UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA

CARRERA DE INGENIERIA QUIMICA

ESTADISTICA II

INTEGRANTES:

 Catota Erika
 Collaguazo Ximena
 Constante Yessenia
 Espinosa Katherine
 TEMA: OBTENCION DE BIOETANOL

PROBLEMA
La contaminación por medio del CO2 de los combustibles (derivados del petróleo) tiene un gran
impacto ambiental por lo que nos lleva a realizar la investigación de la obtención de bioetanol a
partir de diferentes tipos de almidones.
SOLUCION
Debido al incremento del precio del combustible y a la contaminación que este produce, una
solución para reducir este problema es la obtención de bioetanol, ya que el uso de bioetanol permite
reducir en casi 90% las emisiones de gases de efecto invernadero, contribuyendo de modo efectivo
para mitigar el cambio climático, este produce la misma cantidad de Dióxido de Carbono que la
gasolina, pero como lo emite lo consume, teniendo el potencial de producir menos emisiones de
contaminantes ya que no emite compuestos de azufre. Además, es un recurso renovable, lo que
facilita la dependencia reducida de las importaciones de petróleos.
HIPOTESIS
Los diferentes tipos de almidones varían en los grados de alcohol en el proceso de obtención de
bioetanol.
1. OBJETIVOS
1.1. General
Determinar qué tipo de almidón tiene mayor rendimiento en los grados de alcohol en el
proceso de obtención de bioetanol.
1.2. Específicos
 Determinar qué tipo de almidón produce mayor grado de alcohol en función del
tiempo de fermentación.
 Determinar mediante qué tipo de purificador se puede producir de mejor manera
bioetanol.

 Determinar qué concentración de almidón influye de una mejor manera en la

fermentación a partir de la variación de los Grados de Alcohol.

 Cuantificar si la variable de respuesta presenta influencia con respecto a los

factores a estudiar.
2. FUENTES DE VARIACIÓN
Para determinar los grados de alcohol a partir de diferentes tipos de almidón, se ha realizado
una averiguación y análisis previo de los factores que puede influir en los resultados, los
cuales han sido enlistados para a continuación dividir en dos secciones:
Factores

 Tipos de fermentadores
 Tipos de almidón
 Concentración de almidón
 Tipo de levadura
 Cantidad de levadura
 Tiempo de fermentación
  PH de la fermentación
 Tipo de purificación
 Analista
 Medidor de grados de alcohol
 Métodos de destilación
 Cantidad de grados de Alcohol
 Temperatura de Fermentación
 Velocidad de reacción.
 Condiciones ambientales.
 Presión de Vapor
 Método de Hidrolisis

2.1. Factores tratamiento

Son aquellos que generan una influencia en los resultados, por lo cual, se ejecutará el
análisis en base a estos factores.

 Tipo de almidón: Como material de estudio se utilizó almidones: maíz, cebada y

trigo, debido a su gran rendimiento en la obtención de bioetanol y sus aplicaciones
en este ámbito. (Andrade, Vega y Covelo, 2005).
 Concentración del Almidón: Se usaron tres valores en rango de (150 – 200) g/L
de los niveles de los factores a evaluar en el proceso de obtención de etanol
utilizando la estrategia de proceso SSF (Proceso de Fermentación). (Castaño, Eder,
2008).
 Tiempo de fermentación: El tiempo adecuado para la fermentación en la
obtención de bioetanol se recomienda realizarlo en un rango de tiempo de 12 a 14
horas(Castaño Eder, 2008)
2.2. Factores molestia
Son aquellos que no son de interés directo y que pueden provocar una influencia en los
resultados y aumentar la variabilidad no planificada significativamente.
Factores Bloqueo
 Equipos de Fermentación: Para el cultivo de microorganismos en condiciones
óptimas, deben ser desarrollados procedimientos de fermentación en un birreactor que
mediante manipulación genética y la regulación del metabolism la optimización del
medio de cultivo, así como el control adecuado de los factores fisicoquímicos que
afectan al rendimiento de las fermentaciones industriales. Para esto se usó dos tipos
de fermentadores: PureProcess y Bioreactor Bioflo 115

