UNIVERSIDAD NACIONAL DE

TRUJILLO
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL
DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

“EFECTO
“EFECTO DEDELALA LUZ
LUZ EN EN LA GERMINACIÓN
LA GERMINACIÓN DE
ESPORAS Y DESARROLLO
DE ESPORAS DEL LA GAMETOFITO
DE Pityrogramma trifoliata
FILAMENTOSO DE Pityrogramma trifoliata
(PTERIDACEAE) ”
(PTERIDACEAE) ”

TESIS
PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE
BIÓLOGO

AUTOR: Br. MARY EMILY MIRANDA DIESTRA

ASESOR: Dr. FREDDY PELÁEZ PELÁEZ
TRUJILLO – PERU
2015
AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
2014
AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

Dr. ORLANDO MOISES GONZALES NIEVES

RECTOR

Dr. RUBÉN VERA VÉLIZ

VICERRECTOR ACADÉMICO

Dr. WEIDER PORTOCARRERO CÁRDENAS

VICERRECTOR ADMINISTRATIVO

Dr. ESTEBAN ILICH ZERPA

SECRETARIO GENERAL

ii
 AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Dr. JOSÉ MOSTACERO LEÓN

DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Dr. WILLIAM ZELADA ESTRAVER

SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Dr. FREDDY PELÁEZ PELÁEZ

DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL DE CIENCIAS

BIOLÓGICAS

DR. FREDDY MEJIA COICO.

JEFE DEL DEPARTAMENTO DE LA ESCUELA ACADÉMICA

PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

iii
 PRESENTACIÓN

SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:

En cumplimiento con las disposiciones vigentes en el reglamento de grados y títulos de

la Universidad Nacional de Trujillo, someto a vuestra consideración la presente tesis

titulada: Efecto de la luz en la germinación de esporas y desarrollo del gametofito

filamentoso de Pityrogramma trifoliata (Pteridaceae), con lo cual estoy cumpliendo con

uno de los requisitos indispensables para optar el Título Profesional de Biólogo.

Trujillo, mayo del 2015.

Br. Miranda Diestra Mary Emily

iv
 DEL ASESOR

El que suscribe, profesor asesor de la presente tesis titulada: Efecto de la luz en

la germinación de esporas y desarrollo del gametofito filamentoso de Pityrogramma

trifoliata (Pteridaceae).

CERTIFICA:

Que la investigación ha sido desarrollada en conformidad con su

correspondiente proyecto y las orientaciones pertinentes; por tal razón el informe ha

sido redactado con mi asesoramiento, acogiendo las observaciones y sugerencias

alcanzadas, por lo que autorizo a la Br. Miranda Diestra Mary Emily, continuar con su

procedimiento según sus fines.

Dr. Freddy Peláez Peláez

ASESOR

v
 JURADO DICTAMINADOR

_________________________________
Dr. Elmer Alvitez Izquierdo
PRESIDENTE

________________________________
Blga. Narda Alarcón Rojas
SECRETARIO

________________________________
Dr. Freddy Peláez Peláez
VOCAL

vi
 APROBACIÓN

Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que

la presente tesis titulada: Efecto de la luz en la germinación de esporas y desarrollo del

gametofito filamentoso de Pityrogramma trifoliata (Pteridaceae), ha cumplido con los

requerimientos formales y fundamentales, siendo aprobada por:

_________________________________
Dr. Elmer Alvitez Izquierdo
PRESIDENTE

________________________________
Blga. Narda Alarcón Rojas
SECRETARIO

__________________________________
Dr. Freddy Peláez Peláez
VOCAL

vii
 DEDICATORIA

A Dios por haberme permitido llegar a

culminar este gran pasó en mi vida y
haberme dado salud, además de su infinita
bondad y amor.

A mi madre Lucinda y a mi padre Wilson, por

darme la vida, por su amor, por haberme apoyado
en todo momento, por sus consejos, sus valores,
que me ha permitido ser una persona de bien, pero
más que nada gracias por darme una carrera para
mi futuro, todo esto se los debo a ustedes.

A mi hermano Wilson, quien estuvo en

los momentos más difíciles y alegres de
mí vida, te quiero mucho.

A esposo Daniel, quien ha estado conmigo incluso

en los momentos más difíciles. Este proyecto no
fue fácil, pero estuviste motivándome y
ayudándome hasta donde tus alcances lo
permitían, te lo agradezco mucho.

A mi hija Ariana, quien es el motor y

motivo que me impulsa a seguir y ser mejor

cada día de mi vida.

viii
 AGRADECIMIENTO

A la Universidad Nacional de Trujillo, a los

docentes de la Facultad de Ciencias
Biológicas, por las enseñanzas brindadas
durante los cinco años de formación personal,
académica y profesional.

Al profesor asesor Dr. Freddy Peláez, por

compartir sin recelo sus conocimientos, por
desear que sus alumnos siempre continúen
creciendo. Gracias por apoyarme en la
orientación, elaboración y culminación de la tesis
y por incentivar los deseos de investigación.

