CINÉTICA ENZIMÁTICA

El estudio de la cinética enzimática puede producir mucha información importante,

particularmente cuando se combina otras técnicas, relacionada con el mecanismo de
acción de una enzima, la forma en que responde una enzima a cambios fisiológicos en la
concentración de substrato y cómo puede controlarse o regularse la actividad de una
enzima bajo condiciones fisiológicas.

Para los biotecnólogos interesados en el uso de enzimas aisladas o de sistemas

enzimáticos para el rompimiento de substratos (celulosa) o para la formación de
productos (jarabes ricos en fructuosa), la importancia de la cinética enzimática es clara
en la determinación de las condiciones óptimas para la actividad enzimática y para la
determinación de las rapideces de conversión óptimas. Es decir, el conocimiento de los
datos cinéticos permite diseñar el proceso catalizado por enzimas de manera que se logre
la máxima, o el máximo económico, conversión de los substratos en productos.

Ensayos enzimáticos

Para estudiar la cinética es importante crear métodos confiables y reproducibles para la

medición de la actividad enzimática en condiciones específicas. El propósito del ensayo
enzimático es medir la rapidez de formación del producto o la rapidez de la desaparición
del substrato(s) en condiciones controladas de temperatura, pH y concentración de
compuestos modificadores de la actividad.

Se usan dos tipos básicos de ensayos enzimáticos denominados ensayos continuos y

discontinuos. En cualquier caso, se debe asegurar que la rapidez inicial de la reacción se
pueda medir en presencia de una concentración de substrato(s) fija. La rapidez inicial es
importante ya que evita complicaciones debidas a la acumulación del producto y porque
la enzima puede desactivarse en el curso del ensayo. En estas condiciones, la rapidez
medida será directamente proporcional a la concentración de la enzima. Además, la
actividad se mide normalmente bajo condiciones de estado estacionario donde la
concentración del substrato es mucho mayor que la concentración de la enzima, para que
la rapidez difícilmente varíe debido a cambios en la concentración del substrato. Una
práctica común es usar una concertación de substrato por lo menos cinco veces mayor
que la Km de la enzima del substrato. Es posible estudiar la cinética de estado estacionario
o de estado pre-estacionario donde la concentración de las enzimas y del substrato(s) es
comparable, pero esto requiere equipo costoso para asegurar el mezclado rápido de los
componentes y no se analizará aquí.

𝑓𝑢𝑚𝑎𝑟𝑎𝑡𝑜 + 𝐻2 𝑂 ∈ 𝑚𝑎𝑙𝑎𝑡𝑜

Para ensayos continuos más complejos se necesita el acoplamiento o enlace de una

reacción catalizada por una enzima, la cual puede seguirse de manera continua, con la
reacción enzimática que se estudiará.

𝐷 − 𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 + 𝐴𝑇𝑃 ∈ 𝐷 − 𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 − 6 − 𝑓𝑜𝑠𝑓𝑎𝑡𝑜 + 𝐴𝐷𝑃

Ni los substratos ni los productos absorben a longitudes de onda específicas o tienen

propiedades que puedan monitorearse continuamente. Esta reacción se puede acoplar a la
reducción de NADP al añadir glucosa-6-fosfato deshidrogenasa en exceso, es decir, a
concentraciones que no limiten la rapidez de la reacción:

En esta reacción acoplada, la hexocinasa cataliza la formación de D-glucosa-6- fosfato,

la cual se reduce inmediatamente por la acción de la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa
para producir NADPH. El NADP + no absorbe a 340nm, pero el NADPH sí. En
consecuencia, la reacción se puede monitorear continuamente a 340nm.

Estos ensayos acoplados requieren que el producto de la primera reacción, la Dglucosa-

6-fosfato, sea convertida de inmediato 6-fosfogluconolactona. Es decir, la reacción
acoplada debe proceder con una rapidez mayor que la de la reacción que se desea estudiar
cinéticamente. La enzima acoplante debe estar pura, presente en concentraciones no
limitantes de la rapidez de la reacción y debe estar libre de impurezas que pudieran afectar
la actividad de cualquiera de las enzimas.

La actividad de la hexocinasa también podría medirse con un procedimiento de ensayo

discontinuo en el que la d-glucosa y la hexocinasa se mezclan en condiciones definidas,
y las muestras se extraen a intervalos precisos para la determinación de la glucosa. Estos
ensayos requieren que las muestras sean extraídas a intervalos precisos y que la reacción
sea detenida inmediatamente, por ejemplo, mediante la adicción de ácido tricloroacético
para inactivar a la enzima. Siempre que es posible, se prefieren más ensayos continuos
que los discontinuos.

