TEMA II

ESPECTROMETRÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR

EN LA REGIÓN VISIBLE Y ULTRAVIOLETA.

Fenómenos involucrados en el proceso de absorción.

Análisis cualitativo. Análisis cuantitativo: ley de Lambert-Beer,
limitaciones propias, desviaciones instrumentales y del
sistema químico. Interferencias espectrales y químicas.
Espectrofotómetros: esquema y componentes de equipos de
simple haz y de doble haz. Control y evaluación de las
características de un espectrofotómetro. Ruido instrumental,
error fotométrico y sensibilidad. Espectrometría diferencial.
Aplicaciones.
1er clase

El espectro electromagnético

EE = h.ν = h.c/λ

Se define “longitud de onda”, λ, como la distancia entre dos puntos

equivalente de una onda; según la porción del espectro
electromagnético que se quiera caracterizar, puede ser medida en
metros, cm o nanometros (10-9 m). La frecuencia es el número de
veces que una longitud de onda pasa por un punto fijo en la unidad de
tiempo, y está dada en ciclos/seg. o hertz (Hz).
 Luz
blanca

Altas Bajas EE = h.ν = h.c/λ

frecuencias frecuencias
Rojo
800
nm

Violeta Anaranjado
400 nm 720 nm
Espectroscopía Ultravioleta-Visible:

Cuando la materia absorbe radiación electromagnética

de longitud de onda comprendida entre 200 y 800 nm , la
relativamente alta energía involucrada en el proceso
causa excitación electrónica. Amarillo
El ojo humano funciona como un detector sensible que Azul
analiza la luz reflejada por la superficie de un sólido o la 640 nm
480 nm
que es transmitida a través de un líquido. La luz blanca
emitida por el sol está compuesta por un amplio ámbito
longitudes de onda en la región del ultravioleta (UV),
Verde
visible (V) y el infrarrojo (IR). 560 nm
 Fenómenos involucrados en el proceso de absorción

Las energías (frecuencias) observadas son suficientes para promover o excitar un electrón
perteneciente a un enlace molecular o a un electrón no enlazante localizado en alguno de los
átomos de la unión. Consecuentemente, la espectroscopía de absorción molecular en esta
región del espectro es conocida como “espectroscopía electrónica”. El diagrama de la
izquierda muestra las distintas posibilidades de excitación electrónica que pueden ocurrir en
moléculas orgánicas: de las 6 transiciones posibles, sólo las dos de menor energía (n →π* y
π→ π* ) son posibles para las longitudes de ondas comprendidas entre 200 to 800 nm. Como
regla, la promoción de un electrón se verá energéticamente favorecida cuando la misma ocurra
desde el orbital molecular ocupado de mayor energía (highest occupied molecular orbital ,
HOMO) al orbital molecular desocupado de menor energía (lowest unoccupied molecular
orbital, LUMO), y la especie resultante se dice que está en un estado excitado.
 Diagrama de Orbitales moleculares para
formaldehído (CH2O)

H
σ4*
C O
H

s= p=
n=
 Reglas de selección

Dado que todas las transiciones posibles no son igualmente probables, los
espectroscopistas derivaron reglas de selección que contemplan los factores que
influyen en la probabilidad de una transición. Obviamente, uno de estos factores es el
solapamiento de los orbitales involucrados en la excitación electrónica. Por ejemplo,
para el grupo carbonilo (>C=O), existen dos posibles transiciones:

n → π* transición de menor energía (λmax=290 nm)

π → π* transición a mayor energía (λmax=180 nm),

pero la probabilidad de absorción para la transición n →π* es mil veces menor que para
π→ π*. La distribución espacial de los orbitales, mostrada en el diagrama, explica lo
observado: el orbital n no se solapa tan efectivamente con el orbital π* orbital, de modo
que la probabilidad de este modo de excitación es pequeña. La transición π → π* , en
cambio, involucra orbitales con solapamiento significativo, y la probabilidad de la
transición electrónica es cercana al 100%.
Reglas de selección en la espectroscopia electrónica
Se utiliza la mecánica cuántica para identificar las reglas de selección, reglas que surgen para explicar la aparición
de bandas de absorción en las técnicas espectroscopias. Tales reglas proporcionan información de la probabilidad
de una transición electrónica dada, que además determina la intensidad de la banda.

1.- Una transición es permitida sólo si implica un cambio en el número cuántico de orbital
(específicamente, |Δl| = 1).
Así, s → p y d → p son ejemplos de transiciones permitidas, pero p → p y d → d son prohibidas. Esto explica
algunos fenómenos químicos familiares como la gran intensidad del color amarillo-naranja que se produce cuando
un material conteniendo sodio se pone en una llama; la transición permitida 3s → 3p tiene lugar a 590 mn, en la
región visible.
En contraposición, los colores menos intensos de muchas sales de metales de transición que proceden de
absorciones d → d de baja probabilidad (prohibidas) desde el punto de vista de la variación del momento angular.
.
2.- Sólo están permitidas las transiciones de un electrón. Así, para el magnesio la transición 3s2 →3s1-3p1
está permitida, pero la 3s2 → 3p2 está prohibida.

