TECNOLÓGICO DE ESTUDIOS SUPERIORES

DE ECATEPEC

DIVISIÓN DE INGENIERÍA QUÍMICA Y

BIOQUIMICA
GRUPO: 3301 / 4302 PERIODO: 2017-2

FECHA DE ENTREGA: 16/OCTUBRE/2017

ANÁLISIS INSTRUMENTAL

REPORTE DE PRÁCTICA

N° 3
ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN VISIBLE
(CONSTRUCCIÓN DE UNA CURVA DE CALIBRACIÓN Y
DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE UNA
MUESTRA PROBLEMA)

EQUIPO 7

GASCA MELCHOR JENNIFER

LÓPEZ JIMPENEZ JOSÉ MARCOS

ROJAS NÁJERA CARLOS

TREJO MOLINA AURORA

PROFESORA. LUZ ISABEL MENDOZA LUNA

 OBJETIVOS
• Construir una Curva de Calibración

• Determinar la concentración de una muestra problema

CÁLCULOS.
CÁLCULOS PARA PREPARAR UNA SOLUCIÓN DE K2CR2O7 0.01M
Datos: Fórmula: Cálculos:
Concentración=0.01mol/L(M) m 1. Calculo del PM K2Cr2O7
Volumen=50ml ῀0.05L M
(PM)(VL )
PM K2Cr2O7=294.2gr/mol K= 39.1gr/mol x 2 = 78.2gr/mol
O= 16gr/mol x 7 = 112gr/mol
Incógnita: Despeje: Cr= 52gr/mol x 2 = 106gr/mol
(M)(PM)(VL)=m
gr K2Cr2O7= ¿? PM=294.2gr/mol

2. Calculo de los grs de K2Cr2O7

m= (0.01mol/L)(294.2gr/mol)(0.05L)=0.1471gr

Resultado
Pesar 0.1471gr de K2Cr2O7

CÁLCULOS PARA CALCULAR LAS CONCENTRACIONES DE LAS DILUCIONES A PARTIR DE LA SOL. STOCK
Datos: Fórmula: Cálculos:
C1=0.01M C1V1=C2V2 Dilución 1 (2ml)
V1=2,4,5,6 y 7 ml (0.01mol/L )(2ml)
V2=25ml Despeje: C2   0.0008mol/ L
25ml
C1V1
Incógnita: C2  Dilución 2 (4ml)
V2 (0.01mol/L )(4ml)
C2=¿? C2   0.0016mol/ L
25ml
Dilución 3 (5ml)
(0.01mol/L )(5ml)
C2   0.002mol/L
25ml
Dilución 4 (6ml)
(0.01mol/L )(6ml)
C2   0.0024mol/ L
25ml
Dilución 5 (7ml)
 RESULTADOS.
(0.01mol/L )(7ml)
C2   0.0028mol/ L
25ml

Concentración de la dil.1=0.0008mol/L
Concentración de la dil.2=0.0016mol/L
Concentración de la dil.3=0.002mol/L
Concentración de la dil.4=0.0024mol/L
Concentración de la dil.5=0.0028mol/L

TABULACIÓN DE LA ABSORBANCIA DE LAS DILUCIONES A 425 NM

N° de dilución Concentración (mol/L) Absorbancia a 425nm
1 (2ml) 0.0008mol/L 0.05nm
2 (4ml) 0.0016mol/L 0.875nm
3 (5ml) 0.002mol/L 1.068nm
4 (6ml) 0.0024mol/L 1.3nm
5 (7ml) 0.0028mol/L 1.5nm

1,5
1,3
Curva estándar de K2Cr2O7
1,1 y = 715.14x - 0.4145
Absorbancia nm

0,9 R² = 0.9656
0,7 Ecuación
0,5 obtenida
0,3
0,1
-0,1
-0,0002 0,0003 0,0008 0,0013 0,0018 0,0023 0,0028
Concentración mol/L

Grafica 1: Curva estándar del K2Cr2O7 obtenida a partir de la concentración y

absorbancia de las diluciones hechas a partir de la solución stock.

1,5
y = 715.14x + 0.4145 1,3 Ecuación
R² = 1
Absorbancias (nm)

1,1 obtenida
0,9
0,7
0,5
0,3
0,1
Curva estándar ideal del K2Cr2O7
-0,001 -0,0005 -0,1 0 0,0005 0,001 0,0015 0,002
Concentraciones (mol/L)

Grafica 2: Curvas estándar ideal del K2Cr2O7 obtenida a partir de la regresión

lineal en Excel.
 Absorbancia a 425 nm de la muestra problema
Absorbancia a 425 nm Concentración
0.24 nm ¿?

