INTRODUCCIÓN A LA HISTOLOGÍA

Apuntes complementarios

Dra. Guérnica García Gorigoitía M.V.

La histología como disciplina morfológica, investiga las propiedades estructurales de los tejidos
animales y vegetales y su relación de dependencia con la función que desempeñan.

Un organismo superior está constituido por millones de células (1014), distinguiéndose entre ellas
muchos tipos diferentes, sin embargo, todas ellas derivan de la división de una sola célula, el huevo
fecundado.

Los distintos tipos celulares que aparecen en el embrión, se ordenan en tres capas celulares:
ectodermo, mesodermo y endodermo, siguiendo un complicado y preciso patrón de organización, en
el cual las células realizan diversas actividades, por ejemplo crecen, se dividen, elaboran sustancias
que pueden actuar sobre sus vecinas y establecen entre ellas relaciones de variado tipo, que las
llevan a constituir estructuras morfológicas llamadas tejidos. Estos a su vez se organizan durante el
desarrollo para constituir estructuras morfológicas mayores: los órganos.

Las células que constituyen los tejidos miden entre 5 y más de 100 mm de diámetro, siendo por lo
tanto visibles al ojo humano, sólo mediante el empleo de un instrumento fundamental, el microscopio.

El microscopio de luz, inventado en el siglo XVII, permitió que Hooke, un investigador inglés,
describiera en un tejido vegetal, la presencia de pequeñas unidades o celdillas que denominó
“células”. Posteriormente Bichat, anatomista francés, en el siglo XVIII, realizó una clasificación
macroscópica de los tejidos humanos, basándose en las diferentes texturas que ellos presentaban.
Más tarde, empleando un microscopio de luz, se confirmó la presencia de diferentes tejidos en el
organismo.

El nacimiento formal de la histología como ciencia, ocurrió en el siglo XIX, con la formulación de la
Teoría celular de Schwan, en la que planteó que todos los seres vivos se encuentran constituidos
por células.

Las células constituyentes de los tejidos, son incoloras, resultando transparentes a la observación
directa. Esto motivo durante el siglo XIX, el desarrollo de técnicas adecuadas de tinción, que
confirieran un suficiente contraste a sus estructuras, permitiendo la visualización de sus detalles
morfológicos y organelos presentes.

TIPOS DE CORTE

Para el estudio histológico de un órgano o tejido, se requiere obtener trozos o muestras pequeñas de
este, para su tratamiento y montaje en un portaobjetos y posterior visualización en un microscopio.

Los cortes obtenidos en una estructura, pueden ser transversales, longitudinales u oblicuos, con
relación al eje mayor del órgano. Esta dirección de corte dependerá del tejido y estructuras que se
requiera observar. El corte oblicuo puede entregar imágenes histológicas confusas, de ahí la
importancia de verificar el sentido de corte de la muestra.

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La figura A, muestra cortes transversales de dos tipos de células, donde los planos de sección
aparecen numeradas. Los números prima indican como se verían esas células de acuerdo al plano
de corte. También se advierte que el núcleo celular sólo aparecerá si el plano de sección pasa a
través del mismo.

La figura C muestra cortes longitudinales a distintos niveles de una estructura tubular.

Es importante notar como varía el aspecto tridimensional del corte, de acuerdo al nivel de sección.

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 La figura B
ilustra los
planos de
sección
transversal a
distintos
niveles, de
tres objetos
multicelulares
diferentes.

TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

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Los métodos para la obtención de preparaciones histológicas ocupadas en los estudios de
microscopia óptica, se engloban en la Técnica Histológica.

La Técnica Histológica abarca varios procedimientos a los que se somete un tejido para proporcionar
los cortes como se conocen, montados bajo un cubre objeto con imágenes de estructuras
contrastadas, para su estudio bajo microscopia óptica o electrónica.

Los procedimientos de la Técnica Histológica se resumen en las etapas siguientes:

· Obtención de una MUESTRA DEL TEJIDO a estudiar; existen 2 formas:

Necropsia: Examen u obtención de tejido de un organismo muerto.

Biopsia:(del griego bios = vida y oasis = visión) Examen u obtención de tejido de un organismo
vivo.

· FIJACIÓN, este proceso se refiere al tratamiento del tejido con sustancias químicas que
tienen varias finalidades:
1. Conservar los tejidos de forma que muestren el mayor parecido posible a su estado in vivo.

2. Aumentar la dureza del tejido para facilitar la preparación de finas películas de éste.

3. Destruir bacterias y gérmenes que pudieran encontrarse en ellos.

4. Interrumpir los procesos celulares dinámicos que ocurren con la muerte celular.
Esto se logra al inactivar enzimas celulares, que de otra manera iniciarían la autolisis y llevarían a la
degeneración post mortem.

