UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA Y TECNOLÓGICA DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS

ESCUELA DE QUIMICA
QUMICA

AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE HESPERIDINA A PARTIR DE CÁSCARAS DE

NARANJA Y MANDARINA
Álvarez, Brandon,a Guamán, Patricia,a Sandoval, Andreaa
Laboratorio de Química Medicinal, Rotonda Norte, Centro de Laboratorios. Universidad Pedagógica y
Tecnológica de Colombia, Avenida Central del norte 39-115, Tunja, Boyacá, Colombia.a

Resumen: En el presente trabajo se realizo la extracción de hesperidina a partir de

cáscaras de naranja mediante la técnica de extracción por reflujo y cáscaras de
mandarina mediante la técnica Soxhlet usando como disolvente metanol. Las distintas
técnicas de extracción utilizadas presentaron diferencias significativas en cuanto a la
cantidad de hesperidina extraída con un rendimiento de extracción de 0,865 % para la
cáscara de naranja y 0,143% para la cáscara de mandarina. La caracterización física se
realizó mediante cromatografía en capa fina (TLC), espectroscopía UV-Vis y resonancia
magnética nuclear protónica (RMN-1H) y la caracterización química se realizó a través de
la prueba de Shinoda y prueba para fenoles. Se observó que la hesperidina obtenida a
partir de las cortezas de naranja presentó un mayor rendimiento de extracción, grado de
pureza adecuado y resultados positivos para las pruebas de caracterización química
frente a la hesperidina obtenida a partir de la corteza de mandarina.
Abstract: In this work, the extraction of hesperidin from orange peels was carried out
using the technique of reflux extraction and tangerine peels using the Soxhlet technique
using methanol as solvent. The different extraction techniques used showed significant
differences in terms of the amount of hesperidin extracted with an extraction yield of
0.865% for orange peel and 0.143% for tangerine peel. The physical characterization was
carried out by thin layer chromatography (TLC), UV-Vis spectroscopy and proton nuclear
magnetic resonance (1H-NMR) and the chemical characterization was carried out through
the Shinoda test and phenol test. It was observed that the hesperidin obtained from the
orange rinds had a higher extraction yield, adequate degree of purity and positive results
for the chemical characterization tests against the hesperidin obtained from the mandarin
bark.
1. INTRODUCCIÓN actividades biológicas: antioxidante,2
antimicrobiana,3 antiinflamatoria,4
En general, los flavonoides pertenecen al inmunomoduladora, 5 antiviral,6
grupo de los compuestos fenólicos, un antiproliferativa,7 antimutagénica,8
grupo de metabolitos numerosos que anticarcinogénica, 9 acciones
abarcan aproximadamente 8.000 vasodilatadoras, y prevención de
sustancias, divididas en 22 grupos con enfermedades coronarias y desórdenes
una estructura común, determinada por neurodegenerativos,10
un anillo aromático unido al menos a un
sustituyente hidroxilo (grupo fenol) y En los cítricos, los flavonoides más
frecuentemente se encuentran como abundantes son aquellos pertenecientes
derivados de ésteres, éteres y a los grupos de las flavonas, flavanonas,
glicósidos.1 Los compuestos fenólicos chalconas y dihidrochalconas. Estos
han mostrado una amplia variedad de compuestos tienen una distribución

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restringida, lo cual hace que sean
descritos como flavonoides minoritarios a
pesar de estar presentes en
concentraciones significativas en
algunos alimentos de alto consumo.11
El flavonoide hesperidina fue aislado por
primera vez por Leberton, en 1828, de la
parte interna de la cáscara de la
naranja12. Posteriores investigaciones
han estudiado la extracción de este
metabolito a partir de la cascara de
mandarina13, limon14 y toronja15
principalmente.
Figura 1. Estructura de la hesperidina13.
La hesperidina está formada por una
aglicona, hesperetina y un disacárido
unido, rutinosa (figura 1). La hesperidina
se presenta cono una sustancia solida
que es fácilmente soluble en piridina y
soluciones alcalinas, generando una
solución amarillenta clara; presenta
ligera solubilidad en metanol, ácido
acético glacial caliente y nula solubilidad
en acetona, benceno y cloroformo. En
soluciones acuosas disuelve una parte
por cada 5000 de agua. En estado puro
se produce como agujas y tiene un color
entre blanco y amarillo pálido, insípida e
inodora; presenta una formula molecular
C18H34O15 con un peso molecular de
610,57 g/mol y un punto de fusión entre
258 y 260°C.13,16 En este trabajo se
realizó la extracción de hesperidina a
partir de cascaras de naranja y
2
mandarina efectuando una comparación
en el rendimiento de extracción
contrastando las técnicas empleadas y la
corteza del fruto empleado con posterior
caracterización físico-química del
producto obtenido mediante pruebas
químicas y análisis UV-Vis, TLC y RMN-
1H.
2. MATERIALES Y MÉTODOS
2.1. Extracción de hesperidina
Se tomó las cortezas de naranjas y
mandarinas dejándose secar a
temperatura ambiente por un periodo de
una semana. Posteriormente se procedió
a cortar en pequeños trozos las cortezas
de naranja y mandarina reportándose un
peso inicial de 30,168 g y 30,760 g
respectivamente. Cada corteza por
separado se empaquetó dentro de un
dedal de papel filtro y se introdujo en un
extractor Soxhlet con 150 mL de éter de
petróleo (40-60°) dejándose hasta
observar desaparición del color por parte
del disolvente (el éter de petróleo se
recuperó por medio de un proceso de
rotaevaporación).
Las cortezas residuales se dejaron secar
a temperatura ambiente con
subsiguiente extracción con 150 mL de
metanol para cada una de las cortezas:
para la cascara de mandarina se
procedió a realizar en un sistema Soxhlet
y para la cáscara de naranja se realizó
bajo un sistema de reflujo, dejando cada
uno de los sistemas actuando por un
tiempo aproximado de dos horas. Cada
uno de los extractos metanólicos
obtenidos del paso anterior se
concentraron hasta obtener una
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consistencia de jarabe mediante preparación de la muestra se disolvió 10