3.- La multiplicidad de spin se mantiene para una transición permitida (ΔS = 0). Es decir, un electrón no puede
invertir su spin mientras tiene lugar la excitación. Debido a esta regla, los únicos estados excitados accesibles
desde un estado fundamental doblete son también estados dobletes, y mientras que en una transición singlete →
triplete, observada algunas veces, la intensidad de su banda es baja.

4.- Para especies que tienen un centro de inversión, la paridad cambia durante una transición permitida.
Es decir, g → u y u → g son transiciones permitidas, mientras que g → g y u → u son transiciones prohibidas. Esta
regla se llama regla de Laporte.

Una consecuencia práctica es que especies altamente simétricas normalmente absorben menos que especies
similares menos simétricas. Por ejemplo, las bandas de absorción d → d del complejo octaédrico [Ni(NH3)6]2+ son
bastante débiles, lo que se explica por la doble prohibción (por las reglas de orbital y de paridad). La sustitución de
un grupo NH3 por un ligando diferente para dar [Ni(NH3)5L]n+ da lugar a un complejo sin centro de inversión y por lo
tanto, la intensidad de sus bandas son normalmente superiores.
 Magnitud de las Absortividades Molares

ε = 8.7x1019 P A 0 a 105 en el ámbito UV/Vis

P es la probabilidad de la transición
Transiciones prohibidas < 0.1;
Transiciones permitidas entre 0.1 y 1

A es la sección transversal del área de la molécula

blanco (en cm2); alredeor de 10-15 cm2

Como consecuencia, y combinando ambos factores,

• Bandas fuertes ≡ ε = 104 - 105

• Bandas débiles ≡ ε < 103

Como una norma muy general, cada violación de una regla de selección reduce la intensidad de la
banda en un factor de 101 - 102.
Una transición completamente permitida tiene una absortividad molar de 104 L/mol.cm o mayor.
Un valor alrededor de 102 es más típico de una transición d → d, salvo, que ésta esté también prohibida
por spin y/o por la regla de la simetría; en este caso, la absortividad puede caer hasta 10 L/mol.cm o
menor.
 La importancia de la conjugación
Chromophore Ejemplo
Cromóforo Example Excitación
Excitation λmax, ,nm
λmáx nm εε Solvent
Solvente
C=C Ethene π __ > π* 171 15,000 hexane

C≡C 1-Hexyne π __ > π* 180 10,000 hexane

n __> π* 290 15 hexane

C=O Ethanal
π __> π* 180 10,000 hexane

n __ > π* 275 17 ethanol

N=O Nitromethane
π __ > π* 200 5,000 ethanol

C-X X=Br Methyl bromide n __ > σ* 205 200 hexane

X=I Methyl Iodide n __ > σ* 255 360 hexane

Las geometrías moleculares capaces de absorber luz (200 nm<λ< 800 nm ) son los grupos
funcionales con electrones π y heteroátomos con electrones en orbitales n, no ligantes. A
tales grupos absorbentes se los conoce con el nombre de cromóforos.
Las transiciones n → π* de alcoholes y éteres ocurren a λmáx < 160 nm => pueden ser
utilizados como solventes transparentes en estudios espectroscópicos.

Instrumentalmente es impracticable determinar datos de absorción de radiación a λ< 200 nm.

Sin embargo, la conjugación de grupos cromóforos produce un corrimiento a mayores
longitudes de onda de los máximos de absorción (corrimiento batocrómico), de manera que
la absorción UV se vuelve apropiada para la identificación de este tipo de estructuras.

ε >10.000 para cromóforos fuertemente absorbentes; ε muy pequeños (10 a 100) si la absorción de radiación es débil.
La magnitud de ε refleja tanto el tamaño del cromóforo como la probabilidad de que luz de una determinada longitud de
onda sea absorbida por el mismo.
 Terminología para corrimientos espectroscópicos
Naturaleza del
Término
corrimiento

A mayor λ Batocrómico

A menor λ Hipsocrómico

A mayor
Hipercrómico
absorbancia

A menor
Hipocrómico
Absorbancia

Los 4 orbitales atómicos p de dos dobles enlaces

conjugados se combinan para formar 4 orbitales π,
dos ligantes y dos antiligantes; tres dobles enlaces
de un trieno conjugado crea 6 orbitales π, la mitad
enlazantes y la mitad antienlazantes. La transición
más favorable energéticamente π → π* ocurre
desde el orbital molecular π ocupado de mayor
energía (HOMO) al orbital molecular π antiligante
de menor energía (LUMO).

El aumento de la conjugación acerca los orbitales HOMO y LUMO, de manera que la energía requerida (ΔE)
para la excitación electrónica es menor, y por lo tanto, λ aumenta ( λ = h • c/ΔE ).

Grupos Auxocromos
Provocan un efecto hipercrómico
Determinadas agrupaciones atómicas que por sí mismas
no comunican color a la molécula que pertenecen, pero
son capaces de reforzar la acción de un cromóforo.
Suelen contener grupos funcionales con electrones en
orbitales no enlazantes y que, en consecuencia, pueden
absorber únicamente en el ultravioleta lejano,
contribuyen a la estabilización de los orbitales π.

