultats % positifs 60,50 40 10,70 5,40

Observations chez les employs


oxalate (TGO) et de la transaminase glutamate pyruvate
Dans cette partie, on a essay dvaluer les effets toxiques (TGP) sont illustrs dans le tableau 4. Les rsultats indi-
des nitrates et des drivs nitrats sur la sant des quent une augmentation significative des concentrations
employs. Les rsultats obtenus aprs les dosages biochi- du glucose et de la cratinine et qui est proportionnelle
miques et hmatologiques (tableau 1) sont dans les nor- chaque fois la dose du nitrate dammonium administre.
mes, et aucune perturbation na t signale ce niveau. Laugmentation de la concentration du cholestrol est
Lanalyse urinaire a montr lapparition du sang chez hautement significative chez les trois lots traits. La
60 %, des leucocytes chez 40 %, des protines chez 10 % concentration en ure nest augmente quau niveau de la
et du glucose chez 5 % des travailleurs (tableau 2). dose 600 mg/kg. Cependant, il nexiste aucun changement
dans la concentration srique des triglycrides. Les activi-
Partie exprimentale sur les rats ts enzymatiques des transaminases (TGO et TGP) et de la
tude physiologique LDH augmentent avec la dose de polluant administr.
La variation du poids des diffrents organes rapports tude hmatologique
100 g de poids corporel chez les rats tmoins et traits Les rsultats obtenus sont illustrs dans le tableau 5 et
avec 200, 400 et 600 mg/kg de nitrate dammonium pen- rvlent quil nexiste pas de changement significatif du
dant 3 semaines, montre une augmentation significative nombre des globules rouges et de la teneur dhmoglobine
du rapport hpato-corporel chez les trois lots traits. chez tous les lots traits par rapport au lot tmoin.
Cependant, aucun changement significatif au niveau des
tude toxicologique
rapports rno-corporel et splno-corporel (tableau 3).
Lvaluation de la toxicit du nitrate dammonium est
tude biochimique exprime par le dosage du glutathion intracellulaire au
Les rsultats obtenus du dosage de glucose, des triglycri- niveau des diffrents organes cibles ; les rsultats sont
des, du cholestrol, de lure, de la cratinine, de la lactate reprsents dans le tableau 6. Le glutathion tissulaire a
dshydrognase (LDH), de la transaminase glutamate diminu significativement au niveau de tous les organes

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Tableau 3. Variations des rapports hpato-corporel, rno-corporel et splno-corporel chez les rats tmoins et traits quotidiennement
avec 200, 400 et 600 mg/kg de nitrate dammonium durant 3 semaines (chaque valeur reprsente la moyenne DS de 6 rats).

Rapports (%) Tmoin 200 mg/kg 400 mg/kg 600 mg/kg


Hpato-corporel 2,11 0,13 2,56 0,02* 2,63 0,08* 2,68 0,04**
Rno-corporel 0,52 0,08 0,61 0,05 0,75 0,01 0,76 0,02
Splno-corporel 0,24 0,01 0,23 0,01 0,24 0,01 0,27 0,02
* (P < 0,05) ; ** (P < 0,01) : diffrence significative par rapport aux tmoins.

Tableau 4. Concentrations des paramtres biochimiques et hmatologiques chez les rats tmoins et traits quotidiennement avec 200,
400 et 600 mg/kg de nitrate dammonium durant 3 semaines (chaque valeur reprsente la moyenne DS de 6 rats).

Paramtres Tmoin 200 mg/kg 400 mg/kg 600 mg/kg


Glucose (g/L) 0,92 0,04 1,12 0,02* 1,48 0,05** 1,54 0,03***
Triglycerides (g/L) 0,45 0,03 0,41 0,04 0,41 0,03 0,54 0,06
Cholestrol (g/L) 0,31 0,02 0,57 0,04*** 0,84 0,02*** 0,95 0,09***
Ure (g/L) 0,53 0,01 0,54 0,01 0,60 0,04 0,74 0,06*
Cratinine (mg/dL) 0,78 0,03 0,93 0,02* 1,00 0,07* 1,39 0,07**
TGO (U/L) 79,72 7,53 96,24 2,02 144,65 3,12** 166,90 5,62***
TGP (U/L) 34,88 1,64 68,89 3,22** 113,51 3,68*** 167,00 4,70***
LDH (U/L) 305,60 46,9 904,10 58,2** 618,80 65,1** 1 137,0 71,0***
* (P < 0,05) ; ** (P < 0,01) ; *** (P < 0,001) : diffrence significative par rapport aux tmoins.

