You are on page 1of 3

1.

ALAT DAN BAHAN


1.1.Alat
1. Inkubator.
2. Lemari es 1 buah dan freezer -20°C.
3. Mikropipet.
4. Mikrosentrifuga.
5. Sarung tangan.
6. Tabung Eppendorf 1,5 mL.
7. Tabung Eppendorf.
8. Tip mikropipet.
9. Vortex.

1.2.Bahan
1. Bakteri E. coli
2. Digestion Solution,
3. Elution Buffer,
4. Etanol 96%
5. Lysis Solution,
6. Proteinase K Solution,
7. RNase A Solution,
8. Tabung kolektor 2 mL.
9. Wash Buffer I,
10. Wash Buffer II.

2. DATA PENGAMATAN
No. Perlakuan Hasil
1. Pelet sel bakteri diresuspensi dalam 1800 μL Campuran suspensi
Digestion Solution, lalu ditambahkan 20 μL bakteri yang homogen.
Proteinase K. Campuran dikocok
menggunakan vortex.
2. Suspensi diinkubasi pada suhu 55°C sambil Didapati campuran yang
sesekali divortex kira-kira 30 menit. homogen
3. Sebanyak 20 μL RNase A Solution Didapati campuran yang
ditambahkan ke dalam suspensi, lalu homogen
dikocok menggunakan vortex. Campuran
diinkubasi selama 20 menit
pada suhu ruang
4. Sebanyak 200 μL Purelink Genomic Didapati campuran yang
Lysis/Binding Solution ditambahkan ke dalam homogen
campuran, lalu dikocok menggunakan vortex
selama 5 detik hingga diperoleh campuran
yang homogen.
5. Sebanyak 200 μL etanol 96% ditambahkan ke Didapati campuran yang
dalam campuran, lalu dikocok dengan vortex. homogen
6. Lisat dituangkan ke PureLink Spin Column Didapati lisat di dalam
dalam tabung kolektor. Kolom disentrifugasi PureLink Spin Column
selama 1 menit pada kecepatan 10.000 x g
Supernatan dalam tabung kolektor dibuang.
Kolom dimasukkan kembali ke dalam tabung
kolektor yang sama.
7. Sebanyak 500 μl Wash Buffer I ditambahkan Didapati campuran yang
ke dalam kolom, lalu disentrifugasi selama 1 homogen
menit pada kecepatan 10.000 x g. Supernatan
dalam tabung kolektor dibuang, lalu kolom
purifikasi ditempatkan kembali dalam tabung
kolektor yang sama
8. Sebanyak 500 μl Wash Buffer II ditambahkan Didapati campuran yang
ke dalam kolom, lalu disentrifugasi selama 3 homogen yang terdapat
menit pada kecepatan 14.000 x g. Supernatan di tabung Eppendorf.
pada tabung kolektor dibuang dan kolom
dipindahkan ke dalam tabung Eppendorf 1,5
mL steril.
9. Sebanyak 200 μL Elution Buffer ditambahkan Didapati campuran yang
ke dalam kolom, diinkubasi selama 2 menit homogen
pada suhu ruang, lalu disentrifugasi pada
kecepatan 14.000 x g selama 1 menit.
10. Isolat kromosom disimpan dalam tabung Didapati isolat
Eppendorf 1,5 ml di suhu -20°C. kromosom didalam
tabung Eppendorf