Efecto del solvente

Corrimiento Hipsocrómico (n- p*): corrimiento al azul
– Δ polaridad del solvente >solvatación
de los pares de electrones n y –ΔE(n)
 los picos se corren hacia el azul
(más energéticos)
– El corrimiento es del orden de 30 nm
(similar a la energía de puente H)

Corrimiento Batocrómico (p –p*; C+-O-): corrimiento al rojo

Δ polaridad del solvente  Δ polarización de la especie excitada y por tanto la
fuerza de atracción entre solvente y especie absorbente, -ΔE del estado
fundamental y excitado, esta última en mayor proporción los picos se corren
hacia el rojo (5 nm)

Transiciones σ → σ*
Corresponde a una transición
electrónica en un enlace único de
simetría esférica de tan alta energía
que ocurre solamente en el ámbito del
UV de vacío.
El enlace C-H en metano absorbe a
125 nm.
El etano presenta una absorción
adicional a 135 nm, atribuida a la
transición en un enlace C-C, de
menor energía.
Las bandas de absorción
correspondientes a las transiciones
σ→σ* no son apreciables en el
cercano UV y no generalmente no
tienen utilidad práctica.
REPASO Transiciones electrónicas
en moléculas orgánicas
Transiciones n → π* y π → π*
La mayoría de las absorciones en moléculas orgánicas se
deben a estas dos transiciones ubicadas en el ámbito 200-700
nm.
Ambas aparecen en moléculas con dobles enlaces
correspondientes a orbitales π ocupados.
n → π*
- Bajas absortividades
- Corrimiento a mayores energías (menores λs) en solventes
polares (corrimiento hipsocrómico o azul): debido a la mejor
solvatación, el nivel n se estabiliza y la transición requiere una
mayor ΔE.
-El corrimiento pude ser del orden de 30 nm en agua, debido al
enlace puente de H. La energía del el extremo superior de la
transición, π*, no se ve afectada.
π → π*
-Altas absortividades.
-A veces (pero no siempre) ocurre corrimiento a menores
energías (mayores λs) en solventes polares (corrimiento
batocrómico o rojo), de mucho menor significación, de alrededor
de 5 nm.
Los electrones en orbitales π y π* están apenas solvatados,
siendo más favorable la solvatación en π* (<E (π*), de manera
que el ΔE resulta menor cuando se aumenta la polaridad del
solvente.
 Iones de elementos de transición interna (3d y 4d)
Teoría del campo cristalino/campo
Orbitales d
ligando
dxy, dxz y dyz tienen geometría similares, y están
orientados entre los ejes que indican su nomenclatura.
dx2-y2 y dz2 están orientados en coincidencia con los
ejes.

En ausencia de un campo eléctrico o magnético

externo, todos los orbitales d tiene igual energía (5d
degenerados). Los electrones se mueven libremente
entre los distintos orbitales, no siendo necesaria la
absorción de radiación para promover un electrón de
un orbital a otro.
Teoría del campo cristalino/campo ligando
• El enlace coordinado se debe a la interacción electrostática del ión central con los grupos ligando
• Los grupos ligando se comportan como cargas negativas: el campo electrostático creado en torno al
ión central da lugar a un efecto de enlace adicional (energía de estabilización del campo ligando)

La magnitud de la interacción del ligando con los orbitales “d” depende de:
• Densidad de carga del ligando: a mayor densidad de carga, mayor separación del campo.
• Disponibilidad de pares libres: un solo par electrónico distorsiona más que dos (un solo par se orienta
mejor para formar el enlace).
• Capacidad de formar uniones π: a mayor capacidad para formar uniones π, mayor separación.
Los orbitales d más afectados serán los dx2-y2 y los dz2.
Ejemplo:

• En ausencia de campo externo, los cinco orbitales 3d

del Fe3+ son todos de igual energía

• Cuando estos orbitales se encuentran en presencia

del campo electrostático de los ligandos, dejan de tener
la misma energía

La proximidad de los átomos dadores (cargas

puntuales) al átomo central produce un campo
eléctrico que elimina la degeneración existente en el
grupo de orbitales d y los divide en dos grupos,
los t2g de energía inferior y los eg con energía
superior.
Entorno En campo
esférico octaédrico
x

x dz2
Se desestabilizan dx2-y2

Se estabilizan
dxy
dxz
dyz
Entorno En campo
esférico tetraédrico
Se estabilizan
dz2 dx2-y2

Se desestabilizan
dxy
dxz
dyz
 Cuadrado-plano

Octaédrico

x2-y2, z2

Se estabilizan los orbitales

Do que tienen componente z

xy, xz, yz dxz dyz dz2

Se desestabilizan los orbitales

que tienen componentes x e y

dxy dx2-y2
Campo octaédrico, tetraédrico y cuadrado plano REPASO
Acuo-complejos de elementos de transición interna (3d y 4d)

Ti3+ Fe2+

V3+ Co2+

Cr3+ Ni2+
Cr2+

Mn2+
Cu2+
 Complejos de transferencia de carga
• Fe+3 SCN-
• Fe+3 Fenol
• Fe+2 0-fenantrolina
• I3- (complejo de I2 en exceso de I-))

Característica: ε >10000 → detección y cuantificación sensible

Condiciones: * un grupo debe ser un e- -aceptor fuerte,
generalmente un metal (ácido de Lewis)
* el otro debe ser un e- -donor fuerte (base de Lewis)
Como consecuencia de esta transferencia de electrones se origina
un estado excitado que es el resultado de un proceso de
óxido-reducción interna.