Sin importar el tipo de ensayo, es necesario tomar las precauciones siguientes para
obtener datos confiables:

1) Los componentes del sistema de ensayo deben ser de la más alta pureza posible.
2) La preparación de la enzima debe estar libre de compuestos que inhiban o
interfieran con las actividades enzimáticas.
3) La enzima, el substrato(s) y el (los) producto(s), deben ser estables el tiempo que
dure el ensayo.
4) El pH y la temperatura deben mantenerse constantes mediante el uso de soluciones
amortiguadoras y termostatos, ya que estos factores afectan marcadamente la
rapidez de la reacción.
5) La rapidez de reacción medida debe ser constante durante el ensayo y debe ser
proporcional a la cantidad de enzima adicionada.
6) Debe medirse la rapidez inicial de la reacción para evitar cambios notables en la
concentración del substrato, inhibición del producto o que se invierta la reacción.

Cinética de reacciones con un substrato

La cinética enzimática simple se basa en tres principios experimentales:

1) Que el substrato, S, forma un complejo intermediario enzima-substrato, ES, con

la enzima, E.
2) Que la rapidez de la reacción a tiempo t (es decir, la rapidez de desaparición de
substrato, -ds/dt, o bien, la rapidez de formación del producto dp/dt) se representa
con la pendiente de la curva P o S = f (t). Estas pendientes varían con el tiempo
durante el curso de la reacción, debido a la desaparición del substrato. Las
mediciones cinéticas se basan generalmente en la parte lineal de la curva, es decir,
la velocidad inicial o la rapidez inicial de reacción. En esta región, la
concentración del producto es extremadamente pequeña y, en consecuencia, la
descomposición de producto a substrato es insignificante (determinado por la
constante de rapidez K2) y se puede escribir:
3) Para una concentración dada de substrato, la determinación de la variación en la
rapidez de reacción como función de la concentración de la enzima no es lineal,
sino hiperbólica. Esto se debe a que todo el substrato está en la forma de complejo
enzima-substrato, [ES], a altas concentraciones de la enzima. En consecuencia, la
rapidez inicial de la reacción como función de la concentración de la enzima
permanece constante en estas condiciones. Para mediciones de cinética es
necesario trabajar en la región lineal de la curva a baja [E] para que las rapideces
de reacción dependan de la concentración de la enzima. También se puede decir
que la concentración de la enzima debe ser muy pequeña comparada con la
concentración del substrato de tal modo que la información del complejo enzima-
substrato [ES], tiene poco o ningún efecto con la concentración de substrato.

Ecuación de Michaelis-Menten

Dado que la reacción entre la urea y la ureasa (ejemplo mencionado en la pág. 3) se

efectúa en solución acuosa, el agua obviamente está en exceso y podemos considerar
constante su concentración. Sea:

Dividiendo el numerador y el denominador de la ecuación (7-86) entre k1, obtenemos

una forma de la ecuación de Michaelis-Menten:

Donde Km es la constante de Michaelis. Si, además, representamos con Vmáx la

velocidad de reacción máxima para una concentración total de enzima dada,

La ecuación de Michaelis-Menten adopta la conocida forma:

 En la figura se muestra, para una concentración de enzima dada, una grafica d la
velocidad de desaparición del sustrato en función de la concentración del sustrato.
Cuan la concentración de sustrato es baja:

Gráfica 1. Identificación de los parámetros de Michaelis-Menten.

Si la concentración de sustrato es alta:

Consideremos el caso en que la concentración del sustrato es tal, que la velocidad de

reacción es igual a la mitad de la velocidad máxima:

Entonces

Si despejamos la constante de Michaelis de la ecuación obtenemos:

La constante Michaelis es igual a la concentración del sustrato en la velocidad de reacción
es igual a la mitad de la velocidad máxima. Los parámetros Vmáx y km caracterizan las
reacciones enzimáticas que se describen con la cinética de Michaelis-Menten. Vmáx
depende de la concentración total de la enzima, pero km no.

