UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y

BIOQUÍMICA

ESTUDIO EXPERIMENTAL DE BIXA ORELLANA L.

(ACHIOTE)
DOCENTE:
CHÁVEZ ROJAS, Danilo

CURSO:
FITOQUIMICA

PRESENTADO POR:
BENITO MENDOZA, Joyce
CABRERA OCHOA, Victoria
ORTIZ DIAZ, Katia
QUISPE YAURIS, Rayda
ZAPATA REYES, Katia

CICLO Y SECCIÓN
1 “B” – VI Ciclo

LIMA – PERÚ
2017
INDICE

INTRODUCCION pág.

1. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA ......................................................... 4

2. HIPÓTESIS ............................................................................................ 5
3. OBJETIVOS ............................................................................................ 6
4. MARCO TEÓRICO .................................................................................. 7

4.1 TAXONOMÍA DE BIXA ORELLANA L. .............................................. 7

4.2 DISTRIBUCIÓN Y CULTIVO ............................................................. 7
4.3 DESCRIPCIÓN BOTÁNICA............................................................... 8
4.4COMPOSICIÓN QUÍMICA ................................................................. 8
5. MARCO EXPERIMENTAL .................................................................... 10
5.1 RECOLECCIÓN DE LA PLANTA ..................................................... 10
6. SELECCIÓN Y LIMPIEZA ..................................................................... 11
7. LIMPIEZA DE LA HOJA DE ACHIOTE ................................................. 11
8. PESADO DE LA HOJA DE ACHIOTE .................................................. 12
9. SECADO ............................................................................................... 12
10. MOLIENDA ........................................................................................... 13
11. EXTRACCIÓN ....................................................................................... 13
11.1 MACERACIÓN DE ACHIOTE (BIXA ORELLANA) ..................... 14
11.2 LOS MATERIALES A USAR PARA EL MACERADO ................. 14
11.3 MACERADO ................................................................................ 14
11.3 OBTENCIÓN DEL EXTRACTO LIQUIDO .................................. 14
12. PREPARACIÓN DEL EXTRACTO SECO DE ACHIOTE .................... 15
13. ANÁLISIS DE SOLUBILIDAD ............................................................... 16
14. SELECCIÓN DE LOS 3 SOLVENTES MÁS SOLUBLES PARA
ACHIOTE .............................................................................................. 17
15. CROMATOGRAFÍA ............................................................................... 17
16. PRUEBA DE RECONOCIMIENTO DE METABOLITOS DE ACHIOTE 19
17. MATRIZ DE RESULTADOS DE METABOLITOS SECUNDARIOS ..... 21
18. CUADRO COMPARATIVO DE METABOLITOS ................................... 22
19. CONCLUSIONES .................................................................................. 23
20. RECOMENDACIONES.......................................................................... 24
21. BIBLIOGRAFIA ..................................................................................... 25
INTRODUCCIÓN

Las plantas medicinales han sido estudiadas desde el punto de vista de su

composición química, hallándose distintos metabolitos que poseen diferentes
efectos dentro del cuerpo. Debido al gran número de problemas de salud en
poblaciones de bajo recursos económicos, muchas veces estas son utilizadas
en lugar de la medicina moderna para dar solución a las enfermedades comunes
de la población.

Se conoce que para el año 2020, la población mundial será aproximadamente

7,500 millones de habitantes, de los cuales el 75%, vivirá en países en vías del
desarrollo, que hoy consume menos del 15% del mercado farmacéutico, lo que
hace suponer que esta masa poblacional, buscará cada vez más, plantas
medicinales, como recurso terapéutico, para satisfacer sus necesidades de
salud.

La planta del achiote es conocida por sus características antiinflamatorias, en el

presente trabajo se hará un estudio experimental con las hojas de ésta y se
comparar con las bases teóricas que se tienen.
 1. FORMULACION DEL PROBLEMA

¿El
estudio acuoso
de
las
hojas
de
Bixa
Orellana
posee
efectos
órgano
protector
y/o
 cicatrizante
 en
 úlceras
 gástricas?
 2. HIPÓTESIS

El estudio realizado en las hojas de Bixa Orellana L., tiene acción farmacología
en el ser humano.
3. OBJETIVOS:

 Determinar los metabolitos secundarios que hay en las hojas de la

planta Bixa Orellana l.

 Analizar la solubilidad utilizando el extracto seco de las hojas de Bixa

Orellana l. utilizando dichos reactivos.
 4. MARCO TEÓRICO
4.1 TAXONOMÍA (Bixa Orellana L.)