La fijación mantiene las estructuras al generar la formación de enlaces entre las proteínas
constituyentes del tejido.

Los agentes más usados para Microscopia de Luz son el Formaldehído al 5%, Bouin Holland y
Formol al 10%.

· DESHIDRATACIÓN, después de que la muestra ha sido fijada se elimina el fijador y se

deshidrata.

Debido a que gran parte del tejido está constituida por agua, la muestra se somete a una serie
gradual de soluciones alcohólicas deshidratantes, en concentración creciente (de menor a mayor),
por ejemplo, Alcohol Etílico. Se inicia con alcohol al 70 %, continuando luego con soluciones al 80%,
90%, 96% y 100 % para eliminar el agua. Esto permite que el agua sea removida en forma lenta, sin
romper o deformar el tejido.

· ACLARAMIENTO O DIAFANIZACIÓN, luego de deshidratar el tejido, se somete a una

sustancia que es miscible, tanto con el alcohol como con el medio de inclusión a utilizar.

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En la mayoría de los casos se utiliza como medio de inclusión Parafina líquida. La sustancia
comúnmente utilizada para aclarar es el Xilol. El xilol sólo es soluble en alcohol al 100%. Se llama
aclaramiento ya que el tejido se torna transparente, esto se debe a que cambia su índice de
refracción.

NOTA: El alcohol y el xilol disuelven los lípidos de la célula, por lo cual al extraerse también se
extraen las grasas y los lípidos constituyentes de la célula.

· INCLUSIÓN O IMPREGNACIÓN, a fin de que se puedan obtener cortes suficientemente finos

para ser observados al microscopio.

Los tejidos tienen que ser incluidos y envueltos por una sustancia de consistencia firme. Las
sustancias usadas para este fin en microscopía óptica son la gelatina y la parafina.

El objeto de la inclusión es:

· Distinguir entre sí las células y la matriz extracelular, superpuestas en un tejido.

· Tener un objeto lo suficientemente duro para su manejo y corte.

La inclusión se logra al infiltrar la parafina liquida o cualquier medio de inclusión en estado líquido al
tejido, que disuelve el medio de aclaramiento y penetra en el tejido. Por lo general se coloca la
muestra de tejido en un recipiente y se le agrega la parafina fundida a 60-64º C, colocando la muestra
en una estufa.

Debido al calor, el xilol se evapora y los espacios anteriormente ocupados por el, son ahora
ocupados por la parafina. Después se coloca la muetra y un poco de parafina fundida en un molde de
metal de forma cuadrada o rectangular y se deja solidificar a temperatura ambiente, formándose un
bloque sólido de parafina con el trozo de tejido incluido, a este bloque se le denomina Taco.

Los medios de inclusión para Microscopia Electrónica comúnmente utilizados son resinas
polimerizadas o epóxicas como: Epon, Mikropa y Araldit.

· CORTE o SECCIÓN, el taco ahora se puede cortar en láminas lo suficientemente delgadas

como para permitir el paso de la luz a través de él.

La mayor parte de los preparados para microscopia óptica tienen un grosor entre 3 a 10 micrómetros
(habitualmente 5 mm). Para realizar estos cortes se utiliza un aparato llamado MICROTOMO.

Cuando el objetivo es estudiar grasas o lípidos que se extraen en el proceso de aclaramiento o

enzimas que quedan inactivadas por el calentamiento de la inclusión, se utiliza la Técnica de
Congelación de Tejidos.

Se sumerge la muestra de tejido en Nitrógeno líquido para obtener una congelación rápida, luego se
corta con un aparato especial denominado MICROTOMO DE CONGELACIÓN. Existe un aparato
más elaborado y eficiente para los cortes de congelación llamado CRIOSTATO.

La ventaja de esta técnica es que los cortes que se obtienen son muy rápidos. Se puede utilizar en el
diagnostico de material patológico, tomado en intervenciones quirúrgicas y el resultado se obtiene en
el transcurso de una operación.

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Para Microscopía Electrónica se requieren cortes más delgados (denominados ultrafinos) de
aproximadamente 25 a 100 nm. de espesor. Para esto se utiliza un ULTRAMICROTOMO con hoja de
vidrio o diamante. Una vez preparados, se montan sobre rejillas de cobre.

· DESPARAFINADO E HIDRATACIÓN, los cortes todavía no son aptos para su examen con el
microscopio, puesto que los tejidos se hallan infiltrados en parafina.