ACCION DE EFECTORES SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Inhibición de reacciones enzimáticas

Otro factor que influye considerablemente en las velocidades de las reacciones

catalizadas por enzimas, además pH, es la presencia de un inhibidor. Las consecuencias
más drásticas de la inhibición de enzimas se observan en los organismos vivos, donde la
inhibición de cualquier enzima específica que interviene en una secuencia metabólica
primaria hace que toda la secuencia deje de funcionar; el resultado es un daño grave o la
muerte del organismo. Por ejemplo, la inhibición de una sola enzima, citocromo oxidasa,
por el cianuro hace que se detenga el proceso de oxidación aeróbica; la muerte se presenta
en cuestión de minutos. También existen inhibidores benéficos como los que se usan en
el tratamiento de la leucemia y otras enfermedades neoplásicas.

Los tres tipos más comunes de inhibición reversible que ocurren en las reacciones
enzimáticas son la competitiva, anticompetitiva y no competitiva. La molécula de enzima
es análoga a la superficie catalítica heterogénea en cuanto a que contiene sitios activos.
Cuando ocurre inhibición competitiva, el sustrato y el inhibidor suelen ser moléculas
similares que compiten por el mismo sitio de la enzima. Ocurre inhibición anticompetitiva
cuando el inhibidor desactiva el complejo enzima-sustrato, por lo regular uniéndose a las
moléculas tanto de enzima como de sustrato del complejo. Ocurre inhibición no
competitiva en el caso d enzimas que contienen al menos dos tipos de sitios distintos. El
inhibidor se une a un solo tipo de sitio, y el sustrato, solo al otro.

La rapidez de las reacciones catalizadas por enzimas se puede modificar en presencia de

ciertos compuestos, distintos del sustrato, denominados efectores.

Estos desempeñan una función principal en la regulación del metabolismo. Hay dos clases
de efectores: activadores e inhibidores. Hay tres tipos principales de inhibición
enzimática: competitiva, incompetitiva y no competitiva.
Inhibición competitiva

El inhibidor es una sustancia con una estructura química y espacial análoga a la del
sustrato, que se une al sitio activo de la enzima inhibiendo así la unión del sustrato.

Fig. N° . Inhibición competitiva.

Gráfica 2. Grafica de Michaelis Menten para la inhibición competitiva.

Las constantes de rapidez son k1, k-1 y k2 mientras que ki es la constante de disociación
del complejo EI:
Como en ausencia del inhibidor, V=k2 [ES], entonces al sustituir [ES] obtenida de la
ecuación anterior:

[𝑙]
Esta última ecuación muestra que Km ahora esta aumentada por el termino (1 + 𝐾𝑙), lo

cual produce una disminución en la rapidez de reacción, V. El grado de inhibición

depende claramente de la concentración del sustrato [S] y del inhibidor [I].

Inhibición incompetitiva

En este casi el inhibidor se une a ES, pero no a las enzimas libre; por lo tanto, aun cuando
la concentración de sustrato sea saturante, la enzima se distribuirá entre el complejo
formador de producto ES y el complejo que contiene el inhibidor EIS, en una relación
que depende de Ki. Por lo tanto, EIS es un complejo “terminal” incapaz de dar producto
directamente. En consecuencia, Vmáx aumentará por el factor (1=I/Ki), mientras que la
Km realmente disminuirá. Esto se debe a que el inhibidor, I, “jala” la enzima hacia el
estado unido con el sustrato y Km es una medida de la habilidad del sustrato para empujar
la enzima hacia el complejo ES.

Ahora hay dos sitios de unión de la enzima, uno para el sustrato y otro para el inhibidor.

Consecuentemente
Con la ecuación de estado estacionario se puede derivar la siguiente ecuación para la
expresión de Michaelis Menten:

Por lo tanto, una inhibición incompetitiva, tanto Km como Vmáx varían en función de la
concentración de inhibidor.

Inhibición no competitiva

Un inhibidor no competitivo se puede unir a la enzima libre, E, y al complejo enzima

sustrato, ES, para formar EI e EIS. EIS no se puede descomponer para dar el producto y
la enzima.

Fig. N° . Inhibición no competitiva.

Si la concentración de EI e EIS están en equilibrio, las constantes de equilibrio para la
unión de I a E (Ki ES) son idénticas e iguales a Ki, si se supone que la presencia del
sustrato unido no afecta la unión del inhibidor. Como en el caso de la inhibición
incompetitiva, hay dos sitios de unión sobre la enzima, el sitio activo para la unión des
sustrato y un segundo sitio al cual se une el inhibidor sin importar si el sustrato ya está
unido a la enzima o no. El resultado es que la Km permanece constante mientras que la
Vmáx cambia:

Aquí se supone que EI no puede unirse al sustrato para formar EIS, o que la Ki es tan
pequeña que es insignificante. Se puede llegar a la siguiente expresión:

Gráfica 3. Gráfica de Michaelis Menten para la inhibición competitiva.