Reino: Plantae
División: Magnoliophyta
Clase: Magnoliopsidas
Orden: Violales
Familia: Bixaceae
Género: Bixa
Especie: Orellana L.

Nombre científico: Bixa Orellana L.

Nombres populares: Achiote, Urcu, Sacha achote, Urcu achiote, Acote,

achihuete (en quechua), achote, annato (en inglés), anoto, atase, masce, oshin
mashe (en shipibo-conibo).

4.2 DISTRIBUCIÓN Y CULTIVO:

El achiote se encuentra disperso por toda la región neotropical desde México
hasta Perú y Brasil, y se ha extendido a África y Asia. En el Perú, crece de
manera silvestre y cultivada en la Amazonía y la costa, hasta los 1,400 msnm.
Se le cultiva en zonas con climas tropical y subtropical, en suelos pesados con
abundante materia orgánica, buena aireación y permeabilidad, aunque también
se puede adaptar a suelos de baja fertilidad, requiere suelos bien drenados,
prefiriendo los suelos aluviales en las márgenes de los ríos. Se propaga por
semillas y se le siembra al inicio de la temporada lluviosa.
El achiote desarrolla bien en asociación con cultivos maderables como el cedro,
tornillo y marupá, y frutales como el pijuayo, cacao, coco y cítricos.
4.3 DESCRIPCIÓN BOTÁNICA:
El achiote es un árbol que puede llegar a medir 10m de alto y posee un follaje
denso, u tronco es corto y angosto de aproximadamente de diámetro, y presenta
una corteza de color gris oscuro con lenticelas en filas verticales. Tiene hojas
alternas, acorazonadas y puntiagudas, su inflorescencia tiene forma de panícula
terminal, sus flores son rosadas y sus frutos son capsulares, cubierto con
apéndices flexibles. Los frutos del achiote crecen formando racimos, tienen
forma de capsulas dehiscente y la superficie está cubierta con abundantes
apéndices flexibles de color rojo, verduzco o pardo. Las semillas están
recubiertas por una pulpa de color rojo o anaranjado intensos

4.4 COMPOSICIÓN QUÍMICA:

En el achiote se han identificado treinta y cinco componentes de los cuales
acetato de (ZE)-farnesilo (11,6%), acetato de occidentalol (9,7%), espatulenol
(9,6%), ishwarane (9,1%), bixina y norbixina son los mayores constituyentes. La
cantidad total de bixina y norbixina varía significativamente; los valores comunes
son de 2-5%, pero el contenido podría alcanzar sobre los 7% del peso seco de
las semillas. La bixina es la forma cis- del monometil éster del ácido carotenoide
carboxílico, se encuentra en la pulpa que envuelve las semillas, pudiendo llegar
hasta un 3% de su peso.
Otros constituyentes del Achiote incluyen: acetona, achiotina, ácido tomentósico,
carotenoides, un metil éster, trans-bixina, apocarotenoides, y orelina.

Además de estos compuestos, el achiote tiene reportado en su contenido, un

cuerpo de terebintinous y un ácido graso.

En las hojas encontramos: Bixaganeno, ishwarano (aceite esencial) entre otros

mono y sesquiterpenos; flavonoides: 7-bisulfato de apigenina, 7- bisulfato de
luteolina, 8-bisulfato de hipolaetina, glucósido de apigenina, bisulfato de
apigenina, hipoaletina, cosmosiina, entre otros como: flavonas, antocianidinas y
sesquiterpenlactonas; carotenoides: bixina, norbixina, orelina, β-caroteno,
criptoxantina, metilbixina, zeaxantina, luteína; ácido tomentósico; vitaminas (A,
B, y C); proteínas; azúcares; celulosa; grasas; calcio, fierro y fósforo; diterpenos:
farnesilacetona, geraniol, geranil formato, alcaloides (vestigios), ácido gálico
(benzenoide) y ácido alfitólico.
En las semillas encontramos: carotenoides expresados como provitamina A (1
000 -2 000 U.I./g de semilla seca), entre ellos destacan: bixina, betabixina,
metilbixina, norbixina, orelina, zeaxantina, β-caroteno, luteína y criptoxantina;
también contienen bixinato de sodio, achiotina, ácido tomentósico, pectinas,
proteínas, taninos, y un hidrocarburo sesquiterpénico, ishwarane (esencia floral
de las semillas). Las semillas también contienen sílica, potasa, un alto contenido
de fósforo y bajo de calcio; un alto contenido de proteínas, el cual incluye niveles
adecuados de triptófano y lisina, pero bajos niveles de metionina, isoleucina,
leucina, fenilalanina y treonina.