La transición involucra el movimientos de un e- desde el donor hacia

el aceptor, desde un átomo al otro, y no entre orbitales moleculares.
Usualmente, el e- regresa rápidamente a su estado original;
si el complejo se disocia antes,
ocurre una reacción rédox fotoquímica.
 2da clase
Interacción de la luz con una solución

Luz dispersada

Luz incidente Luz transmitida

reflexión en las interfases

Absorción de luz

 cómo se deducen propiedades de absorción a través del estudio de luz transmitida?

 cómo se tratan la reflexión y la dispersión?

 Tratamiento instrumental de la dispersión

 La dispersión es despreciable en solución, en donde las moléculas

están homogéneamente distribuidas
 La dispersión es considerable en coloides y sólidos cuando el
tamaño de la partícula es del orden de la longitud de onda utilizada

 La dispersión se reduce suspendiendo las partículas en

un medio con índice de reflexión similar (KBr en pastillas e
inmersión en Nujol para IR)
 Tratamiento instrumental de la reflexión

Luz incidente Luz transmitida

reflexión en las interfases

Luz incidente Luz transmitida
 La fracción de luz reflejada
puede ser compensada midiendo
simultáneamente con iguales reflexión en las interfases
materiales (cubeta y solvente)

 La fracción de luz reflejada puede

ser minimizada aumentando el espesor
de la muestra: el número de interfases
permanece constante
 Transmitancia

muestra

Si la luminiscencia y la dispersión son despreciables

α = absorbancia
1=α+T+ρ T = transmitancia
ρ = reflectancia

Si se elimina o minimiza la reflexión,

1=α+T

En estas condiciones, la absorción puede ser calculada a través de la luz

transmitida.
 Luz transmitida y absorción

muestra

dI: disminución de I en un espesor infinitesimal dl

c: concentración molar de la especie absorbente [mol/m3]
К : coeficiente neperiano de extinción molar [m2/mol]

reordenando e integrando en el ancho de la muestra

T Ley de Lambert-Beer

Absorbancia neperiana TODAS ESTAS MAGNITUDES

SON ADIMENSIONALES
Absorbancia (base 10)
 Ley de Lambert-Beer
Transmitancia (T)

P = potencia transmitida
P0 = potencia incidente

Absorbancia (A)
A = -logT
A = 2 – log T%
 INSTRUMENTACIÓN

Interruptor
Fuente Detector Lectura
luminosa Cubeta
P0 PT

Amplificador
p0
Sistema
dispersor de luz
Adquisición digital
de datos

Fuentes continuas
(D2 y W) Fotomultiplicador
Fotodiodos
Prismas
Redes de difracción Cuarzo (UV)
Vidrio óptico (visible)
Plástico (descartables) 28
 FUENTES CONTINUAS

Espectro de emisión de una lámpara de arco de D2 y filamento de tungsteno

Bulbo de cuarzo o vidrio que contiene al

filamento de tungsteno

29
 Fuentes continuas
Lámparas de Hidrógeno y Deuterio (160 – 375 nm)

D2 + Ee → D2* → D’ + D’’ + h
Molécula excitada de deuterio
con energía cuantizada
(discreta)
Bulbo de cuarzo relleno con
deuterio; contiene un par de
electrodos.
Disociación en dos átomos
de deuterio con diferentes
energías cinéticas

Ee = ED2* = ED’ + ED’’ + hv

Ee es la energía eléctrica absorbida por la molécula. E D2* es la energía cuantizada

de D2*, y ED’ y ED’’ son las energías cinéticas de ambos átomos de deuterio 30
 Fuentes continuas
Lámparas de Tungsteno (350-2500 nm)

Emisión de cuerpo negro (dependiente de la temperatura)

• Se le agrega I2 W + I2 → WI2

• ayuda a conservar el filamento

• aumenta la vida útil de la lámpara
• mejora su eficiencia luminosa
• reduce el tamaño del filamento
• mayor temperatura de color
• poca o ninguna depreciación luminosa
• reproducción del color excelente.

