Energia e enzimas 1

2 Energia e enzimas

A força que atravessa o rastilho verde dirige a flor

Dirige minha idade verde; que dinamita as raízes das árvores
É meu destruidor.
E eu estou mudo para descrever a rosa encurvada torcida
Minha juventude está encurvada pela mesma febre invernal.

A força que dirige a água através das rochas

Dirige meu sangue vermelho; que seca córregos caudalosos
Torna a lavar a mina.
E eu estou mudo para clamar até minhas veias
Como salta na montanha a mesma boca que suga.

Dylan Thomas, Poemas colecionados (1952)

Nessas estrofes de abertura do famoso poema de Dylan Thomas, o poeta pro-

clama a unidade essencial das forças que impulsionam de maneira semelhante
objetos animados e inanimados, desde o começo até o declínio final. Os cientis-
tas chamam essa força de energia. As transformações de energia desempenham
um papel-chave em todos os processos físicos e químicos que ocorrem nos
sistemas vivos. Mas a energia sozinha é insuficiente para dirigir o crescimento
e o desenvolvimento de organismos. Proteínas catalisadoras, denominadas en-
zimas, são necessárias para garantir que as taxas de reações bioquímicas sejam
suficientemente rápidas para sustentar a vida. Neste capítulo, serão examina-
dos os conceitos básicos a respeito de energia e a maneira pela qual as células
transformam energia para realizar trabalho (bioenergética), bem como a estru-
tura e a função das enzimas.

FLUXO DE ENERGIA ATRAVÉS DE SISTEMAS VIVOS

O fluxo de matéria através de organismos individuais e comunidades bio-

lógicas é parte da experiência cotidiana; o mesmo não acontece com o fluxo de
energia, embora ele seja fundamental para a própria existência dos seres vivos.
O que torna conceitos como energia, trabalho e ordem tão indefiníveis é a sua
natureza insubstancial: consideramos muito mais fácil visualizar a dança de
2 Capítulo 2
átomos e moléculas do que as forças e os fluxos que determinam a
direção e o alcance de processos naturais. O ramo da física que se
ocupa desses temas é a termodinâmica, uma disciplina abstrata e
necessária, a qual a maioria dos biólogos se satisfaz em examinar
superficialmente. A bioenergética, no entanto, é tão vinculada a
conceitos e relações quantitativas derivados da termodinâmica que
é praticamente impossível discutir o tema sem referência freqüen-
te a energia livre, potencial, entropia e segunda lei.
O propósito deste capítulo é reunir e explicar, de modo tão
simples quanto possível, as relações e os conceitos fundamentais
da termodinâmica, presentes em diferentes partes deste livro. Para
obter uma visão mais ampla do tema, os leitores poderão consul-
tar os textos introdutórios encontrados em Klotz (1967) e Nicholls
e Ferguson (1992) ou os textos avançados de Morowitz (1978) e de
Edsall e Gutfreund (1983).
A termodinâmica evoluiu durante o século XIX na tentativa
de compreender como trabalha uma máquina a vapor e por que o
calor é produzido quando se perfura um cilindro oco. O próprio
nome “termodinâmica” e muito da linguagem dessa ciência lem-
bram essas raízes históricas, mas seria mais apropriado falar em
energética, pelo fato de os princípios envolvidos serem universais.
As plantas vivas, como todos os outros fenômenos naturais, estão
submetidas às leis da termodinâmica. Como prova disso, a termo-
dinâmica proporciona uma estrutura indispensável para a descri-
ção quantitativa da vitalidade biológica.
ENERGIA E TRABALHO
Comecemos pelos significados de “energia” e “trabalho”. Na
física elementar, como na vida diária, energia é definida como a
capacidade de realizar trabalho. O significado deste é mais difícil
de elaborar. Trabalho, no sentido mecânico, é o deslocamento de
qualquer corpo contra uma força oposta. O trabalho realizado é o
produto da força e da distância de deslocamento, sendo expresso
pela seguinte equação:*
W = f ∆l
O trabalho mecânico aparece em química porque, sempre que
o volume final de uma mistura de reação excede o volume inicial,
o trabalho deve ser realizado contra a pressão da atmosfera; inver-
samente, a atmosfera executa trabalho quando um sistema se con-
*A propósito, podemos observar que as dimensões de trabalho são complexas —
ml2t–2 — , em que m significa massa, l, distância e t, tempo — e que trabalho é uma
grandeza escalar, isto é, o produto de dois termos vetoriais.
FIGURA 2.1 Energia e trabalho em um sistema mecânico. (A) Um peso sobre o assoalho é atado a uma
mola por um barbante. (B) Ao ser puxada, a mola fica sob tensão. (C) A energia potencial armazenada na
mola estendida executa o trabalho de erguer o peso quando a mola se contrai.
trai. Esse trabalho é calculado pela expressão PDV (na qual P re-
presenta a pressão, e V, o volume), que aparece freqüentemente
em fórmulas termodinâmicas. Na biologia, trabalho é empregado em
um sentido mais amplo para descrever deslocamento contra qualquer for-
ça que os seres vivos encontram ou geram: mecânica, elétrica, osmótica ou
mesmo potencial químico.
A ilustração mecânica familiar pode ajudar a esclarecer a rela-
ção entre energia e trabalho. A mola, na Figura 2.1, pode ser es-
tendida se nela for aplicada uma força por uma determinada
distância — isto é, se for realizado trabalho sobre a mola. Esse tra-
balho pode ser restabelecido por um arranjo apropriado de rolda-
nas e utilizado para erguer um peso até a mesa. Desse modo,
podemos dizer que a mola estendida possui energia numericamente
igual ao trabalho que ela pode realizar sobre o peso (desconside-
rando a fricção). O peso sobre a mesa, por sua vez possui energia em
virtude de sua posição no campo gravitacional da Terra, que pode
ser empregada para realizar outro trabalho, tal como fazer girar uma
manivela. Assim, o peso ilustra o conceito de energia potencial, ou
seja, a capacidade de realizar trabalho que surge da posição de um
objeto em um campo de força; a seqüência ilustra a conversão de um
tipo de energia em outro, ou energia de transdução.
A primeira lei: a energia total é sempre conservada
É uma experiência universal que dispositivos mecânicos en-
volvem a execução de trabalho e a produção ou absorção de calor.
Usando pesos diferentes, podemos variar a quantidade de traba-
lho realizado pela mola até um máximo, sendo que a quantidade
de calor produzido também varia. Mas muitos estudos experimen-
tais têm mostrado que, sob circunstâncias ideais, a soma do traba-
lho realizado e do calor desenvolvido é constante e depende apenas
das extensões inicial e final da mola. Desse modo, podemos consi-
derar uma propriedade, a energia interna da mola, por meio da
característica descrita pela seguinte equação:
∆U = ∆Q + ∆W (2.2)
Q é a quantidade de calor absorvido pelo sistema, e W é a quan-
(2.1)
tidade de trabalho realizado pelo mesmo.* Na Figura 2.1, o traba-
lho é mecânico, mas poderia igualmente ser elétrico, químico ou
de qualquer outro tipo. Assim, DU é a quantidade líquida de ener-
gia introduzida no sistema, como calor ou como trabalho; inver-
*A Equação 2.2 é mais comumente encontrada sob a fórmula DU = DQ – DW, a qual
resulta da convenção de que Q é a quantidade de calor, proveniente do entorno, ab-
sorvida pelo sistema, e W é a quantidade de trabalho realizado pelo sistema sobre o
entorno. Essa convenção afeta o sinal de W, mas não altera o significado da equação.