Factores Aleatorios

 Método de Destilación: Los métodos de destilación que se va a emplear son: la

destilación fraccionada y la destilación por vapor el cual es un método que sirve para
obtener el componente más volátil en forma pura, además estos métodos son más
eficientes y económicos que otros métodos.
 Medidor de Grados Alcohol: El alcoholímetro de Gay-Lussac es un tipo específico
de densímetro de flotación, con la particularidad de que está diseñado para determinar
el grado de alcohol, para lo cual se usara dos alcoholímetros.
 Factores Fijos

 Analistas: Los mismos que se deben regir a los procedimientos que se encuentran
descritos en el manual del equipo.
 PH de la fermentación: La fermentación a pH = 4, es la óptima, pues el consumo de
sustrato para este valor de pH es significativamente más alto.
 Cantidad de Levadura: la cantidad de levadura se basó en la prueba piloto,
determinando que la más óptima es el uso de 10g de Levadura.
 Tipo de Levadura: La levadura Saccharomyces cerevisiae se ha convertido en los
últimos años en un organismo seleccionado para su estudio por su biología celular y
genética. Los conocimientos fundamentales que se desprenden aun hoy en día
permiten clarificar desde una nueva óptica. Esta es la razón que se hayan producido
numerosos progresos en el conocimiento de la fermentación alcohólica.
 Temperatura de fermentación: Durante la fermentación debe controlarse la
temperatura porque durante la misma se produce un relativo aumento de esta debido
a la descomposición de los azucares que producen una reacción exotérmica, es decir
con desprendimiento de calor. La temperatura óptima para la fermentación oscila entre
(24 – 35) °C siendo 34 °C la más adecuada. Si la temperatura es muy baja la
fermentación es lenta, si la temperatura excede los 35 °C se disminuye la acción de las
levaduras y si esta aumenta por encima de los 40°C esta se puede teter debido a la
inhibición de las levaduras
 Velocidad de Reacción: La velocidad de reacción se define como la cantidad de
sustancia que reacciona por unidad de tiempo. En el transcurso de toda la
fermentación, solo se adiciona oxígeno en forma de aire y un para el control del pH,
con el fin de garantizar las condiciones óptimas de operación que permitan obtener
una alta concentración celular. La composición del medio de cultivo, la concentración
de biomasa y la concentración del metabolito cambia constantemente como resultado
del metabolismo celular. Si se trabajó con temperaturas óptimas de 37°C, se puede
obtener parámetros cinéticos, tales como la velocidad específica de crecimiento de
aproximadamente 0,188h-1 .
 Condiciones Ambientales: Las condiciones ambientales tales como la humedad, la
actividad del agua, el pH, la temperatura, la concentración y disponibilidad del sustrato, la
aireación, el tamaño de partículas y la forma de inoculación afectan significativamente
tanto el crecimiento como la formación de productos.

 Presión de Vapor: Se usa vapor porque es un eficiente portador de calor. Se produce

en la caldera y se transmite a las instalaciones cerveceras mediante un sistema de
distribución de tuberías. Durante el proceso, el vapor pierde calor y se condensa.
Preferentemente se usa el vapor a una presión entre 7 y 10 bar en la elaboración de
etanol.

 Método de Hidrolisis: La hidrolisis del almidón se llevó a cabo esto se realizó para
obtener glucosa, porque esta es la fuente de carbono (sustrato) que requiere la levadura
para crecer y poder producir el etanol.