CINÉTICA ENZIMÁTICA EN LOS REACTORES

Las expresiones cinéticas utilizadas aquí comienzan con las reacciones con las reacciones
que implican un único producto sin que exista inhibición por el substrato o por el
producto. Posteriormente se introducirán los efectos del flujo no ideal de los reactantes y
las restricciones disfuncionales. La elección final de la temperatura, pH, concentración
de substrato y extensión de la conversión a los que el reactor opera dependen de un
balance económico global que tenga en cuenta los costos de operación, del sustrato, de
trabajo, auxiliares, etc, y los costos de inversión del equipo necesario. El efecto global de
esta aproximación es intentar minimizar el tamaño del reactor o la concentración de
enzima necesario para conseguir una productividad dada.

La cinética de Michaelis-Menten debe adaptarse para proporcionar una descripción

cinética de los reactores discontinuos, aunque es mejor utilizar la ecuación en forma
integrada con respecto al tiempo. Para una reacción irreversible sin inhibición que emplea
un único enzima en un reactor discontinuo en condiciones isotérmicas se tiene que:

Donde kE es la actividad máxima del enzima total en el reactor en moles reaccionados

por segundo, V e el volumen de trabajo del reactor, π es el tiempo operación y X es el
𝑆−𝑆𝑡
grado de conversión donde es la concentración inicial S de substrato y St la
𝑆

concentración después de un periodo de tiempo de reacción t. De la misma forma, para

un reactor de flujo pistón:

Donde q es la velocidad volumétrica de alimentación del substrato en segundos -1 y π es

el tiempo medio de resistencia de la solución de substrato en el reactor en segundos, de
tal forma que si se representa XS frente a 1n(1-X), la pendiente de la gráfica resultante es
igual a 2,303 veces el km aparente del enzima.

Esto tiene en cuenta el grado de conversión del substrato en producto y la velocidad de

flujo de substrato a través del reactor. Otro factor a tener en cuenta es el grado de mezcla
del fluido en el reactor, así como los eventuales efectos de los inhibidores. El enzima
localizado en la entrada del reactor está expuesto a una alta concentración de substrato
con independencia del grado de conversión final conseguido en el reactor, y así opera en
unas condiciones cinéticas efectivas de orden cero con respecto a los substratos presentes
en exceso. Sin embargo, el enzima localizado hacia la salida del reactor estará expuesto
en una concentración de substrato baja cuando el grado de conversión conseguido sea
alto, operando así en condiciones cinéticas de primer orden.

Para un reactor continuo de mezcla completa:

Cuando S/Km es bajo, es decir, cuando se ha tenido un grado de conversión alto (o se ha

usado una concentración de substrato baja) la velocidad de reacción es de primer orden,
y el tiempo de reacción requerido para obtener un grado de conversión particular es
directamente proporcional de S/Km, la reacción es esencialmente de orden cero, y en este
caso el tiempo necesario para conseguir un grado de conversión dado que es virtualmente
independiente de S/Km. para que un proceso resulte útil a nivel industrial se requiere
usualmente un alto grado de conversión de substrato en producto. Un enzima
inmovilizado opera generalmente en condiciones cinéticas de primer orden, en especial
si se consideran las altas densidades de enzima que con frecuencia se utilizan en las
preparaciones comerciales de enzimas inmovilizados. En estos casos el tiempo requerido
para conseguir un incremento relativamente pequeño del grado de conversión depende
claramente del valor de S/Km logrado en la operación, de forma que este parámetro tiene
gran importancia experimental.

Si se tienen en cuenta las ecuaciones que describen los reactores de flujo pistón y los
reactores continuos con agitación, las prestaciones de ambos tipos de reactores son
prácticamente idénticas cuando se usan concentraciones elevadas de substrato y S>Km,
mientras que a concentraciones bajas de substrato S<Km el reactor de fuljo pistón es de
20 a 30 veces más eficaz que el reactor continuo tipo tanque con agitación se el grado de
conversión necesario es alto, con la ventaja adicional de que tiene una densidad mucho
mayor de moléculas de enzima.