samente, a execução de trabalho e a produção de calor acarretam
um decréscimo na energia interna. Não podemos especificar um
valor absoluto para o conteúdo de energia; podem ser medidas
apenas mudanças na energia interna. Observe que a Equação 2.2
admite que calor e trabalho são equivalentes; seu propósito é
enfatizar que, sob circunstâncias ideais, DU depende somente dos
estados inicial e final do sistema, não de como calor e trabalho
são distribuídos.
A Equação 2.2 é um balanço da primeira lei da termodinâmi-
ca, que é o princípio da conservação de energia. Se um sistema
determinado não troca energia com seu entorno, seu conteúdo
energético permanece constante; se há troca de energia, a mudan-
ça na energia interna será dada pela diferença entre a energia ga-
nha do entorno e a perdida para o mesmo. A mudança em energia
interna depende apenas dos estados inicial e final do sistema, não
da rota ou do mecanismo de troca de energia. Energia e trabalho
são interconversíveis; mesmo o calor é uma medida da energia
cinética dos constituintes moleculares do sistema. Para tornar isso
o mais simples possível, a Equação 2.2 estabelece que nenhuma
máquina, incluindo as máquinas químicas que reconhecemos como
vivas, pode realizar trabalho sem uma fonte de energia.
Um exemplo da aplicação da primeira lei a um fenômeno bio-
lógico é o estoque de energia de uma folha. As folhas absorvem de
duas maneiras a energia do seu entorno: como irradiação inciden-
te direta do sol e como irradiação infravermelha do entorno. Parte
da energia absorvida pela folha é irradiada de volta para o entorno
como irradiação infravermelha e calor; uma fração da energia ab-
sorvida é armazenada como produtos fotossintéticos ou mudan-
ças de temperatura da folha. Desse modo, pode ser escrita a seguinte
equação:
Energia total absorvida pela folha =
energia emitida a partir da folha +
energia armazenada pela folha
Observe que, embora a energia absorvida pela folha tenha
sido transformada, a energia total permanece a mesma, em con-
cordância com a primeira lei.
A mudança na energia interna de um sistema representa
o trabalho máximo que ele pode realizar
Devemos qualificar a equivalência de energia e trabalho in-
vocando “condições ideais” — isto é, exigindo que o processo fun-
cione de maneira reversível. O significado de “reversível” em
termodinâmica é especial: o termo descreve condições sob as quais
as forças opostas são tão intimamente balanceadas que uma mu-
dança infinitesimal em uma ou outra inverteria a direção do pro-
cesso.* Sob essas condições, o processo produz a quantidade
máxima possível de trabalho. A reversibilidade, nesse sentido, fre-
qüentemente não se mantém na natureza, como no exemplo da
folha. As condições ideais diferem tão pouco de um estado de equi-
líbrio que qualquer processo ou reação exigiria um tempo infinito
e, por esse motivo, não ocorreria de modo algum. Não obstante, o
conceito de reversibilidade termodinâmica é útil: se medirmos a
*Em bioquímica, reversibilidade tem um significado diferente: em geral, o termo se
refere a uma reação cuja rota pode ser invertida, freqüentemente com entrada de
energia.
Energia e enzimas 3
mudança em energia interna que um processo acarreta, teremos
um limite superior para o trabalho que ele pode realizar; para qual-
quer processo real, o trabalho máximo será menor.
No estudo de biologia vegetal, encontramos muitas fontes
de energia — notavelmente transformações luminosas e quími-
cas — bem como uma variedade de funções de trabalho, incluin-
do trabalho mecânico, osmótico, elétrico e químico. O significado
da primeira lei na biologia provém, certamente, de estudos de
físicos do século XIX, segundo os quais os vários tipos de energia
e trabalho são mensuráveis, equivalentes e, dentro de certos li-
mites, interconversíveis. A energia está para a biologia como o
dinheiro para a economia: os meios pelos quais os seres vivos
adquirem bens e serviços.
Cada tipo de energia é caracterizado por um fator de
capacidade e um fator potencial
A quantidade de trabalho que pode ser realizado por um sis-
tema, seja mecânico ou químico, está em função do tamanho desse
sistema. Trabalho pode sempre ser definido como o produto de
dois fatores — força e distância, por exemplo. Um chama-se fator
de intensidade ou fator potencial, que é independente do tamanho
do sistema; o outro é o fator de capacidade, diretamente proporci-
onal ao tamanho (Tabela 2.1).
Em bioquímica, energia e trabalho são tradicionalmente ex-
pressos em calorias; 1 caloria é a quantidade de calor necessária
para elevar 1°C na temperatura de 1 g de água, especificamente de
15,0°C para 16,0°C. Em princípio, pode-se cumprir o mesmo pro-
cesso realizando trabalho mecanicamente com uma pá; tais expe-
rimentos levam ao estabelecimento do equivalente mecânico de
calor de 4,186 joules por caloria (J cal–1).* Teremos também a opor-
tunidade de usar as unidades elétricas equivalentes, com base no
volt. Um volt é a diferença de potencial entre dois pontos quando
1 J de trabalho está envolvido na transferência de um coulomb de
carga de um ponto a outro. (Um coulomb é a quantidade de carga
transportada por uma corrente de 1 ampère [A] durante 1 s. A trans-
ferência de 1 mol [mol] de carga através de um potencial de 1 volt
[V] envolve 96.500 J de energia ou trabalho.) A diferença entre ener-
gia e trabalho freqüentemente é uma questão de sinal. O trabalho
deve ser realizado para trazer uma carga positiva para mais perto
de outra carga positiva, mas as cargas, desse modo, adquirem ener-
gia potencial e, por sua vez, podem realizar trabalho.
TABELA 2.1
Fatores potencial e de capacidade, em energética
Tipo de energia Fator potencial Fator de capacidade
Mecânica Pressão Volume
Elétrica Potencial elétrico Carga
Química Potencial químico Massa
Osmótica Concentração Massa
Térmica Temperatura Entropia
*Em uso padrão corrente, baseado no metro, quilograma e segundo, a unidade fun-
damental de energia é o joule (1 J = 0,24 cal) ou o quilojoule (1 kJ = 1.000 J).
4 Capítulo 2
A DIREÇÃO DO PROCESSO ESPONTÂNEO
Os eventos do mundo real têm naturalmente um curso previ-
sível. A maçã cai do galho da árvore. Uma mistura dos gases hi-
drogênio e oxigênio é convertida em água. A mosca aprisionada
em um frasco está fadada a morrer, e as pirâmides, a se fragmentar
em areia; coisas se desintegram. Mas não há nada no princípio de
conservação de energia que impossibilite a maçã, com absorção de
calor do seu entorno, de voltar ao seu galho, ou que impeça a água,
de uma maneira semelhante, de se dissociar em seus elementos
constituintes. A busca do motivo pelo qual nenhuma dessas coisas
acontece levou a profundos insights filosóficos e úteis formulações
quantitativas a respeito da energética de reações químicas e da
quantidade de trabalho que pode ser realizado por elas. Uma vez
que os seres vivos, em muitos aspectos, são máquinas químicas,
devemos examinar com certo detalhe essas questões.
A segunda lei: a entropia total sempre aumenta
A partir da experiência diária com pesos caindo e corpos quen-
tes crescendo no frio, pode-se esperar a ocorrência de processos
espontâneos na direção da diminuição da energia interna — isto é,
a direção em que DU é negativa. Mas existem muitas exceções para
isso ser uma regra geral. O derretimento do gelo é uma exceção.
Um cubo de gelo, colocado em água a 1°C, derreterá, apesar de as
medições mostrarem que a água líquida (em qualquer temperatu-
ra acima de 0°C) está em um estado energético mais alto do que o
gelo; evidentemente, alguns processos espontâneos são acompa-
nhados por um aumento da energia interna. Os nossos cubos de
gelo derretendo não infringem a primeira lei, pois há absorção de
calor quando eles derretem. Isso sugere que existe uma relação
entre a capacidade de absorção espontânea de calor e o critério
determinante da direção de processos espontâneos, o que é o caso.
A função termodinâmica que buscamos é denominada entropia.
Ela é a quantidade de energia não-disponível para realizar traba-
lho em um sistema, correspondendo ao grau de aleatoriedade des-
te. Matematicamente, a entropia é o fator de capacidade
correspondente à temperatura, Q/T. Assim, podemos apresentar
a resposta à nossa pergunta, bem como a segunda lei da termodi-
nâmica: a direção de todos os processos espontâneos é para au-
mentar a entropia de um sistema mais seu entorno.
Poucos conceitos são tão básicos a uma compreensão do mun-
do em que vivemos, ainda que tão obscuros, como a entropia —
presumivelmente porque a entropia não está intuitivamente rela-
cionada às nossas percepções sensoriais, como estão a massa e a
temperatura. Segue a exposição especialmente lúcida de Atkinson
(1977), que apresenta a lei de uma forma que, à primeira vista,
pouco se assemelha àquela dada acima:
Nós tomaremos [a segunda lei] como o conceito de que qualquer
sistema, não em zero absoluto, tem uma irreduzível quantidade
mínima de energia que é uma propriedade inevitável sua na-
quela temperatura. Isso significa que um sistema requer uma certa
quantidade de energia exatamente para cada temperatura espe-
cificada.
A constituição molecular da matéria proporciona uma expli-
cação imediata: alguma energia é armazenada nos movimentos
térmicos das moléculas e nas vibrações e oscilações dos seus áto-
mos constituintes. Podemos considerá-la uma energia isotermica-
mente indisponível, já que o sistema não pode prescindir dela sem
uma queda na temperatura (admitindo que não há mudança física
ou química). A energia isotermicamente indisponível de qualquer
sistema aumenta com a temperatura, uma vez que a energia de
movimentos moleculares e atômicos aumenta com a temperatura.
Quantitativamente, a energia isotermicamente indisponível de um
determinado sistema é dada por ST, em que T é a temperatura
absoluta, e S, a entropia.
Mas o que é entropia? A reflexão sobre a natureza da energia
isotermicamente indisponível sugere que, para cada temperatura
em particular, a quantidade de tal energia será tanto maior quanto
mais átomos e moléculas estiverem livres para se mover e vibrar —
isto é, quanto mais caótico for o sistema. O arranjo ordenado de
átomos em um cristal, com um lugar para cada um e cada um no
seu lugar, corresponde, ao contrário, a um estado de baixa entro-
pia. No zero absoluto, quando todo movimento cessa, a entropia
de uma substância pura é igualmente zero; essa situação é, às ve-
zes, chamada de terceira lei da termodinâmica.
Uma molécula grande, uma proteína, por exemplo, dentro da
qual ocorrem muitos tipos de movimentos, terá quantidades consi-
deráveis de energia armazenada dessa maneira — mais do que teria
uma molécula de um aminoácido. Mas a entropia da molécula de
proteína será menor do que a dos aminoácidos constituintes nos quais
ela pode se dissociar, devido às restrições impostas aos movimentos
desses aminoácidos, enquanto eles são parte da estrutura maior. Todo
o processo que leva à liberação dessas restrições aumenta a liberda-
de de movimento e, portanto, a entropia.
Essa é a tendência universal de processos espontâneos, ex-
pressa na segunda lei; é a razão pela qual as enzimas armazenadas
no refrigerador tendem a se deteriorar e o gelo derrete na água. O
aumento na entropia com o derretimento do gelo em água é “re-
compensado” pela absorção de calor do entorno. Enquanto a mu-
dança líquida na entropia do sistema mais seu entorno for positiva,
o processo pode ocorrer espontaneamente. Isso não significa ne-
cessariamente que o processo ocorrerá: a taxa é geralmente deter-
minada por fatores cinéticos separados da mudança em entropia.
Conforme manda a segunda lei, o destino das pirâmides é frag-
mentar-se em areia, ao passo que a areia nunca se reagruparia por
si só em uma pirâmide; a lei não diz quão rapidamente isso deve
acontecer.
Um processo é espontâneo se o D S para o sistema e seu
entorno for positivo
Não há nada de místico na entropia; ela é uma quantidade
termodinâmica como qualquer outra, mensurável experimental-
mente e expressa em unidades próprias. Um método de quantifi-
cá-la é por meio da capacidade de calor de um sistema, a quantidade
de energia necessária para elevar a temperatura em 1°C. Em al-
guns casos, a entropia pode até ser calculada a partir de princípios
teóricos, embora apenas para moléculas simples. Para os nossos
propósitos, o que importa é o sinal da mudança de entropia, DS:
um processo pode ocorrer espontaneamente quando DS para o sis-
tema e seu entorno for positivo; um processo para o qual DS é ne-
gativo não pode ocorrer espontaneamente, mas o processo oposto
pode. Para um sistema em equilíbrio, a entropia do sistema mais
seu entorno é máxima, e DS é zero.
“Equilíbrio” é outra dessas palavras familiares, mais fácil de
usar do que de definir. Seu significado habitual implica que forças
atuando sobre um sistema são igualmente balanceadas, de tal modo