A mis amigos Robert, Anghely y Nancy,

quienes estuvieron en el inicio y término de la
ejecución de la tesis, gracias a su apoyo
brindado en cada momento y sobre todo
gracias por sus consejos.

ix
 RESUMEN

En el presente estudio, se determinó el efecto de la luz en la germinación de

esporas y desarrollo del gametofito filamentoso de Pityrogramma trifoliata
(PTERIDACEAE), evaluando su desarrollo vegetativo mediante observaciones y
registros diarios a cada tratamiento en función del tiempo de desarrollo, utilizando
cuatro tratamientos diferentes (En ausencia de luz “oscuridad” y en presencia de luz: 8
Watt; 15Watt y 27 Watt); con cuatro repeticiones cada uno. En todos los sistemas se
consideró un fotoperiodo de 12 horas luz/ 12 horas oscuridad).

Las esporas fueron sembradas sobre papel filtro, sobre una base de esponja
humedecida, en cajas Petri y regadas con agua destilada, posteriormente fueron
ubicadas en cada sistema, Considerándose como indicador de geminación la aparición
de la primera célula protálica. También se registró el número de esporas germinadas, y
tiempo de duración del crecimiento del gametofito filamentoso, según la intensidad
luminosa.

Los resultados obtenidos muestran diferencias significativas entre los

tratamientos, las esporas germinan y tienen un rápido crecimiento del gametofito
filamentoso, en menor tiempo con un nivel de luz de 27watt, la diferencia radica en los
niveles de luz de 8watt y 15watt en los cuales las esporas terminaron de germinar hasta
el décimo día, y el crecimiento del gametofito filamentoso fue más lento en estos
tratamientos, así también en el tratamiento expuesto a oscuridad no hubo germinación
considerándose a las esporas fotoblasticas positivas, con una temperatura de 30 ± 2 °C
en todos los tratamientos.

PALABRAS CLAVE: Pityrogramma trifoliata, germinación, esporas, gametofito

filamentoso.

x
 ABSTRACT

In this study, the effect of the light decided in the germination of spores and
development of the filamentous gametophyte of Pityrogramma trifoliata
(PTERIDACEAE), evaluating his vegetative development by means of observations
and daily records to every treatment depending on the time of development, using four
different treatments (In absence of light "darkness" and in presence of light: 8 Watt;
15Watt and 27 Watt); with four repetitions each one. In all the systems darkness was
considered to be a photoperiod of 12 hours luz/12 hours).

The spores were sowed on paper I filter, on a base of moistened sponge, in boxes
Petri and watered with distilled water, later they were located in every system, Being
Considered to be an indicator of gemination the appearance of the first cell protálica.
Also there was registered the number of germinated spores, and time of duration of the
growth of the filamentous gametophyte, according to the luminous intensity.

The obtained results show significant differences between the treatments, the
spores germinate and have a rapid growth of the filamentous gametophyte, in minor
time with a level of light of 27watt, the difference takes root in the levels of light of
8watt and 15watt in which the spores stopped germinating until the tenth day, and the
growth of the filamentous gametophyte was slower in these treatments, this way also in
the treatment exposed to darkness there was no germination being considered to the
spores fotoblasticas positive, with a temperature of 30 ± 2 °C in all the treatments.

KEY WORDS: Pityrogramma trifoliata, germination, spores, gametofito filamentoso.

xi
 INDICE

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ..................... ii

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO .................... iii

PRESENTACIÓN ........................................................................................................... iv

DEL ASESOR ...................................................................................................................v

JURADO DICTAMINADOR ........................................................................................ vi

APROBACIÓN .............................................................................................................. vii

DEDICATORIA ............................................................................................................ viii

AGRADECIMIENTO ..................................................................................................... ix

RESUMEN ........................................................................................................................x

ABSTRACT .................................................................................................................... xi

INDICE ........................................................................................................................... xii

INTRODUCCIÓN .............................................................................................................1

MATERIALES Y MÉTODOS..........................................................................................6

RESULTADOS ...............................................................................................................11

DISCUSIÓN ...................................................................................................................21

CONCLUSIONES ...........................................................................................................23

REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA .................................................................................24

ANEXOS .........................................................................................................................28

xii
 I. INTRODUCCIÒN

Las pteridofitas o helechos y plantas afines, como tradicionalmente

se denominaban, constituyen un grupo totalmente artificial y parafilético. Estas plantas

ahora están clasificadas en dos grandes grupos monofiléticos: Lycophyta

(Licopodiofitas), que presentan micrófilas, esporangios axilares en las hojas con

dehiscencia distal y completa y Monilophyta (monilofitas) o helechos, con megáfilas y

esporangios variados, pero nunca axilares (Smith, et al., 2006).