2.3. Clasificación de Variación

Cualitativos

 Tipo de fermentador
 Tipo de Almidón
  Método de Purificación
 Condiciones ambientales.
 Tipo de levadura
 Medidor de grados de alcohol
 Analista
 Método de Destilación
 Método de Hidrolisis
Cuantitativos

 Tiempo de Fermentación
 Temperatura de Fermentación
 Concentración del Almidón
 Cantidad de levadura
 PH de la fermentación
 Presión de Vapor
 Velocidad de Reacción

2.4. Unidad experimental

Solución de almidón de maíz, trigo o cebada
3. REGLA DE ASIGNACION DE LAS UNIDADES EXPERIMENTALES

3.1. Tipo de diseño experimental

Se coloca tres niveles de los factores Tipo de almidón y concentración uno en forma
vertical y horizontal, fijando cada uno de los valores de nivel, el factor método de
purificación lo colocamos de forma aleatoria tomando en cuenta los tres tipos de almidón,
realizándose una repetición de cada observación.
3.2. Diseño Factorial.
Debido a la falta de interacciones en un modelo de diseño de cuadrado grecolatino y
latino, se procedió a trabajar con un diseño factorial en el que todos los factores
interactúen con las muestras de manera aleatoria.
4. ESPECIFICACIÓN DE MEDIDAS

4.1. Variable respuesta

Grados de Alcohol medida en °GL, es la variable respuesta de nuestro proyecto, lo cual
comprobará la cantidad de alcohol de los factores tratamiento, se optó por esta variable,
ya que esta nos suministra información sobre como los factores de estudio influyen del
contenido de bioetanol por el experimento.
Los °Gl
4.2. Materiales y Equipos.

4.2.1. Balanza analítica Rango: 0-320 g Ap. ±0,0001 g

4.2.2. Matraz Erlenmeyer: V=500 mL Ap. ±50 mL
V=50 mL Ap. ±10 mL
4.2.3. Pipetas V=25 mL Ap. ± 0,1 mL
V=5 mL Ap. ± 0, 05 mL
 4.2.4. Probetas V=250 mL Ap. ± 10 mL
V=100 mL Ap. ± 1 mL
4.2.5. Agitador de vidrio
4.2.6. Destilador de alcohol Modelo TE-012
4.2.7. Termómetro Rango: -10-110 °C Ap. ± 1 °C
4.2.8. Potenciómetro Rango: 0-14 Ap. ± 0,01
4.2.9. Papel Filtro Dilaco

4.3. Sustancias y Reactivos.

4.3.1. Agua destilada tipo 1 H2O

4.3.2. Levadura Saccharomyces cerevisiae
4.3.3. Yoduro de Potasio al 10% en volumen KI.
4.3.4. Cloruro de calcio CaCl2
4.3.5. Ácido fosfórico H3PO4
4.3.6. Acetato de sodio anhidro CH3COONa

4.4. Procedimiento

4.4.1. Solución Almidón

Se preparó una solución madre de almidón para realizar las pruebas de yodo y
azucares reductores. La solución de almidón se realizó de la siguiente manera:

 0,507 g de almidón en 50 ml de agua destilada

 Mezclar perfectamente y se almacena
4.4.2. Prueba de Yodo
La prueba de yodo se realizó con la finalidad de determinar la presencia de almidón
en la muestra. Una coloración azul-morado, por la formación de un complejo de
almidón-yodo indica un resultado positivo.
4.4.3. Prueba de Azucares Reductores.
La prueba de azucares reductores tienen como objetivo determinar la presencia de
grupos carbonilos libres (C=O), de ahí su nombre. Esto implica la oxidación del
grupo aldehído de la glucosa.
4.4.4. Hidrolisis de Almidón.
La hidrolisis se llevó acabo en dos etapas. La primera fue la reacción de la enzima
amilasa y la segunda por medio de la enzima glucoamilasa, esto se realizó para
obtener glucosa, porque esta es la fuente de carbono que requiere la levadura para
crecer y poder producir etanol.