que não há uma tendência líquida de mudança; aqui o termo “equi-
líbrio” será empregado com essa conotação. Uma mistura de subs-
tâncias químicas pode estar no centro de uma interconversão rápida,
mas, se as taxas das reações para frente e para trás são iguais, não
haverá mudança líquida em composição, e o equilíbrio prevalecerá.
A segunda lei tem sido apresentada em muitas versões. Uma
delas exclui máquinas de moto-perpétuo, porque, pela segunda lei,
a energia é perpetuamente degradada em calor e movimento conti-
nuado isotermicamente indisponível (DS > 0), o que requer uma en-
trada de energia externa. A versão mais célebre e confusa da segunda
lei foi proposta por R. J. Clausius (1879): “A energia do universo é
constante; a entropia do universo tende na direção do máximo”.
Como a entropia, criada do nada, pode aumentar continua-
mente? A raiz da dificuldade é verbal, como Klotz (1967) elegante-
mente explica. Visto que Clausius definiu entropia com o sinal
oposto (correspondente à ordem, em vez do caos), sua tendência
universal seria diminuir; seria, então, óbvio que as mudanças es-
pontâneas ocorressem na direção do decréscimo da capacidade de
mudança espontânea posterior. Os solutos se difundem de uma
região de concentração mais alta para uma de concentração mais
baixa; o calor flui de um corpo quente para um frio. Às vezes, es-
sas mudanças podem ser invertidas por um agente externo, redu-
zindo a entropia do sistema considerado, mas esse agente deve
mudar a ponto de reduzir sua própria capacidade de mudança
posterior. Em suma, “entropia é um índice de esgotamento; quan-
to mais um sistema perde sua capacidade de mudança espontâ-
nea, tanto mais essa capacidade foi esgotada e maior é a entropia”
(Klotz, 1967). Inversamente, quanto mais afastado do equilíbrio
está um sistema, maior é a sua capacidade de mudança e menor é
a sua entropia. Os seres vivos enquadram-se na última categoria:
Uma célula é a epítome de um estado que está distante do equilíbrio.
ENERGIA LIVRE E POTENCIAL QUÍMICO
Muitas transações energéticas que ocorrem em organismos
vivos são químicas. Por esse motivo, necessitamos de uma ex-
pressão quantitativa para o montante de trabalho que uma rea-
ção química pode realizar. Para esse propósito, são inadequadas
as relações que envolvem a mudança de entropia no sistema mais
seu entorno. Precisamos de uma função que não dependa do en-
torno, mas que, como DS, alcance um mínimo sob condições de
equilíbrio e, desse modo, possa servir como critério de exeqüibi-
lidade de uma reação e como medida de energia, nele disponí-
vel, para a realização de trabalho. A função empregada
universalmente para esse propósito é a energia livre, abreviada-
mente G, em homenagem ao físico-químico do século XIX J. Wi-
llard Giggs, que foi seu introdutor.
D G é negativa para um processo espontâneo, sob
temperatura e pressão constantes
Anteriormente falávamos da energia isotermicamente indispo-
nível, ST. Energia livre é definida como a energia que está disponí-
vel sob condições isotérmicas, sendo expressa pela seguinte equação:
∆H = ∆G + T∆S (2.3)
O termo H, entalpia ou conteúdo de calor, não é inteiramente equi-
valente a U, a energia interna (ver Equação 2.2). Para ser exato, DH
é uma medida da mudança total de energia, incluindo o trabalho
Energia e enzimas 5
que pode resultar de mudanças em volume durante a reação, en-
quanto DU exclui esse trabalho. (Retornaremos ao conceito de en-
talpia um pouco mais tarde.) Entretanto, no contexto biológico,
geralmente nos ocupamos com reações em solução, para as quais
as mudanças de volume são insignificantes. Para a maioria dos
propósitos, então,
∆U ≅ ∆G + T∆S (2.4)
e
∆G ≅ ∆U − T∆S (2.5)
O que torna isso uma relação útil é a demonstração de que, para
todos os processos espontâneos sob temperatura e pressão constantes, DG é
negativo. Desse modo, a mudança de energia livre é um critério de
exeqüibilidade. Toda reação química que prossegue com DG negati-
vo pode ocorrer espontaneamente; um processo para o qual DG é
positivo não pode ocorrer, mas a reação pode ir na direção oposta.
Uma reação para a qual DG é zero está em equilíbrio, e não ocorrerá
mudança líquida. Para condições determinadas de temperatura e
pressão, DG depende apenas da composição da mistura da reação;
por isso, a expressão alternativa “potencial químico” é especialmen-
te apropriada. Novamente, nada é dito sobre taxa, apenas sobre di-
reção. Fatores cinéticos, em vez de termodinâmicos, determinam se
uma reação, tento um dado DG, prosseguirá e em que taxa.
Existe uma relação íntima e simples entre a mudança em ene-
ria livre de uma reação química e o trabalho que a reação pode
realizar. Uma vez que a reação seja realizada reversivelmente,
∆G = ∆Wmáx. (2.6)
Isto é, para uma reação ocorrendo sob condições de temperatura e
pressão constantes, –DG é uma medida de trabalho máximo que o processo
pode executar. Mais precisamente, –DG é o trabalho máximo possí-
vel, exclusivo de trabalho pressão-volume, e, assim, é uma quanti-
dade de grande importância em bioenergética. Todo o processo
que vai em direção ao equilíbrio, em princípio, pode realizar tra-
balho. Portanto, podemos descrever processos para os quais DG é
negativo como “liberadores de energia” ou exergônicos. Inversa-
mente, para todo processo que se afasta do equilíbrio, DG é positi-
vo, e falamos de uma reação “consumidora de energia” ou
endergônica. Evidentemente, uma reação endergônica não pode
ocorrer: todos os processos reais vão em direção ao equilíbrio, com
DG negativo. Não obstante, o conceito de reações endergônicas é
uma abstração útil, pois muitas reações biológicas parecem mo-
ver-se para longe do equilíbrio. Um exemplo excelente é a síntese
de ATP durante a fosforilação oxidativa, cujo DG aparente é tão
alto quanto 67 kJ mol–1 (16 kcal mol–1). Claramente, a célula deve
realizar trabalho para compensar a reação exergônica global. As-
sim, a ocorrência de um processo endergônico na natureza implica
que ele esteja acoplado a um segundo processo, exergônico. Muito
da bioenergética celular e molecular está relacionado com o meca-
nismo pelo qual a ligação de energia é efetuada.
A mudança-padrão em energia livre, D G0, é a mudança
em energia livre quando a concentração de reagentes e
produtos é 1 M
As mudanças em energia livre podem ser medidas experi-
mentalmente por métodos calorimétricos. Elas têm sido tabuladas
de duas formas: como a energia livre de formação de um compos-
to a partir de seus elementos e como DG para uma reação específi-
6 Capítulo 2
ca. É importante lembrar que, por convenção, os valores numéri-
cos se referem a um conjunto específico de condições. A mudança
padrão em energia livre, DG0, refere-se a condições tais que todos os rea-
gentes e produtos estão presentes a uma concentração de 1 M; em bio-
química, é mais conveniente utilizar DG0’, que é definido da mesma
maneira, exceto que o pH empregado é 7. As condições obtidas no
mundo real provavelmente são muito diferentes dessas, particu-
larmente com relação às concentrações dos participantes. Para to-
mar um exemplo familiar, DG0, para a hidrólise de ATP, é de
aproximadamente –33 kJ mol–1 (–8 kcal mol–1). No citoplasma, en-
tretanto, as concentrações reais de nucleotídeos são de aproxima-
damente 3 mM ATP, 1 mM ADP e 10 mM Pi. Como veremos, as
mudanças em energia livre dependem fortemente de concentra-
ções, e DG para a hidrólise de ATP sob condições fisiológicas, as-
sim, é muito mais negativo do que DG0’, cerca de –50 a –65 kJ mol–1 (–12 a –15
kcal mol–1). Desse modo, visto que valores de DG0, para muitas reações,
são facilmente acessíveis, não devem ser usados indiscriminadamente como
guias para o que acontece em células.
O valor de D G é uma função do deslocamento da reação a
partir do equilíbrio
A discussão precedente sobre energia livre mostra que deve
haver uma relação entre DG e a constante de equilíbrio da sua rea-
ção. Em equilíbrio, DG é zero; quanto mais distante uma reação
está do equilíbrio, maior é DG, e a reação pode realizar mais traba-
lho. O balanço quantitativo dessa relação é
∆G 0 = − RT ln K = −2,3RT log K
R é a constante do gás, T, a temperatura absoluta, e K, a constante
de equilíbrio da reação. Essa equação é uma das uniões mais úteis
entre termodinâmica e bioquímica e tem muitas aplicações. Por
exemplo, a equação é facilmente modificada para permitir o côm-
puto da mudança em energia livre para concentrações diferentes
das padrões. Para as reações mostradas na equação
A+B ⇔ C+D
a mudança real em energia livre, DG, é dada pela equação
[C][D]
∆G = ∆G 0 + RT ln
[A][B]
onde as letras entre colchetes se referem às concentrações no mo-
mento da reação. Falando estritamente, devem ser usadas ativida-
des, mas, como estas geralmente não são aplicadas para condições
celulares, usam-se concentrações.
A Equação 2.9 pode ser reescrita para tornar sua implicação
um pouco mais direta. A letra q representa a razão massa: ação, [C]
[D]/[A] [B]. A substituição da Equação 2.7 na Equação 2.9, seguida
por rearranjo, resulta na equação:
K
∆G = −2,3 RT log
q contendo componentes A e B a concentrações [A] e [B]. Os dois
Em outras palavras, o valor de DG é uma função do deslocamento
da reação a partir do equilíbrio. Para deslocar um sistema do equi-
líbrio, deve ser realizado trabalho sobre ele, e DG deve ser positivo.
Inversamente, um sistema deslocado do equilíbrio pode realizar
trabalho sobre outro sistema, contanto que os parâmetros cinéti-
cos permitam o prosseguimento da reação e exista um mecanismo
que acople os dois sistemas. Quantitativamente, uma mistura de
reação a 25°C, cuja composição está uma ordem de grandeza dis-
tante do equilíbrio (log K / q = 1), corresponde a uma mudança em
energia livre de 5,7 kJ mol–1 (1,36 kcal mol–1). O valor de DG é nega-
tivo se a razão real massa:ação é menor do que a razão de equilí-
brio, e positivo se a razão massa:ação é maior.
O ponto em que DG é uma função do deslocamento de uma
reação (na verdade, de qualquer sistema termodinâmico) a partir
do equilíbrio é central para a compreensão da bioenergética. A Fi-
gura 2.2 ilustra diagramaticamente essa relação para a intercon-
versão química de substâncias A e B; a relação reaparecerá
brevemente sob outros aspectos.
A mudança de entalpia mede a energia transferida
como calor
Os processos físicos e químicos são quase invariavelmente
acompanhados pela geração ou absorção de calor, que reflete a
mudança na energia interna do sistema. A quantidade de calor
transferido e o sinal da reação estão relacionados à mudança em
energia livre, conforme mostrado na Equação 2.3. A energia absor-
vida ou produzida como calor, sob condições de pressão constan-
te, é designada como a mudança em conteúdo de calor ou entalpia,
DH. Os processos que geram calor, como a combustão, são chama-
dos de exotérmicos; aqueles em que o calor é absorvido, tais como
o derretimento ou a evaporação, são referidos como endotérmi-
cos. A oxidação da glicose em CO2 e água é uma reação exergônica
(DG0 = -2.858 kJ mol–1 [-686 kcal mol–1]); quando essa reação ocorre
(2.7)
durante a respiração, parte da energia livre é conservada por meio
de reações acopladas que geram ATP. A combustão da glicose dis-
sipa a energia livre da reação, liberando a maior parte dela como
calor (DH = –2.804 kJ mol–1 [-673 kcal mol–1]).
(2.8)
(2.9)
FIGURA 2.2 Energia livre de uma reação química como uma função
(2.10)
do deslocamento a partir do equilíbrio. Imagine um sistema fechado
componentes podem ser interconvertidos pela reação A ´ B, que está
em equilíbrio quando a razão massa:ação, [B]/[A], se iguala à unidade.
A curva mostra qualitativamente como a energia livre, G, do sistema
varia quando o total [A] + [B] é mantido constante, mas a razão
massa:ação é deslocada do equilíbrio. As setas representam
esquematicamente a mudança em energia livre, DG, para uma conversão
pequena de [A] em [B] ocorrendo sob razões massa:ação diferentes
(segundo Nicholls e Ferguson, 1992).