5. MARCO EXPERIMENTAL
5.1 RECOLECCIÓN DE LA PLANTA
La muestra fue obtenida y recolectada en el distrito de Chancay, perteneciente
a la región Lima provincias el día 28 de agosto del 2017, exactamente de una
huerta donde podemos encontrar diferentes cultivos de frutas y vegetales.
Se seleccionaron las mejores hojas y se llegó a recolectar 500 gr.
En Chancay podemos encontrar un clima desértico, la temperatura media anual
es de 19.6 ° C, mientras que la temperatura promedio del mes de agosto fue
16.7° C.

6. SELECCIÓN Y
LIMPIEZA
Se seleccionaron aquellas hojas
que no presentaran moho,
putrefacción, resequedad,
parásitos o insectos plagas.
También la forma de la hoja tenía
que ser la adecuada y el color tenía que ser de un verde intenso no presentando
decoloración o signos de resequedad.

7. LIMPIEZA DE LA HOJA DE ACHIOTE (Bixa Orellana)

Se procedió a limpiar la hoja de impurezas presentes en su superficie como
polvo, insectos grandes, etc.
Debido a que la hoja es frágil se procedió a usar materiales suaves como cepillo
de dientes, gasas, papel toalla, papel tisú y papel higiénico, también se usó
alcohol medicinal para su desinfección superficial, para ello se tuvo extremo
cuidado durante la limpieza y se ejerció la presión suficiente para poder retirar
impurezas.
Debido también que algunas hojas presentaban resequedad alrededor que la
hoja, estas fueron cortadas con una tijera común.

8. PESADO DE LA HOJA DE ACHIOTE (Bixa Orellana)

Luego de la limpieza se procede el pesado de la planta, realizándose esta en
una balanza mecánica de alta resistencia del cual nos dispuso el laboratorio.
El resultado del peso total es 266,4gr de hojas de Bixa Orellana.

En comparación con el peso original este se vio muy reducido y podemos deducir
que esto se debió quizá a la limpieza de gran cantidad de impurezas como
insectos y tierra. También a la selección de las hojas, pero sobre todo al recortar
los bordes secos de las hojas, el cual estuvo presente en casi la mayoría de
ellas.

9. SECADO
El secado del material vegetal tiene como objetivo primordial eliminar al máximo
la cantidad de agua, con el fin de prevenirlo del enmohecimiento, la acción de
enzimas y bacterias, y de posibles reacciones químicas. El secado fija los
constituyentes y facilita la trituración y la molienda, un secado no apropiado
puede ocasionar cambios no previsibles, y por lo tanto perdida de los metabolitos
secundarios de la muestra recolectada.
El secado de nuestra planta se llevó acabo:
Inicio: 29-08-2017
Termino: 02-09-2017
El método empleado fue el de secado artificial, el cual se realizó en la estufa de
secado o también llamado horno de secado a 40° C, las hojas se pusieron sobre
una fuente hecha de papel Kraft y se dejó allí hasta que las hojas estén
completamente secas y sin ningún indicio de humedad.
Esto lo podemos comprobar cuando al tocar la hoja e intentar quebrarla, esta se
podrá hacer fácilmente debido a la fragilidad.

10. MOLIENDA
Al obtener la planta seca se procedió a su molienda el día 05-09-2017, ésta se
realizó con ayuda de un mortero hasta que la muestra quede en pequeños
grumos para luego poder aplicar los métodos de extracción.
La molienda favorecerá al procedimiento que se utilice para extraer los
metabolitos secundarios de la planta.
El peso total de la molienda fue de 148.6gr.
11. EXTRACCIÓN
La extracción de metabolitos es un proceso de trasferencia de materia, que
implican el tratamiento del material vegetal con el disolvente adecuado, que
solubilice dentro de lo posible, únicamente el principio activo deseado, para ello
se debe conocer cuáles son los metabolitos presentes en el material vegetal y
aplicar el método correcto de extracción. Entre los métodos más conocidos y
usados tenemos la maceración, la percolación, destilación por errastre de vapor,
extracción de soxhlet, etc.
En nuestro caso se utilizó la técnica de maceración.

