UNIVERSIDAD DE COSTA RICA

FACULTAD DE AGRONOMÍA
ESCUELA DE FITOTECNIA
AF-0109

OBSERVACION DE BACTERIAS FITOPATOGENAS

Las bacterias son microorganismos omnipresentes. La mayoría son saprófitas y juegan

un papel muy importante en la descomposición de la materia orgánica y en el reciclaje de
nutrientes en la biosfera. Otras, viven en el filoplano así como en la rizosfera. Los géneros
Rhizobium y Frankia establecen una asociación simbiótica en raíces de plantas leguminosas,
mientras que unos pocos géneros son patógenos a plantas cultivadas.

Las bacterias poseen paredes celulares bastantes rígidas, lo cual les confiere formas
diferentes. Existen dos tipos de pared, que pueden ser diferenciados por medio de la tinción
de Gram. Estos pueden ser Gram positivos o Gram negativos. Muchos poseen flagelos y son
capaces de nadar, otros carecen de él y por lo tanto son estáticas, pero a pesar de ésto,
pueden mostrar un movimiento sobre su propio eje denominado movimiento “browniano” Se
reproducen por fisión, por lo que se alcanzan grandes poblaciones en poco tiempo.

La mayoría de las bacterias fitopatógenas son Gram-negativas, tienen forma de bastón y

pertenecen a uno de los siguientes géneros que se describen a continuación:

Agrobacterium: se desplazan por medio de 1 a 4 flagelos perítricos (distribuidas por toda

la superficie). Cuando crecen en medios de cultivo artificial, las colonias son de color blanco.
Estas bacterias son habitantes del suelo y de la rizosfera. Las plantas afectadas presentan
tumoraciones en la raíz o base del tallo.

Erwinia: se desplazan por medio de varios o muchos flagelos perítricos. Son las únicas
bacterias fitopatógenas que son anaerobias facultativas. En medio de cultivo, las colonias con
de color crema y unos pocos son de color amarillo. Algunas especies de Erwinia producen
enzimas pectolíticas y causan pudriciones blandas, mientras que otro géneros que no las
producen, provocan necrosis o marchitamiento.

Pseudomonas: se desplazan por medio de uno o muchos flagelos polares (situados en

un extremo de la célula). Muchas especies son habitantes comunes de suelos o de ambientes
marinos y de agua dulce. Las colonias son generalmente blancas y muchos producen
pigmentos fluorescentes que se observan al colocar los cultivos bajo una luz ultravioleta.
Causan una gran variedad de síntomas, incluyendo pudriciones suaves, marchitamiento,
agallas, manchas en hojas, etc.

Xanthomonas: se desplazan mediante un flagelo polar. Las colonias en medio de cultivo

artificial son generalmente amarillas. Este género contiene únicamente patógenos de plantas.
Provocan marchitamientos y manchas en hojas.

Xyllela: son estáticos, o sea, no poseen flagelos. Son estrictamente aerobios. En medio
de cultivo forman colonias muy pequeñas. Viven en el xilema de las plantas.
 Clavibacter (antes Corynebacterium): Gram positiva, de morfología variable ya que las
células generalmente tiene forma de bastón, pero en ocasiones presentan hinchamientos . La
mayoría son estáticos. Las colonias en medio de cultivo artificial son blancas al inicio, pero
luego se tornan amarillentos a anaranjados. Causan marchitamientos, cánceres, tizones y en
ocasiones, pudriciones.

Streptomyces: Gram positiva. Tiene forma de filamento y forman cadenas de “conidios” .

En medio de cultivo, las colonias son pequeñas y producen una gran variedad de pigmentos
que le dan color. La mayoría de las especies viven en el suelo como saprófitos, pero hay unas
pocas que son fitopatógenas, provocando el síntoma conocido como “sarna”.

I. OBJETIVOS

- Observar síntomas causados por bacterias en plantas cultivadas.

- Observar la morfología y movilidad de algunas bacterias fitopatógenas.

II. PROCEDIMIENTO

En el laboratorio se tendrán platos de Petri con cultivos de bacterias. Observe cada

género y haga las anotaciones sobre tamaño, forma, color y olor.

Tinción de gram (morfología)

Habrán suspensiones de las bacterias que usted observó previamente. Para cada una
de ellas, tome una asada de la suspensión y distribúyalo uniformemente sobre la
superficie de un portaobjetos que ha sido previamente lavado para que no haya grasa
sobre la misma. Deje secar a temperatura ambiente por unos minutos. Una vez secos,
efectúe la tinción de la siguiente manera:

a. Cubra la porción de la lámina donde se colocó la bacteria con cristal violeta. Deje
reposar por 30 segundos y enjuague con agua de tubo.
b. Cubra la preparación con lugol y deje reposar por 30 segundos. Enjuague con agua
de tubo
c. Lave la preparación con solución decolorante hasta que se elimine el exceso de
colorante.
d. Cubra con safranina, deje reposar por 30 segundos y enjuague.

Deje secar y observe al microscopio con objetivo de inmersión (recuerde que debe
utilizar una gota de aceite de inmersión para que el lente no se raye).

Movilidad:

Se le proporcionará un portaobjetos limpio, el cual tendrá un círculo en el centro. Con

la ayuda de un gotero, ponga una gota de la suspensión de bacterias del género
 Pseudomonas dentro del círculo. Coloque el cubreobjetos y examine cuidadosamente
utilizando el objetivo de inmersión.

III. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Haga un dibujo de cada uno de los géneros de bacterias observados e indique las
diferencias entre ellos.

Qué tipo de movimiento presenta Pseudomonas sp.?