En la actualidad se calcula que existen de 10 000 a 12 000 especies de Pteridofitos

reunidos en 232 géneros y 38 familias (Smith, et al., 2005). Estas plantas se distribuyen

desde las selvas tropicales hasta los círculos polares, pero son más diversas y

abundantes en los bosques tropicales húmedos de las zonas montañosas, entre los 1500

y 2500 metros, aunque pueden crecer en hábitats secos y soleados (Riba, et al., 2002).

El Perú tiene 1195 especies de Pteridophyta entre nativas y adventicias (Smith, et al.,

2005). , abarcando a la mayoría de géneros de América y alrededor de un tercio de las

especies del Neotrópico (Tryon, et al., 1994).

Las pteridofitas son plantas vasculares en donde el gametofito y el esporofito son

fisiológicamente independientes uno del otro en la madurez, el gametofito, también

llamado prótalo, es pequeño e inconspicuo, y muy sensible a los cambios

microambientales y a presiones de selección del medio, sin embargo, esta fase es

esencial por la variabilidad genética, promoviendo adaptaciones en estas plantas, en ella

se ubican las estructuras reproductoras que son los arquegonios y anteridios. Los

anteridios son más o menos globosos y contienen a los anterozoides los cuales son

liberados cuando han alcanzado la madurez y se desplazan para fecundar a la ovocélula

y formar el cigoto, el cual iniciará al embrión y éste al esporofito (Cronquist, 1991).

Las esporas de los helechos son estructuras microscópicas unicelulares, y su

producción puede ser inmensa, como es el caso de Pteridium aquilinum, en el cual una

hoja puede producir aproximadamente 1 gramo (300 millones de esporas), en Dicksonia

antarctica 750 millones. Pero a pesar de esta gran cantidad de esporas no todas llegan a

producir esporofitos, siendo numerosos los factores que las limitan (Raghavan, 1989).

La viabilidad de las esporas y la tasa de crecimiento de los gametofitos, son

factores básicos para un exitoso establecimiento de los helechos en un nuevo hábitat

después de la dispersión. Estos factores están controlados por propiedades intrínsecas

(genotipo, edad y latencia) y por factores extrínsecos (pH suelo, humedad, temperatura,

luz y competidores) (Pérez-García y Reyes, 1993; Raghavan, 1989). Siendo estos

últimos quienes juegan un papel determinante, en este sentido se ha señalado que la luz

y la temperatura han sido los factores físicos considerados más importantes (Brum y

Randi, 2002).

Pityrogramma es un género de aproximadamente 17 especies, la mayoría de

América tropical, doce especies son americanas. (Mickel y Smith, 2004).

2
 Pityrogramma trifoliata, se caracteriza por tener rizoma corto, cubierto de

escamas lanceoladas con hojas aglomeradas o raramente separadas, de 0,5 a 1 m de

largo; pecíolo de 20 a 30 cm de largo, escamoso en la base, surcado por encima; lámina

pinnada a bipinnada, lanceolado-elongada, de 40 a 80 cm de largo por 8 a 15 cm de

ancho. De amplia distribución en américa tropical y subtropical. Esta especie y otros

helechos que se encuentran en el extremo norte de Chile, alcanzan en esta zona, el

límite sur de su distribución natural en Sudamérica (Rodríguez, 1995).

Martínez (2010), señala que la germinación de esporas de helechos alcanzan un

periodo de 3 y 7 días después de la siembra; Escamilla et al. (2008), trata del genero

Pityrogramma, siendo la primera aportación que se tiene para el conocimiento de la

biología del género, en el cual la germinación de esporas fue entre los 9 y 16 días.

La fase sexual de algunas pocas especies de helechos es conocida por los trabajos

de Farlow (1874), Goebel (1930), Steil (1933), Mehra (1938) y Nayar y Kaur

(1971).Así como los trabajos realizados sobre el desarrollo y la morfología del

gametofito y esporofito de helechos, realizados por, Mendoza et al. (1996) y Mendoza

et al. (1997).

Pérez-García y Mendoza-Ruiz (2009), en un estudio comparativo de la fase sexual

de ocho especies del género Blechnum, describen que las esporas de ambas especies son

fotoblásticas positivas, debido a que no germinaron después de 100 días en la oscuridad.

Sin embargo se ha descrito que la germinación de esporas se satura con altos niveles de

cantidad de luz entre los que se puede citar el realizado por Brum y Randi (2002), en

3
donde se encontró que las esporas de Rumohra adiantiformis saturaron su germinación

con alta cantidad de luz.

Bunning y Mohr (1955) descubrieron que al iluminar las esporas con luz roja se

inducia la germinación pero las mismas esporas inhibían la germinación si se exponían

a una luz rojo-lejano. Entre los trabajos que abarcan el efecto que tienen ciertos factores

como la luz y temperatura en el proceso de germinación y desarrollo del gametofito, se

encuentran los realizados por López (2013), Mendoza, (1999), Alarcón-Rojas y Peláez-

Peláez (2008), en los cuales las esporas expuestas a luz, germinaron entre los 4 a 8 días,

alcanzando así la fase filamentosa entre los 8 a 10 días.