11.1 Maceración de ACHIOTE (Bixa Orellana)

La maceración es un método de extracción de los principios activos de
una planta en un líquido.
Consiste en dejar reposar una planta en agua fría u algún otro solvente
durante un periodo de tiempo, que puede oscilar entre unas 6 horas o
varias semanas o meses.
Existen diferentes tipos de maceración, se escoge el método más
adecuado en función de la solubilidad de los principios activos de las
plantas.
En nuestro caso usamos la maceración con alcohol 60°.

11.2 Los materiales a usar para el macerado y el filtrado fueron:

- Alcohol 60°

- Frasco ámbar
- Muestra vegetal seca
- Papel filtro
- Gasas
- Embudo de filtración
- Soporte universal
- Pinzas de metal para soporte universal
- Aros para el embudo
 - Beaker

11.3 Macerado: El primer paso fue colocar en un frasco ámbar de boca

ancha el material vegetal seco y pulverizada luego agregamos el alcohol con
cuidado de no salpicar, la llenamos hasta un dedo sobre la muestra, se cierra
herméticamente para que ningún microorganismo altere la muestra y se deja
reposar por 5 a más días.
Fecha de inicio: 05-09-2017
Fecha de término: 03-10-2017

21.1 Obtención del extracto liquido: Una vez pasado los días
indicados para la maceración se extrae el contenido del frasco y se
filtra las veces que sea necesaria hasta obtener la muestra liquida
traslucida sin ningún sobrenadante. La cantidad de este extracto
líquido fue de 80ml.

12. PREPARACIÓN DEL

EXTRACTO SECO DE
ACHIOTE (Bixa Orellana)
Para poder seguir con el procedimiento
experimental es necesario eliminar el
solvente en el que se encuentran los
metabolitos, es decir tenemos que
evaporar el solvente de nuestra muestra
liquida.
Para ellos la muestra liquida se coloca en una placa Petri y se lleva a la estufa
de secado hasta que todo el solvente, en nuestro caso alcohol, sea eliminado de
la muestra, resultando un extracto seco el cual posee un aspecto de caramelo
pegado y su color es similar al de la muestra liquida pero más intenso.
También podremos observar que la muestra se vio reducido y el aspecto de
caramelo es pegajoso.

13. ANÁLISIS DE SOLUBILIDAD

El equilibrio de solubilidad de una sustancia en un solvente dado, a
temperatura y concentración adecuada, es una cantidad característica de
aquella sustancia y, por consiguiente, utilizable como criterio de identificación y
pureza.
Cuando se conoce la estructura química de un solvente, es posible predecir, con
algún grado de exactitud, cuáles deben ser las características que debe poseer
un compuesto para poder disolverse. Para ello, se puede utilizar el principio que
establece que mientras mayor sea la similitud estructural entre las moléculas del
solvente y las del soluto, mayor es la posibilidad que se produzca la solución.
Así, un líquido no polar es un buen solvente para sustancias no polares, en
cambio, su acción es
limitada o nula frente a
moléculas polares o
sustancias iónicas.
A su vez, un líquido polar
es un buen solvente
para moléculas polares y
para iones, pero es muy mal
solvente para moléculas
no polares.
En este caso se utilizó agua,
etanol, ácido acético,
propanol,
diclorometano y éter de petróleo para la prueba de solubilidad para nuestro
extracto seco de achiote.
El resultado que se obtuvo fue favorable y podemos deducir que el extracto
seco se achiote (bixa orellana) es más soluble en agua y cloroformo, es
medianamente soluble en etanol y éter de petróleo, poco soluble ácido acético
y butanol; e insoluble en propanol y diclorometano.

14. SELECCIÓN DE LOS 3 SOLVENTES MÁS SOLUBLES PARA

ACHIOTE (Bixa Orellana)
Se procede a escoger los 3 solventes más solubles para nuestro extracto
vegetal de Bixa Orellana lo cual nos servirá durante la cromatografía de capa
fina.
De acuerdo a nuestros resultados obtenidos de la prueba de solubilidad
escogimos el agua y cloroformo ya que estos fueron los dos solventes más
solubles, y escogemos al etanol como el tercer solvente ya que en los
resultados este fue uno de los componentes medianamente solubles para
nuestro extracto seco.

