DETERMINACIÓN DE HIERRO EN VINOS MEDIANTE ESPECTROSCOPÍA

DE ABSORCIÓN ATÓMICA CON LLAMA

- ¿Cuál es el fundamento de la técnica?

Se basa en promover los electrones de los átomos a orbitales más altos

mediante la absorción de radiación de una determinada frecuencia (longitud de
onda). Esta longitud de onda, es característica para cada átomo. Así, es
posible calcular la cantidad de radiación absorbida y con ese dato se podrá
obtener la concentración del analito en la muestra.

- Dibujar un esquema con los componentes principales del instrumento

de espectroscopía de absorción atómica (AAS) utilizado.

- ¿Qué fuente de excitación se ha utilizado? ¿Qué fuente de excitación se

utilizaría en el caso de espectroscopía de emisión atómica (AES)?

........................

- Explicar el tipo de sistema de atomización que se ha utilizado. Comente

otra posible alternativa de atomización.

Se ha empleado un sistema de atomización por llama, así, la muestra, al pasar

a través de la llama, se atomiza y los átomos absorben la radiación atómica.

- ¿Qué tipo de calibración se va a utilizar? ¿Por qué? Explique cómo se

lleva a cabo.

Se realizan dos tipos de calibración, una empleando el método de adición

estándar (para evitar el efecto matriz) y la otra no.

Para preparar las disoluciones con el método de adición, se mantiene

constante el volumen de muestra y se varía el volumen de patrón, enrasando
finalmente de manera que todas las disoluciones tengan el mismo volumen.
DETERMINACIÓN FLUORIMÉTRICA DE QUININA EN UN AGUA TÓNICA

- ¿Cuál es el fundamento de la técnica?

Algunas sustancias emiten radiación visible cuando son iluminadas con luz UV.
Si la emisión cesa al cesar la fuente de excitación, el fenómeno se denomina
fluorescencia. La intensidad de radiación fluorescente se puede relacionar con
la concentración de la sustancia. La quinina es una de esas sustancias.

- Dibujar un esquema con los componentes principales del

espectrofluorímetro utilizado en la medida de fluorescencia.

- ¿Por qué se mide la radiación de fluorescencia con una disposición en

ángulo recto respecto a la radiación de excitación?

Porque cuando la muestra es excitada, ésta emite radiación en todas las

direcciones del espacio, sin embargo la luz que emite suele ser detectada con
mayor facilidad si forma un ángulo recto con la radiación de excitación. Así,
suelen colocarse los monocromadores formando un ángulo recto con respecto
a la trayectoria del haz para limitar las contribuciones del propio haz incidente.

- Explicar el fenómeno conocido como desplazamiento de Stokes.

Las bandas de fluorescencia molecular están formadas principalmente por

bandas que tienen longitudes de onda más largas y , por tanto, energías menores
que la banda de radiación responsable de su excitación. Este desplazamiento
hacia longitudes de onda mayores se llama desplazamiento de Stokes.

- Comentar algunos factores que influyen en la medida de fluorescencia,

potenciándola o produciendo una disminución de la misma.

1.- Rendimiento cuántico: El rendimiento cuántico o la eficacia cuántica de la

fluorescencia es simplemente la relación entre el número de moléculas que
emiten fluorescencia respecto al número total de moléculas excitadas.
2.- Estructura: La fluorescencia más intensa y la más útil es la que presentan los
compuestos que contienen grupos funcionales aromáticos.

3.- Rigidez estructural: Empíricamente se encuentra que la fluorescencia está

particularmente favorecida en moléculas que poseen estructuras rígidas.

4.- Temperatura y disolvente: La eficacia cuántica de la fluorescencia disminuye

en muchas moléculas con el aumento de la temperatura, ya que el aumento de
la frecuencia de las colisiones a temperatura elevada hace aumentar la
probabilidad de desactivación no radiante ( conversión externa ). Una
disminución en la viscosidad del disolvente también aumenta la probabilidad de
conversión externa y produce el mismo resultado.