Pérez-García et al. (2007) evaluaron la sensibilidad de esporas de cuatro especies

de helechos tropicales a diferentes calidades de luz, encontrando que ninguna espora

germinó bajo luz con calidad rojo-lejano ni en oscuridad, pero la germinación fue alta

en los tratamientos de luz blanca.

Así también los helechos al igual que las demás plantas cumplen funciones

medioambientales diversas. Algunos helechos que se han caracterizado por su

utilización en el control medioambiental incluyen a los géneros Pteris (como P. vittata)

y Pityrogramma (como P. calomelanos), que se utilizan como fito-remediadores para

controlar la contaminación del agua, por medio de la absorción de arsénico y selenio,

etc. (Navarrete et al., 2006; Rathinasabapathi et al., 2006), por lo cual es necesario y de

gran importancia conocer ciertos aspectos de la biología de este género.

4
 Y Frente a la problemática existente de la producción tradicional, la cual es lenta

y poco flexible en el campo laboral. Y teniendo en cuenta que no se tiene información

suficiente sobre este género. Se considera necesario el estudio de esta especie que se

cultiva ocasionalmente como ornamental, buscando un mayor rendimiento en la

producción de esporas de este helecho a partir de la primera célula protálica y de esta

manera permitiendo la conservación y cultivo, especialmente aquellas especies que se

encuentran en vías de extinción en nuestro país.

En el presente estudio, se analizó el efecto que ejerce la intensidad luminosa sobre

la germinación de esporas y el tiempo del desarrollo del gametofito filamentoso de

Pityrogramma trifoliata en condiciones de laboratorio.

5
 II. MATERIALES Y MÉTODOS

MATERIAL BIOLÓGICO:

Se colectaron ejemplares fértiles de Pityrogramma trifoliata (PTERIDACEAE),

en el distrito de Poroto, provincia de Trujillo, departamento de La Libertad. Los

ejemplares colectados fueron llevados al Laboratorio de Botánica (Fig. 1.). Un ejemplar

fue seleccionado para ser identificado en el herbarium truxillense (HUT).

Fig. 1. Ejemplar fértil de Pityrogramma trifoliata, recolectado en el área de estudio.

6
OBTENCIÓN DE ESPORAS:

De las frondas se extrajeron foliolos que presentaron soros maduros, los cuales

fueron colocados en un sobre de papel, en un periodo de cuatro días, para el

desprendimiento de las esporas y luego separarlas de los esporangios con ayuda de un

pincel fino (Fig. 2.). Luego de hacer obtenido las esporas, estas fueron puestas en sobres

de papel y se mantuvieron en refrigeración, hasta el momento de la siembra (Fig. 3.).

Fig. 2. Extracción de foliolos que presentaron soros maduros, separados de los

esporangios con ayuda de un pincel fino.

Fig. 3. Esporas colocadas en sobres de papel hasta el momento de la siembra.

7
PREPARACION DE TRATAMIENTOS:

Para ello se utilizaron cajas de Tecnopor (80x42x40cm.

Se midió la intensidad luminosa para cada tratamiento utilizando un medidor

digital de luz “CEM” modelo DT1309, usando focos ahorradores de luz blanca de

8, 15 y 27 WATTS.

Las cajas de Tecnopor fueron acondicionadas para cada tratamiento como:

I. Ausencia de luz: se estableció una caja completamente en

oscuridad, en la que cada placa Petri fue cubierta con

papel aluminio.

II. 8WATT: se instaló un foco con 32.5 cm de distancia a la

placa Petri; y la intensidad luminosa fue de 2.49 Kilolux.

III. 15WATT: se instaló un foco con 29.5 cm de distancia a la

placa Petri; y la intensidad luminosa fue de 4.16Kilolux.

IV. 27WATT: se instaló un foco con 27.5 cm de distancia a

la placa Petri; y la intensidad luminosa fue de 6.26

Kilolux.

En cada sistema se mantuvo una temperatura de 30 ± 2 °C y humedad relativa de 50 a

52%.

8
Utilizando un programador digital “DT1 MASTERCLEAR” se mantuvo un fotoperiodo

de 12 horas luz/ 12 horas oscuridad en todos los sistemas.

SIEMBRA DE ESPORAS:

La siembra se realizó en cajas Petri de 60x15mm. Las cuales fueron previamente

esterilizadas en una estufa, en la que se colocó papel filtro Whatman N°1 sobre una base

de esponja humedecida. En cada papel filtro se trazó cinco círculos de 3 mm de

diámetro, donde se colocaron 20 esporas por círculo, obteniendo un total de 100 esporas

por caja Petri y en total se hicieron cuatro repeticiones observándose 400 esporas.