Agua (H2O): es una sustancia cuya molécula está formada por dos átomos de
hidrogeno y uno de oxígeno (H2O). El agua es inodora, incolora, e insípida, es
decir, no tiene un olor propio, no tiene color ni sabor. Su importancia reside en
que casi la totalidad de los procesos químicos que suceden en la naturaleza.
Es una molécula "polar"; es decir, existe en ella una distribución irregular de la
densidad electrónica.
RESULTADOS No (-) + ++ +++
H2O Si
Etanol Si
Ácido acético Si
Butanol Si
Propanol No
Cloroformo Si
Diclorometano No
Éter de petróleo Si
Cloroformo: el triclorometano, cloroformo o tricloruro de metilo, es un
compuesto químico de fórmula química CHCl3. Puede obtenerse por cloración
como derivado del metano o del alcohol etílico o, más habitualmente en
la industria farmacéutica, utilizando hierro y ácido sobre tetracloruro de
carbono. A temperatura ambiente, es un líquido volátil, no inflamable, incoloro,
de olor penetrante, dulzón y cítrico. Es un disolvente polar aprótico.
Etanol: es un compuesto químico, mejor conocido como alcohol etílico que en
situaciones de temperatura normal se caracteriza por ser un líquido incoloro e
inflamable en punto de ebullición de 78 grados centígrados. Es un disolvente
polar prótico.

15. CROMATOGRAFÍA
Luego de escoger los tres solventes con mayor grado de solubilidad (sistema
de solventes), para nuestra planta pasamos a realizar la cromatografía de capa
fina. Esta es una técnica cromatográfica que utiliza una placa inmersa verticalmente. Esta
placa cromatográfica consiste en una fase estacionaria polar (comúnmente se utiliza sílica
gel) adherida a una superficie sólida.
 Etanol
 Agua destilada
 Cloroformo
Preparar la cromatografía

15.1 Fase móvil:

Se prepara la fase móvil donde se colocaran los solventes para que
pueda realizar la corrida la muestra sembrada en la placa de silica gel,
fase estacionaria, para ello primero tenemos que medir el volumen de
nuestra cuba, este volumen debe quedar a la altura de la mitad de un
centímetro es decir 0,5cm esto variara debido al modelo de cuba que
tengamos.
Volumen de la cuba = 5ml
Una vez obtenido el volumen debemos realizar un cálculo para conocer
el volumen que debemos agregar de cada solvente (sistema de
solvente) estas se encuentran divididas en proporciones que
concuerden con su solubilidad en nuestro caso es:
Agua: Cloroformo: Etanol (3:3:2)
Entonces a cada proporción se le agregara la variable desconocida y
se sumara todas las proporciones de los solventes sea el volumen
obtenido de la cuba, como lo siguiente:
Agua 3x
Cloroformo 3x
Etanol 2x
3𝑥 + 3𝑥 + 2𝑥 = 5𝑚𝑙
8𝑥 = 5𝑚𝑙
𝑥 = 1,8
Agua 3x → 3(1,8) = 1,9
Cloroformo 3x → 3(1,8) = 1,9
Etanol 2x → 2(1,8) = 1,3
Una vez obtenido el volumen de cada solvente procedemos a poner
cada uno de ellos en la cuba donde se esperara a que sea colocada la
placa se silica gel.
15.2 Fase estacionaria:
Se coloca un poco de extracto seco en
tres tubos diferentes y en cada tuvo le
agregamos nuestros solventes y lo
diluimos. Cuando la solución esté lista
utilizaremos capilares para sembrar la
muestra en las placas de sílica gel y
luego pasar a colocarlos en la cuba
con el sistema de solventes ya
preparado, dejar correr el
cromatograma, pasar a retirar y dejar
secar la silica gel.
Como resultado obtenemos que los
puntos coloreados se han corrido en
una línea casi recta hacia arriba
formando dos columnas coloreadas.
16. PRUEBA DE RECONOCIMIENTO DE METABOLITOS DE
ACHIOTE (Bixa Orellana)

16.1 Preparar el raspado para reconocimiento de metabolitos

Después de haber dejado secar la sílica gel ya con el cromatograma
corrido, se procede a raspar las partes más coloreadas de las columnas
en la sílica, este raspado se coloca en un tubo de ensayo con 10 ml de
H2O destilada.
Finalmente se pasa a filtrar y luego se tiene la solución lista para colocar
en los demás tubos de ensayo y proceder al reconocimiento
16.2 Prueba de reconocimiento de metabolitos don diferentes
reactivo
Reactivos de laboratorio con sus respectivos tubos de ensayo con la
muestra y el reactivo.
17. Matriz de resultados de metabolitos secundarios de achiote (Bixa
Orellana)