A bioenergética está preocupada com a transdução da ener-
gia e, portanto, destaca as transações de energia livre, mas, às ve-
zes, a transferência de calor pode também ter significância biológica.
Por exemplo, a água tem um alto calor de vaporização, 44 kJ mol–
1 (10,5 kcal mol–1) a 25°C, que desempenha um papel importante
na regulação da temperatura foliar. Durante o dia, a evaporação
da água da superfície foliar (transpiração) dissipa calor para o en-
torno e ajuda a esfriar a folha. Inversamente, a condensação de
vapor d’água como orvalho aquece a folha (é um processo exotér-
mico), pois a condensação da água é o inverso da evaporação. A
função abstrata da entalpia é uma medida direta da energia troca-
da sob forma de calor.
REAÇÕES REDOX
A oxidação e a redução referem-se à transferência de um ou
mais elétrons de um doador para um receptor, geralmente para
outra espécie química; um exemplo é a oxidação de ferro ferroso
por oxigênio, que forma ferro férrico e água. As reações desse tipo
requerem consideração especial, pois desempenham um papel cen-
tral na respiração e na fotossíntese.
A mudança em energia livre de uma reação de oxidação-
redução é expressa como o potencial redox padrão em
unidades eletroquímicas
As reações redox podem ser corretamente descritas em ter-
mos da sua mudança em energia livre. No entanto, a participação
de elétrons torna conveniente seguir o curso da reação com instru-
mentação elétrica e estimula o uso de uma anotação eletroquími-
ca. Isso permite também a dissecção do processo químico em
semi-reações oxidativa e redutora separadas. Para a oxidação do
ferro, podemos escrever
2Fe 2+ ⇔ 2Fe 3+ + 2e ±
½O 2 + 2H + + 2E ± ⇔ H 2 O
2Fe 2+ + ½O 2 + 2H + ⇔ 2Fe 3+ + H 2 O
A tendência de uma substância a doar elétrons, sua “pres-
são de elétrons”, é medida por seu potencial de redução padrão
(ou redox), E0, com todos os componentes presentes em uma con-
centração de 1 M. Em bioquímica, é mais conveniente empregar
E’0, que é definido da mesma maneira, exceto pelo pH, que é 7.
Por definição, então, E’0 é a força eletromotriz dada por uma meia-
célula, em que as espécies reduzidas e oxidadas estão presentes a
1 M, 25°C e pH 7, em equilíbrio com um eletrodo que pode rever-
sivelmente aceitar elétrons de espécies reduzidas. Por conven-
ção, a reação é escrita como uma redução. O potencial de redução
padrão do eletrodo de hidrogênio* serve como referência: em pH
7, ele é igual a –0,42 V. O potencial redox padrão, conforme defi-
nido aqui, freqüentemente é referido na literatura bioenergética
como o potencial do ponto médio, Em. Um potencial do ponto
*O eletrodo padrão de hidrogênio consiste de platina, sobre a qual gás hidrogênio
borbulha a uma pressão de 1 atm. O eletrodo é imergido em uma solução contendo
íons de hidrogênio. Quando a atividade dos íons de hidrogênio é 1, aproximada-
mente 1 M H+, o potencial do eletrodo é tido como 0.
Energia e enzimas 7
médio negativo identifica um bom agente redutor; os oxidantes
têm potenciais do ponto médio positivos.
O potencial redox para a redução de oxigênio a água é +0, 82
V; para a redução de Fe3+ a Fe2+ (a direção oposta à da Equação
2.11), +0,77 V. Portanto, não podemos prever que, sob condições
padrões, a ligação Fe2+–Fe3+ tenderá a reduzir oxigênio a água, em
vez do contrário. A mistura contendo Fe2+, Fe3+ e oxigênio prova-
velmente não chegará ao equilíbrio, e a extensão do seu desloca-
mento a partir do equilíbrio poderá ser expressa em termos de
mudança em energia livre, para a Equação 2.13, ou da diferença
em potencial redox, DE’0, entre o oxidante e o redutor (+0,05 V, no
caso da oxidação do ferro). Em geral,
∆G 0 ′ = − nF ∆E ′0 (2.14)
onde n é o número de elétrons transferidos, e F é a constante de
Faraday (23,06 kcal V–1 mol–1). Em outras palavras, o potencial re-
dox padrão é uma medida, em unidades eletroquímicas, da mu-
dança em energia livre de um processo de oxidação-redução.
Como as mudanças em energia livre, o potencial redox, medi-
do sob condições diferentes da padrão, depende das concentra-
ções das espécies oxidadas e reduzidas, de acordo com a seguinte
equação (observe a semelhança, em forma, com a Equação 2.9):
2,3RT oxidante
Eh = E0′ + log (2.15)
nF redutor
Aqui, Eh é o potencial medido em volts, e os outros símbolos têm
seus significados habituais. A conseqüência é que o potencial re-
dox sob condições biológicas pode diferir substancialmente do
potencial de redução padrão.
O POTENCIAL ELETROQUÍMICO
Na seção anterior, introduzimos o conceito de que a mistura
(2.11)
de substâncias, cuja composição diverge do estado de equilíbrio,
representa uma fonte potencial de energia livre (ver Figura 2.2).
(2.12)
Inversamente, uma quantidade similar de trabalho deve ser rea-
lizada sobre uma mistura em equilíbrio, a fim de deslocar sua
(2.13)
composição do equilíbrio. Nesta seção, examinaremos as mudan-
ças de energia livre associadas com outro tipo de deslocamento
do equilíbrio — a saber, os gradientes de concentração e de po-
tencial elétrico.
O transporte de um soluto não-carregado contra seu
gradiente de concentração diminui a entropia do sistema
Considere um vaso dividido por uma membrana em dois com-
partimentos, que contêm soluções de um soluto não-carregado,
em concentrações C1 e C2, respectivamente. O trabalho requerido
para transferir 1 mol de soluto do primeiro compartimento para o
segundo é dado pela seguinte equação:
C2
∆G = 2,3RT log (2.16)
C1
Essa expressão é análoga à de uma reação química (Equação
2.10) e tem o mesmo significado. Se C2 é maior do que C1, DG é
positivo, e deve ser realizado trabalho para transferir soluto. No-
vamente, a mudança em energia livre para o transporte de 1 mol
8 Capítulo 2
de soluto, contra um gradiente de concentração 10 vezes maior, é
5,7 kJ ou 1,36 kcal.
A razão pela qual um trabalho deve ser realizado para mover
uma substância de uma região de concentração menor para uma
de concentração mais alta é que o processo acarreta uma mudança
para o estado menos provável e, portanto, um decréscimo na en-
tropia do sistema. Inversamente, a difusão do soluto da região de
concentração mais alta para a de concentração mais baixa ocorre
na direção da probabilidade maior; isso resulta em um aumento
na entropia do sistema e pode prosseguir espontaneamente. O si-
nal de DG torna-se negativo, e o processo pode realizar a quantida-
de de trabalho especificada pela Equação 2.16, proporcionado por
um mecanismo que acopla o processo de difusão exergônico à re-
alização de trabalho.
O potencial de membrana é o trabalho que deve ser
realizado para mover um íon de um lado da membrana
ao outro
O assunto se torna um pouco mais complexo se o soluto em
questão mantém uma carga elétrica. A transferência de soluto
carregado positivamente do compartimento 1 para o comparti-
mento 2 causará, então, uma diferença de carga através da mem-
brana, com o segundo compartimento tornando-se eletropositivo
em relação ao primeiro. Uma vez que cargas iguais se repelem, o
trabalho realizado pelo agente que move o soluto do comparti-
mento 1 para o compartimento 2 é uma função da diferença de
carga; mais precisamente, ele depende da diferença de potencial
elétrico através da membrana. Essa diferença, chamada abrevia-
damente de potencial de membrana, aparecerá novamente nas
páginas subseqüentes.
O potencial de membrana, DE,* é definido como o trabalho
que deve ser realizado por um agente para mover uma carga-teste
de um lado da membrana ao outro. Quando precisa ser realizado 1
J de trabalho para mover 1 coulomb de carga, a diferença de po-
tencial é de 1 V. O potencial elétrico absoluto de uma fase única
não pode ser medido, mas a diferença de potencial entre duas fa-
ses sim. Por convenção, o potencial de membrana é sempre refe-
rente ao movimento de uma carga positiva. Ele expressa o potencial
intracelular em relação ao extracelular, que é definido como zero.
O trabalho que deve ser realizado para mover 1 mol de um
íon contra um potencial de membrana de DE volts é dado pela
seguinte equação:
∆G = zF ∆E (2.17)
onde z é a valência do íon, e F é a constante de Faraday. O valor
do DG da transferência de cátions para um compartimento posi-
tivo é positivo e, assim, requer trabalho. Inversamente, o valor
de DG é negativo quando cátions se movem para um comparti-
mento negativo, podendo, desse modo, ser realizado trabalho.
Através da membrana plasmática da grande maioria das células, o po-
tencial elétrico é negativo; por isso, os cátions tendem a entrar, mas são
“bombeados” para fora.
*Muitos textos utilizam o símbolo DY para diferença de potencial de membrana. No
entanto, para evitar confusão com o uso de DY para indicar potencial hídrico (ver
Capítulo 3), o símbolo DE é usado aqui e em todo o texto.
A diferença de potencial eletroquímico, Dm~ inclui
potenciais de concentração e elétrico
Em geral, íons se movendo através de uma membrana estão
sujeitos a gradientes de concentração e de potencial elétrico. Con-
sidere, por exemplo, a situação representada na Figura 2.3, que
corresponde a um evento importante em transdução de energia
durante a fotossíntese. Um cátion de valência z se move do com-
partimento 1 para o compartimento 2, contra um gradiente de con-
centração (C 2 > C 1) e um gradiente de potencial elétrico de
membrana (o compartimento 2 é eletropositivo em relação ao 1). A
mudança em energia livre envolvida nessa transferência é dada
pela seguinte equação:
C2
∆G = zF∆E + 2,3RT log (2.18)
C1
DG é positivo, e a transferência pode prosseguir somente acoplada
a uma fonte de energia, neste caso, a absorção de luz. Como resul-
tado dessa transferência, os cátions no compartimento 2 estão a
um potencial eletroquímico mais alto do que os mesmos íons no
compartimento 1.
O potencial eletroquímico de um íon em particular é designa-
do m~íon. Os íons tendem a fluir de uma região de potencial eletro-
químico alto para outra de potencial baixo e, assim procedendo,
podem, em princípio, realizar trabalho. A quantidade máxima desse
trabalho, desconsiderando a fricção, é dada pela mudança em ener-
gia livre dos íons que fluem do compartimento 2 para o 1 (ver
Equação 2.6) e é numericamente igual à diferença de potencial ele-
troquímico, Dm~íon. Esse princípio fundamenta muito da transdu-
ção biológica de energia.
A diferença de potencial eletroquímico, Dm~íon, é apropriada-
mente expressa em quilojoules por mols ou quilocalorias por mols.
Entretanto, é conveniente expressar a força que impulsiona o mo-
vimento iônico em termos elétricos, em volts ou milivolts. Para
converter Dm~íon em milivolts (mV), todos os termos da Equação
2.18 são divididos por F:
∆µ íon 2,3RT C
= z∆E + log 2 (2.19)
F F C1
FIGURA 2.3 Transporte contra um gradiente de potencial
eletroquímico. O agente que move o soluto carregado (do
compartimento 1 ao compartimento 2) deve realizar trabalho para
superar o gradiente de potencial eletroquímico e o gradiente de
concentração. Como conseqüência, os cátions no compartimento 2
alcançam um potencial eletroquímico mais alto do que aqueles no
compartimento 1. Os ânions neutralizantes foram omitidos.