 En el matraz de 4 L se colocaron 3L de agua

 Se pesaron 90g de los tres tipos de almidón y se colocó en dicho matraz.
 Se pesaron 6 g de CaCl2 y se colocaron en el matraz anterior
 Se esperó que la solución gelatinizara.
 Después que la temperatura alcanzara los 72°C y se colocaron 6 g de la
enzima amilasa.
 La reacción se dejó a temperatura constante durante 5 horas
 Se realizó una prueba de cuantificación de almidón por medio de la prueba
de yodo. Si la coloración observada era lila o casi blanca se podía seguir con
 la segunda etapa de la hidrolisis. De otro modo, se dejaba reaccionar por más
tiempo hasta que se presentara este color.
 Se enfrió el matraz en un baño de hielo a 4°C y se adiciono 1 mL de H3PO4
para obtener un pH de 4.2.
 Se llevó a la solución del matraz una temperatura de 60°C y adicionaron 9
mL de la enzima glucoamilasa, la reacción se dejó por 2.5 horas a
temperatura constante.
 Se realizó pruebas de azúcar reductoras.

4.4.5. Fermentación.


En el reactor de 3.25 L de volumen nominal se agregaron 2L de solución de
almidón hidrolizada, el cual es el medio de cultivo y se le agregaron 10 g de
nutrientes para levadura.
 Se inoculo al medio de cultivo del birreactor, 500 mL de la solución de levadura,
que llevaba 24 hr con inoculo.
 Se esterilizo el inoculo y se lavó perfectamente el birreactor antes de la
operación.
 Se ajustó el biorreactor a una temperatura de 30°C y una agitación de 150 rpm
 Se realizaron las pruebas de alcohol correspondientes.
4.4.6. Destilación.
Para aumentar la concentración de alcohol de la solución obtenida posterior a la
fermentación se llevaron a cabo dos etapas. Una destilación y una purificación en
las cuales se utilizó acetato de sodio anhidro.
4.4.7. Determinación de porcentaje de alcohol fue medida a partir de un decímetro, donde
podemos obtener el grado de alcohol de las muestras.

4. PLAN PILOTO
Se realizaron pruebas preliminares específica posibles errores cometidos en la
experimentación:

ERROR
Para la fermentación a distintas
concentraciones de levaduras de 6 y 8
gramos no fueron óptimos, verificados por
las mediciones de °Brix.
En la fermentación se observó una
variación mínima de pH, este es un
indicativo de la presencia de mico
organismos externos que nos afecta la
producción de bioetanol
En la destilación el porcentaje de alcohol
obtenido no cumple con especificación ya
que la configuración del equipo utilizado
llega a una concentración máxima del 81°
Gl
En la fermentación el tiempo recomendado
de 6 horas fue insuficiente para que todas
las azucares se fermentaran.
SOLUCIÓN
La cantidad de levadura adecuada es de 10
gramos y con estas variables se observa
mayor producción de etanol
Para contrarrestar la presencia de
microorganismos externos se evitó el
contacto directo con el medio ambiente en
la etapa de fermentación para así evitar un
cambio de pH.
Debido al bajo rendimiento del destilador
se remplazó el equipo por dos nuevos
destiladores teniendo una mayor eficiencia.
Por lo que se incrementó un intervalo de
tiempo siendo este de 8 a 12 horas, donde

En la hidrolisis para el cumplimiento de
la segunda etapa se realizó una prueba de
cuantificación de almidón por medio de la
prueba de yodo el mismo que indico la
falta de cuantificación del almidón.
este a su vez se puedo fermentar
favoreciendo a los grados alcohólicos.
Considerando el tiempo mínimo como 5
horas para la hidrolisis en su primera etapa
y posteriormente realizar la prueba de yodo
para comprobar la cuantificación de
almidón en la solución

5. ESPECIFICACIÓN DEL MODELO

 Modelo de efecto aleatorio:

El modelo efectuado es apropiado, ya que se quiere determinar por medio experimental
cuál de las interacciones son más efectivas
 Factores Fijos:
 Temperatura de Fermentación:
 Condiciones de almacenamiento:
 Proceso de fermentación:
 Tipo de levadura:
 Cantidad de levadura:
 Presión de Vapor:

6. ESQUEMATIZAR LOS PASOS DEL ANALISIS ESTADISTICO.

Concentración
(g/ml) 150 170 190 200
Tiempo (h) MaÍz Cebada Trigo MaÍz Cebada Trigo MaÍz Cebada Trigo MaÍz Cebada Trigo
97.02 95.51 98.37 92.96 94.07 91.90 96.46 94.03 90.82 96.63 99.74 93.68
10
97.50 96.31 94.62 94.87 91.88 93.85 94.28 93.53 92.98 96.03 92.56 92.43
92.48 95.21 95.50 95.41 95.50 91.87 97.21 96.32 94.36 93.80 93.15 91.12
12
95.33 95.33 92.89 96.17 93.12 90.64 94.80 95.77 93.39 95.61 92.67 97.03
90.80 93.09 92.15 94.96 94.00 93.08 92.91 90.85 92.46 94.13 94.91 94.62
14
96.00 92.22 93.16 95.29 96.98 94.30 91.15 92.34 91.03 93.28 94.31 92.11

7. DETERMINAR EL TAMAÑO DE LA MUESTRA.

Se estableció el tamaño de la muestra con la ayuda del programa Statgraphics. Se hizo con
un estudio de todos los datos sacando una media y desviación estándar de la muestra
proporcionando como resultados:
8. Resultados ANOVA.

Se realizó el análisis de varianza con el asistente de diseño experimental de Statgraphics.

Luego se define la variable de respuesta, y los factores de respuesta de tipo categórico, con
sus respectivos niveles cada factor a estudiar, luego se selecciona el diseño factorial, el
número de repeticiones, y se aleatorizado todos los niveles.
Una vez hecho esto se crea los datos de la matriz con los dataos aleatorizados y para ingresar
la variable de respuesta debemos ir a herramientas en la opción Simulaciones Monte Carlo y
en Generación de Número Aleatorios el software nos dará los datos de la variable de
respuesta.
 Modelo con 96 corridas con una réplica.

Tabla ANOVA

Hipótesis nulas que nos responde ANOVA

 La diferencia entre la media del Tipo de almidón es igual a 0

 La diferencia entre la media de Concentración es igual a 0
 La diferencia entre la media de los Tiempos es igual a 0
 La diferencia entre las interacciones es igual a 0

9. CONCLUSIONES

Para el tipo de almidón

 Con un valor-p de 0.0085 siendo menor a 0.001 se rechaza la Ho ya que existe resultados
muy altamente significativos entre la media de los tipos de almidón al 95% de nivel.
 Usando los tres tipos de almidón maíz, cebada, y trigo podemos decir que existe
resultados altamente significativos en el maíz dando 94,7953 grados de alcohol como
media.
 Partiendo de que la diferencia entre la media de los almidones es igual a cero se tiene
una probabilidad del 0.85% de que en el experimento por lo menos una de las medias
difiera de la media general, debido a no rechazo la Ha ya que existe resultados muy
altamente significativos entre la media de los tipos de almidón.

Para la Concentración de Almidón

 Ya que el valor-p 0.2718 es mayor a 0,01 no rechazo la Ho ya que no tengo evidencia
para decir que existe diferencia entre la media de los tipos de almidón a un nivel del
95%.
 Con las concentraciones que estamos trabajando está en el rango de 150 a 200 g/L, y
podemos decir que no existe evidencia estadística para asegurar que en dichos valores
de concentración del almidón.
 Si asumimos que la diferencia de la concentración es igual a cero, se tiene la
probabilidad del 27.18% es mayor a 0.01 no rechazo la Ho ya que no tengo evidencia
para decir que existe diferencia entre la media de los tipos de almidón.