5.- Efecto del pH: La fluorescencia de un compuesto aromático depende

normalmente del pH. Tanto la longitud de onda como la intensidad de emisión
son probablemente diferentes para la forma ionizada y no ionizada del
compuesto. Por lo tanto será muy frecuente en los métodos fluorimétricos el
control estricto del pH.
6.- Efecto de la concentración: La potencia de la radiación fluorescente F es
proporcional a la potencia radiante del haz de excitación que es absorbido por el
sistema.

DETERMINACION Y CUANTIFICACION DE COMPUESTOS VOLÁTILES

DEL AROMA MEDIANTE CROMATOGRAFÍA DE GASES.

- ¿Cuál es el fundamento de la técnica?

La cromatografía de gases es una técnica en la cual la muestra se inyecta en

una fase móvil, un gas inerte cuya única función es transportar el analito a
través de la columna cromatográfica que separa lso componentes de la mezcla.
Estos componentes saldrán de la columna a distintos tiempos dependiendo de
su afinidad con la fase estacionaria y pasarán por un detector adecuado.

- Dibujar un esquema con los componentes principales del instrumento

de cromatografía de gases utilizado.
- ¿Qué función tiene la columna cromatográfica?

En ella ocurre la separación y, consecuentemente, los procesos físico-químicos en los

que se basa la misma. Cada analito sale de la columna a un tiempo definido (tiempo de
retención) que varía en función de la afinidad del mismo por la fase estacionaria, la
temperatura y el flujo del gas portador (o gas de arrastre) que constituye la fase móvil.
En cuanto al control de temperatura en la columna, sabemos que a menor temperatura,
la separación será mejor pero el tiempo de análisis será mayor, por eso, lo más
adecuado es trabajar a distintas temperaturas (temperatura programada) para obtener
una mejor resolución de los picos cromatográficos.

- ¿Qué significa trabajar a temperatura isoterma o con gradiente de

temperatura? Explicar las diferencias.

Si trabajamos con temperatura isoterma, la temperatura en la columna no varía

durante todo el proceso de separación, a diferencia de si trabajamos en gradiente,
proceso en el cual se programan distintas temperaturas en la columna.

- Explicar cómo es la separación de dos compuestos, A y B, si tienen una

resolución Rs=1

En cromatografía de gases, la resolución es la medida cuantitativa de la eficacia de la

columna a la hora de separar compuestos, en este caso, dos compuestos A y B.
Atendiendo a la siguiente fórmula:

𝑡𝑟& − 𝑡𝑟(
𝑅" =
𝑊( + 𝑊&
2

Cuanto mayor sea el valor de la resolución (obtenido a partir de la fórmula anterior),

mejor es la separación. Lo ideal que se intenta alcanzar es obtener un valor de
resolución máximo en un tiempo mínimo. A partir de 1,5 se considera una buena
separación.

DETERMINACIÓN DE HIERRO (II) EN COMPRIMIDOS MEDIANTE

ANALISIS POR INYECCIÓN EN FLUJO.

- ¿Cuál es el fundamento de la técnica?

La técnica de a FIA se basa en la inyección de la muestra que contiene el analito,

en una corriente de un líquido en movimiento. Al entrar en contacto con este, y
debido al flujo laminar existente, la muestra se eluye en la corriente. Esto hace
que la muestra se disperse. Cuando la muestra llega al detector, este mide su
correspondiente grado de dispersión. En función del grado de dispersión de la
muestra, se emite una señal que está directamente relacionada con la
concentración de analito en la muestra.

- Dibujar un esquema con los componentes principales del instrumento

de análisis por inyección en flujo (FIA) utilizado.

- Explicar qué tipo de técnica es la colorimetría

La colorimetría es un tipo de método analítico espectrométrico en el que se

estudia la medida de colores y se desarrollan métodos para la cuantificación de
color, es decir, para obtener valores numéricos de color. Se basa en la medida
de la absorción de radiación visible por superficies coloreadas. Depende sobre
todo de la intensidad del rayo incidente. A mayor intensidad, mayor intensidad
de luz transmitida.