Um tema importante em questão é a força motora de prótons, que
será considerada detalhadamente no Capítulo 6.
As Equações 2.18 e 2.19 têm provado ser de importância cen-
tral em bioenergética. Primeiro, elas calculam a quantidade de ener-
gia que deve ser gasta no transporte ativo de íons e metabólitos,
uma função importante de membranas biológicas. Segundo, a ener-
gia livre de reações químicas é geralmente transformada em ou-
tras formas, via geração intermediária de gradientes de potencial
eletroquímico, os quais desempenham papel importante em des-
crições de união de energia biológica. Deve-se enfatizar que os ter-
mos elétrico e concentração podem ser adicionados, como na
Equação 2.18, ou subtraídos e que a aplicação da equação a casos
particulares requer atenção cuidadosa do sinal do gradiente. De-
vemos também observar que as mudanças em energia livre em
reações químicas (ver Equação 2.10) são escalares, enquanto as rea-
ções de transporte têm direção; esse é um aspecto sutil, mas críti-
co, do papel biológico de gradientes de íons.
A distribuição de íons em equilíbrio é um caso especial e
importante da equação eletroquímica geral (Equação 2.18). A Fi-
gura 2.4 mostra uma vesícula limitada por uma membrana (com-
partimento 2), que contém uma concentração alta do sal K2SO4,
circundada por um meio (compartimento 1) com uma concentra-
ção mais baixa do mesmo sal; a membrana é impermeável a âni-
ons, mas permite a passagem livre de cátions. Os íons potássio,
portanto, tenderão a se difundir da vesícula para a solução, en-
quanto os ânions sulfato serão retidos. A difusão dos cátions gera
um potencial de membrana com o interior da vesícula negativo,
o que impede mais difusão. Em equilíbrio, DG e Dm~K+ se igualam
a zero (por definição). A Equação 2.18 pode ser, então, reescrita,
resultando na seguinte equação:
−2,3RT C ENZIMAS: OS CATALISADORES DE VIDA
∆E = log 2 (2.20)
zF C1
onde C2 e C1 são as concentrações de íons K+ nos dois comparti-
mentos; z, a valência, é unidade; DE é o potencial de membrana em
equilíbrio com o gradiente de concentração de potássio.
FIGURA 2.4 Geração de um potencial elétrico por difusão de íons. O
compartimento 2 tem uma concentração salina mais alta do que o
compartimento 1 (ânions não são mostrados). Se a membrana é
permeável aos cátions, mas não aos ânions, os cátions tenderão a se
difundir para fora do compartimento 2, em direção ao compartimento 1,
gerando um potencial de membrana, no qual o compartimento 2 é
negativo.
Energia e enzimas 9
Essa é uma forma da célebre equação de Nernst. Segundo
ela, em equilíbrio, um íon permeante será distribuído através da
membrana de tal modo que a força motora química (para fora,
neste caso) será balanceada pela força motora elétrica (para den-
tro). Para um cátion univalente, a 25°C, cada aumento de 10 vezes
no fator concentração corresponde a um potencial de membrana
de 59 mV; para um íon divalente, o valor é de 29,5 mV.
A discussão anterior sobre as conseqüências energéticas e elé-
tricas da translocação iônica ilustra um ponto que deve ser clara-
mente compreendido — a saber, que um potencial elétrico através
de uma membrana pode surgir por dois mecanismos distintos. O
primeiro mecanismo, ilustrado na Figura 2.4, é a difusão de partí-
culas carregadas em um gradiente de concentração preexistente,
um processo exergônico. Um potencial gerado por tal processo é
descrito como um potencial de difusão ou potencial de Donnan.
(O potencial de Donnan é definido como o potencial de difusão
que ocorre no caso limitante, em que o contra-íon é completamen-
te impermeante ou fixado, como na Figura 2.4.) Muitos íons são
desigualmente distribuídos através de membranas biológicas e di-
ferem bastante em suas taxas de difusão através de barreiras; por
isso, os potenciais de difusão sempre contribuem para o potencial
de membrana observado. Mas, na maioria dos sistemas biológi-
cos, o potencial elétrico medido difere do valor que seria esperado
com base na difusão iônica passiva. Nesses casos, deve-se recorrer
a bombas de íons eletrogênicas, sistemas de transporte que execu-
tam o processo exergônico indicado na Figura 2.3, a expensas de
uma fonte de energia externa. Os sistemas de transporte desse tipo
transformam a energia livre de uma reação química no potencial
eletroquímico de um gradiente iônico e desempenham um papel
importante na ligação de energia biológica.
As proteínas constituem cerca de 30% do peso seco total de
células vegetais típicas. Se excluirmos materiais inertes, tais como
parede celular e amido, que podem ser responsáveis por mais de
90% do peso seco de algumas células, proteínas e aminoácidos re-
presentam aproximadamente 60 a 70% do peso seco da célula viva.
Como vimos no Capítulo 1, estruturas do citoesqueleto, tais como
microtúbulos e microfilamentos, são compostas de proteína. As pro-
teínas também ocorrem como formas de reserva, particularmente
em sementes. Mas a função principal de proteínas no metabolismo é
servir como enzimas, catalisadores biológicos que aumentam bas-
tante as taxas de reações bioquímicas, tornando possível a vida. As
enzimas participam dessas reações, mas não são fundamentalmente
modificadas no processo (Mathews e Van Holde, 1996).
As enzimas são chamadas de “agentes de vida” — uma ex-
pressão muito apropriada, já que elas controlam quase todos os
processos vitais. Uma célula típica tem milhares de enzimas dife-
rentes, que executam uma ampla variedade de ações. As caracte-
rísticas mais importantes das enzimas são sua especificidade, que
lhes permite distinguir moléculas muito similares, e sua eficiência
catalítica, que é muito maior do que a de catalisadores comuns. A
estereo-especificidade das enzimas é notável, permitindo-lhes dis-
tinguir não apenas enantiômeros (estereo-isômeros imagem-espe-
lho), por exemplo, mas átomos ou grupos de átomos aparentemente
idênticos (Creighton, 1983).
Essa capacidade de distinguir moléculas semelhantes resulta
do fato de que o primeiro passo na catálise enzimática é a forma-
10 Capítulo 2
ção de um complexo não-covalente firmemente ligado entre a en-
zima e o(s) substrato(s): o complexo enzima-substrato. As reações
catalisadas por enzimas exibem propriedades cinéticas incomuns,
que estão também relacionadas à formação desses complexos muito
específicos. Outra característica distintiva das enzimas é que elas
estão sujeitas a vários tipos de controle regulador, variando de efei-
tos sutis sobre a atividade catalítica por moléculas efetoras (inibi-
doras ou ativadoras) até a regulação da síntese e destruição
enzimática pelo controle da expressão gênica e turnover protéico.
As enzimas são únicas quanto aos grandes aumentos de taxa
que proporcionam, cujas ordens de grandeza são maiores do que
as efetuadas por outros catalisadores. As ordens típicas de au-
mentos de taxas de reações catalisadas por enzimas, acima das
reações não-catalisadas correspondentes, são de 108 para 1012.
Muitas enzimas, em 1 s, convertem em produto cerca de mil mo-
léculas de substrato. Algumas convertem aproximadamente um
milhão!
Diferentemente da maioria dos outros catalisadores, as enzi-
mas funcionam sob temperatura e pressão atmosférica ambiente e
geralmente em uma faixa estreita de pH, próximo à neutralidade
(há exceções, como, por exemplo, as proteases e ribonucleases va-
cuolares, que são mais ativas em pH 4 a 5). Poucas enzimas são
capazes de funcionar sob condições extremamente adversas; os
exemplos são a pepsina, a enzima degradadora de proteína do es-
tômago, cujo pH ótimo situa-se ao redor de 2,0, e a hidrogenase da
arqueobactéria hipertermófila (“afinidade ao calor extremo”) Pyro-
coccus furiosus, que oxida H2 a uma temperatura ótima mais alta
do que 95°C (Bryant e Adams, 1989). A presença de tais enzimas,
notavelmente estáveis ao calor, capacita Pyrococcus a crescer oti-
mamente a 100°C.
As enzimas são geralmente designadas segundo seus subs-
tratos, com adição do sufixo “-ase”, como, por exemplo, a-amila-
se, malato desidrogenase, b-glicosidase, fosfoenolpiruvato
carboxilase, rábano-bastardo peroxidase. Muitos milhares de en-
zimas já foram descobertos, e sempre estão sendo encontradas no-
vas. Com base na reação que catalisa, cada enzima é designada de
maneira sistemática pela União Internacional de Bioquímica. Além
disso, muitas enzimas têm nomes comuns ou populares. Assim, o
nome comum rubisco se refere à D-ribulose-1,5-bifosfato carboxila-
se/oxigenase (EC 4.1.1.39*).
A versatilidade das enzimas reflete suas propriedades como
proteínas. A natureza das proteínas permite à enzima o reconheci-
mento refinado do seu substrato e o aparato catalítico necessário
para realizar reações químicas diversas e rápidas (Stryer, 1995).
As proteínas são cadeias de aminoácidos unidos por
ligações peptídicas
As proteínas são compostas de cadeias longas de aminoáci-
dos (Figura 2.5) unidos por ligações amida, conhecidas como liga-
ções peptídicas (Figura 2.6). As 20 diferentes cadeias laterais de
aminoácidos dotam as proteínas de uma ampla variedade de gru-
pos que possuem propriedades químicas e físicas distintas, inclu-
indo grupos hidrofílicos (polares, afinidade à água) e hidrofóbicos
(não-polares, aversão à água), grupos carregados e polares neu-
*O número da Comissão de Enzimas (EC; do inglês, Enzyme Commission) indica a
classe (4 = liase) e as subclasses (4.1 = clivagem carbono-carbono; 4.1.1 = clivagem
da ligação C-COO–).
tros, grupos ácidos e básicos. Essa diversidade, associada à flexibi-
lidade relativa da ligação peptídica, confere a tremenda variação
em propriedades protéicas, indo da rigidez e inércia de proteínas
estruturais até a reatividade de hormônios, catalisadores e recep-
tores. A orientação tridimensional da estrutura protéica proporci-
ona a discriminação exata no reconhecimento de ligantes, as
moléculas que interagem com proteínas, conforme demonstrado
pela capacidade das enzimas em reconhecer seus substratos e dos
anticorpos em reconhecer os antígenos, por exemplo.
Todas as moléculas de uma proteína possuem a mesma se-
qüência de resíduos de aminoácidos, determinada pela seqüência
de nucleotídeos no gene que codifica para aquela proteína. Embo-
ra a proteína seja sintetizada como uma cadeia linear sobre o ribos-
somo, quando liberada, ela se dobra espontaneamente em uma
forma tridimensional específica, o estado natural. A cadeia de
aminoácidos é denominada polipeptídeo. O arranjo tridimensio-
nal dos átomos na molécula é chamado de conformação. As mu-
danças em conformação não envolvem quebra de ligações
covalentes. A desnaturação implica a perda dessa forma tridimensi-
onal única e resulta na perda de capacidade catalítica.
As forças responsáveis pela forma de uma molécula de proteí-
na são não-covalentes (Figura 2.7). Essas interações não-covalen-
tes incluem: ligações de hidrogênio, interações eletrostáticas
(também conhecidas como ligações iônicas ou pontes salinas), in-
terações de van der Waals (forças de dispersão), que são dipolos
transitórios entre átomos especialmente próximos, e “ligações”
hidrofóbicas — tendência de grupos não-polares de evitar contato
com a água e, assim, de se associar entre si. Além disso, ligações de
covalentes dissulfeto são encontradas em muitas proteínas. Embo-
ra cada tipo de interação não-covalente seja fraco, existem tantas
interações não-covalentes em proteínas que, no total, elas contri-
buem para a estabilização da estrutura natural com uma grande
quantidade de energia livre.
A estrutura da proteína é hierárquica
As proteínas são constituídas de unidades organizacionais pro-
gressivamente complexas. A estrutura primária de uma proteína se
refere à seqüência de resíduos de aminoácidos. A estrutura secun-
dária são as unidades estruturais regulares, geralmente mantidas
juntas por ligações de hidrogênio. As mais comuns dessas unidades
são a hélice a e as folhas b pregueadas paralelas e antiparalelas (Fi-
gura 2.8). A estrutura terciária — estrutura tridimensional final do
polipeptídeo — resulta do empacotamento das unidades da estru-
tura secundária e da exclusão do solvente. A estrutura quaternária
se refere à associação de dois ou mais polipeptídeos tridimensionais
separados a fim de formar complexos. Quando associados dessa ma-
neira, os polipeptídeos individuais são denominados subunidades.
Uma molécula de proteína constituída por uma cadeia poli-
peptídica única e grande é composta de diversas unidades do-
bradas independentemente, conhecidas como domínios.
Tipicamente, os domínios possuem uma massa molecular de cerca
de 104 dáltons. O sítio ativo de uma enzima — isto é, a região
onde o substrato se liga e ocorre reação catalítica — é muitas ve-
zes localizado na interface entre dois domínios. Por exemplo, na
enzima papaína (uma protease vacuolar encontrada no mamão
que é representativa de uma grande classe de tiol proteases ve-
getais), o sítio ativo situa-se na junção de dois domínios (Figura
2.9). Hélices, voltas e folhas b contribuem para a forma tridimen-
sional única dessa enzima.
 Energia e enzimas 11

FIGURA 2.5 Estruturas, nomes, códigos de uma letra (entre colchetes), abreviaturas com três letras e classificação dos aminoácidos.
12 Capítulo 2

As enzimas são catalisadores protéicos altamente

específicos

Todas as enzimas são proteínas, embora recentemente tenha

FIGURA 2.6 (A) A ligação peptídica (amida) une dois aminoácidos.
(B) Sítios de rotação livre, dentro dos limites de impedimento estérico,
das ligações N—Ca e Ca—C (y e f); não há rotação em torno da ligação
peptídica, devido ao seu caráter de ligação-dupla.
As determinações da conformação de proteínas têm revelado
a existência de famílias de proteínas que possuem dobras tridi-
mensionais comuns, bem como padrões comuns de estrutura su-
persecundária, tal como b-a-b.
sido descoberto que alguns ácidos ribonucléicos pequenos e com-
plexos RNA-proteína exibem comportamento semelhante ao das
enzimas no processamento de RNA. As proteínas possuem mas-
sas moleculares que variam de 104 a 106 dáltons e podem ser uma
cadeia polipeptídica com uma dobra (subunidade ou protômero)
ou oligômeros de muitas subunidades (oligômeros são geralmen-
te dímeros ou tetrâmeros). Normalmente, as enzimas têm somente
um tipo de atividade catalítica associada com a mesma proteína;
isoenzimas ou isozimas são enzimas com função catalítica seme-
lhante que têm estruturas e parâmetros catalíticos distintos e são
codificadas por genes diferentes. Por exemplo, vários tipos de iso-
zimas têm sido encontrados para peroxidase, uma enzima de pa-
redes de células vegetais que participa da síntese de lignina. Uma
isozima de peroxidase foi também localizada em vacúolos. As iso-
zimas podem exibir especificidade a tecidos e mostrar regulação
relativa ao desenvolvimento.
As enzimas freqüentemente contêm um grupo prostético
não-protéico ou co-fator, o qual é necessário para a atividade bi-
ológica. A associação de um co-fator a uma enzima depende da
estrutura tridimensional da proteína. Uma vez ligado à enzima,
o co-fator contribui para a especificidade da catálise. Exemplos
típicos de co-fatores são os íons metálicos (p. ex., zinco, ferro,
molibdênio), grupos heme, agrupamentos de ferro-enxofre (es-
pecialmente em enzimas de oxidação-redução) e coenzimas (p.
ex., nicotinamida adenina dinucleotídeo [NAD+/NADH], flavi-