Para el Tiempo
 Según el valor- p 0.0284 es menor a 0.05 rechazo la Ho hay evidencia para decir que
existe una influencia significativa en diferencia entre la media de los tiempos de
fermentación.
 Utilizando los tres tiempos de fermentación: 10, 12 y 14 horas nos demuestra que hay
un aumento de grados de alcohol significativamente al usar un mayor tiempo.
 Al tener un efecto estadísticamente significativo el factor de Tiempo de fermentación
y basándonos en nuestras medias tenemos que el mayor tiempo, 14 horas se obtendrá
un máximo grado de alcohol al cual deseamos obtener en la producción de bioetanol.

Para la Interacción entre Tiempo de Fermentación – Tipo de Almidón

Partiendo del supuesto de que hay interacción entre Tiempo de Fermentación-Tipo de

Almidón, se tiene una probabilidad del 78.31% de que en el experimento, la falta de
interacción de los dos factores tengan influencia en la variable de respuesta, debido a que
el valor-p 0.7831 es mayor a 0.01 no se rechaza la Ho ya que el resultado debe reportarse
como estadísticamente no significativo influyendo en la disminución de grados
alcohólicos respecto a los grados de alcohol

Para la Interacción entre Tipo de Almidón – Tiempo de Fermentación

Partiendo del supuesto de que no hay interacción entre Tipo de Almidón – Tiempo de
Fermentación, se tiene una probabilidad del 78.31 % de que en el experimento realizado,
la interacción de los dos factores tengan influencia en la variable de respuesta, ya que el
valor-p 0.7831 es mayor a 0.05 por tanto no rechazo la Ho ya que se tiene evidencia para
decir que la interacción entre el tipo de almidón y tiempo de fermentación no influye en
los grados de alcohol.

Para la Interacción entre Concentración– Tiempo de Fermentación

A partir de la interacción entre Concentración-Tiempo de Fermentación, se tiene un valor-
p de 0.0022, que en el experimento la interacción de los dos factores tengan influencia en
la variable de respuesta, debido a que mi p-valor es menor a 0.01 se rechaza la Hipótesis
nula ya que se tiene evidencia para decir que la interacción entre Concentración del almidón
y tiempo de fermentación si influyen en los grados de Alcohol en la obtención de Bioetanol.

Gráficas
CONCLUSION
Se puede observar que los puntos muestrales para el tipo de almidón de Cebada y Trigo
son dispersos a comparación del maíz donde se tiene los puntos muestrales en un rango
más pequeño

ANOVA Gráfico para Grados de Alcohol

14 12 10
Tiempo de Fermentación P = 0.0210

190 170 200 150

Concentración P = 0.2718

Trigo Cebada Maiz

Tipo de Almidón P = 0.0085

Residuos
-4.2 -2.2 -0.2 1.8 3.8 5.8

En este gráfico observamos el valor p para el análisis de medias de los tres factores de
estudio, son valores p altos por esta razón concluimos que no existe influencia de ninguno
de estos en la disminución de la concentración de coliformes fecales en aguas grises. Las
medias de temperatura se encuentran más cercanos por esta razón tiene un valor p más
alto 0,8234 que los del tipo de arcilla y tiempo.
 En la gráfica se puede observar que el tipo de almidón cebada, maíz y trigo no existe una
diferencia significativa en el valor, para el trigo existe diferencia en el valor siendo este
inferior a los demás, en el maíz la media es superior a comparación de los otros dos
valores.

Gráfico de Interacciones

97 Tiempo de Fermentación
10
12
96
14
Grados de Alcohol

95

94

93

92

91
150 170 190 200
Concentración

En la gráfica de interacciones podemos observar la interacción entre la concentración y

tiempo de fermentación como nos indicó ANOVA, donde podemos ver el cruce que existen
entre los dos factores

ELECCIONES DE NIVELES
Los niveles de los factores tratamientos se los hará por medio de interés de investigación,
basándonos en estudios ya realizados, esto es debido a una mejora del método de obtención de
bioetanol.