LABORATORIO

RESUMEN

El presente trabajo presenta el cultivo y estudio de características microorganismos presentes en 2

muestras de suelo y aire, las técnicas permiten aislar en una colonia de microorganismos, y
evidenciar en diferentes cultivos características de crecimiento bacteriano y estudiar sus
características morfológicas a partir de las tinciones de Gramm, tinta china, Rojo Congo, y Wayson
en donde se obtuvo …………. Y se obtuvo la siguiente identificación preliminar ……………….

ADSTRAC

The present report presents the cultivation and study of microorganism characteristics presented
in 2 soil and air samples, the techniques allow isolating in a colony of microorganisms, and evidence
in different cultures characteristics of bacterial growth and study their morphological characteristics
from the stains of Gramm, Chinese ink, Red Congo, and Wayson where it was obtained ............ And
the following preliminary identification was obtained ............... ....

INTRODUCCIÓN

Robert Koch fue el primero en cultivar bacterias en medio sólido. Él utilizó rebanadas de papa y
gelatina pero tuvieron inconvenientes grandes inconvenientes. Walter Hesse, un colaborador de
Koch sugirió utilizar el agar como agente gelificante y Petri diseñó dos placas circulares como mejora
del medio de cultivo, que son soluciones para cultivar microorganismos en el laboratorio. Desde el
siglo XIX, estas tres ideas establecieron la principal base para el aislamiento, diferenciación y estudio
microbiológico y sus invenciones hasta el día de hoy (Mandingan et al., 2009).

Para un Ingeniero ambiental es necesario conocer e implementar las técnicas necesarias para el
cultivo e identificación de un microorganismo el cual puede ser fuente de un problema sanitario por
ser patógeno, u objetivo de estudio para una propuesta de restablecimiento funcional ecológico.

Para el presente caso de 2 muestras aire y suelo, se realiza el cultivo en medio líquido, semisólido
y sólido. Rojas (2011) expone que mediante las técnicas de sembrado se aísla, mantiene y evalúan
distribución, apariencia, forma del crecimiento bacteriano, motilidad y morfología de las colonias.
Posteriormente, mediante las técnicas de tinción de Gram, tinta China, Rojo Congo para
determinar capsula y Wayson permite identificar esporas.

PROCEDIMIENTO Y MATERIALES
Los medios de cultivo realizados en el laboratorio son medio líquido, sólido y semisólido, de
bacterias procedentes del suelo. Previamente ha tomado una muestra de suelo de un
centímetro, y este se mezcla con agua peptonada de forma homogénea.

Medios Líquidos: Se esteriliza el asa al rojo vivo, se toma la muestra con el asa redonda
y se introduce en el tubo y se agita el asa para que quede de manera homogénea.
Finalmente se fija a la llama dos veces y se esterilizar el asa.
Medios sólidos: Se esteriliza el asa al rojo vivo, se toma la muestra con el asa recta y se
realiza un punción recta en la mitad del agar sin tocar el fondo. Finalmente se fija a la llama
dos veces y se esteriliza el asa.

Medios Semisólidos: Se esteriliza el asa, se toma la muestra y en el agar pico de flauta

con el asa redonda distribuir con movimiento en estría y fijar.
Tinción Gram: Es nombrada de esta forma en honor de Chistian Gram, quien fue el
bacteriólogo que la descubre. Se utiliza para realizar la clasificación y diferenciación de
las bacterias en dos grupos: Gram negativas o Gram positivas. El reactivo que se emplea
es el Cristal violeta, cuya función es dar color a todas las células. Igualmente se utiliza
Lugol, el cual actúa como mordiente y sirve para intensificar el color de la tinción y por
último fushina o Safranina, que es para contratinción.
El procedimiento inicia tomando de un cultivo en un agar nutritivo de una bacteria del aire,
se realiza flotes bacteriano en la lámina, se fija al calor con el mechero pasando tres veces
la lámina, se agrega Cristal violeta cubriendo el flotes y se deja actuar por un minuto y
seguido a esto se limpia con agua para eliminar exceso del colorante. Se agrega esta vez
lugol y se deja actuar por un minuto, se lava con el fin de eliminar el exceso de mordiente.
Luego se agrega fushina y se deja actuar por un minuto, se deja secar y por último se
observa al microscopio.
Tinciones específicas
Para identificar las capsulas: Para esto utilizamos Tinta China y Rojo Congo.
Tinción con tinta China: El procedimiento comienza agregando una gota de tinta China
en la lámina y después de haber tomado con el asa redonda la bacteria, se mezcla junto
con la tinta China, se coloca una laminilla buscando que no queden burbujas y observar al
microscopio.
Tinción con Rojo Congo: Se agrega una gota de Rojo Congo en la lámina y se mezcla
con la bacteria que previamente se ha tomado un fragmento de la colonia bacteriana en
este caso de un microorganismo del aire, y se realiza frotis, no se fija la lámina, se extiende
la suspensión buscando que quede una película delgada, dejar secar y se lava el flotes.
Agregar fushina y dejar por 1 min, lavar y observar por el microscopio.
Para identificar esporas
Técnica de Coloración Wayson: Se aplica sobre un flotis seco y se fija el colorante de
Wayson, despu{es de 30 segundos lavar.

RESULTADOS

Agar líquido, Semi-sólido y sólido

 Se presentan basilos gran positivos.
Rojo Congo

Fuente de imagen: Autores

En todos los agares se presenta crecimiento y
en el agar sólido no hay motilidad.

Tinción de gram:

No cuenta con capsula, negativo para

capsula.

Wayson

Se determino que el microorganismo del

suelo es gram positivo, por su coloracion
rosada.

Tinta China

Se determinó que las bacterias procedentes

del aire son cocos, positivo para esporas

Fuente: Autora
Se observa que no cuenta con capsula, por lo
tanto es negativo para capsula.

Tinción de gram Basillo de muestra de la DISCUSION DE RESULTADOS

docente. Resiembra Aire
Se puede observar que las bacterias de la
resembra son iguales a las de la siembra.

CONCLUSIONES

Se logró determinar si un microorganismo era

gram negativo o gram positivo, se realizaron
siembras en agares sólido, semisólido y
líquido y en estos se presentó crecimiento de
bacterias procedentes del suelo.

Por medio de las técnicas de tinción de tinta

China y Rojo Congo se analizó si el
microorganismo estudiado tenía capsula o no.
E igualmente con Wayson se determinó
esporas positivo negativo.

BIBLIOGRAFIA

Mandigan, T., Martinko, J., Dunlap, P. & Clark,

D. (2009) Brock, biología de los
microorganismos. Madrid: Pearson
Educación.

Rojas, A. (2011). Conceptos y práctica de

microbiología general. Palmira: Universidad
Nacional de Colombia.