Apariencia de color: blanco

Temperatura de color: 29000 ºK
Vida útil: 2000 - 5000 h

31
Ley de Planck para emisión de un cuerpo negro
 DISPERSIÓN DE LUZ
Difracción por un prisma

El giro del prisma

α permite seleccionar
diferentes  -s.
Ranura

El ancho de ranura
define el ámbito de
longitud de onda

D (dispersión angular) = dθ/dλ = dθ/dη * dη/dλ η : índice de refracción

dθ/dη es máxima para α = 60º ηm = c/vm

R = λ (medio) /Δλ no es lineal, pues depende de dη/dλ

32
 DISPERSIÓN DE LUZ
Difracción por redes de difracción
• Por transmisión (transparentes)
• Por reflexión (placas de plástico, moldeadas sobre red primaria, cubiertas de Alº)

Interferencia positiva sólo si

CB + BD = n·λ
CB = d·sen i
Luz colimada y coherente
BD = d·sen θ
(haces paralelos y en fase)
con ángulo de incidencia i n·λ = d·( sen i + sen θ )
θ
Ecuación de la red

d = 1 mm/1000

D (dispersión angular) = dθ/dλ = n/ d*cosθ ~ n/d

D (dispersión lineal) = dy/dλ = F*dθ/dλ ~ F*n/d 33
 DISPERSIÓN ANGULAR Y LINEAL DE UNA RED DE DIFRACCIÓN

D (dispersión angular) = dθ/dλ

n   = d  (sen i + sen rθ )
sen i = cte d = cte n = cte
n  d = d  cos rθ  dr
dθ
dr
dθ n
cos θ  1  D= = = cte
d d
D (dispersión lineal) = dy/dλ
dsen rθ cos rθ dr
dθ dθ
dr n
Dlineal = F  =F  F  = F  = cte
d d d d
34
DIAGRAMA DE DISPERSIÓN POR UNA RED DE DIFRACCIÓN

n·λ = d·( sen i + sen θ )

35
COMPARACIÓN DE PRISMAS Y RED DE DIFRACCIÓN

36
 EQUIPOS CON PRISMA Y CON RED DE DIFRACCIÓN

Con prisma de Littrow

30º espejado (evitar birrefringencia)
Con espejo de Littrow

Con red de difracción

37
MONTAJE TIPO EBERT

38
 MONTAJE DE CZERNY - TURNER

Monocromador Fastie-Ebert:
es similar al Czerny-Turner pero usa un
único espejo de enfoque/colimador.

39
 EFECTO DEL ANCHO DE BANDA ESPECTRAL
3ra clase

Ancho de banda: desplazamiento del monocromador (en unidades de λ) necesario para barrer
la ranura de salida con la imagen de la ranura de entrada

w = Δλa mitad de altura

w = ¾ Δλ

HAY RESOLUCIÓN cuando

2·ancho espectral de la ranura =
ancho de banda efectivo

w = 1/2 Δλ
2w = Δλ
40
EFECTO DEL ANCHO DE BANDA ESPECTRAL
SOBRE EL ESPECTRO DEL CITOCROMO C

41
 EFECTO DEL ANCHO DE RANURA

Rendijas angostas Rendijas angostas

 mayor estructura fina en los espectros  disminuye la intensidad luminosa
 se obtienen absorbancias mayores  disminuye la relación S/R
(ver exactitud fotométrica)

Situación de compromiso
 reducir el ancho de la rendija lo suficiente como
para resolver estructura fina sin pérdida de sensibilidad 42
REPASO ELECCIÓN DEL ANCHO DE RANURA
La función principal del monocromador es proveer un haz de energía radiante de
longitud de onda y ancho de banda espectral dados.

La función secundaria es el ajuste de la

potencia luminosa: la luz emergente de
la ranura de salida puede ser controlada
por ajuste del ancho de la rendija.

Rendijas anchas
Bandas anchas y
desviación de la ley de Beer

Rendijas angostas
Bajo rendimiento lumínico y
disminución de S/R

43
 SISTEMAS DE DETECCIÓN
Diagrama de un fotomultiplicador
La señal se amplifica en cada dinodo, que está
aproximadamente 90 V más positivo que el
dinodo anterior.
Eventualmente, los electrones se recogen en
el ánodo. En este momento, se han producido
106 - 107 electrones por cada fotón incidente;
la corriente resultante es amplificada y
medida.

44
 Requisitos a cumplir:
• Responder a una amplia región de λ de Eradiante
• Ser sensibles a bajos niveles de Eradiante
• La respuesta debe ser rápida
• La señal eléctrica producida debe ser fácilmente amplificable
• Debe tener un nivel bajo de ruido
• La señal eléctrica generada debe ser directa y linealmente
proporcional a la potencia del haz incidente sobre el detector
G = k” + k´P G = i, R, V
k” = corriente negra
A = log Po/P = log (k´Go/k´G) = k´= sensibilidad
= log (Go/G)
45
 RESPUESTA ESPECTRAL
DE SUPERFICIES FOTOSENSORAS

46
 SISTEMAS DE DETECCIÓN
Fotodiodo
El diodo ideal es un componente discreto que permite la circulación de corriente entre sus
terminales en un determinado sentido, mientras que la bloquea en el sentido contrario.

• Están constituidos de una capa de Si tipo-p

(dopado con In, B ó Ga) sobre un soporte de
Si tipo-n (dopado con As, P o Sb) , creando un
diodo de unión p-n cubierto por una ventana
de SiO2 a modo de protección.
• Cuando se polariza inversamente, los
electrones y huecos se alejan de la zona de
unión, formando una zona de depleción que
actúa como un capacitor, con cargas
acumuladas a ambos lados de la interfase.47
 •Se observa que en la zona de depleción
no hay prácticamente electrones ni
huecos libres. En esencia, el dispositivo
se asemeja a un condensador en el que
la región intermedia sirve de dieléctrico y
las zonas dopadas actúan como placas
cargadas de un condensador.