rotaevaporación, procediendo
recuperar el disolvente utilizado
(metanol). Los jarabes obtenidos se
disolvieron en 50 mL de una solución de
ácido acético al 6% hasta formación lenta
de un precipitado amarillo-blancuzco; se
filtró la solución y se recuperó el
precipitado que se llevó a secado a
temperatura ambiente. Una vez seco, se
procedió a su purificación mediante
lavado en acetona caliente y se registró
los pesos finales del extracto aislado.
2.2. Caracterización química
En la identificación de flavonoides se
efectuó la prueba de Shinoda: se tomó 4
mg del extracto y se disolvió en 1 mL de
etanol al 95%; se adicionó una pequeña
lámina de magnesio y unas gotas de
ácido clorhídrico concentrado.
En la identificación de taninos se tomó
3,5 mg del extracto con disolución en 1
mL de etanol al 95%; luego se adicionó
unas gotas de solución de cloruro férrico
al 5%.
2.3. Caracterización física
Cromatografía en capa delgada
Se realizó pruebas de solubilidad
empleando mezclas de
diclorometano/metanol y significativas en el rendimiento de
cloroformo/metanol en diferentes
proporciones. En base a los ensayos
realizados anteriormente, se procedió a
realizar cromatografía de capa delgada
en placas de silica gel, utilizando como
fase móvil diclorometano/metanol y
cloroformo/metanol en proporciones 3:1
y 1:1 respectivamente. Para la
a mg de alopurinol en una mezcla
cloroformo/metanol 1:1, se aplicó por
separado en cada placa dejando correr la
muestra hasta que recorrió
aproximadamente las tres cuartas partes
de la longitud de la placa. Se retiro la
placa, se marcó el frente del solvente y
se revelo en una cámara adaptada con
yodo.
Espectroscopia UV-Vis
Se realizó la toma del espectro UV-Vis
mediante un barrido espectral a un rango
de 190-1100 nm mediante un
espectrofotómetro UV-Vis (Mapada UV-
1800PC).
Espectroscopia de resonancia
magnética nuclear protónica
Por último, se realizó la toma del
espectro RMN-1H mediante un equipo
Bruker AscendTM – 400, que opera a
400 MHz para RMN-1H. Se utilizó
dimetilsulfóxido deuterado como
disolvente, usando las señales
residuales del mismo como referencia (δ:
2,52 ppm en RMN-1H).
3. DISCUSIÓN Y RESULTADOS
Las extracciones realizadas por los dos
métodos tuvieron diferencias
extracción debido a las técnicas
empleadas para cada caso, así como el
tipo de corteza usada. La extracción
realizada a partir de la naranja con
extracción por reflujo tuvo el mayor
rendimiento de extracción (0,865%) en
comparación con la extracción realizada
a partir de la mandarina con extracción