EVALUACIÓN DE LA GERMINACIÓN:

 Se evaluó desde el cuarto día interdiariamente, utilizando un

microscopio binocular “Leica”.

 Se utilizó como indicador de germinación la presencia de la primera

célula protálica (inicio de germinación).

9
EVALUACIÓN DEL TIEMPO DEL DESARROLLO DEL GAMETOFITO

FILAMENTOSO:

 Se evaluó después de la aparición de la primera célula protálica, al

empezar a dividirse transversalmente formando un filamento

uniseriado (6 células), hasta la formación del primer tabique

transversal, para iniciar la formación del filamento biseriado, dando

origen a la fase laminar.

ANÁLISIS DE DATOS:

Los datos obtenidos fueron procesados para determinar Promedios, Desviación

Estándar y Análisis de Varianza (ANAVA) con una probabilidad de error del 5%.

Como existieron diferencias significativas se aplicó la Prueba de Comparación

Múltiple de TUKEY con una probabilidad de error del 5%, mediante el programa

estadístico Statgraphic 5.2.

10
 III.RESULTADOS

Las esporas de Pityrogramma trifoliata (PTERIDACEAE) son de apertura trilete

(Fig. 4.), de forma tetraédrica- globosa, superficialmente granuladas irregularmente, son

de color naranja brillante, no clorofílicas.

Fig. 4. Espora de Pityrogramma trifoliata, sin germinar.

11
 En esta especie la germinación de las esporas se inicia el cuarto día después de

haber sido sembradas, diferenciándose primero la célula rizoidal corta, hialina y sin

cloroplastos; posteriormente emerge la célula prótalica, que es perpendicular a la

rizoidal (Fig. 5.), con numerosos cloroplastos, conservando la cubierta de la espora.

Fig. 5. Aparición de la primera célula protálica de Pityrogramma trifoliata (del cuarto al

décimo día después de la siembra)

El tiempo de germinación de las esporas de Pityrogramma trifoliata (Pteridaceae)

difiere de acuerdo a los cuatro tratamientos (Fig. 6.), es así que en el tratamiento I

(Oscuridad), hasta los 100 días de evaluadas las esporas no germinaron, en los

12
tratamientos II (8 W - 2.49 Kilolux) y III (15 W - 4.16Kilolux), las esporas empezaron a

germinar entre los 4 a 10 días después de la siembra, y en el tratamientos IV (27 W -

6.26 Kilolux), la germinación se inició en un periodo comprendido entre los 4 y 6 días

desde la siembra.

Fig. 6. Días de Inicio y Término de germinación de las esporas de Pityrogramma

trifoliata (PTERIDACEAE) a diferentes intensidades de luz, en los tratamientos I

(Oscuridad); II (30 ± 2 °C / 8 W - 2.49 Kilolux), III (30 ± 2 °C / 15 W - 4.16Kilolux) y

IV (30 ± 2 °C /27 W - 6.26 Kilolux).

13
 El porcentaje de germinación de las esporas de Pityrogramma trifoliata varía

desde 68 % (tratamiento II, 8 W - 2.49 Kilolux), hasta un valor de 91.5 % (tratamiento

IV, 27 W - 6.26 Kilolux) (Fig. 7.), a diferencia del tratamiento I (oscuridad), donde las

esporas no germinaron hasta los 100 días de evaluadas.

Fig.7. Porcentaje de la germinación de las esporas de Pityrogramma trifoliata

(PTERIDACEAE) a diferentes intensidades de luz, en los tratamientos I (Oscuridad); II

(30 ± 2 °C / 8 W - 2.49 Kilolux), III (30 ± 2 °C / 15 W - 4.16Kilolux) y IV (30 ± 2 °C

/27 W - 6.26 Kilolux).

14
 Entre los valores obtenidos en los porcentajes de germinación de las esporas de P.

trifoliata, existe una diferencia estadísticamente significativa entre la media de

Porcentaje de germinación entre un nivel de Tratamientos y otro, puesto que el valor-P

es menor que 0.05 (P = 0.0000), con un nivel del 95 % de confianza, como se muestra

en la tabla 1.

Tabla 1. Análisis de varianza (ANAVA) para Porcentaje de Germinación de esporas de

Pityrogramma trifoliata (PTERIDACEAE) a diferentes intensidades de luz, en los

tratamientos I (Oscuridad); II (30 ± 2 °C / 8 W - 2.49 Kilolux), III (30 ± 2 °C / 15 W -

4.16Kilolux) y IV (30 ± 2 °C /27 W - 6.26 Kilolux).