• El campo electrostático principal existe

dentro de la región de depleción y
cualquier par electrón-hueco tenderá a
separarse (en direcciones opuestas)
atraído por la tensión en la zona de
depleción y la tensión de polarización
inversa aplicada.

•La generación de pares ocurrirá a varias

profundidades, dependiendo de la
energía de los fotones y de la naturaleza
y grosor de los materiales.

•Si se producen pares electrón-hueco fuera de

la zona de depleción, tendrán una elevada
probabilidad de recombinación, en cuyo caso no
habrá fotocorriente disponible. 48
La medición de corriente, con funcionamiento a tensión constante mientras el diodo
detecta la fotocorriente, es generalmente el mejor modo de funcionamiento.
La corriente del fotodiodo es en este caso lineal en varias décadas, y es igual a:

Ifoto = q η r Jr AD

• q = carga del electrón (1,6 X 10-19 C).

• η r = rendimiento cuántico, electrones/fotón.
• Jr= flujo de radiación de la fuente,
fotones/(seg) (cm2).
• AD= área del detector, en cm2.

Características:

• el espesor de la capa p superior debe ser tan delgada como sea posible y la
zona de depleción efectiva tan ancha como sea posible, para llevar al máximo el
rendimiento cuántico.
• La zona de depleción puede ensancharse aumentando la polarización inversa
del diodo.
•Aumentando la polarización inversa también disminuye el tiempo de tránsito que
tardan los electrones y los huecos en alcanzar los extremos. 49
 ARREGLO DE FOTODIODOS

Al principio de cada medida, el diodo está

completamente cargado. Cuando incide la
radiación, los electrones libres y huecos
( unión p-n ) creados migran a la región de carga
opuesta, descargando parcialmente el
capacitor, siendo la carga remanente
10 pF inversamente proporcional a la potencia
radiante. La descarga del capacitor al final
Tamaño real
de la medida es determinada por medición
5V de la corriente requerida para cargar
nuevamente el capacitor.

50
 INSTRUMENTACIÓN

Clasificación según arreglo óptico Clasificación según monocromador

• Mono haz • Fotómetros

• Doble haz en el espacio • Espectrofotómetros
• Doble haz en el tiempo
• Multicanal

 Fotómetros: son instrumentos más simples que utilizan

filtros como elemento monocromador. Sólo detectan una
única longitud de onda por vez, tienen una relación S/R
alta debido a la simpleza de la óptica y son poco
costosos.
 Espectrofotómetros: son instrumentos que contienen
elementos dispersivos (redes o prismas) como
monocromadores, algunos permitiendo el barrido
simultáneo de varias longitudes de onda. Son más caros,
y usualmente tienen una relación S/R menos favorable
debido a la complejidad de la óptica. 51
 TIPOS DE INSTRUMENTAL
Instrumentos mono haz

Pueden ser de lectura única o de barrido digital (almacenado en memoria)

Diseño instrumental simple
Sensible a: 1.- fluctuaciones o parpadeo de la fuente
2.- deriva o parpadeo del detector

 0% T se fija con el obturador en el paso de luz

 100%T se ajusta con la solución en la cubeta
 Se toman las demás medidas colocadas en forma sucesiva en la cubeta
 Se calcula A = log P0/PT 52
 EQUIPO SIMPLE HAZ

Espectrómetro Bausch & Lomb (Spectronic 20)

 Bajo costo (U$S 500 a 3000)

 380 nm < λ < 800 nm
 Resolución 8 – 20 nm

53
 TIPOS DE INSTRUMENTAL
Instrumentos doble haz en el espacio

 Solución blanco y analito se leen simultáneamente

y la señal de referencia es restada de la señal de la muestra
 La mayor desventaja es la necesidad de 2 detectores (apareados),
que hace al instrumento más caro
54
 TIPOS DE INSTRUMENTAL
Instrumentos doble haz en el tiempo

 Es el tipo doble haz comercialmente más utilizado

 Ventajas respecto a un simple haz:
 compensación por variación de la intensidad de la de fuente
 compensación por deriva del detector y amplificador
 compensación por variación en la intensidad como función de λ
La señal de salida periódica permite filtros basados en frecuencia
55
EQUIPO DOBLE HAZ MANUAL

56
EQUIPO DOBLE HAZ CON UNA CUBETA

57
EQUIPO DOBLE HAZ CON DOS CUBETAS

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 TIPOS DE INSTRUMENTAL
Mono haz Doble haz

Simple haz Doble haz

Lámparas W/I2 - D2 W/I2 - D2
Rango 200 –900 nm 200 –900 nm
Costo U$S 3000 -U$S 8000 U$S 4000 -U$S 15000
Resolución 0,5 to 8 nm 0,1 to 3 nm
Exactitud ± 0,05 nm ± 0,03 nm
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 EQUIPO DOBLE HAZ CON DISPERSIÓN DOBLE

 La luz pasa dos veces a través del monocromador aumentando

grandemente la resolución
 Ancho de banda: 0,07 nm
 Luz espuria: 0,0008%
 Caro (> U$S 10000) 60
 TIPOS DE INSTRUMENTAL
Espectrofotómetro con arreglo de diodos (multicanal)

 Capacidad de barrer (registrar) el espectro en ≈ 0,1 seg.

