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Seminario 7
ANÁLISIS DE MACRONUTRIENTES: PROTEÍNAS, LÍPIDOS E HIDRATOS DE
CARBONO
ANÁLISIS DE PROTEÍNAS
Las proteínas son el constituyente principal de las células y resultan imprescindibles para
el crecimiento, la reparación y la continua renovación de los tejidos corporales. Además tienen
también funciones reguladoras vitales y pueden ser utilizadas con fines energéticos. El contenido
en proteínas (y de otros macro y micronutrientes) debe reflejarse en la etiqueta en la sección
referente al etiquetado de propiedades nutritivas. Para llevar a cabo este fin, se deben realizar
las determinaciones analíticas de dicho nutriente.
El método tiene tres etapas: digestión, destilación y valoración. La digestión (1) consiste
en realizar una mineralización de la muestra, con el objeto de transformar el nitrógeno orgánico
en nitrógeno amoniacal en medio ácido (NH4+ utilizando ácido sulfúrico). Posteriormente, se
separa por destilación (2) en medio alcalino como NH3. Finalmente, este NH3 se determina
volumétricamente mediante una valoración ácido-base (3). El amoniaco se puede recoger en HCl
en exceso y valorar en HCl no consumido con NaOH hasta el viraje del rojo de metilo. También se
puede recoger el amoniaco en una disolución de ácido bórico (H3BO3) y posteriormente valorar
el borato (H2BO3-) generado hasta el viraje del verde de bromocresol utilizando HCl.
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Seminario 7 Análisis de macronutrientes: proteínas, lípidos e hidratos de carbono
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Seminario 7 Análisis de macronutrientes: proteínas, lípidos e hidratos de carbono
ANÁLISIS DE LÍPIDOS
Los lípidos son un grupo de compuestos de estructura heterogénea que tienen en común
su liposolubilidad en disolventes orgánicos apolares. Los lípidos en el organismo cumplen una
función energética (aportan 9 kcal/g), función plástica (forman parte de las membranas celulares,
protegen la integridad de la piel, y son indispensables para el crecimiento y regeneración de los
tejidos) y función reguladora (aportan ácidos grasos esenciales, actúan como vehículos de
vitaminas liposolubles y ayudan a mantener la temperatura corporal).
La fracción lipídica de los alimentos es la parte del alimento que se puede extraer
mediante un disolvente orgánico apolar (hexano, éter etílico, cloroformo, etc). La extracción se
puede hacer de forma directa, con un disolvente orgánico apolar cuando hay cantidades notables
de lípidos, o previa hidrólisis, cuando la fracción lipídica está asociada a otras moléculas como
proteínas y glúcidos.
a) Métodos directos
Se extrae la fracción lipídica con disolventes orgánicos apolares. El disolvente orgánico se evapora
posteriormente y se determina la cantidad de lípidos por gravimetría, expresando el resultado en
tanto por ciento de grasa (peso/peso), es decir, gramos de grasa en 100 g de alimento. Dentro de
los métodos directos, se puede distinguir la extracción de alimentos sólidos o líquidos.
Para la extracción de la grasa de un alimento líquido, se puede usar un método en continuo
(método Palkin) o en discontinuo utilizando embudos de decantación y realizando la
extracción por etapas. Tras la extracción se evapora el disolvente utilizado y se determina
la cantidad de lípidos por gravimetría.
Cuando el cuerpo extractor se llena del líquido extractivo, éste se vacía por el sifón lateral
interno (E) y desemboca en el matraz inferior (A). El disolvente orgánico se va reciclando
durante el proceso, mientras los lípidos se van concentrando en el matraz inferior. Una vez
finalizado el proceso, se evapora el disolvente al vacío y se determina la cantidad de lípidos
por gravimetría. El método Soxhlet no es un método adecuado si posteriormente se desea
analizar la calidad de los lípidos, ya que al hacer la extracción en caliente, la fracción lipídica
se modifica principalmente por oxidación.
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Hidratos de carbono
asimilables = 100 – (% agua + % proteínas + % lípidos + % cenizas + % fibra)
De manera más particular, y en función del tipo de azúcar a determinar, existen diversos métodos
para su determinación:
- Determinación de azúcares directamente reductores
- Determinación de azúcares no directamente reductores pero hidrolizables
- Determinación de azúcares no reductores y no hidrolizables
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Este método se basa en una reacción redox entre el azúcar reductor (con función aldehído)
y una solución de Cu2+, en medio básico y con tartrato. El medio básico enoliza los azúcares y el
tartrato impide la precipitación del Cu2+. El Cu2+ se reduce a Cu+, que precipita en forma de Cu2O,
de color rojo ladrillo. La reacción no tiene estequiometría definida, por lo que hay que calcular el
factor de Fehling (estandarización del reactivo), es decir, los gramos de glucosa necesarios para
reducir un determinado volumen de Fehling, realizando para ello la valoración de una solución
patrón de azúcar (glucosa).
Debido a que estos azúcares (como la sacarosa) no son reductores (no tiene OH libre, sino
enlazado), su determinación se realiza con los métodos descritos anteriormente, previa hidrólisis.
Una vez calculada la cantidad de monosacáridos, es necesario realizar una conversión de sacarosa
mediante la relación de pesos moleculares, teniendo en cuenta a su vez que la sacarosa produce
2 moles de monosacáridos:
Dentro de este grupo de azúcares se encuentra la fibra. Hay varios métodos para su
determinación, como son:
- Método colorimétrico de Southgate
- Método basado en el uso de detergentes, por valoraciones
- Método enzimático, que permiten determinar de manera separada tanto la fibra soluble
como no soluble
- Método Weende, menos utilizado actualmente
- Métodos cromatográficos, menos utilizados actualmente
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OBJETO
EJERCICIOS
1. Calcular el factor de un licor de Fehling con los datos siguientes: 10 ml del licor son
reducidos por 9.8 ml de una solución de glucosa del 0.4857% (p/v).
2. Se pesan 10 g de un polvo que sólo contiene un azúcar reductor (glucosa). Se lleva a 100
ml con agua destilada. Se toma una alícuota de 20 ml y se diluye nuevamente a 100 ml. Se
realiza el método Fehling y para reducir 10 ml del licor (F=0.053) se gastan 8 ml de esta
última dilución. Calcúlese la riqueza de glucosa del polvo.
4. 2.6 g de una harina de arroz se someten al método Kjeldahl. El NH3 producido se recoge
sobre 35 ml de HCl 0.1 M, y el exceso de HCl necesita 15.6 mL de NaOH 0.1 M para su
neutralización. ¿Cuál es el porcentaje de proteínas en dicha harina?