Instituto Tecnológico Nacional – Instituto Tecnológico de La Paz

Asignatura. Microbiología
Práctica 1. Esterilización de material.

ESTERILIZACIÓN DE MATERIAL
Objetivos.
1. Preparar el material utilizado en la parte práctica de la materia de
microbiología
2. Esterilizar adecuadamente el material que se utilizará en el laboratorio.
Material.
Ácido clorhídrico 0.1 N Algodón
Agua purificada Bureta de 25 mL
Azul de metileno 0.03 Cajas Petri de vidrio de 100x150mm
Fenolftaleína 0.5 Cilindro de acero inoxidable
Hidróxido de sodio 0.1N Cinta testigo
Sacarosa al 1 Gasa, hilo de cáñamo
Papel kraff Gradilla
Pinzas para bureta/soporte universal Horno de esterilización
Tubos de cultivo bacteriológico c/tapa Masking tape
Matraz Erlenmeyer de 250 mL

Método.
A. Preparación del material para esterilización
a. Poner filtro de algodón a cada pipeta, utilizando un clip para lograrlo,
y envolverla en papel. Marcar el volumen de cada pipeta y la fecha
de preparación. En caso de tener cilindros de acero inoxidable
colocar en él las pipetas sin que queden muy ajustadas.
b. Envolver con papel las cajas de Petri, en grupos de 5. Colocarlas con
la tapa hacia abajo. De tener cilindros disponibles, lavas las cajas,
secarlas perfectamente y colocarlas con la tapa hacia abajo.
c. Poner el tapón de algodón al matraz Erlenmeyer y colocarle encima
un gorro de papel.
d. Esterilizar el material por calor seco según la siguiente tabla,
Esterilización por calor seco
Temperatura (C) Tiempo (Min)
121 360
140 180
150 150
160 120
170 60
180 30
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Asignatura. Microbiología
Práctica 1. Esterilización de material.

B. Manejo de diluciones (Preparación de diluciones decimales utilizando como

diluyente agua destilada y azul de metileno)
a. Con una pipeta de 10 mL agregue a una serie de 5 tubos de ensayo,
9 mL de agua purificada.
b. Con una pipeta de 1 mL adicione al primer tubo, 1 mL de azul de
metileno y haga las 4 diluciones decimales (1.10) seriadas.
c. Anotar observaciones
d. Colocar en un tubo de ensayo limpio de 16x150mm, 2 mL de
sacarosa + 2 mL de azul de metileno, añadir lentamente resbalando
por las paredes del tubo 6 mL de agua destilada. Agitar
cuidadosamente sin mojar el tapón.
e. Anote observaciones

C. Manejo de cajas y tubos

a. Colocar 10 mL de solución de HCL en el fondo de una caja de Petri,
añadir una gota de fenolftaleína y titular el ácido con NaOH.
Homogenice cuidadosamente para aprender a abrir y cerrar
perfectamente una caja de Petri.

D. Guía de observación
a. Describir correctamente la forma de utilizar una pipeta.
b. Explicar qué utilidad tienen las diluciones, mencione ejemplos.
c. Explicar que se observa en las diluciones de la primera serie (1.10),
registre el dato de cuál fue el factor de la dilución final.
d. Explicar en qué dilución ya no se detecta el colorante, discútalo.