 Promedia la señal durante 1 seg. o más para aumentar la relación S/R
 Posee alto rendimiento de energía radiante debido a la óptica escasa
 Resolución 0,2 nm
 Bajo costo
 Interferencia por difracción de segundo orden
 Fluorescencia de la muestra
 La resolución depende de la red y del arreglo de diodos
 Ruido del detector
61
EQUIPO MULTICANAL DE DOBLE HAZ

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 Tamaño compacto
 Barrido rápido (≈ 0,1 seg.)
 Rango: 200 – 800 nm
 Ancho de banda: 2 nm
 Costo: U$S 3000 – U$S 10000

63
4ta clase Ley de Lambert-Beer
Transmitancia (T)

P = potencia transmitida
P0 = potencia incidente

Absorbancia (A)
𝐼𝑇
T= = 10 -εbc
𝐼𝑜
𝐼𝑇
A = -logT = -log = εbc
𝐼𝑜
A = 2 – log T%
 Limitaciones reales (fundamentales) de la Ley de Beer

• La radiación incidente debe ser monocromática.

• Los centros absorbentes deben actuar independientemente, libres de
interaccciones electrostáticas mutuas, en el momento de la absorción →
[analito] < 0,01 M
• La sección transversal (x*y) del volumen donde ocurre la absorción debe
permanecer constante a lo largo del paso óptico.

Limitaciones aparentes de la Ley de Beer

Limitaciones instrumentales Limitaciones del sistema químico

• Falta de monocromaticidad • Equilibrios: disociación, pH,

• Luz espuria
• Relación señal a ruido
formación de complejos
• Interacción por concentración o
puente de H
• Cambio en el índice de refracción
• Fluorescencia o fosforescencia
Limitaciones instrumentales de la Ley de Beer: radiación policromática
 Limitaciones instrumentales de la Ley de Beer: luz espuria

PS = stray light
P + PS
T =
P0 + PS
A =  log T
 P + PS 
A =  log  
 P0 + PS 
A = abc = kc
• La luz espuria limita el límite superior instrumental de lectura de Absorbancia:

Si Ps = 1% A = log[(P0+0,01P0)/(0+0,01P0)] = log(1,01/0,01) ~ 2

• El límite inferior de absorbancia lo fija el ruido instrumental

 Limitaciones instrumentales de la Ley de Beer: relación señal a ruido

Definición: es la mínima concentración o masa

de analito que se puede detectar con un nivel
de significación dado.

Depende de las fluctuaciones de la señal del

blanco.
 Limitaciones instrumentales de la Ley de Beer: ruido instrumental

Δ c 0.434 DT
A: - Corriente negra o ruido del amplificador : proviene = ( )
de la agitación térmica (aleatoria) de los electrones. c log T T
Ocurre fundamentalmente en resistencias,
condensadores, detectores de radiación y
demás elementos resistivos.
Depende de la temperatura, es independiente de la
frecuencia de trabajo pero depende del ancho de banda.
Mínimo para 0,1 < A <1
𝑉𝑎𝑣 = 4𝑘𝑇𝑅Δ𝑓

B : - Ruido de disparo: menor en magnitud, proviene del

movimiento de electrones o fotones en los nodos o
uniones n-p. Es aleatorio. Depende del valor de la
corriente, del ancho de banda y es independiente de la
frecuencia de trabajo.
Importante si A < 0,02 𝑖𝑎𝑣 = 2𝐼𝑒Δ𝑓

C: - Ruido de parpadeo: es proporcional a la magnitud

de la señal; depende de la construcción y ensamblado
de resistencias y detectores de fotones. Otra causa es la
variación de alimentación de la lámpara, o dispersión.
Rango óptimo: 0,2 < A < 0,9 2
𝑉𝑎𝑣 = 𝐾𝐼 /𝑓
 Precisión fotométrica: curva de Twyman-Lothian

Suposiciones:

 ∆T es independiente de T
 incertidumbre en b: se evita por cubetas apareadas
 incertidumbre en ε : se minimiza por regresión lineal

Etapas:

 Ajuste de 0%T
 Ajuste de 100%T
 Medida de %T
(10 a 20 veces)

Δ c 0.434 DT
= ( )
c log T T
 y ya que estamos… Exactitud fotométrica

Exactitud fotométrica: está basada en la relación

entre el cambio en la potencia radiante y
la transmitancia medida
T

muestra

Parámetros afectan la exactitud fotométrica :