Tableau 5. Dosage des paramtres hmatologiques chez les rats tmoins et traits quotidiennement avec 200, 400 et 600 mg/kg de
nitrate dammonium durant 3 semaines (chaque valeur reprsente la moyenne DS de 6 rats).

Paramtres Tmoin 200 mg/kg 400 mg/kg 600 mg/kg


Globules rouges (106/L) 8,45 0,18 8,36 0,30 8,50 0,28 8,48 0,23
Hmoglobine (g/dL) 16,13 0,86 15,94 0,40 16,26 0,32 16,14 0,21

Tableau 6. Taux du glutathion (nM/mg protide) chez les rats tmoins et traits quotidiennement avec 200, 400 et 600 mg/kg de nitrate
dammonium durant 3 semaines (chaque valeur reprsente la moyenne DS de 6 rats).

Organes Tmoin 200 mg/kg 400 mg/kg 600 mg/kg


Foie 34,46 1,04 24,62 1,00** 25,23 1,08** 21,74 1,50***
Intestins 12,29 0,47 7,61 0,66*** 6,91 0,74*** 6,02 0,25***
Reins 10,93 0,39 8,95 0,36* 8,50 0,30** 8,22 0,34**
Rate 15,91 0,77 14,06 0,33* 14,07 0,55* 13,91 0,47*
Testicules 15,85 0,14 13,57 0,43** 14,60 0,47** 10,60 0,66***
* (P < 0,05) ; ** (P < 0,01) ; *** (P < 0,001) : diffrence significative par rapport aux tmoins.

tudis : le foie, les intestins, les reins, la rate et les testi- tr que limpact nocif des xnobiotiques varie en fonction
cules. Cette diminution est proportionnelle aux doses du de lespce, de la substance, de ltat physiologique, de la
polluant administr et spcialement au niveau des organes dure dexposition, du mode dexposition et de la dose
cibles tels que le foie, les intestins et les testicules. administre. Dune faon gnrale, les agressions sont
accompagnes par une augmentation simultane du cata-
bolisme et de lanabolisme sous la dpendance de facteurs
Discussion neurohormonaux [11].

De nombreux travaux ont mis en vidence les consquen- Concernant les effets toxiques des drivs nitrats sur la
ces des agressions chimiques par des polluants chez sant humaine, la premire partie de cette tude ralise
lhomme et lanimal. Ces travaux ont tout dabord dmon- en milieu professionnel montre quaucune altration des