En los reactores en columna de relleno con flujo continuo, o e reactores con agitación, se
ha observado una importante relación entre la velocidad de flujo a través del reactor (q)
y el grado de conversión. La forma exacta de estas curvas varía en función de factores
como la extensión de inhibición por el producto, aunque debería ser constante con el
tamaño del reactor siempre que las propiedades hidrodinámicas permanezcan inalteradas.
Cuando se usan valores altos de S/Km y grados de conversión bajos el comportamiento
de ambos reactores es casi siempre idéntico. Sin embargo, con valores bajos de S/Km,
cuando el orden de reacción es mayor que cero, las prestaciones de los reactores tubulares
son más favorables, incluso en gran proporción, comparadas con las de los reactores de
mezcla completa. En este caso, se pueden obtener grados de conversión altos a
velocidades de flujo mucho más altas en los reactores de flujo pistón que en los de mezcla
completa, en tanto que en otras formas de trabajo se obtienen valores comparables.

En cada reactor la cantidad de enzima activo es la que determina la extensión de la

reacción. Por tanto, lo reactor deben compararse en base a las cantidades de enzima que
necesitan para llevar a cabo una reacción en particular. En la figura 3.18 se representa la
cantidad de enzima necesario para lograr un grado de conversión dado en un reactor
continuo con agitación comparado con la cantidad de enzima requerido en un reactor con
columna empaquetada para diversas concentraciones de substrato. Los valores extremos
son idénticos para los tamaños de reactor de flujo pistón y con agitación continua
necesarios para obtener la misma cantidad de producto, con reacciones de orden cero y
uno, cuando no se produce cambios de volumen ni existe inhibición. En los reactores
discontinuos la cantidad de enzima requerido puede ser mayor que en los reactores
continuos por la pérdida experimentada entre lotes. Si α es la proporción del tiempo de
operación de un reactor continuo en la que el reactor discontinuo está operando, la
cantidad de enzima y por tanto el tamaño del reactor requerido para dar una productividad
global igual a la del reactor de flujo pistón (P) debe ser:

Operación Ideal del reactor

Características como las concentraciones finales de sustrato, de producto y de biomasa y

el tiempo requerido para la conversión pueden calcularse, para los diferentes esquemas
de reacción, mediante balances de materia. Para un sistema general de reacción es posible
relacionar las velocidades de cambios de masas de los componentes del sistema con la
velocidad de reacción mediante la ecuación:

Donde M es la masa del componente A en el reactor, t el tiempo, Mˆ i es el causal másico

de A que entra al reactor, Mˆ o el caudal másico de A que sale del reactor, RG es la
velocidad másica de generación de A por reacción y RC la velocidad másica de consumo
de A por reacción.

Cinética enzimática en Reactores discontinuos.

Los reactores discontinuos tienen la forma tradicional de reactor, como por ejemplo los
usados en cervecería, y son muy adecuados para el uso de enzimas solubles, o cuando se
requiere u volumen de producción pequeño o la producción es infrecuente. En general
consisten en un tanque donde se mezcla el substrato o el enzima y una vez alcanzado el
grado de reacción deseado el contenido del reactor se descarga. Las desventajas de estos
reactores discontinuos se deben a los cambios en las condiciones de operación durante la
reacción, por lo que requieren un control más complejo de proceso. Otra dificultad es
también el mantenimiento de un buen grado de mezcla en reactores con mayor escala de
producción, debido a la imposibilidad de asegurar una entrada de potencia proporcional
al aumento de tamaño de reactor.

Otros problemas que se presentan en los procesos discontinuos son las variaciones en la
calidad del producto, el tiempo de paso entre las reacciones discontinuas, la demanda
discontinua de servicios y equipo auxiliar y trabajo, y también la imposibilidad de
reutilizar el enzima o la tendencia a perderlo durante su recuperación entre dos lotes
(aunque también se puede usar de forma semicontinua). Estas desventajas pueden ser
secundarias especialmente cuando se necesita una buena transferencia de masa o de gases.
Por ejemplo, le producción de ácido 6-aminopenicilánico se hace en un reactor
discontinuo con agitación que contiene penicilina acilasa inmovilizada, neutralizándose
el ácido formado durante la reacción mediante la adición continua de álcalis. En la
industria el reactor que se utiliza más frecuentemente es el de columna con flujo pistón.
En varias aplicaciones en sistemas discontinuos de los enzimas, como por ejemplo en la
producción de extracto de malta o en la industria cervecera, es necesario que exista una
actividad enzimática elevada durante la reacción y que no quede enzima activo residual
en el producto, lo que generalmente se consigue incrementando la temperatura del reactor
de forma que la ultimas moléculas de substrato se consuman justo antes de que se
desnaturalicen la ultimas moléculas de enzima.