FIGURA 2.7 Exemplos de interações não-covalentes em proteínas. As ligações de hidrogênio são

interações eletrostáticas fracas, envolvendo um átomo de hidrogênio entre dois átomos
eletronegativos. Nas proteínas, as ligações de hidrogênio mais importantes são aquelas entre as
ligações peptídicas. Interações eletrostáticas são ligações iônicas entre grupos carregados
positivamente e negativamente. As interações de van der Waals são dipolos transitórios de espectro
curto. As interações hidrofóbicas (não mostradas) envolvem a reestruturação do solvente água em
torno de grupos não-polares, minimizando a exposição da área de superfície não-polar do solvente
polar; essas interações são movidas por entropia.
 Energia e enzimas 13

FIGURA 2.8 Hierarquia da estrutura de proteínas. (A) Estrutura primária: ligação peptídica. (B e C) Estrutura secundária: hélice a (B) e folha b
pregueada antiparalela (C). (D) Estrutura terciária: hélices a; folhas b pregueadas e espirais aleatórias. (E) Estrutura quaternária: quatro subunidades.

na adenina dinucleotídeo [FAD/FADH2], flavina mononucleotí-
deo [FMN] e piridoxal fosfato [PLP]). As coenzimas são geral-
mente vitaminas ou derivados de vitaminas e atuam como
carregadoras. Por exemplo, NAD+ e FAD carregam hidrogênio e
elétrons em reações redox, biotina carrega CO2, e tetra-hidrofola-
to carrega fragmentos de um carbono. A peroxidase possui gru-
pos heme e Ca2+ como grupos prostéticos e é glicosilada, ou seja,
ela contém carboidratos covalentemente adicionados a cadeias
laterais de asparagina, serina ou treonina. Tais proteínas são de-
nominadas glicoproteínas.
14 Capítulo 2

FIGURA 2.10 Acoplamento da hidrólise de ATP para mover uma

reação energeticamente desfavorável. A reação A + B Æ C é
termodinamicamente desfavorável, ao passo que a hidrólise de ATP
para formar ADP e fosfato inorgânico (Pi) é termodinamicamente muito
favorável (tem um DG bastante negativo). Com intermediários
apropriados, tais como A-P, as duas reações são acopladas, produzindo
uma reação global que é a soma das reações individuais e tem uma
mudança em energia livre favorável.

FIGURA 2.9 Conformação da cadeia principal da papaína,

mostrando os dois domínios e a fenda do sítio ativo entre eles. As enzimas atuam como catalisadores porque reduzem a ener-
gia livre de ativação de uma reação. Fazem isso por meio de uma
combinação da elevação do estado fundamental DG do substrato
e da redução do DG do estado de transição da reação, decrescen-
Determinada enzima catalisará apenas um tipo de reação quí- do, assim, a barreira contra a reação (Figura 2.11). A presença da
mica para somente uma classe de molécula — em alguns casos, enzima leva a uma nova rota de reação, diferente daquela da rea-
para apenas um composto em particular. As enzimas também são ção não-catalisada.
bem estereoespecíficas e não formam subprodutos. Por exemplo,
a b-glicosidase catalisa a hidrólise de b-glicosídeos, compostos for-
mados por uma ligação glicosídica à D-glicose. O substrato deve
ter a configuração anomérica correta: ele deve ser b-, não a-. Além
disso, deve ter a estrutura de glicose; nenhum outro carboidrato,
tal como xilose ou manose, pode atuar como substrato para b-gli-
cosidase. Finalmente, o substrato deve ter a estereoquímica corre-
ta, nesse caso, a configuração D absoluta. A rubisco (D-ribulose-
1,5-bifosfato carboxilase/oxigenase) catalisa a adição de dióxido à
D-ribulose-1,5-bifosfato para formar duas moléculas de 3-fosfato-
D-glicerato, o passo inicial no ciclo fotossintético C3 de redução do
carbono, e é a enzima mais abundante do mundo. A rubisco pos-
sui especificidade muito estrita para o substrato carboidrato, mas
catalisa também uma reação de oxigenase em que O2 substitui CO2,
conforme será discutido no Capítulo 8.

As enzimas diminuem a barreira de energia livre entre

substratos e produtos
Os catalisadores aceleram a taxa de uma reação por meio da
redução da barreira de energia entre substratos (reagentes) e pro-
dutos; eles próprios não são esgotados na reação, mas regenera-
dos. Desse modo, um catalisador aumenta a taxa de uma reação,
mas não afeta a razão de equilíbrio de reagentes e produtos, pois
as taxas de reação são ampliadas em ambas as direções na mesma
extensão. É importante perceber que as enzimas não podem pro-
mover a ocorrência de uma reação não-espontânea (energeticamen-
te ascendente). Entretanto, muitas reações energeticamente
desfavoráveis em células prosseguem porque estão acopladas a
uma reação energeticamente mais favorável, geralmente envolven-
do hidrólise de ATP (Figura 2.10).
FIGURA 2.11 Curvas de energia livre para a mesma reação, não-
catalisada e catalisada por enzima. Como um catalisador, enzima
diminui a energia livre de ativação do estado de transição entre
substratos e produtos, comparada com uma reação não-catalisada.
Procede assim por meio da formação de vários complexos e
intermediários, tais como os complexos enzima-substrato e enzima-
produto. A energia livre do estado fundamental do complexo enzima-
substrato, na reação catalisada por enzima, pode ser mais alta do que a
do substrato na reação não-catalisada; a energia livre do estado de
transição do substrato ligado à enzima será significativamente menor do
que na reação não-catalisada correspondente.
 Energia e enzimas 15

A catálise ocorre no sítio ativo
O sítio ativo de uma molécula de enzima é geralmente uma
fenda ou um bolsão sobre ou próximo à sua superfície, que ocupa
apenas uma pequena fração dessa superfície. É conveniente consi-
derar o sítio ativo como constituído de dois componentes: o sítio
de ligação para o substrato (que atrai e posiciona o substrato) e os
grupos catalíticos (as cadeias laterais reativas de aminoácidos ou
co-fatores, que executam as reações envolvidas na clivagem e for-
mação de ligações).
A ligação do substrato ao sítio ativo inicialmente envolve
interações não-covalentes entre o substrato e as cadeias laterais
ou ligações peptídicas da proteína. O restante da estrutura da
proteína proporciona meios de posicionamento do substrato e
dos grupos catalíticos, flexibilidade para mudanças conformaci-
onais e controle regulador. A forma e a polaridade do sítio de
ligação são responsáveis por muito da especificidade das enzi-
mas, e existe complementaridade entre forma e polaridade do
substrato e do sítio ativo. Em alguns casos, a ligação do substrato
induz uma mudança conformacional no sítio ativo da enzima.
Essa mudança é particularmente comum onde há dois substra-
tos. A ligação do primeiro substrato estabelece uma mudança con-
formacional da enzima, o que resulta na formação do sítio de
ligação para o segundo substrato. A hexoquinase é um bom exem-
plo de uma enzima que exibe esse tipo de mudança conformaci-
onal (Figura 2.12).
Os grupos catalíticos são geralmente cadeias laterais de ami-
doação de um próton, e os básicos, pela recepção de um próton.
Os grupos catalíticos nucleofílicos formam uma ligação covalente
transitória com o substrato.
O fator decisivo na catálise é a interação direta entre a enzima e
o substrato. Em muitos casos, existe um intermediário que contém
uma ligação covalente entre a enzima e o substrato. Embora os deta-
lhes do mecanismo catalítico difiram de um tipo de enzima para
outro, um número limitado de atributos está envolvido em toda ca-
tálise enzimática. Esses atributos incluem catálise ácido-base, catáli-
se eletrofílica ou nucleofílica e distorção do estado fundamental por
meio de tensões eletrostáticas ou mecânicas sobre o substrato.
Uma equação cinética simples representa uma reação
catalisada por enzima
Os sistemas catalisados por enzimas freqüentemente exibem
uma forma especial de cinética denominada cinética de Michaelis-
Menten, que é caracterizada por uma relação hiperbólica entre a
velocidade de reação, v, e a concentração do substrato, [S] (Figura
2.13). Esse tipo de gráfico é conhecido como gráfico de saturação,
pois, quando a enzima se torna saturada com substrato (i.e., cada
molécula da enzima tem uma molécula de substrato associada a
ela), a taxa fica independente da concentração do substrato. A ci-
nética de saturação indica que um processo de equilíbrio precede
o passo limitante da taxa:
E + S ←
rápido
→ ES ← → E + P
lento

noácidos e/ou co-fatores que podem funcionar como catalisado-
res. Os exemplos comuns de grupos catalíticos são ácidos (—COOH
das cadeias laterais de ácido aspártico ou ácido glutâmico, imida-
zol da cadeia lateral da histidina), bases (—NH2 da lisina, imidazol
da histidina, —S– da cisteína), nucleófilos (imidazol da histidina,
—S– da cisteína, —OH da serina) e eletrófilos (freqüentemente íons
metálicos, como Zn2+). Os grupos catalíticos ácidos funcionam pela
onde E representa a enzima; S, o substrato; P, o produto; e ES, o
complexo enzima-substrato. Desse modo, com o aumento da con-
centração do substrato, alcança-se um ponto no qual todas as mo-
léculas de enzima estão na forma do complexo ES, a enzima é
saturada com substrato. Uma vez que a taxa da reação depende da
concentração de ES, esta não aumenta, porque pode não haver con-
centração mais alta de ES.

