Instituto Politécnico Nacional.

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas.

Químico Farmacéutico Industrial.
Laboratorio de Bioquímica General.

Alumnos:
Campos Rojas Juan Isaac
García Torres Rebeca Del Rosario.
Sección: 2 Grupo: 3FV1

Práctica 14: Aislamiento de DNA Plasmídico.

Introducción:
Las moléculas intactas de cultivos bacterianos
nativos, debido a su tamaño son difíciles de aislar,
la mayoría de las células bacterianas contienen más
de 1 a 20 moléculas de DNA más pequeñas
denominadas, plásmidos, se replican en números
fijos junto con los cromosomas, sus funciones no
son conocidas claramente, pero algunos de ellos
llamados episomas se incorporan al cromosoma de
la célula huésped. Los plásmidos pueden ser
transmitidos de una célula bacteriana a otra durante
la conjugación sexuada, confiriendo así nuevas
características fenotípicas a la célula recipiendaria.

Objetivos:
 Aislar DNA plasmídico bacteriano,
comprobando dicho aislamiento mediante
electroforesis en gel de agarosa.
Nuestro plásmido corrió en el carril 6, observando
Resultados: que el plásmido no se rompió y perduró en forma
súper enrollada, se observa un desplazamiento
Figura 1. Resultados obtenidos en la electroforesis correcto y no observa barrido.
grupal.
Discusión:

En la práctica nos proporcionaron las bacterias

incubadas en un tubo eppendorf en baño de hielo.

Adicionamos la solución I que contiene la solución

Figura 2. Resultados obtenidos en la electroforesis
grupal visto con luz ultravioleta.
GTE (Glucosa Tris EDTA) para atrapar a los iones y
no permitir que ataquen a las DNAsas e incubamos
en hielo para que las células re suspendidas
mueran.
Después le adicionamos la solución II que contiene
SDS y NaOH para romper la membrana y liberar su
contenido celular e incubamos nuevamente.
Agregamos la solución III que contiene acetato de
potasio para provocar el DNA genómico precipitara
por su alto peso molecular al igual que algunas
proteínas, incubamos en hielo por determinado
tiempo y centrifugamos, vertimos el sobrenadante
en otro tubo eppendorf que contenía nuestro
plásmido y el precipitado son las proteínas que
procedemos a desechar.
Después al sobrenadante le agregamos la solución
IV que contiene isopropanol para que el plásmido
precipite, ya que no es soluble en alcohol,
incubamos y centrifugamos nuevamente,
desechamos nuestro sobrenadante cuidando de to
agitar el tubo para que nuestro plásmido no se
despegue y no se vuelva a re suspender con el
sobrenadante que haya quedado.
La cámara de electroforesis junto con el pozo de gel
lo preparó la profesora así que procedimos a
agregar la solución V que contiene el regulador tris-
EDTA para disolver el plásmido y colocar una
pequeña muestra a un carril del pozo y esperamos
a que se llevara a cabo la electroforesis por 30 min.
Después revelamos con bromuro de etidio para
que se intercalen en nuestra muestra el DNA, para
esto se necesita la luz ultravioleta.

El plásmido puede presentarse de tres formas,

estas pueden ser súper enrollada que se desplazará
más rápido en la electroforesis por lo que estará al
final, lineal que se encuentra arriba de está dando
un desplazamiento regular y circular relajada no
tendrá un buen desplazamiento por lo que se queda
cerca del pozo, si la placa se ve barrido quiere decir
que se hidrolizó. Analizando nuestro carril de la
placa de las figuras 1y 2, nuestro plásmido logró
desplazarse correctamente esperando que el
plásmido esté de forma súper enrollado.

Conclusiones:
 El plásmido debe poseer una estructura
súper enrollada para que ser funcional ante
la resistencia a la ampicilina.
 Si presenta una estructura súper enrollada
se puede recuperar el plásmido y se puede
insertar otro organismo, si es lineal no posee
esa funcionalidad al estar hidrolizado.
 El DNA plasmídico se puede utilizar para
replicar o mutar células humanas con ayuda
de distintos enzimas.
 El DNA se puede romper o enlazar, y
sabiendo que el plásmido se puede aislar, se
puede introducir el DNA genómico para
modificar la genética de un individuo.

Bibliografías:
 F.B. Amstrong “Bioquímica”, ed:Reverté,
España, Barcelona, pp.173-175. (2008)
 Peña Antonio “Bioquímica” , ed:Limusa ,
México D.F., pp.112-115 (2004)
 Lehninger, “Principios de Bioquímica”,ed
Omega, pp 880-890,4ta edición (2005)