METABOLITO
REACTIVO COLOR RESULTADO
SECUNDARIO

Dragendorff Alcaloides Naranja +++

Mayer Alcaloides Precipitado blanco +++

Burchard Esteroides Celeste -

Molish Carbohidratos Anillo purpura ++

Borntrager Quinonas (Antraquinonas y Rojo -

aftoquinona)

Rosenheim Leucoantocianinas Rojo +

(Flavonoides)

Fehling A y B Azucares reductores Anaranjado ladrillo casi -

marrón

Gelatina Sal Taninos Precipitado blanco ++

NaOH Cumarinas Amarillo intenso -

Wagner alcaloides Marrón ++

18. CUADRO COMPARATIVO DE METABOLITOS:

 METABOLITOS HALLADOS EN TESIS METABOLITOS HALLADOS EN LABORATORIO
En
 las
 hojas
 encontramos:
 Nuestro análisis de esta planta solo es en
 Alcaloides hojas de Bixa Orellana, donde pudimos
 Bixaganeno hallar:
 Ishwarano (aceite esencial)  Alcaloides
 Monoterpenos y sesquiterpernos  Carbohidratos
 Flavonoides  Leucoantocianinas (flavonoides)
 Flavonas  Taninos
 Antocianidinas
 Sesquiterpeactonas
 carotenoides
 β-carotenos
 Vitaminas (A,B y C)
 Proteínas
 Azucares
 Celulosa
 Grasas
 Calcio, fierro y fósforo
 Diterpenos
 Ácido gálico (benzenoide)
 Ácido alfitólico
 Taninos
En las semillas encontramos:
 Carotenoides (provitamina A)
 β-carotenos
 Luteína
 Taninos
 Bixinato de sodio
 Achiotina
 Proteínas
 Ishwarano (aceite esencial)
 Sesquiterpenos
 Fenilalanina
 Leucina
 Silica
 Fosforo y calcio
 Metionina
 Treonina
 Ácido tomentosico

19. CONCLUSIONES
 Al finalizar el estudio y según las comparaciones con la base
científica que se tenía podemos decir que nuestra muestra
obtenida contaba con algunos de los metabolitos mencionados
en teoría, al reaccionar con los compuestos en la marcha
fitoquímica realizada.
Debido a la tesis con la que fue comparada nuestro proyecto
fue elaborada con más detalles no pudimos reconocer los
metabolitos que se encuentran en menor proporción en nuestra
planta de achiote, por ello se recomienda realizar más pruebas
de reconocimiento, sin embargo si se logró reconocer los
metabolitos secundarios principales como alcaloides.
Debido a que el reconocimiento de alcaloides fue el más notado
en las pruebas, podemos verificar que esta planta cumple con
ciertas funciones terapéuticas (como el de antiinflamatorio,
desinflamatorio, analgésico,etc.) las cuales están basadas en
su mayor parte por la presencia de alcaloides.
De acuerdo a nuestra investigación también podemos conocer
que esta planta no solo tiene un uso medicinal, también es
usado por algunas regiones como especia y colorante
alimentario; en cuanto al área cosmética este también es usado
como un protector epidérmico y colorante natural.

20. RECOMENDACIONES
 Coger con cuidado las placas de silica gel.

Evitar el contacto de productos químicos con la piel.

No se debe coger un producto de un recipiente no etiquetado, ni sustituir

un producto por otro en un experimento, si no lo aconseja el profesor.

Utilizar en todo momento gradillas y soportes para el uso de tubos.

Antes de comenzar con la separación, es recomendable equilibrar

adecuadamente la columna con la fase móvil a utilizar.

21. BIBLIOGRAFÍA
Rodrígues S, Soares V, de Oliveira T, Gesteira A, Otoni W, Costa M.
Isolation and purification of RNA from tissues rich in poliphenols,
polysaccharides, and pigments of annatto (Bixa orellana L.).

González Y, Porta T, Méndez R, Blanco F. Estudio de la irritación

dérmica primaria en piel dañada de conejos tras la exposición a un
extracto alcohólico de Bixa orellana L. Rev Cubana Estomatol.

Lourido PérezI, Hetzel de la C; Martínez Sánchez, Gregorio (abril-junio

de 2010). «La Bixa orellana L. en el tratamiento de afecciones
estomatológicas, un tema aún por estudiar». Rev Cubana Farm (Ciudad
de La Habana, Cuba)