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Soxhlet (0,143%). Esto puede indicar que
probablemente la naranja posea un
mayor contenido de hesperidina en
comparación con la mandarina o que la
técnica por Soxhlet no es la apropiada
para el aislamiento de este tipo de
compuestos.
De acuerdo con lo reportado por
Dominguez17, la cantidad de hesperidina
encontrada en naranjas y mandarinas es
de 35-80 mg/Kg y 2,43-3,99 mg/Kg
respectivamente, valores superiores a
los resultados obtenidos en este estudio.
Cabe decir que el valor reportado es para
todo el fruto como tal y no solo para la
corteza, por lo cual estos datos sólo
pueden ser comparativos de forma
parcial.
Las pruebas químicas realizadas al
extracto aislado dieron prueba positiva,
indicando que el extracto contiene dentro
de su estructura taninos y flavonoides.
La prueba de Shinoda es positiva cuando
el compuesto presenta un flavonoide
(flavonas, flavonoles y flavanonas) con
núcleo benzopirona que reacciona en
presencia de magnesio y ácido
clorhídrico concentrado en disolución
alcohólica, generando un complejo rojizo
en la solución13 (figura 2):
Figura 2. Esquema general de la
reacción de Shinoda13.
4
La prueba con tricloruro de hierro es
aplicable a la identificación de taninos,
los cuales son polímeros de los
polifenoles con 1 a 2% de hidróxidos
fenólicos libres, los cuales precipitan en
presencia de cloruro férrico, provocando
una ruptura de enlace y la unión del
grupo fenóxido al hierro formando un
complejo de coloración oscura.13 (figura
3).
Figura 3. Reacción de fenol con cloruro
férrico.
Las pruebas se solubilidad aplicadas al
extracto mostró el mejor resultado para
una mezcla CHCl3/CH3OH 1:1. Los Rf
obtenidos para cada placa
cromatográfica fueron 0,73 y 0,875 en
fases móviles de CH2Cl2/CH3OH 3:1 y
CHCl3/CH3OH 1:1, que concuerda con lo
reportado por Tarazona13. La diferencia
en los Rf se debe a la variación en los
solventes empleados y sus diversas
proporciones de aplicación, indicando
que un Rf ideal está entre 0,65 y 0,7.
El espectro UV-Vis (figura 4) arrojó un
máximo de absorción a 295 nm y un
hombro de absorción a 335 nm;
Tarazona13 reportó para este compuesto
un máximo de absorción a 289 nm con
una inflexión de baja intensidad a 330 nm
siendo picos muy próximos a los
mostrados por el extracto obtenido que
da un indicio correspondiente a la
presencia de hesperidina.
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debido a su enlace con el oxígeno que es

Figura 4. Espectro UV-Vis realizado al
extracto.
El espectro RMN-1H permite reconocer
características estructurales importantes
del compuesto a identificar. En los
anexos se muestra el espectro protónico
obtenido para el extracto aislado. Se
observa la presencia de un doblete a un
δ 1,070-1084 ppm correspondiente a los
protones de grupo metil en la posición 2ʹʹʹ
que se encuentran altamente protegido
por lo cual están en campo alto. En la
región comprendida entre 2,747 y 3,766
ppm se encuentran los protones
asociados a la molécula de rutinosa ya
que se encuentran en ambientes
químicos similares. En la región
comprendida entre 4,498 y 4,976 ppm se
asocian los grupos -OH en la molécula de
rutinosa. Entre 5,191 y 5,477 ppm se
relaciona con los protones cercanos a los
enlaces O-glucosidicos. A partir de 6,117
y 6,931 ppm se relaciona con los
protones de los anillos aromáticos
presente en la flavonona y por último a
9,137 ppm se relaciona la grupo -OH de
la posición 3ʹ del 3 anillo de la flavonona
al estar muy desprotegido ese protón
muy electronegativo.
CONCLUSIONES
Se logró aislar un extracto a partir de las
cáscaras de mandarina y naranja con un
buen grado de pureza indicado por las
pruebas realizadas en su caracterización
fisicoquímica. Se observó variaciones en
el rendimiento de extracción debido a las
distintas técnicas de extracción
empleadas, así como el uso de dos
diferentes fuentes de hesperidina
reportándose un mayor contenido de
este flavonoide en la naranja con un valor
de 0,865%. Las pruebas químicas
aplicadas arrojaron resultados positivos
para la presencia de taninos y
flavonoides dentro de la estructura del
extracto aislado. En las técnicas UV-Vis
y RMN-1H los resultados fueron
concordantes con lo reportado por la
literatura13, que junto con las pruebas
químicas confirman que el compuesto
aislado corresponde al flavonoide
hesperidina. Se recomienda en futuros
estudios asociados con la hesperidina
tomar un mayor número de muestras
para tener resultados significativos
hablando en términos estadísticos,
consultar técnicas alternativas de
extracción menos agresivas tales como
microondas y ultrasonido que minimizan
el riesgo de pérdida de muestra debido a
que este tipo de compuestos son
sensibles al calor y a la exposición
directa de luz. Con respecto a la
caracterización del extracto es sugerible
el uso de técnicas como IR,
espectrometría de masa y difractometria
de rayos X que permitan identificar de

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una manera conjunta junto con las
pruebas aplicadas el extracto obtenido
mediante este trabajo.
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