Fuente Suma de G Cuadrado Razón-F Valor-P

Cuadrados l Medio

Entre 14186.1 3 4728.69 6304.92 0.0000

grupos

Intra 6.0 8 0.75

grupos

Total 14192.1 1

(Corr.) 1

15
 En el Método de la Diferencia Significativa Honesta de Tukey (DSH) para

Porcentaje de Germinación de esporas de P. trifoliata, en los cuatro tratamientos se

identificaron 3 grupos homogéneos según la alineación de las columnas; entre los cuales

no existen diferencias estadísticamente significativas entre aquellos niveles que

compartan una misma columna de X's, con una probabilidad de error del 5%, como se

detalla en la tabla 2.

Tabla 2. Método de la Diferencia Significativa Honesta de Tukey (DSH) para

Porcentaje de Germinación de esporas de Pityrogramma trifoliata (PTERIDACEAE) a

diferentes intensidades de luz, en los tratamientos I (Oscuridad); II (30 ± 2 °C / 8 W -

2.49 Kilolux), III (30 ± 2 °C / 15 W - 4.16Kilolux) y IV (30 ± 2 °C /27 W - 6.26

Kilolux).

Tratamientos Casos Media Grupos Homogéneos

T1 3 0.0 X

T2 3 68.0 X

T3 3 70.0 X

T4 3 91.5 X

16
 De tal manera, no existen diferencias estadísticamente significativas entre el

tratamiento II (8 W - 2.49 Kilolux) y III (15 W - 4.16 Kilolux), a diferencia de la

comparación de tratamientos entre 8 W, 15 W y 27 W, en los que sí hay diferencias

estadísticamente significativas con un nivel de 95 % de confianza, como se observa en

la tabla 3.

Tabla 3. Método de la Diferencia Significativa Honesta de Tukey (DSH) para

Porcentaje de Germinación de esporas de Pityrogrammatrifoliata (PTERIDACEAE) a

diferentes intensidades de luz, en los tratamientos I (Oscuridad); II (30 ± 2 °C / 8 W -

2.49 Kilolux), III (30 ± 2 °C / 15 W - 4.16Kilolux) y IV (30 ± 2 °C /27 W - 6.26

Kilolux).

Contraste Sig. Diferencia +/- Límites

T1 - T2 * -68.0 2.2636

T1 - T3 * -70.0 2.2636

T1 - T4 * -91.5 2.2636

T2 - T3 -2.0 2.2636

T2 - T4 * -23.5 2.2636

T3 - T4 * -21.5 2.2636

* Indica una diferencia significativa.

17
 La germinación de esta especie es de tipo Vittaria, ya que exhiben un patrón de

desarrollo en el que la primera división celular de la espora es perpendicular a su eje

polar, seguida por la división de la célula protálica inicial por una pared paralela al eje

polar. Como resultado de las divisiones de la primera célula protálica, entre los seis y

diez días se forma un filamento uniseriado conformado por seis células irregulares

clorofílicas, finalizando de esta manera la fase filamentosa. (Figs. 8,9 y 10).

Fig. 8. Gametofito filamentoso de Pityrogramma trifoliata, con cuatro células

clorofílicas.

18
 Fig. 9. Gametofito filamentoso de Pityrogramma trifoliata, con cinco células

clorofílicas.

Fig. 10. Gametofito filamentoso de Pityrogramma trifoliata, completa con seis células

clorofílicas (Del décimo al dieciochoavo día después de la siembra).

19
 El tiempo de inicio y termino del desarrollo del gametofito filamentoso de

Pityrogramma trifoliata varía entre los tres tratamientos (8Watt, 15 Watt y 27 Watt),

desde una duración de 8, 6 y 3 días respectivamente, como se muestra en la tabla 4.

Tabla 4. Duración del crecimiento del gametofito filamentoso de Pityrogramma

trifoliata (PTERIDACEAE), según la intensidad luminosa

N° DE DIAS

INICIO TERMINO

(FASE ( FASE

TRATAMIENTOS FILAMENTOSA) FILAMENTOSA) DURACIÓN

TRATAMIENTO

II (8 Watt) 11 19 8

TRATAMIENTO

III (15 Watt) 11 17 6

TRATAMIENTO

IV (27 Watt) 7 10 3

20
 IV. DISCUSIÓN

Por diversos factores como la luz, la temperatura, la humedad, el pH, entre otros;

las fases del desarrollo de los helechos se ven influenciados (Raghavan, 1989). El efecto

de la luz sobre la inducción de la germinación de esporas de helechos, ha sido estudiada

extensivamente, estableciéndose que este factor promueve la germinación de esporas

por una respuesta de pigmentos denominados fitocromos. La germinación fitocromo

dependiente puede ser fotorreversible anteponiendo una irradiación con un espectro rojo

lejano, y puede ser fotoirreversible irradiando brevemente con luz azul o UV (Brum y

Randi, 2002).

Las esporas de Pityrogramma trifoliata necesitaron luz para germinar, pues hasta

los 60 días de evaluadas ninguna espora germinó bajo completa oscuridad (Tratamiento

I). Al igual que otras especies de helechos estudiadas, se ha informado la existencia de

fotoblastismo positivo, como Onoclea sensibilis (Wayne y Hepler, 1984),

Pityrogramma sp. y Diplazium sp. (Pérez-García et al., 1982) y Dryopteris paleacea

(Haupt y Psaras, 1989).

