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I. .Introducción
Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azúcares simples
hasta sustancias complejas como la sangre. Para aislar o purificar una especie
bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de bacterias, se siembra
en un medio de cultivo sólido donde las células que se multiplican no cambian de
localización; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por
escisión binaria una colonia macroscópica compuesta por decenas de millones de
células similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un
nuevo medio crecerá como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.
Otras veces el medio de cultivo contiene determinados azúcares especiales que sólo
pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se añaden indicadores de pH
que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se
generan catabolitos ácidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentación,
generan gases que pueden ser apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo
cerrado. Con otros medios de cultivo se identifica si las bacterias producen
determinadas enzimas que digieren los nutrientes: así, algunas bacterias con enzimas
hemolíticas (capaces de romper los glóbulos rojos) producen hemólisis y cambios
apreciables macroscópicamente en las placas de agar-sangre. Los diferentes medios y
técnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de microbiología de un hospital,
pues sirven para identificar las bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y
los antibióticos a los que son sensibles esas bacterias .
En un primer momento, el método estándar utilizado para las pruebas in vitro fue el
de dilución en caldo, que proporcionaba un resultado cuantitativo. Actualmente
existen varios métodos que se utilizan para llevar a cabo los estudios de sensibilidad
a los antibióticos y todos ellos se realizan bajo condiciones entandarizadas por
organismos internacionales.
Dilución en caldo
Para medir la CMB se debe realizar la prueba de actividad bactericida, que emplea el
mismo sistema de dilución en caldo que para medir la sensibilidad.
A partir de la CMI, se siembra una cantidad conocida de inóculo de cada uno de los
tubos de caldo que no tienen turbidez en placas de agar, y el número de colonias
que crece en estos subcultivos, después de incubar durante la noche, se compara
con el número de UFC/ml del cultivo original. La mínima concentración del agente
antibacteriano que permite sobrevivir a menos de 0,1 % del inóculo original se
denomina concentración bactericida mínima (CBM).
Difusión en agar
Método de E-test
Es un método más reciente, es una combinación de características de los métodos
anteriores. Se trata de una técnica cuantitativa en placa que permite obtener una
lectura directa de CMI en µg/ml, ya que se emplean tiras plásticas impregnadas en
concentraciones crecientes de antibiótico.
II. Objetivos
II.1Objetivos Generales
3.1 Materiales
Hisopos de algodón estériles
Asa bacteriológica
Mechero de Bunsen
Placa con Agar sangre
Placa con Agar SS
Placa con Agar McConkey
3.2 Métodos
Incubar los diferentes medios por un periodo comprendido entre 24 y 48 horas a 37°C.
Es importante que las placas de agar sangre se observen a las 24 horas para observar los
patrones de hemólisis.
Reportar la morfología colonial y guardar los cultivos en refrigeración para la siguiente
sesión.
Tinción de Gram
1.- Se hace un frotis delgado del material a estudiar y se deja secar al aire.
2.- Se fija la preparación pasándola un par de veces a través de la flama del mechero. De esta
forma se evita que sea lavada durante la tinción.
3.- Cubrir la superficie del frotis con solución de cristal violeta por un lapso de un minuto.
4.- Enjuagar con agua destilada.
5.- Cubrir la superficie del frotis con la solución de yodo de Gram, dejando que esta actué por un
lapso de un minuto.
6.- Enjuagar con agua destilada. 8.- Enjuagar con agua destilada.
9.- Cubrir el frotis con la solución de safranina por 15 segundos.
10.- Enjuagar con agua destilada.
11.- Secar al aire.
12.- Observar al microscopio a 40x y 100x.
VI.- RESULTADO
V.- CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFÍA
http://www.danival.org/notasmicro/medioscult/_madre_medios.html
http://www.mailxmail.com/curso-analisis-clinicos/medios-cultivo
I. Introducción
Las infecciones respiratorias agudas tienen una incidencia muy elevada en todas las
edades, constituyen el principal motivo de consulta en todos los países y en todos los
estratos socioeconómicos. Entre las bacterias que causan infecciones respiratorias
agudas de forma primaria, se reconoce al género Streptoccocus, en especial al grupo A
como el más frecuente en rinofaringitis y faringoamigdalitis purulenta.
Como género, estos microorganismos, se caracterizan por tener una forma redondeada,
que oscila entre 0.5 a 1 micra de diámetro, se pueden encontrar como cocos aislados, en
pares o formando cadenas, se distinguen por ser anaerobios facultativos y catalasa
negativos1.
La gran mayoría de los estreptococos, se distinguen por la producción de una gran
variedad de toxinas y enzimas extracelulares, siendo un rasgo distintivo la producción de
hemolisinas con las que efectúan reacciones hemolíticas (hemólisis en cultivos
enriquecidos con sangre.
Algunos microorganismos como Streptococcus pneumoniae pueden presentar cápsulas
polisacaridas que le confieren un aspecto mucoide a las colonias que se desarrollan sobre
el agar, y son lisados con facilidad por agentes tensoactivos, por ejemplo, las sales
biliares.
Parte de las características antes mencionadas pueden emplearse como fundamentos para
una clasificación; sin embargo la agrupación de las diferentes especies en los grupos
actualmente conocidos, quien emplea antígenos específicos de la pared celular como
base para dicha clasificación.
II. Objetivos
2.1Objetivos generales
2.2Objetivos Específicos
3.1 Material
• Asa bacteriológica
• Mechero
• Microscopio
• Juego de colorante para Gram
• Tinta china
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• 2 placas de agar sangre
• 2 tubos de glucosa + rojo fenol
• Cepa de Streptococcus pyogenes
• Cepa de Streptococcus pneumoniae
• 1 tubo con desoxicolato de sodio
• Discos de optoquina.
IV. Metodos