A partir de los datos obtenidos, se calculará la concentración de la muestra problema

utilizando un comando en Excel llamado TENDENCIA, en donde se seleccionan los valores
conocidos (concentración y absorbancia de las diluciones) y por último la absorbancia de la
muestra problema.
Datos de las diluciones ya conocidas Datos de la muestra problema
N° de Absorbancia a
dilución 425 (nm) Concentración mol/L Absorbancia (nm) Concentración
1 0.05 0.0008 0.74 ?¿
Calcular la concentración de la muestra
2 0.875 0.0016 problema
3 1.068 0.002 0.0016248
CONCENTRACIÓN DE LA MUESTRA
4 1.3 0.0024 PROBLEMA
5 1.5 0.0028 c=0.0016248

ANÁLISIS DE RESULTADOS.
En la gráfica uno, se puede apreciar la relación que existe entre las absorbancias y
las concentraciones de las diluciones a partir de la solución stock; por su parte, esta
curva de calibración se puede considerar como una “buena” curva patrón, ya que el
coeficiente de correlación (r2) nos indica que tan cercanos están los puntos de la
línea recta. Así mismo se puede apreciar que se cumple la Ley de Lambert-Beer,
en donde se dice que entre mayor concentración tenga la solución, mayor será su
absorbancia.

En la gráfica número dos, se observa una curva patrón IDEAL, ya que todos los
puntos graficados están sobre la línea recta, y el coeficiente de correlación es igual
a 1. Lo ideal es tener este tipo de curvas, pero existen diferentes interferencias que
impiden llegar a este tipo de gráficos.

Por otro lado, a partir de nuestros datos obtenidos de la absorbancia y la

concentración de las diluciones, podemos obtener la concentración de nuestra
muestra problema, la cual guarda una relación semejante a la solución stock. Una
curva de calibración es un gráfico que relaciona las absorbancias frente a las
concentraciones conocidas de diluciones a partir de una solución stock.
Se puede concluir que las absorbancias y las concentraciones de las diluciones,
guardan una relación lineal, ya que los puntos graficados en la curva de calibración
están muy cercanos a la recta, esto es posible deducirlo gracias al coeficiente de
correlación, que aunque no sea exactamente 1, está próximo a este; de esta forma
se puede decir que es una “buena” curva de calibración para poder obtener la
concentración de nuestra muestra problema, de lo contrario, si la relación existente
no fuera lineal, no sería apropiado utilizar la curva de calibración para calcular la
concentración de una muestra problema, ya que la tendencia a un error sería mayor.

Para realizar las curvas de calibración, lo ideal es que se tenga una línea recta que
pasa por todos los puntos, pero esto no siempre es así, ya que existen errores
aleatorios que impiden la correcta relación entre las absorbancias y las
concentraciones, los errores pueden: ser mal manejo del instrumento, una mala
preparación de la solución stock, la incorrecta limpieza de las celdas, material sucio,
etc. Pero para minimizar este tipo de errores, y obtener una curva de calibración lo
más cercana a una recta, es recomendable (y común) utilizar una regresión lineal
por medio del método de “mininos cuadrados”; este método se utiliza para “ajustar”
los datos obtenidos experimentalmente, y así obtener una curva de calibración lo
más cercana a una línea recta.

CONCLUSIONES

• Las absorbancias y las concentraciones de las diluciones guardan una

relación lineal, ya que los puntos graficados en la curva de calibración están
muy cercanos a la recta y cumple un comportamiento lineal como lo marca
la Ley de Lambert-Beer.

CUESTIONARIO
1. Explique que es una curva de calibración y que utilidad analítica tiene.
R= es una representación gráfica de una señal que se emite (del espectrofotómetro)
en función de la concentración del analito. Es útil para determinar la concentración
de una sustancia en una muestra desconocida.
2. Enuncie la Ley de Lambert-Beer.
R= “La absorbancia está relacionada linealmente con la concentración de las
especies absorbentes y con la longitud de la trayectoria de la radiación en el medio
absorbente”
La importancia radica en que relaciona la absorbancia con la longitud de onda a la
que absorbe la radiación de una sustancia,
 3. Investigue 5 aplicaciones concretas de los métodos espectrofotométricos.
a) Determinación de iones metálicos.
b) Biorremediación: analizar y confirmar la presencia de hongos o bacterias en el
cultivo de microorganismos.
c) Determinación del Pka de un indicador.
d) Determinación de la estabilidad térmica de los aceites vegetales.
e) Determinación de pigmentos en productos alimenticios.

BIBLIOGRAFÍA.

YouTube. (2017). Cuantificación de Proteínas. [online] Available at:

https://www.youtube.com/watch?v=ZA1lzPMyCMU [Accessed 15 Oct. 2017].

YouTube. (2017). curva de calibración. [online] Available at:

https://www.youtube.com/watch?v=STLO4W8yc7Y [Accessed 15 Oct. 2017].
YouTube. (2017). Métodos para realizar una curva de calibración. [online] Available at:
https://www.youtube.com/watch?v=gEFmrHSVBMQ&t=156 [Accessed 15 Oct. 2017].
YouTube. (2017). Tutorial: Cómo confeccionar una curva de calibración.. [online] Available
at: https://www.youtube.com/watch?v=V1lE-cx2fO4&t=22s [Accessed 15 Oct. 2017].
A.Skoog, D., James Holler, E. and A.Nieman, T. (2001) Principios de análisis instrumental