El tiempo de inicio de germinación es muy variable en el tratamiento IV – 27 Watt

(6.26 Kilolux), donde la germinación inició entre los 4 a 6 días y los tratamientos II - 8

Watt (2.49 Kilolux) y III – 15 Watt (4.16 Kilolux), en los que las esporas germinaron

entre los 4 a 10 días después de la siembra. Pues la intensidad luminosa conjuntamente

con el agua, son los factores encargados de elevar la permeabilidad de la membrana,

provocando que la luz active al fitocromo, y este desencadene una serie de reacciones

21
que estimulan la primera división mitótica de la espora. El primer ejemplo típico de

tales fenómenos fue encontrado en Pteris. vittata (Furuya et al., 1997), quienes

sostienen que al menos tres fotorreacciones participan en la germinación de las esporas,

dos de las cuales son controladas por el fitocromo.

Es así que la germinación se incrementó y el tiempo de desarrollo del gametofito

filamentoso de P. trifoliata se acorto en una duración de tres días, con una intensidad

de luz recibida de 6.26 Kilolux (27 Watt), alcanzando un porcentaje de germinación de

91.5%, y se inhibió en oscuridad. Estos resultados confirman que las esporas necesitan

luz para germinar y para el desarrollo de su ciclo. El patrón de germinación de la

especie bajo estudio fue similar al descrito para el helecho Rumohra adiantiformis, pues

las esporas mostraron nula germinación en los tratamientos de oscuridad e incremento

su germinación con alta cantidad de luz (Brum y Randi, 2002).

El crecimiento del gametofito filamentoso fue acelerado en condiciones de mayor

intensidad luminosa (tratamiento IV: 27 W – 6.26 Kilolux), teniendo esta fase una

duración de tres días, a diferencia de los otros tratamientos (II: 8W – 2.49 Kilolux y II:

15W – 4.16 Kilolux), en los cuales la fase alcanzó una duración entre 6 y 8 dias

respectivamente, al igual que estudios realizados en este género como Pityrogramma

calomelanos, en el que el desarrollo del ciclo y el crecimiento del gametofito fue

rápido.(Escamilla et al., 2008).

22
 V. CONCLUSIONES

Las esporas de Pityrogramma trifoliata requieren luz para germinar; es decir, son

fotoblásticas positivas, ya que ninguna espora germinó en oscuridad. Así mismo, se

demostró que existe una relación directa entre el incremento de intensidad luminosa y el

incremento en el porcentaje de germinación, alcanzando un 91.5 % de esporas

geminadas en el tratamiento con 6, 26 kilolux de intensidad luminosa.

Las esporas de Pityrogramma trifoliata, sometidas a mayor intensidad luminosa

(6, 26 kilolux), iniciaron el proceso de germinación en un periodo de entre 4 a 6 días

después de la siembra, a diferencia, de aquellos tratamientos donde la intensidad

luminosa era menor, el inicio de la germinación se presentó al día decimo después de la

siembra.

. El desarrollo del gametofito filamentoso de Pityrogramma trifoliata, también se

ve influenciado por la intensidad luminosa, pues se ha demostrado que mientras mayor

sea ésta variable, el gametofito filamentoso alcanza su desarrollo en menor tiempo,

siendo tan sólo de 3 días para el tratamiento de mayor intensidad (6, 26 kilolux).

23
 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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27
Anexos
Anexo 1. Colecta de ejemplares fértiles de Pityrogramma trifoliata (Pteridaceae), en el

distrito de Poroto, provincia de Trujillo, departamento de La Libertad.

Anexo 2. Muestras colectadas en la prensa botánica, posteriormente identificadas en el

Herbarium Truxillense (HUT), Herbario de la Universidad Nacional de Trujillo

Anexo 3. Ejemplares fértiles puestos en sobres, hasta el momento de la siembra.

Anexo 4. Acondicionamiento de cajas de Tecnopor para cada tratamiento.

 Anexo 5. Culminación del sistema, para cada tratamiento.

Anexo 6. Extracción de foliolos que presentaron soros maduros, separados de los

esporangios con ayuda de un pincel fino.

 Anexo 7. Esporas obtenidas puestas en Cajas Petri.

Anexo 8. Cajas Petri, acondicionadas con papel filtro sobre una base de esponja

humedecida.
Anexo 9. Cinco círculos de 3 mm de diámetro trazados en cada papel filtro.

Anexo 10. Experiencia desarrollada en condiciones de laboratorio.

Anexo 11. Siembra de esporas en cada uno de los círculos trazados en la caja Petri.

Anexo 12. Siembra de esporas en cada uno de los círculos trazados en la caja Petri.
Anexo 13. Se colocaron 20 esporas en cada círculo, obteniendo un total de 100

esporas por caja Petri.

