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TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS Integrantes: Patricia Vargas.

Carolina Andrade.

DISPONIBLES EN CHILE. Flavia Aldana.


Marcelo Andrade.
Docente: Raúl Sendra.
Medicina Veterinaria-Inmunología. Fecha de exposición: 06/11/17.
INTRODUCCIÓN.
Para que el resultado final de una prueba
analítica de laboratorio sea correcta, la
calidad de la prueba depende del
cumplimiento en cadena de una buena
práctica, que comienza desde el momento
de la preparación del paciente para la
obtención de la muestra, posteriormente
con la extracción de la misma ( utilizando
distintas técnicas dependiendo de lo que
se quiera obtener) y finalmente termina
con una interpretación de los resultados
obtenidos.
OBTENCIÓN DE MUESTRAS.
Sangre
Examen directo para detectar
virus, bacterias y protozoos.
Pruebas serológicas, tiene que
ser muestra coagulada.
Plasma sanguíneo.
MANEJO DE MUESTRAS.
Cantidad de muestra tomada y conservante utilizado Las muestras deben ser tomadas
en cantidad suficiente y en las condiciones especiales que cada una requiere.
Identificación de muestras Las muestras deben estar perfectamente identificadas, tanto
las muestras que sean para análisis interno en las dependencias del centro como las que
sean para análisis en laboratorios externos.
Identificación de muestras que van a ser analizadas en el propio Centro Veterinario
• Las muestras deben ser identificadas en el momento de su extracción para minimizar
los errores.
• En el bote o soporte de la muestra debe incorporarse como mínimo el nombre de
paciente y el número de historia clínica.
• El personal que recepciona la muestra debe incorporar estos datos y
completarlos en unas fichas de registro que debe ser accesibles desde el
laboratorio, donde figurarán todos los análisis, los ya realizados y los
pendientes. Identificación de la muestra que va a ser enviada a un laboratorio
externo
• La muestra deberá ir acompañada de un volante de petición del que
quedará copia o registro en el Centro Veterinario. El volante de petición
deberá incorporar los datos del paciente, de la clínica, del veterinario
responsable, fecha, breve historia clínica y determinación que se solicita.
Remisión de muestras de citología. Las muestras deben enviarse en
contenedores adecuados. Las extensiones se enviarán fijadas y colocadas en
porta-preparaciones de plástico. Se pueden proteger envolviéndolas con
varias capas de papel absorbente.
DESCRIPCIÓN DE PRUEBAS DE LABORATORIO.
Test de ELISA es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno
inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima
capaz de generar un producto detectable, como cambio de color o
algún otro tipo.

(Abbas et al, 2012)