FIGURA 2.12 Mudança conformacional em hexoquinase, induzida pelo primeiro substrato da enzima, D-glicose. (A) Antes
da ligação da glicose. (B) Após a ligação da glicose. A ligação da glicose à hexoquinase induz uma mudança conformacional,
na qual os dois domínios principais se juntam para fechar a fenda que contém o sítio ativo. Essa mudança estabelece o sítio de
ligação para o segundo substrato, ATP. Dessa maneira, a enzima evita a hidrólise improdutiva de ATP por meio da proteção
dos substratos do solvente aquoso. A reação global é a fosforilação da glicose e a formação de ADP.
16 Capítulo 2
FIGURA 2.13 Gráfico da velocidade inicial, v, versus concentração do
substrato, [S], para uma reação catalisada por enzima. A curva é
hiperbólica. A taxa máxima, Vmáx., ocorre quando todas as moléculas da
enzima são integralmente ocupadas por substrato. O valor de Km,
definido como a concentração do substrato a 1/2 Vmáx., é um reflexo da
afinidade da enzima com o substrato. Quanto menor o valor de Km,
tanto mais firme é a ligação.
Quando uma enzima é misturada com um excesso de substra-
to, há um período inicial muito curto (geralmente milissegundos),
durante o qual as concentrações de complexos enzima-substrato e
intermediários chegam a certos níveis; esse período é conhecido como
pré-estado estacionário. Uma vez estabelecidos os níveis intermedi-
ários, eles permanecem relativamente constantes, até que o substra-
to seja esgotado; esse período é denominado estado estacionário.
Normalmente, os valores de cinética enzimática são medidos
sob condições de equilíbrio estacionário, as quais geralmente pre-
valecem na célula. Para muitas reações catalisadas por enzimas, a
FIGURA 2.14 Gráficos duplos-recíprocos de Lineweaver-Burk. Um gráfico de 1/v versus 1/[S] produz uma linha reta.
(A) Reação catalisada por enzima não-inibida, mostrando o cálculo de Km a partir da intercepção-x e de Vmáx. a partir da
intercepção-y. (B) O efeito de um inibidor competitivo sobre os parâmetros Km e Vmáx. O Km aparente é aumentado, mas o
Vmáx. não muda. (C) Um inibidor não-competitivo reduz Vmáx., mas não tem efeito sobre Km.
cinética sob condições de estado estacionário pode ser representa-
da por uma expressão simples, conhecida como a equação de Mi-
chaelis-Menten:
Vmáx. [S]
v= (2.21)
K m + [S]
O v é a taxa ou velocidade observada (em unidades tais como mols
por litro por segundo), Vmáx. é a velocidade máxima (a uma con-
centração de substrato infinita), e Km (geralmente medida em uni-
dades de molaridade) é uma constante, característica do sistema
particular enzima-substrato, estando relacionada à associação cons-
tante da enzima com o substrato (ver Figura 2.13). Km representa a
concentração de substrato referida para semi-saturar a enzima e,
desse modo, é a concentração do substrato a Vmáx./2. Em muitos
sistemas celulares, a concentração habitual de substrato está pró-
xima de Km. Quanto menor o valor de Km, tanto mais fortemente a
enzima se liga ao substrato. Os valores típicos para Km estão na
faixa de 10–6 a 10–3 M.
Podemos obter facilmente os parâmetros Vmáx. e Km pelo ajus-
te de dados experimentais à equação de Michaelis-Menten, seja
por ajuste de curva computadorizada ou por uma forma lineariza-
da da equação. Um exemplo de forma linearizada da equação é o
gráfico duplo-recíproco de Lineweaver-Burk, mostrado na Figura
2.14A. Quando dividido pela concentração da enzima, o valor de
Vmáx. dá o número de turnover, que é o número de moléculas de
substrato convertidas em produto por unidade de tempo por mo-
lécula de enzima. Os valores típicos de número de turnover variam
entre 102 e 103 s–1.
As enzimas estão sujeitas a vários tipos de inibição
Todo agente que reduz a velocidade de uma reação catalisada
por enzima é chamado de inibidor. Os inibidores podem exercer
seus efeitos de muitas maneiras. Geralmente, se a inibição é irre-
versível, o composto é chamado de inativador. Outros agentes
podem aumentar a eficiência de uma enzima; são denominados

ativadores. Inibidores e ativadores são muito importantes na re-
gulação celular de enzimas. Muitos inseticidas e herbicidas impor-
tantes na agricultura são inibidores de enzimas. O estudo da
inibição enzimática pode fornecer informações úteis sobre os me-
canismos cinéticos, a natureza de intermediários e complexos en-
zima-substrato, o mecanismo químico da ação catalítica, bem como
a regulação e o controle de enzimas metabólicas. Além disso, o
estudo de inibidores de potenciais enzimas-alvo é essencial para o
planejamento racional de herbicidas.
Os inibidores podem ser classificados como reversíveis e ir-
reversíveis. Os inibidores irreversíveis formam ligações cova-
lentes com uma enzima ou a desnaturam. Por exemplo,
iodoacetato (ICH2COOH) inibe irreversivelmente tiol proteases,
como a papaína, por alquilação do grupo –SH do sítio ativo. Uma
classe de inibidores irreversíveis é a dos agentes modificadores
dirigidos ao sítio ativo, assim denominados porque sua estrutu-
ra os dirige para o sítio ativo. Um exemplo é a tosil-lisina cloro-
metil cetona (TLCK; do inglês, tosyl-lysine chlromethyl ketone), que
inativa irreversivelmente a papaína. A parte tosil-lisina do inibi-
dor se parece com a estrutura do substrato e, assim, se liga no
sítio ativo. A parte clorometil cetona do inibidor reage com a ca-
deia lateral de histidina do sítio ativo. Tais compostos são muito
úteis em estudos mecanísticos de enzimas, mas têm uso prático
limitado como herbicidas, devido à sua reatividade química, que
pode ser prejudicial à planta.
Os inibidores reversíveis formam ligações não-covalentes
fracas com a enzima e seus efeitos podem ser competitivos, não-
competitivos ou mistos. Por exemplo, glifosato (Roundup®), her-
bicida de efeito amplo e largamente utilizado, trabalha por meio
de inibição competitiva de uma enzima-chave na biossíntese de
aminoácidos aromáticos, 5-enolpiruvilchiquimato-3-fosfato (EPSP;
do inglês, 5-enolpyruvylshirimate-3-phosfate) sintase (ver Capítulo
13). A resistência ao glifosato foi recentemente alcançada por en-
genharia genética de plantas, de modo que elas são capazes de
superproduzir EPSP sintase (Donahue et al., 1995).
Inibição competitiva. A inibição competitiva é a forma mais sim-
ples e comum de inibição reversível. Geralmente origina-se da li-
gação do inibidor ao sítio ativo com uma afinidade semelhante ou
mais forte do que a do substrato. Assim, a concentração efetiva da
enzima decresce pela presença do inibidor, e a reação catalítica será
mais lenta do que se o inibidor não estivesse presente. A inibição
competitiva é geralmente baseada no fato de que a estrutura do
inibidor se assemelha à do substrato; daí a forte afinidade do inibi-
dor pelo sítio ativo. A inibição competitiva pode também ocorrer
em enzimas alostéricas, nas quais o inibidor se liga a um sítio dis-
tante sobre a enzima, causando uma mudança conformacional que
altera o sítio ativo e impede a ligação de substrato normal. Tal sítio
de ligação é um sítio alostérico. Nesse caso, a competição entre
substrato e inibidor é indireta.
A inibição competitiva resulta em um aumento aparente em
Km e não tem efeito sobre Vmáx. (ver Figura 2.14B). Pela medição da
Km aparente como uma função da concentração do inibidor, pode-
se calcular Ki, a constante do inibidor, que reflete a afinidade da
enzima com o inibidor.
Inibição não-competitiva. Na inibição não-competitiva, o ini-
bidor não compete com o substrato para se ligar ao sítio ativo.
Em vez disso, pode se ligar a um outro sítio sobre a proteína e
Energia e enzimas 17
obstruir o acesso do substrato ao sítio ativo, modificando, as-
sim, as propriedades catalíticas da enzima; ou pode se ligar ao
complexo enzima-substrato e, desse modo, alterar a catálise. A
inibição não-competitiva é freqüentemente observada na regu-
lação de enzimas metabólicas. A propriedade diagnóstica des-
se tipo de inibição é que K m não é afetada, enquanto V máx.
decresce na presença de quantidades crescentes de inibidor (ver
Figura 2.14C).
Inibição mista. A inibição mista é caracterizada pelos efeitos
sobre Vmáx. (que decresce) e Km (que aumenta). É muito comum e
resulta da formação de um complexo, consistindo da enzima, do
substrato e do inibidor que não se decompõe em produtos.
O pH e a temperatura afetam a taxa de reações
catalisadas por enzimas
A catálise enzimática é muito sensível ao pH. Essa sensibili-
dade é facilmente compreendida quando se considera que os gru-
pos catalíticos essenciais são geralmente ionizáveis (imidazol,
carboxila, amino) e ativos cataliticamente em apenas um de seus
estados de ionização. Por exemplo, imidazol, atuando como uma
base, será funcional somente em valores de pH acima de 7. Os
gráficos das taxas de reações catalisadas por enzimas versus pH
são geralmente campanulados, correspondendo a duas curvas
sigmóides, uma para um grupo ionizável, atuando como um áci-
do, e outra para o grupo que atua como base (Figura 2.15A). Em-
bora os efeitos do pH sobre a catálise enzimática geralmente
reflitam a ionização do grupo catalítico, podem também refletir
uma mudança conformacional (dependente de pH) na proteína,
que leva à perda de atividade, como um resultado da ruptura do
sítio ativo.
A dependência da temperatura na maioria das reações quí-
micas também se aplica às reações catalisadas por enzimas. Des-
se modo, a maioria destas reações mostra um aumento
exponencial na taxa com temperatura crescente. Entretanto, pelo
fato de as enzimas serem proteínas, outro fator importante entra
em consideração – a saber, a desnaturação. Após ser alcançada
uma certa temperatura, as enzimas exibem um decréscimo de
atividade muito rápido, como conseqüência do início da desna-
turação (Figura 2.15B). A temperatura à qual a desnaturação co-
meça e, conseqüentemente, a atividade catalítica é perdida varia
com a proteína considerada e com as condições ambientais, como
o pH. Freqüentemente, a desnaturação começa a cerca de 40 a
50°C e se completa a aproximadamente 10°C acima.
Os sistemas cooperativos aumentam a sensibilidade a
substratos e geralmente são alostéricos
As células controlam rigorosamente as concentrações da maio-
ria dos metabólitos. Para manter tal controle rígido, as enzimas que
regulam a interconversão de metabólitos devem ser muito sensí-
veis. No gráfico de velocidade versus concentração do substrato (ver
Figura 2.13), podemos ver que a velocidade de uma reação catalisa-
da por enzima aumenta com a concentração crescente do substrato
até Vmáx. No entanto, pela equação de Michaelis-Menten (Equação
2.12), podemos calcular que o aumento da velocidade de uma rea-
ção catalisada por enzima de 0,1 Vmáx. a 0,9 Vmáx. requer uma eleva-
ção enorme (81 vezes) na concentração do substrato:
18 Capítulo 2

Vmáx. [S] V [S]′ (Figura 2.16). A vantagem de sistemas cooperativos é que uma
0,1Vmáx. = , 0,9Vmáx. = máx. pequena alteração na concentração do efetor crítico (substrato, ini-
K m + [S] K m + [S]′
bidor ou ativador) ocasionará uma grande mudança na taxa. Em
0,1K m = 0,9[S], 0,9K m = 0,1[S]′ outras palavras, o sistema se comporta como comutador.
0,1 0,9 [S] A cooperatividade é observada tipicamente em enzimas alos-
= × téricas que contêm sítios ativos múltiplos localizados em subunida-
0,9 0,1 [S]′
2 des múltiplas. Tais enzimas oligoméricas existem geralmente em dois
[S]  0,1  0,01 estados conformacionais principais: um ativo e um inativo (ou rela-
=  =
[S]′  0,9  0,81 tivamente inativo). A ligação de ligantes (substratos, ativadores ou
inibidores) à enzima perturba a posição de equilíbrio entre as duas
conformações. Por exemplo, um inibidor favorecerá a forma inati-
Esse cálculo mostra que a velocidade da reação é insensível a
va; um ativador, a forma ativa. O aspecto cooperativo aparece da
mudanças pequenas na concentração do substrato. O mesmo fator
seguinte maneira: um evento cooperativo positivo é aquele em que
se aplica no caso de inibidores e inibição. Em sistemas cooperati-
a ligação do primeiro ligante torna mais fácil a ligação do próximo.
vos, por outro lado, uma alteração pequena em um parâmetro, tal
Similarmente, a cooperatividade negativa significa que o segundo
como a concentração do inibidor, causa uma grande mudança na
ligante se ligará menos facilmente do que o primeiro.
velocidade. Uma conseqüência de um sistema cooperativo é que o
A cooperatividade na ligação de substrato (homoalosteria)
gráfico de v versus [S] não é mais hiperbólico, mas se torna sigmóide
ocorre quando a ligação do substrato a um sítio catalítico sobre
uma subunidade aumenta a afinidade ao substrato de um sítio ca-
talítico idêntico localizado em uma subunidade diferente. Os li-
gantes efetores (inibidores ou ativadores), ao contrário, se ligam a
sítios diferentes do sítio catalítico (heteroalosteria). Essa relação se
ajusta satisfatoriamente ao fato de que os produtos finais de rotas
metabólicas, os quais freqüentemente servem como inibidores por
retroalimentação, geralmente não têm semelhança estrutural com
os substratos do primeiro passo.

