UNIVERSIDAD DE SUCRE

FACULTAD DE INGENIERIA
DEPARTAMENTO DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

PRACTICA No 4: METABOLISMO MICROBIANO

I. OBJETIVOS.
• Realizar pruebas bioquímicas de identificación bacteriana a un cultivo
determinado.
• Adquirir destreza en la identificación bacteriana a través de pruebas
bioquímicas.
• Aplicar en la práctica los fundamentos científicos de cada prueba bioquímica
a ensaya.
• .Identificar presuntamente la cepa microbiana ensayada.

II. FUNDAMENTO TEORICO.

Los microorganismos llevan a cabo una gran variedad de reacciones metabólicas

de anabolismo y catabolismo sobre determinados sustratos y con la ayuda
imprescindible de las enzimas, las cuales llegan a ser particulares para géneros y
especies, lo que hace que la determinación de tales características inherentes del
microorganismo sirva como criterios básicos para la identificación y clasificación
de los microorganismos.

Los microorganismos deben degradar substratos adecuados para la obtención de

la fuente de carbono, y para ellos necesitan de la presencia de enzimas
específicas, esto hace la diferencia entre un microorganismo y otro.

Finalmente la caracterización bioquímica de los microorganismos se complementa

con la identificación morfológica y en casos pertinentes se lleva a cabo una
 identificación a niveles superiores, como el caso de la inmunológica y la molecular
que poseen altos porcentajes de sensibilidad y especificidad.

III. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS.

EQUIPOS MATERIALES REACTIVOS

Incubadoras Cultivo bacteriano Agar triple azúcar
Autoclave tubos taparrosca Agar citrato
Horno esterilizador Erlemeyer 250 ml Agar SIM
Microscopio Asas bacteriológicas Agar lisina
Nevera refrigerante Algodón Agar kligler
cinta de enmascarar Caldo urea
Peróxido de hidrógeno
Agua destilada

IV. PROCEDIMIENTO.
• Rotular adecuadamente los tubos de ensayo
• Verificar que el cultivo del ensayo se encuentra puro, mediante la
observación de colonias con características homogéneas.
• Tomar una porción suficiente de colonia bacteriana del cultivo
suministrado con un asa recta. “Recuerde no se debe repetir la toma de
muestra, es decir, con la primera asada de colonias se deben sembrar todos
los tubos del ensayo”.
• Realizar siembras por la técnica de punción en los medios de cultivo
que tienen en los tubos, en aquellos que son inclinados, además de la punción
se hace una estría encima de la parte superficial del medio. “Recuerde
sembrar primero los caldos”.
• Incubar a 35-37°C durante 24-48 horas
• Realizar las lecturas e interpretaciones de los resultados respectivos
en cada tubo según el caso.

V. CUESTIONARIO.
a. Cuál es el fundamento científico de cada una de las siguientes pruebas
bioquímicas:
- Prueba de la Oxidasa
- Prueba de la catalasa
- Prueba de los nitratos
- Prueba de la Urea
- Prueba de la Lisina
- Prueba de motilidad
- Prueba de indol
- Prueba de fermentación de carbohidratos
- Prueba de la esculina
- Prueba de Hemólisis

b. Por que razón se debe partir de cultivos axénicos para la realización de las
pruebas bioquímicas.
c. Cual es la función de los indicadores de pH en los medios de cultivo para
pruebas bioquímicas.
d. Cual es el valor diagnóstico de las pruebas bioquímicas en la identificación
microbiana.
e. . Para que tipo de microorganismos no se recomienda la realización de pruebas
bioquímicas.
f. Que recomienda usted cuando las pruebas bioquímicas realizadas a un
patógeno no conducen a la plena identificación.

VI. BIBLIOGRAFIA.
• LUNA, Gilma Janeth. Manual operativo de Análisis Microbiológicos para
alimentos. Fondo Editorial Fundación Universidad de Bogotá Jorge Tadeo
Lozano. Bogotá-Colombia. 1994.
• BROCK, Thomas D. Microbiología. Sexta edición. Prentice Hall
Hispanoamericana S.A. México. 1991.
• JAWETZ, MELNICK Y ADELBERG. Microbiología Médica. Manual Moderno.
17ª edición. México. 2001.
• KONEMAN, Elmer W. Diagnóstico Microbiológico. Editorial Médica
Panamericana. México. 1990.
• Manual de Medios de Cultivo. Merck
• Microbiology Manual. 12th edition. Merck. 2006