Anexo 14. Rotulado de las cuatro repeticiones de cada tratamiento.

Anexo 15. Cajas Petri, sometidas a condiciones de oscuridad, cubiertas con papel

aluminio.
 TRATAMIENTO I : OSCURIDAD
DIAS DE INCIO
Nº DE Nº DE Y TERMINO DE TOTAL DE
REPETICIÓN CIRCULOS GERMINACIÓN Nº ESPORAS
(N=20) 4 100 TOTAL GERMINADAS
1 0 0 0
2 0 0 0
1 0
3 0 0 0
4 0 0 0
5 0 0 0
1 0 0 0
2 0 0 0
2 3 0 0 0 0
4 0 0 0
5 0 0 0
1 0 0 0
2 0 0 0
3 3 0 0 0 0
4 0 0 0
5 0 0 0
1 0 0 0
2 0 0 0
4 3 0 0 0 0
4 0 0 0
5 0 0 0

Anexo 16. Número de esporas germinadas en el tratamiento I (Oscuridad), del

cuarto a los 100 días después de la siembra.

 TRATAMIENTO II: 8 W - 2.49 KILOLUX

DIAS DE INCIO Y TERMINO Nº TOTAL DE

Nº DE Nº DE CIRCULOS DE GERMINACIÓN TOTAL ESPORAS
REPETICIÓN (N=20) GERMINADAS
4 6 8 10

1 9 0 0 4 13

1 2 6 2 5 0 13 69

3 7 2 1 0 10

4 6 3 3 5 17

5 8 2 6 0 16

1 6 0 2 4 12

2 2 13 1 1 0 15 66

3 4 1 3 0 8

4 10 4 2 0 16

5 7 2 5 1 15

1 11 3 1 0 14

3 2 9 7 0 0 16 71

3 2 0 10 1 13

4 6 3 5 2 16

5 5 3 4 0 12

1 5 4 1 0 10

4 2 4 2 7 2 15 66

3 4 3 9 0 16

4 4 6 4 0 14

5 2 6 1 2 11

Anexo 17. Número de esporas germinadas en el tratamiento II (30 ± 2 °C / 8 W - 2.49

Kilolux, del cuarto al décimo día después de la siembra.
 TRATAMIENTO III : 15 W - 4.16 KILOLUX

DIAS DE INCIO Y TERMINO

Nº DE Nº DE DE GERMINACIÓN TOTAL DE
REPETICIÓN CIRCULOS Nº ESPORAS
( N = 20) TOTAL GERMINADAS
4 6 8 10

1 3 1 2 1 7

1 2 2 6 12 0 20 71

3 6 2 5 6 19

4 3 3 4 1 11

5 10 4 0 0 14

1 6 5 5 1 17

2 2 7 1 3 1 12 71

3 4 4 0 2 10

4 4 2 6 0 12

5 7 4 9 0 20

1 8 3 0 0 11

3 2 8 0 6 2 16 70

3 13 3 1 0 17

4 10 1 4 1 16

5 2 8 0 4 10

1 1 2 7 0 10

4 2 1 2 8 1 12 68

3 0 3 11 0 14

4 0 10 10 0 20

5 0 3 9 0 12

Anexo 18. Número de esporas germinadas en el tratamiento III (30 ± 2 °C / 15 W -

4.16 Kilolux), del cuarto al décimo día después de la siembra.

 TRATAMIENTO IV : 27 W - 6.26 KILOLUX

DIAS DE INCIO Y
Nº DE Nº DE CIRCULOS TERMINO DE
REPETICIÓN (N=20) GERMINACIÓN Nº TOTAL TOTAL DE
ESPORAS
4 6 GERMINADAS

1 12 4 16

1 2 13 6 19 93

3 11 8 19

4 19 0 19

5 11 9 20

1 18 0 18

2 2 15 4 19 89

3 13 1 14

4 16 4 20

5 15 3 18

1 20 0 20

3 2 19 0 19 93

3 11 6 17

4 13 6 19

5 17 1 18

1 19 0 19

4 2 12 8 20 91

3 13 5 18

4 10 8 18

5 12 4 16

Anexo 19. Número de esporas germinadas en el tratamiento IV (30 ± 2 °C /27 W -

6.26 Kilolux), del cuarto al sexto día después de la siembra.

TRATAMIENTOS I II III IV

PROMEDIO (X) 0 68 70 91.5

PORCENTAJE (%) 0 68 70 91.5

Anexo 20. Promedio y Porcentaje de germinación de las esporas de Pityrogramma

trifoliata (Pteridaceae) en los tratamientos I (Oscuridad); II (30 ± 2 °C / 8 W - 2.49

Kilolux), III (30 ± 2 °C / 15 W - 4.16Kilolux) y IV (30 ± 2 °C /27 W - 6.2