Los cortes se colocan sobre un portaobjetos a los que se les ha agregado una pequeña cantidad de
Albúmina, la cual actúa como adhesivo.

La parafina se elimina en un solvente orgánico, como Xilol, en el cual la parafina es miscible, para
luego rehidratar la muestra, haciéndola pasar por una serie de graduaciones decrecientes de alcohol
etílico.

· TINCIÓN, los tejidos son transparentes, razón por la cual deben ser tratados con colorantes.

Una vez rehidratado, se procede a teñir el tejido. Los colorantes más utilizados son la
HEMATOXILINA y la EOSINA.

Los colorantes pueden agruparse en 3 clases:

· Colorantes que diferencian los componentes ácidos y básicos de la célula.

· Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz extracelular.

· Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de metales con ellos.

FUNDAMENTOS QUÍMICOS DE LA COLORACIÓN

La EOSINA es un colorante ácido y sus propiedades tintoriales pueden ser explicadas sobre la base
de lo que se sabe de la acción de las anilinas ácidas. La HEMATOXILINA aunque no es un
colorante básico típico, posee propiedades muy semejantes a las anilinas básicas.

Un colorante ácido es una sal cuya base es incolora y su ácido es coloreado (eosina o eosinato de
sodio). La molécula de anilina presente en este tipo de colorante, tiene una o más cargas negativas
positivas en su porción coloreada.

Los colorantes ácidos reaccionan con los GRUPOS CATIÓNICOS de los componentes celulares, por
ejemplo, proteínas de la matriz extracelular como el colágeno y las presentes en el citoplasma celular.

Esto confiere una tinción acidófila a estructuras como las fibras musculares, algunos tejidos
conectivos, etc. La reacción de estos grupos varía según el pH.

Un colorante básico es una sal cuya base es coloreada y el ácido es incoloro (hematoxilina, azul de
metileno o clorhidrato de azul de metileno). En este caso, las moléculas de anilina tienen una o más
cargas positivas en su porción coloreada.

Los colorantes básicos reaccionan con los GRUPOS ANIÓNICOS de los componentes celulares, por
ejemplo los grupos fosfato de los ácidos nucléicos (ADN y ARN). Esto confiere una tinción basófila a
estructuras como el núcleo celular y los ribosomas presentes en el RER.

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Por otra parte, un colorante puede clasificarse en ortocromático o metacromático, según la coloración
que le confiere al tejido teñido.

Tinción ortocromática: los tejidos adquieren un color igual al de la solución colorante empleada.

Tinción metacromática: una sustancia o un componente celular se tiñe con un color diferente al del
colorante empleado.
Para que la muestra pueda mantenerse de modo permanente, se coloca un cubreobjeto, con un
medio adecuado para el MONTAJE (por ejemplo una gota de Bálsamo de Canadá o similar).

· OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO ÓPTICO, una vez seco el preparado, este se encuentra

en condiciones de ser observado al microscopio. Es importante verificar que el cubreobjetos
este ubicado hacia arriba en la platina del equipo.

En el microscopio óptico (M.O.) consta de un sistema mecánico o de soporte, un sistema óptico y un

sistema de iluminación.

El sistema de soporte consiste en una columna eje, que en su extremo superior lleva un soporte para
el sistema óptico y en su extremo inferior posee una base o pie donde va colocada la platina, las
pinzas y el revolver que contiene a las lentes de objetivos.

El sistema óptico posee 2 tipos de lentes:

1) Lente ocular con un aumento de 10x.

2) Lentes objetivos, con aumento de 4x, 10x, 40x y 100x.

Al observar con lente objetivo 4x, la muestra estará aumentada 40 veces (10 x 4)

El sistema de iluminación del M.O. consiste en una fuente de luz, que puede iluminar desde arriba
(luz incidente) o desde bajo la platina (luz transmitida).

El microscopio electrónico (M.E.) utiliza un haz de electrones de ubicación superior. El poder de

resolución, es decir la capacidad de ver separadas dos estructuras contiguas, es mucho mayor que la
resolución del microscopio óptico.

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 GENERALIDADES DE LOS TEJIDOS

Un tejido es un conjunto o asociación de células y sustancia intercelular o matriz extracelular

elaborada por ellas mismas, que durante el proceso de diferenciación embrionaria, presenta un
mismo origen. La forma celular y la función biológica a cumplir, son semejantes.

A. CLASIFICACIÓN DE LOS TEJIDOS:

Dado que la histología como ciencia, estudia los tejidos y órganos de los seres vivos, estos han sido
clasificado según:

1. Característica morfofuncional: relacionando la morfología con la función específica que ellos

cumplen, se distinguen 4 tipos de tejidos básicos: epitelial, con sustancia fundamental,
muscular y nervioso.