PCR (REACCIÓN EN CADENA POLIMERASA)
El proceso de detección de un agente infeccioso por
amplificación genética se desarrolla de manera
habitual en tres etapas. La primera consiste en la
extracción y purificación de los ácidos nucleicos del
microorganismo de la muestra biológica, seguido de
la amplificación de un segmento seleccionado del
genoma del microorganismo mediante reacción en
cadena de la polimerasa, es decir, la PCR
propiamente dicha. Finalmente, en la tercera etapa
se lleva a cabo la detección de los fragmentos
amplificados en la PCR (amplicones) por
electroforesis en gel de agarosa y tinción con
bromuro de etidio, o mediante hibridación con
sondas específicas.
PRUEBA DE AGLUTINACIÓN
En las pruebas de aglutinación (p. ej., aglutinación con látex, coagregación), una partícula
(cuenta de látex o bacteria) se acopla con un reactivo antigénico o humoral. La partícula
compleja formada se mezcla con la muestra (como LCR o suero); si el anticuerpo o el
antígeno buscados están presentes en la muestra, producirán el entrecruzamiento de las
partículas, lo que se observa como una aglutinación.
FIJACIÓN DEL COMPLEMENTO
Esta prueba mide la cantidad de anticuerpos
consumidores de complemento (o que lo fijan) de una
muestra de suero o LCR. Se usa para el diagnóstico de
algunas infecciones virales o micóticas. La muestra se
incuba con cantidades conocidas de complemento y del
antígeno que es el blanco del anticuerpo en estudio. El
grado de fijación del complemento indica la cantidad
relativa de anticuerpos en la muestra. La prueba permite
medir los títulos de anticuerpos IgM e IgG, o puede
modificarse para detectar determinados antígenos. Es
precisa, pero tiene aplicaciones limitadas, es laboriosa y
requiere muchos controles.
PRUEBA DE PRECIPITACIÓN
Estas pruebas miden la cantidad de antígeno o de anticuerpo en los líquidos corporales a partir del grado
de precipitación visible de complejos de antígeno-anticuerpo dentro de un gel de agarosa o en solución.
En general, una muestra de sangre se mezcla con un antígeno de prueba para detectar los anticuerpos
del paciente, en general cuando se sospecha una infección micótica o una meningitis piógena. Para
obtener un resultado positivo, se requiere una gran cantidad de anticuerpo o de antígeno, y por ello la
sensibilidad es baja.
PRUEBA DE INMUNOTRANSFERENCIA DE WESTERN
Esta prueba detecta anticuerpos contra el microorganismo en una muestra del
paciente (que puede ser suero u otro líquido corporal) mediante su reacción con
antígenos blanco (p. ej., componentes virales) que se hallan inmovilizados en una
membrana mediante electrotransferencia. La inmunotransferencia de Western suele
tener una buena sensibilidad, aunque menor a la de las pruebas de cribado como el
ELISA, y generalmente su especificidad es elevada.
INMUNOFLUORESCENCIA
Se emplean anticuerpos para identificar la distribución anatómica de un antígeno en
el interior de un tejido o de los compartimientos celulares . Para ello se incuba el
tejido o la célula con un anticuerpo marcado con un flurocromo o una enzima, y la
posición que ocupe el marcado, determinada con el microscopio adecuado sirve
para deducir la ubicación del antígeno.
KITS DISPONIBLES EN CHILE PARA MEDICINA
VETERINARIA.
Animales menores:
1.Para Parvovirus canino: Detección de
antígenos específicos de Parvovirus
canino en 10 minutos, tomando una
muestra de heces con una tórula que
luego se introduce en un tubo hasta
que las partículas se ubiquen en fondo,
extraer con una pipeta y colocar en
dispositivo de reacción. Resultados:
Dos líneas rojas es positivo, una sola
línea es negativo.
2. Para distemper canino:
Detección de antígenos
específicos de Virus Distemper
canino en 10 minutos, tomando
una muestra de secreción
ocular o nasal con una tórula,
realizando el mismo proceso
anterior.
3.Para Giardia canina:
Detección de antígenos
específicos de Giardia
lamblia (protozoo) en 10
minutos, tomando una
muestra de heces con una
tórula, realizando el mismo
proceso anterior.
4.Para Brucella canina: Detección
de antígenos específicos de
Brucella (Bacteria) en 10 minutos,
tomando una muestra de suero,
plasma o sangre entera con una
pipeta de la cantidad antes
extraída, colocándola en el
dispositivo de reacción para
luego aplicarle una sustancia