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paramtres biochimiques sriques et sanguins na t mie et de lhmolyse. Ces deux phnomnes sont lis et
signale chez les travailleurs malgr leur exposition chro- ont pour origine labsorption du nitrate dammonium qui
nique ces xnobiotiques (par voie cutane et par inhala- une fois absorb subit des modifications chimiques abou-
tion). Ces rsultats ont t confirms dans les travaux de tissant la formation de nitrites. Devant cette agression, le
Bonderf et Delemotte [12]. Ceci peut tre expliqu soit globule rouge dveloppe sa propre dfense grce au gluta-
par une bonne prise en charge mdicale au sein de lentre- thion qui reprsente un des lments les plus importants
prise, soit par un dveloppement de systme adaptatif de dans les globules rouges, ainsi que deux autres mcanis-
lorganisme. De plus, plusieurs tudes pidmiologiques mes de dtoxification : la NADPH-metHb rductase et la
ont tudi la mortalit par cancer chez des travailleurs NADH-metHb rductase qui peuvent rgnrer lhmo-
exposs des poussires de nitrates, le plus souvent le globine partir de la methmoglobine. Ces processus bio-
nitrate dammonium. La majorit de ces tudes sont nga- chimiques ncessitent de lATP fournie essentiellement
tives, ne relevant aucun excs significatif de tumeurs par le glucose rythrocytaire. Nous pensons donc que
notamment digestives et bronchopulmonaires [13]. Seule latteinte de lintgrit membranaire des globules rouges
une tude norvgienne de Frandrem [14] a signal une et la sortie du glucose seraient lorigine de la toxicit du
discrte lvation de la frquence des cancers gastriques nitrate. Alors, les globules rouges ayant perdu leur source
au sein dune usine de production des engrais nitrats. dnergie principale sont incapables dactiver leur systme
Par contre, cette exposition professionnelle long terme de dfense.
aux drivs nitrats provoque des dommages rnaux, illus- Les rsultats obtenus rvlent aussi une augmentation bien
trs par lapparition de leucocytes et du sang dans les claire de la concentration du cholestrol srique, cet effet
urines chez environ 50 % de la population tudie. peut tre expliqu par la rduction de la scrtion des
Plusieurs travaux ont t consacrs ltude de la toxicit hormones thyrodiennes T3 et T4 confirm par les travaux
des nitrates et des nitrites, la plupart dentre eux visent de Jahreis [21] et Simon [22]. En effet, certains troubles
comme principale cible les globules rouges [15, 16]. Ces de mtabolisme des lipides sont rapports un dysfonc-
composs peuvent avoir de graves effets, parfois mortels, tionnement thyrodien. Dans lhypothyrodie il peut y
sur la capacit de lhmoglobine transporter loxygne avoir une hyperlipmie et une hypercholestrolmie [23].
en transformant le fer ferreux en fer ferrique [17]. Ce type Dans toutes les agressions par les xnobiotiques le mta-
de toxicit sur lhmatie a t mis en vidence chez les bolisme hpatique des protines est modifi vers la pro-
mammifres telle la souris [18]. Des methmoglobinmies duction des systmes de dfense et vers la noglucoge-
(cyanose) peuvent apparatre dans les cas suivants [6] : nse. La dgradation des composs protiques hpatiques
ingestion de fortes quantits de nitrites (lgumes conte- peut expliquer laugmentation de lure et de la cratinine
nant beaucoup de nitrates), avec faute dhygine provo- srique chez les rats traits, o les protines peuvent tre
quant une contamination bactriologique ; dgrades en acides amins puis en ure et cratinine.
lorsquil survient une prolifration bactrienne nitrato- Ainsi ces acides amins forms peuvent se transformer
rductrice dans un site o habituellement la densit bact- sous laction des transaminases sriques en composs car-
rienne trs faible ne permet pas cette rduction ; boxyliques tels que lacide pyruvique [24]. Ceci implique
lorsque survient une ingestion accidentelle (ou crimi- la forte activit enzymatique de la TGO et de la TGP chez
nelle) de produits riches en nitrites. les rats traits surtout par des doses importantes du nitrate
Leffet oxydant des nitrites sur lhmoglobine est dammonium dans notre travail. De plus, laccumulation
confirm par tous les travaux entrepris sur les nitrates et du pyruvate peut expliquer laugmentation de la LDH qui
les nitrites tels ceux de Batina [19] qui a consacr plu- catalyse la rduction de ce dernier en lactate.
sieurs travaux ltude de leffet de ces composs sur les Dans ce cas on peut suggrer que la forte activit enzyma-
globules rouges du rat et qui a mis en vidence une forte tique de la TGO et de la TGP est lie leffet hpatotoxi-
methmoglobinmie. que de ce xnobiotique, sachant que le foie est lorgane
Nos rsultats indiquent une augmentation proportionnelle principal de la dtoxification parce quil contient la plu-
entre la dose des nitrates et la concentration du glucose part des enzymes du mtabolisme, en effet les concentra-
srique. Ce rsultat est confirm par les travaux de Knobe- tions de la cytochrome P450 et du glutathion sont trs
loch et al. [20]. Ceci peut tre expliqu par les travaux de leves.
Batina [19]. En effet, Batina, aprs une culture des globu- Cette perturbation du systme enzymatique hpatique a
les rouges in vitro, a procd des tests de cytotoxicit t mise en vidence indirectement par laugmentation du
avec les nitrates et les nitrites. Les nitrates provoquent un rapport hpato-corporel aprs le traitement par le nitrate
dsquilibre ionique et un besoin en ATP, pouvant sexpli- dammonium. Ce rsultat est en accord avec les travaux de
quer par une lvation du taux du glucose sanguin, et ce Batina [19] qui a montr une augmentation pondrale du
sont les nitrites qui sont lorigine de la methmoglobin- foie des rats traits aux nitrates et nitrites. Nous avons

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constat une augmentation du poids des reins qui peut tre Rfrences
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