• ancho de rendija respecto al ancho de la banda

w
W w < 10% ancho de banda (Cuidado! S/R puede disminuir!)
• barrido del espectro muy rápido respecto de w: los máximos
se corren en la dirección de barrido y aparecen achatados.
• inexactitud en fijar λ
• luz espuria (importante para IT bajas o en zonas de baja
sensibilidad del detector)
 Limitaciones del sistema químico de la Ley de Beer:
equilibrio ácido base
AH (absorbente) ↔ A- (absorbente) + H+
Rojo de metilo Si los espectros de las sustancia puras AH y A-
se cruzan a una λ determinada, entonces
cualquier espectro de las sustancias en
situación de equilibrio se cruzará a esa λ,
llamada punto isosbéstico

Fenolftaleína
La existencia de un punto isosbéstico es
evidencia de que sólo dos especies están
presentes en la reacción química

Gráfico 3D de la fenolftaleína
• Incolora a pH < 8,0
• Rosada a pH>9,5 con modificación de la
estructura molecular
 Limitaciones del sistema químico de la Ley de Beer:
Interacción por concentración/puente H
Limitaciones del sistema químico de la Ley de Beer:
formación de complejos

Cuando la especie absorbente es un ion complejo, la concentración del ligando libre

debe ser constante y en exceso (~100 veces) respecto a la del analito

Limitaciones del sistema químico de la Ley de Beer:

disociación/asociación

Limitaciones del sistema químico de la Ley de Beer:

Cambio del índice de refracción por concentración
C < 10-3 M, ε constante
Para altas concentraciones, η varía considerablemente
y por lo tanto ε también, causando desviación
 de la ley de Beer
 =  (verd )
( 2 + 2) 2
 Interferencias espectrales

Las interferencias espectrales

son siempre positivas (aditivas)
y afectan la EXACTITUD

Las interferencias espectrales detectadas deben corregirse por:

 separación del analito o del interferente
 enmascaramiento del interferente
 uso de un método más selectivo o sensible
 determinación simultánea
 Debemos disponer de tantas ecuaciones como incógnitas
 Las absortividades molares se obtienen de las curvas de calibración de los
analitos puros
 Esta técnica es confiable para la determinación de hasta tres analitos
 Para análisis de multicomponentes se requiere de un software quimiométrico
capaz de efectuar el reconocimiento del patrón espectral (pattern recognition)
El planteo de las ecuaciones es válido si:
• los componentes son mutuamente independientes
• para ambos se cumple la ley de Beer (ámbito lineal)

Cuando se dispone de los espectros de las sustancias puras y de la mezcla desconocida:

• se eligen longitudes de onda en las que Δε sean máximas
• se miden A a varias longitudes de onda (λn)
• el sistema puede extenderse a más de dos componentes (tomados de a pares)

An = εMn.b.CM + εNn.b.CN (a λn)

𝐴𝑛 𝐴𝑛 εNn
εMn.b εMn.b = CM + CN . εMn

CN
CM εNn
εMn
 Interferencias químicas

Las interferencias químicas son generalmente negativas

y proporcionales a la concentración del interferente
Afectan la EXACTITUD

Se considera interferente todo aquello que altera el equilibrio químico,

influyendo sobra la concentración de la especie absorbente y la concentración
total del analito.

Ejemplo:
 pH
 presencia de otros ligantes que formen complejo con el analito
 concomitantes que compiten con el analito por el ligante

Una vez detectadas las interferencias, éstas se deben eliminar o corregir.

Si no es posible, se debe recurrir a la separación del analito u otros métodos
de cuantificación que contemplen la presencia del interferente.
 Espectrometría derivativa

Si un espectro se representa
como la absorbancia A como
función de la longitud de onda λ,
los espectros derivados son: W =1

W =0.53

W =0.34

El número de bandas que aparecen

es igual a n+1

• bipolar • aparecen líneas satélites

• La función es 0 a λmáx • λmáx coinciden
Obtención de espectros derivados

Una forma matemática de obtener espectros derivados

es digitalizando con intervalos de ∆λ apropiados al ancho
de banda natural del analito y al ancho de banda espectral
del instrumento.

n=1

n=2

O bien por ajuste de un polinomio :

Aλ = a0 +a1λ1+a2λ2+…alλl

Cuantificación

Si se asume que un espectro de orden cero cumple con la

ley de Beer, debe existir una relación lineal similar entre la
concentración y la amplitud de la banda para los órdenes
superiores.
Tomando la diferencia entre el mínimo menor y el mayor
máximo se logra la mejor relación S/R, pero es más
sensible a errores por interferencia de otros componentes
Ventajas y Aplicaciones

• Identificación y caracterización

• mayor resolución (ver Fig.1)

• resolución de interferencia mutua

• eliminación del fondo:

en el barrido espectral, el fondo es constante
y por lo tanto su derivada es cero)
Ventajas y Aplicaciones • Interferencia por adición
de luz dispersada (aprox. 10%) y su
• mejora la exactitud en la cuantificación de eliminación por derivatización
componentes con ancho de banda
pequeño frente a otro componente (fondo o
dispersión) con ancho de banda mucho mayor.

160 nm NBW 40 nm NBW

1A 1A

-∆NBW
∆A

40 nm NBW
0.01A

• supresión de matriz
• mayor sensibilidad
• Análisis de trazas