buffer. Resultados: Dos líneas
rojas es positivo, una sola línea es
negativo.
5.Para Leucemia +
Inmunodeficiencia felinas:
Detección de antígeno p27 de
virus de Leucemia y anticuerpo
p24 de Inmunodeficiencia en
10 minutos, tomando una
muestra de suero, plasma o
sangre entera, realizando el
mismo procedimiento anterior
solo que en dos espacios
diferentes en el dispositivo de
reacción.
Animales mayores:
Enfermedades presentes en Chile (SAG, 2015)
Bovinos:
Brucelosis (Brucella abortus) ( FC, ELISA )
La brucelosis del ganado es una enfermedad causada
por Brucella abortus (B. abortus), una bacteria
intracelular facultativa. El modo más importante de
transmisión de la enfermedad es la ingestión de
organismos B. abortus que pueden estar presentes en
tejidos de fetos abortados, membranas fetales y fluidos
uterinos. La característica clínica principal de la
enfermedad es el aborto.
Diarrea viral bovina (PCR, ELISA)
El virus de la diarrea viral bovina (BVDV) deprime el
sistema inmunológico vacuno, tornando al animal
susceptible a muchas otras infecciones.
Leucosis bovina enzoótica (ELISA)
El virus de la leucemia bovina (BLV) es un retrovirus que puede causar linfosarcoma
en el ganado. El virus reside en los linfocitos de la sangre donde los anticuerpos
circulantes son incapaces de neutralizarlo.
Rinotraqueítis infecciosa bovina / Vulvovaginitis pustular infecciosa (ELISA)
La rinotraqueítis infecciosa bovina (IBR) es una enfermedad infecciosa altamente
contagiosa causada por el herpesvirus-1 bovino (BHV-1). Además de causar
enfermedad respiratoria, este virus puede causar conjuntivitis, abortos, encefalitis e
infecciones sistémicas generalizadas.
Tuberculosis bovina (ELISA)
La tuberculosis bovina causada por el Mycobacterium bovis (M. bovis)
Équidos: Enfermedades presentes en Chile
Arteritis viral equina en burros silvestres (PCR)
La Arteritis Viral Equina (AVE) es una enfermedad respiratoria que se
transmite mediante la inhalación de partículas provenientes del exudado
nasal de equinos infectados. La enfermedad también puede transmitirse en
forma venérea durante el apareamiento, ya sea monta natural o mediante
la inseminación artificial.
Gripe o influenza equina (ELISA)
La influenza A es una zoonosis de significativa importancia debido a su
prevalencia mundial, numerosos subtipos y naturaleza reordenante.
Presenta una amplia gama de perfiles patógenos, desde la casi ausencia
de signos clínicos hasta la alta mortalidad, dependiendo de la especie
afectada y del subtipo involucrado.
Piroplasmosis equina (ELISA)
La piroplasmosis equina es una infección en los caballos producida por
protozoos y transmitida por garrapatas. Es posible que sea difícil
diagnosticar la piroplasmosis, ya que puede causar signos clínicos
variables y no específicos. Los síntomas de esta enfermedad varían desde
fiebre aguda, inapetencia y malestar hasta anemia, ictericia, muerte
súbita, o pérdida de peso crónica y poca tolerancia al ejercicio.
Ovinos/Caprinos:
Artritis/encefalitis caprina (ELISA)
Es una enfermedad viral en cabras causada por el virus Artritis y
Encefalitis Caprina (AEC), de importancia económica. El virus AEC
es un lentivirus y uno de los mas severos lentivirus de la familia
Retroviridae. Infecta a sus huéspedes de por vida. Aunque la
mayoría de las infecciones son subclínicas, algunos animales
desarrollan síndromes progresivos intratables tales como
poliartritis en animales adultos y encefalomielitis en cabritos.
Epididimitis ovina (Brucella ovis) (FC)
La brucelosis ovina es causada por una bacteria
llamada Brucella ovis (B. ovis). Todas las razas ovinas son
susceptibles a la brucelosis, la cual puede causar pérdidas
económicas considerables debido a un incremento en el sacrificio
de carneros, menores porcentajes de señalada de corderos y
períodos de parición extendidos. La enfermedad produce
inflamación del epidídimo en carneros y de la placenta en
ovejas preñadas. La infección de ovejas preñadas conduce a
abortos y muerte de corderos recién nacidos debido a cambios
microscópicos y macroscópicos a nivel de la placenta y el feto.
Otros:
Lagomorfos:
Mixomatosis (PCR)
Enfermedad infecciosa, causada por un virus, que padecen los conejos y que
se caracteriza por la aparición de tumefacciones en las mucosas y en la piel.