A cinética de alguns processos de transporte de

membrana pode ser representada pela equação de
Michaelis-Menten
As membranas contêm proteínas que aceleram o movimento
de íons ou moléculas orgânicas específicos através da bicamada
lipídica. Algumas proteínas de transporte de membrana são enzi-
mas, tais como ATPases, que usam a energia da hidrólise de ATP
para bombear íons através da membrana. Quando essas reações se
processam na direção inversa, as ATPases de mitocôndrias e cloro-
plastos podem sintetizar ATP. Outras proteínas de membrana fun-
cionam como carregadores, ligando seu substrato a um lado da
membrana e liberando-o no outro lado.

FIGURA 2.15 Curvas de pH e temperatura para reações enzimáticas

típicas. (A) Muitas reações catalisadas por enzimas mostram contornos
campanulados de taxa versus pH. O ponto de inflexão corresponde a pKa
de um grupo ionizante (i. e., o pH no qual o grupo ionizante está 50%
dissociado) no sítio ativo. (B) A temperatura causa um aumento
exponencial na taxa da reação, até que o ótimo seja alcançado. Além do
ótimo, a desnaturação térmica diminui drasticamente a taxa.
FIGURA 2.16 Os sistemas alostéricos exibem gráficos sigmóides de
taxa versus concentração do substrato. A adição de um ativador desloca
a curva para a esquerda; a adição de um inibidor a desloca para a
direita.

A cinética de transporte mediado por carregador pode ser re-
presentada pela equação de Michaelis-Menten, da mesma manei-
ra que a cinética de reações catalisadas por enzimas (ver Capítulo
6). Em vez de uma reação bioquímica com substrato e produto, no
entanto, o carregador se liga ao soluto e o transfere de um lado de
uma membrana para o outro. Considerando X como soluto, pode-
mos escrever a seguinte equação:
X fora + carregador → [X - carregador] → X dentro + carregador
Desde que o carregador possa se ligar ao soluto mais rapidamente
do que pode transportá-lo para o outro lado da membrana, o trans-
porte de soluto exibe cinética de saturação. Ou seja, é alcançada uma
concentração além da qual a adição de mais soluto não resulta em
uma taxa de transporte mais rápida (Figura 2.17). Vmáx. é a taxa má-
xima de transporte de X através da membrana; Km é equivalente à
constante de ligação do soluto para o carregador. Como as reações
catalisadas por enzimas, o transporte mediado por carregador re-
quer um alto grau de especificidade estrutural da proteína. O trans-
porte real do soluto através da membrana aparentemente envolve
mudanças conformacionais também semelhantes àquelas das rea-
ções catalisadas por enzimas.
A atividade enzimática é freqüentemente regulada
As células podem controlar o fluxo de metabólitos por meio
da regulação da concentração de enzimas e da sua atividade cata-
lítica. Pelo uso de ativadores ou inibidores alostéricos, as células
podem modular a atividade enzimática e obter expressão de catá-
lise muito cuidadosamente controlada.
Controle da concentração enzimática. A quantidade de enzimas
em uma célula é determinada pelas taxas relativas de sua síntese e
degradação. A taxa de síntese é regulada, em nível genético, por
uma variedade de mecanismos, que são discutidos mais detalha-
damente na última seção deste capítulo.
FIGURA 2.17 As cinéticas de transporte de um soluto através de
uma membrana, mediado por carregador, são análogas àquelas de
reações catalisadas por enzimas. Assim, as representações gráficas de
velocidade de transporte versus concentração de soluto são
hiperbólicas, tornando-se assintóticas a uma velocidade máxima em
concentração alta de soluto.
Energia e enzimas 19
Compartimentalização Enzimas diferentes ou isozimas com pro-
priedades catalíticas distintas (p. ex., afinidade ao substrato) po-
dem estar localizadas em regiões diferentes da célula, tais como
mitocôndrias e citosol. Similarmente, enzimas associadas com ta-
refas especiais estão freqüentemente compartimentadas; por exem-
plo, as enzimas envolvidas na fotossíntese são encontradas em
cloroplastos. Os vacúolos contêm muitas enzimas hidrolíticas, tais
com proteases, ribonucleases, glicosidases e fosfatases, bem como
peroxidases. As paredes celulares contêm glicosidases e peroxida-
ses. As mitocôndrias são a principal localização das enzimas en-
volvidas na fosforilação oxidativa e no metabolismo energético,
incluindo as enzimas do ciclo do ácido tricarboxílico (TCA; do in-
glês, tricarboxylic acid).
Modificação covalente. O controle por modificação covalente de
enzimas é comum e geralmente envolve sua fosforilação e adenili-
lação,* de modo que a forma fosforilada, por exemplo, é ativa, e a
forma não-fosforilada é inativa. Esses mecanismos de controle são
normalmente dependentes de energia e, em sua maioria, envol-
vem ATP.
As proteases normalmente são sintetizadas como precursores
ativos, conhecidos como zimógenos ou proenzimas. Por exemplo,
a papaína é sintetizada e se torna ativa mais tarde pela clivagem
(hidrólise) de uma ligação peptídica. Esse tipo de modificação co-
valente evita degradação proteolítica prematura de constituintes
celulares pela enzima recentemente sintetizada.
Inibição por retroalimentação. Considere uma rota metabólica
típica com dois ou mais produtos finais, como a mostrada na Figu-
ra 2.18. O controle do sistema requer que, se os produtos finais são
formados em demasia, sua taxa de formação seja diminuída. De
maneira semelhante, se o reagente A for formado em demasia, deve
ser aumentada a taxa de conversão de A em produtos. O processo
é geralmente regulado por controle de fluxo no primeiro passo da
rota e a cada ponto de ramificação. Os produtos finais, G e J, que
podem não manter qualquer semelhança com o substrato A, ini-
bem as enzimas em A → B e no ponto de ramificação.
Por haver duas enzimas em A Æ B, cada uma inibida por um
dos metabólitos finais (mas não pelo outro), é possível exercer um
controle mais apurado do que com apenas uma enzima. O primei-
ro passo em uma rota metabólica é geralmente chamado de passo
cometido. Nesse passo, as enzimas estão sujeitas a maior controle.
A frutose-2,6-bifosfato desempenha um papel central na re-
gulação do metabolismo do carbono em vegetais, pois funciona
como um ativador na glicólise (a decomposição de açúcares para
gerar energia) e um inibidor na gliconeogênese (a síntese de açú-
cares). A frutose-2,6-bifosfato é sintetizada a partir da frutose-6-
fosfato em uma reação que requer ATP e é catalisada pela enzima
frutose-6-fosfato 2-quinase; esta é degradada na reação inversa ca-
talisada por frutose-2,6-bifosfatase, que, por sua vez, libera fosfato
inorgânico (Pi). Essas duas enzimas estão sujeitas ao controle me-
tabólico por frutose-2,6-bifosfato, assim como ATP, Pi, frutose-6-
fosfato, diidroxiacetona fosfato e 3-fosfoglicerato. O papel da
frutose-2,6-bifosfato no metabolismo vegetal será discutido nos Ca-
pítulos 8 e 11.
*Embora alguns textos se refiram à conjugação de um composto com ácido adeníli-
co (AMP) como “adenilação”, o termo quimicamente correto é “adenililação”.
20 Capítulo 2
FIGURA 2.18 Inibição por retroalimentação em uma rota metabólica hipotética. As letras (A-J)
representam metabólitos, e cada seta representa uma reação catalisada por enzima. A seta em
negrito para a primeira reação indica que estão envolvidas duas enzimas diferentes com
sensibilidades distintas a inibidores. As linhas tracejadas indicam metabólitos que inibem
enzimas específicas. O primeiro passo na rota metabólica e os pontos de ramificação são sítios
particularmente importantes de controle por retroalimentação.
RESUMO
Os organismos vivos, incluindo as plantas verdes, são gover-
nados pelas mesmas leis de fluxo de energia aplicadas a toda parte
do universo. Essas leis de fluxo de energia são enquadradas nas
leis da termodinâmica.
Energia é definida como a capacidade de realizar trabalho,
que pode ser mecânico, elétrico, osmótico ou químico. A primeira
lei da termodinâmica expressa o princípio da conservação da ener-
gia: esta pode ser convertida de uma forma em outra, mas a ener-
gia total do universo permanece a mesma. A segunda lei da
termodinâmica apresenta a direção de processos espontâneos: um
processo espontâneo é aquele que resulta em um aumento líquido
na entropia total (DS), ou aleatoriedade, de um sistema mais seu
entorno. Os processos que envolvem transferência de calor, tal como
o esfriamento devido à evaporação da água pelas folhas, são me-
lhor discutidos em termos da mudança no conteúdo de calor, ou
entalpia (DH), definida como a quantidade de energia absorvida
ou produzida como calor sob pressão constante.
A mudança em energia livre, DG, é um parâmetro convenien-
te para a determinação da direção de processos espontâneos em
sistemas químicos ou biológicos sem referência ao seu entorno. O
valor de DG é negativo para todos processos espontâneos sob tem-
peratura e pressão constantes. O DG de uma reação é uma função
do seu deslocamento do equilíbrio. Quanto maior o deslocamento
do equilíbrio, tanto mais trabalho a reação pode realizar. Os siste-
mas vivos evoluíram no sentido de manter suas reações bioquími-
cas tão distantes do equilíbrio quanto possível.
O potencial redox representa a mudança em energia livre de
uma reação de oxidação-redução expressa em unidades eletro-
químicas. Como as mudanças em energia, o potencial redox de
um sistema depende das concentrações das espécies oxidases e
reduzidas.
O estabelecimento de gradientes iônicos através de membra-
nas é um aspecto importante do trabalho realizado por sistemas
vivos. O potencial de membrana é uma medida do trabalho reque-
rido para transportar um íon através de uma membrana. A dife-
rença de potencial eletroquímico inclui potenciais de concentração
e elétrico.
As leis da termodinâmica têm a propriedade de prever se uma
reação pode ocorrer e em que direção, mas elas não informam nada
sobre a velocidade de uma reação. A vida depende de catalisado-
res protéicos altamente específicos chamados enzimas, para acele-
rar as taxas das reações. Todas as proteínas são compostas de
aminoácidos unidos por ligações peptídicas. A estrutura protéica é
hierárquica; pode ser classificada em níveis primário, secundário,
terciário e quaternário. As forças responsáveis pela forma de uma
molécula de proteína são não-covalentes e facilmente rompidas
por calor, substâncias químicas ou pH, levando à perda de confor-
mação ou desnaturação.
As enzimas funcionam pela diminuição da barreira de ener-
gia livre entre os substratos e produtos de uma reação. A catálise
ocorre no sítio ativo da enzima. As reações mediadas por enzimas
exibem cinética de saturação e podem ser representadas pela equa-
ção de Michaelis-Menten, que relaciona a velocidade de uma rea-
ção catalisada por enzima à concentração do substrato. A
concentração do substrato é inversamente relacionada à afinidade
de uma enzima pelo seu substrato. Uma vez que a velocidade da
reação é relativamente insensível a mudanças pequenas na con-
centração do substrato, muitas enzimas exibem cooperatividade.
Tipicamente, tais enzimas são alostéricas, contendo dois ou mais
sítios ativos que interagem entre si e podem estar localizados em
subunidades diferentes.
As enzimas estão sujeitas a inibições reversível e irreversível.
Os inibidores irreversíveis formam tipicamente ligações covalen-
tes com a enzima; os inibidores reversíveis formam ligações não-
covalentes com a enzima e podem ter efeitos competitivos,
não-competitivos ou mistos.
A atividade enzimática é freqüentemente regulada nas célu-
las. A regulação pode ser acompanhada por: compartimentaliza-
ção de enzimas e/ou substratos; modificação covalente; inibição
por retroalimentação, em que os produtos finais de rotas metabó-
licas inibem as enzimas envolvidas em passos iniciais; e controle
da concentração de enzimas na célula, por expressão gênica e
degradação protéica.
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*Indica uma referência recomendada como bibliografia geral sobre a área do conhe-
cimento tratada e que também é citada no capítulo.

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