A. Operación discontinua de un reactor de mezcla perfecta

Los procesos discontinuos operan en sistemas cerrados de manera que el sustrato se añade
al comienzo del proceso y los productos son retirados sólo al finalizar el mismo. Las
reacciones aerobias no son operaciones discontinuas en el sentido estricto de la palabra.
La baja solubilidad del oxígeno en el medio acuoso significa que éste debe suministrarse
de manera continuada mientras se elimina el dióxido de carbono y otros gases producidos
en el proceso. Sin embargo, los reactores en los que no existe ni entrada ni salida de
líquidos se consideran como discontinuos. Si no existen fugas o evaporación en el reactor,
el volumen de líquido en los reactores discontinuos puede considerarse constante.
 Fig. N° .Esquema de un reactor enzimático discontinuo agitado.
Cinética enzimática en reactores de flujo continuo

A. Reactor De Mezcla Perfecta

Los biorreactores operan de forma continua en algunas industrias de bioprocesos tales

como destilerías, en la producción de levadura de panadería y tratamiento de residuos, y
en ciertas conversiones de tipo enzimático. Si el reactor está bien mezclado, la corriente
de producto posee la misma composición que el líquido presente en el reactor. Por lo
tanto, cuando se utilizan los reactores continuos con células o enzimas libremente
suspendidos, el catalizador es continuamente extraído del reactor en la corriente de
producto. Para las enzimas, este es un serio problema ya que el catalizador no se produce
en la reacción mientras que en los cultivos de celulares el crecimiento suple las células
que son eliminadas del reactor. Los reactores continuos utilizan enzimas libres
únicamente si la enzima es barata y puede añadirse continuamente si la enzima es barata
y puede añadirse continuamente con el fin de mantener constante la concentración de
catalizador en el reactor.
 Fig. N° .Gráfica de un tanque agitado de flujo continuo.
Con enzimas más caras, la operación en continuo es más factible si se trabaja con enzimas
inmovilizadas y retenidas dentro del reactor. Los reactores continuos de mezcla perfecta
se conocen generalmente mediante siglas CSTR, que significan reactor de tanque agitado
continuo. Algunas veces se utiliza también el término CSTF para expresar el fermentador
de tanque agitado continuo. Los parámetros de operación característicos en los reactores
continuos son la velocidad de dilución D y el tiempo medio de residencia τ. Estos
parámetros están relacionados de la siguiente manera:

En la operación de un reactor continuo, la cantidad de material que puede procesarse en

un determinado periodo de tiempo viene expresado por el caudal, F. Por lo tanto, para
una determinada capacidad de tratamiento, el tamaño del reactor V y el capital y los costes
de operación a él asociados son mínimos cuando τ se hace tan pequeño como sea posible.
La teoría del reactor continuo permite calcular relaciones entre τ (o D) y las
concentraciones de sustrato, producto y células en el reactor en estado estacionario.

Reacción enzimática

Apliquemos la ecuación siguiente al sustrato limitante en reactor

enzimático continuo que opera en estado estacionario. El caudal másico de sustrato que
entra al reactor, Mi, es igual a Fs mientras que el caudal másico de sustrato que sale del
reactor, Mo, es igual a Fs. Como en el reactor no se genera sustrato RG=0. La velocidad
de consumo de sustrato Rc es igual a la velocidad volumétrica de reacción v multiplicada
por V, donde v tiene expresada por la ecuación V=V’máx. La parte izquierda es cero
porque el sistema se encuentra en estado estacionario. Por lo tanto, el balance de materia
en estado estacionario para el sustrato en una reacción enzimática continua es:

Para reacciones con enzimas libres se supondrá que la perdida de enzima en la corriente
de producto se repone inmediatamente, por lo que Vmáx permanece constante y se
alcanza el estado estacionario. Dividiendo por V y aplicando la definición de velocidad
de dilución de la ecuación D=F/V se obtiene:

Si Vmáx, Km y Si son conocidos, la ecuación anterior puede utilizarse directamente para

calcular la velocidad de dilución necesaria para alcanzar una determinada conversión de
sustrato. La concentración de producto en estado estacionario puede calcularse a partir de
la estequiométrica.