Código: FR-GME-025

GUÍA PROTOCOLO DE PRÁCTICA Versión: 03

Proceso: Gestión de los Fecha de emisión: Fecha de versión:

Medios Educativos 26-Mar-2010 24-Jul-2015

Sección 1. DATOS DE LA ASIGNATURA

Nombre de la asignatura Nombre del docente
Bioprocesos III PAOLA ANDREA BAUTISTA DUARTE

Nombre de la práctica
2. Caracterización macroscópica y microscópica.
Fecha de práctica Hora No. de grupos

19/08/17 8:00-12:00 8

Objetivo general
Realizar las principales técnicas para la tinción de hongos y bacterias y reconocer las estructuras principales de
estos organismos
Sección 2. LISTADO DE MATERIALES REACTIVOS Y EQUIPO

Cant. Materiales Cant. Equipos Cant. Reactivos Concentración

Kit de colorantes de
8 Pinzas (preferiblemente dientes planos) 1 Incubadora
gram

Pileta para realizar tinciones Cuenta colonias Azul de lactofenol

Frasco lavador con agua destilada Estereoscopio Aceite de inmersión

Alcohol par limpieza

8 Microscopio
de lentes

Papel de arroz

Sección 3. PROCEDIMIENTO (preferiblemente en diagrama de flujo)

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Después del tiempo de incubación aparecerán colonias que son conocidas como unidades formadores de colonia (UFC). Con ayuda de una lupa, haga
una descripción morfológica de una colonia representativa de cada una de las cajas de Petri, usando las características de la figura 1.

Adicionalmente con ayuda de un contador de colonias se realizara el recuento en placa del número de UFC. Para esto, se contaran las placas que tengan
entre 30 y 300 colonias y se aplicara la siguiente formula:

(n º colonias * fd )
UFC / ml 
v
Dónde: fd: factor de dilución
v: es el volumen en mililitros sembrado en placa

Reporte los resultados obtenidos.

Figura 1. Morfología de colonias microbianas.

Luego, elija una sola colonia la cuál tomará para hacer la tinción de gram (bacterias) y lactofenol (hongos), realizando los siguientes pasos

1. Tinción de gram
- Preparación de frotis
- Adicionar cristal violeta por 1 min y enjuague con agua destilada
- Adicionar lugol por 1 min y enjuague con agua destilada
- Adicionar alcohol acetona por 15 s y enjuague con agua destilada
- Adicionar fucsina por 1 min y enjuague con agua destilada
- Observar en 4x, 10x, 40x y 100 x con aceite de inmersión
2. Tinción de azul de lactofenol
- Tomar la muestra del hongo empleando la técnica de impronta con cinta o cubreobjetos
- Colocar la muestra encima de una lámina portaobjetos con una gota de azul de lactofenol
- Observar al microsocpio a 4x, 10x y 40x
- Realizar la descripción de las principales características microscópicas.

Sección 4. DISPOSICIÓN DE RESIDUOS

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Los elementos de protección personal serán depositados en la caneca de guantes, gorros y tapabocas respectivamente. Los agares en la
caneca roja de medios de cultivo para entrega a empresa recolectora de residuos. Las láminas y laminillas serán dispuestas en el
guardián o serán depositados en una solución de hipoclorito al 0,25 % para su desinfección. Los residuos de colorantes son almacenados
en el contenedor de colorantes para su entrega a la empresa que maneja los residuos.

Sección 5. POLÍTICAS DE LA PRÁCTICA

 La hora de entrada será hasta quince minutos después de iniciada la práctica.
 Conocer y aplicar el reglamento del laboratorio RG-GME-004.
 Es obligatorio para cualquier usuario del laboratorio portar y utilizar los elementos de protección personal (bata, guantes, gafas, cofia,
tapabocas y una toalla de manos).
 El estudiante debe consultar con anterioridad las fichas de seguridad de los reactivos que se van a utilizar durante la práctica.
 La práctica del laboratorio inicia una vez llegue el docente.
 El docente debe radicar en la jefatura de laboratorio esta guía con ocho (8) días de anterioridad, ya sea en medio físico o por correo
electrónico.
 La entrega de materiales, equipos y reactivos se realizara hasta quince (15) minutos después de empezada la clase, igualmente la entrega de los
mismos debe realizarse diez (10) minutos antes de finalizar la práctica experimental.
 El laboratorio no realizará entrega de ningún tipo de material a los estudiantes después del tiempo estimado.
 Cualquier daño o pérdida de equipos o materiales será responsabilidad del estudiante que haya causado el daño. Sin embargo se recomienda al
docente la supervisión constante de los estudiantes. En caso de ausencia del docente en el laboratorio informar a la Jefatura del Laboratorio o a
los Laboratoristas para mantener controlada la práctica experimental.
 En el caso de cancelación por parte del docente de la práctica experimental informar a la Jefatura del Laboratorio con suficiente anterioridad para
poder disponer del laboratorio.
DOCENTE LABORATORIO
Fecha de diligenciamiento: Fecha de radicación:
Firma Firma

Pasos para el diligenciamiento de este formato

1. Esta solicitud debe ser diligenciada a mano, en letra imprenta clara, con tita negra, evitando enmendaduras y/o tachones.
2. Debe ser diligenciado por el docente responsable de la práctica especificando en cada sección los datos de la misma.
3. El docente debe dar a conocer a sus estudiantes con antelación en qué consiste la práctica y los elementos que se utilizarán en ella.

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