- ¿Cómo influye el caudal de flujo en el sistema FIA a las medidas

analíticas?

Un aumento en el caudal de flujo, supone una disminución de la dispersión de

la mezcla, y por lo tanto, supone a su vez una disminución de tiempo de
arranque (tiempo que tarda la FIA en empezar a codificar las señales), y en
consecuencia, un aumento de la anchura del pico.
- Explicar qué se entiende por fiagrama

Un fiagrama es un gráfico que representa la evolución del proceso de inyección

de flujo. Mediante representar la señal analítica frente al tiempo, y aparecerán
unos picos cuya altura dependerá de la concentración de analito, y cuya
anchura dependerá de la dispersión de este en el flujo de la fia.

IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE CAFEÍNA POR

CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN (HPLC)

¿Cuál es el fundamento de la técnica?

Se basa en la separación de dos o más componentes de una muestra,

mediante la utilización de dos fases, una móvil y una estacionaria no polar
(fase reversa).

Dibujar un esquema con los componentes principales del instrumento de

cromatografía líquida (HPLC) utilizado.

Explicar la separación mediante HPLC trabajando en gradiente.

En la elución en gradiente se varía la composición de la FM durante el análisis.

Es decir un gradiente normal de una cromatografía de fase reversa puede
empezar a un 5% de disolvente y progresar de forma lineal hasta un 50% en 25
minutos. El gradiente utilizado varía en función de la hidrofobicidad del
compuesto. El gradiente separa los componentes de la muestra como una
función de la afinidad del compuesto por la fase móvil utilizada respecto a la
afinidad por la fase estacionaria.
Se inyecta la muestra en la fase móvil, así, cada analito avanzará con una
velocidad diferente dependiendo de su afinidad a las fases. Estas interacciones
químicas determinan el tiempo en realizar el recorrido por la columna de cada
compuesto, así cada analito saldrá de la columna con un tiempo diferente, es
decir, están separados.

Explicar las diferencias entre fase normal e inversa. ¿Qué modo se utiliza
en esta práctica?

Las diferencias radican en la polaridad de cada una de las fases. En la fase

normal, la FE es polar y la FM no polar o poco polar. Sin embargo, en la Fase
reversa la FE es NO polar y la FM es polar. En la práctica realizada se emplea
la fase reversa.

Explicar las diferencias encontradas entre una columna utilizada en GC y

otra en HPLC.

En la CG no se varía la composición trabajando en gradiente, sino que varía la

temperatura. En HPLC varía la composición de la fase móvil.

La FM de la CG es un gas, mientras que en HPLC es un líquido.

DETERMINACIÓN DE Fe(II) EN UN PREPARADO FARMACÉUTICO

MEDIANTE VALORACIÓN CON KMnO4

¿Cuál es el fundamento de la técnica?

Es una valoración REDOX, en la cuál se reduce el manganeso y se oxida el

hierro

¿Qué tipo de reacciones tienen lugar?

MnO4- + 8 H+ + 5e- à Mn2+ + 4 H2O

Fe+2 à Fe+3 + e-

MnO4- + 8H+ + 5Fe2+ à Mn2+ + 4 H2O + 5 Fe3+

Explicar que le ocurre al KMnO4 en la reacción y que produce en el Fe2+

Lo que le ocurre al KMnO4 es que se reduce el Mn+7 y se oxida el Fe2+ a

Fe3+
¿Qué tipo de indicador es utilizado?

KMnO4, que actúa como valorante e indicador, ya que tiene un color violeta
intenso característico

¿Cómo se calcula la concentración de Fe2+?

N(Fe)*V(Fe)=N(KMnO4)*V(KMnO4)

Entonces la normalidad del Fe= (N(KMnO4)*V(KMnO4))/V(Fe)

La normalidad es igual a la molaridad por el número de valencia.

Como el número de electrones transferidos en el caso del hierro es 1, la

normalidad será igual a la molaridad en este caso.