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 · Tejido epitelial: es aquel constituido por células ubicadas una al lado de otra (en
yuxtaposición), con escasa sustancia intercelular. Se describen 2 variedades de epitelios:
Epitelios de revestimiento y epitelios glandulares.

· Tejidos con sustancia fundamental: son aquellos constituidos por una escasa cantidad
de células, separadas por abundante matriz extracelular. Se distinguen 4 variedades:
Tejido conectivo o conjuntivo, tejido cartilaginoso, tejido óseo y sangre (células
sanguíneas y plasma).

· Tejido muscular: es aquel caracterizado por estar constituido por células alargadas, que
responden con contracción a los estímulos. Se distinguen 3 variedades: Tejido estriado
esquelético o voluntario, tejido estriado cardíaco o involuntario y tejido liso
involuntario.

· Tejido nervioso: es aquel cuya característica fundamental es la presencia de células

ramificadas, altamente especializadas, las neuronas, que poseen desarrolladas
propiedades de irritabilidad y conductibilidad. Se distinguen 2 variedades: Neuronas y
neuroglía.

Todos estos tejidos son incapaces de sobrevivir en forma independiente unos de otros, requiriendo de
la asociación con otro tejido para su mantención, nutrición, inervación y soporte. Por ejemplo, el tejido
epitelial no posee elementos que lo soporten ni irrigación que lo nutra; requiere estar asociado al
tejido conectivo subyacente. Las células musculares requieren del tejido conectivo para su nutrición y
soporte y del tejido nervioso para su inervación.

El tejido conectivo resulta por lo tanto de importancia fundamental, y su distribución en la economía

del organismo es muy amplia.

2. Origen: toma como criterio la hoja embrionaria de la cual deriva el tejido, en el embrión
trilaminar:

· Ectodérmicos: tejido nervioso, piel y sus anexos, esmalte dentario.

· Mesodérmicos: epitelios del tracto genital y urinario, endotelios, tejidos con sustancia
fundamental, músculos, aparato cardio-vascular.

· Endodérmicos: epitelio de revestimiento y glandular del aparato digestivo y respiratorio.

3. Grado de diferenciación (clasificación según Bizzoziro):

· Tejidos lábiles: son tejidos que presentan un bajo grado de diferenciación tisular y una alta
capacidad reparativa. Ejemplos: epitelios de revestimiento, tejidos conectivos no
especializados.

· Tejidos estables: son tejidos más especializados y diferenciados. En estado de

normalidad, sus células persisten durante toda la vida del individuo. Su capacidad
regenerativa es menor que en el caso anterior, pero pueden regenerarse lentamente.
Ejemplos: tejido óseo, cartilaginoso, epitelio glandular.

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 · Tejidos perennes: estos tejidos presentan un grado de diferenciación y especialización
mayor que los anteriores, por lo que permanecen sin recambio durante toda la vida del
individuo. No posee capacidad reparativa, luego frente a la destrucción tisular es incapaz
de regenerarse. Ejemplos: tejido nervioso y muscular liso y cardíaco.

4. Grado de regeneración:

El poder de regeneración (autoplasia) de un tejido, es inversamente proporcional a su grado de

diferenciación celular.

· Tejidos autoplásticos: son aquellos que se reparan rápidamente, a partir de las propias
células del tejido involucrado. Ejemplos: tejidos lábiles como epitelios de revestimiento y
tejido conectivo no especializado.

· Tejidos anaplásticos: son aquellos tejidos que reparan a través de células menos
diferenciadas que las propias, las que posteriormente se diferencian para adquirir la
morfología y función del tejido. Es el caso del tejido óseo y cartilaginoso. Por ejemplo, un
daño en cartílago origina una proliferación del tejido conectivo fibroso periférico, el pericondrio;
posteriormente estas células proliferadas, se diferencian a condrocitos, es decir se
“cartilaginizan” posteriormente.

· Tejidos heteroplásticos: son aquellos tejidos perennes, que poseen un alto grado de
diferenciación y cuya reparación se realiza a partir de un tejido diferente y de menor grado de
diferenciación. Ejemplos: tejido nervioso y muscular liso y cardíaco; si se daña una zona
del tejido nervioso, esta será reemplazada por un tejido afuncional de relleno, a partir de
células gliales.

B.- PROPIEDADES DE LOS TEJIDOS:

Los tejidos vivos poseen ciertas características, que les son propias:

1. Capacidad de regeneración, la cual varía según su grado de diferenciación tisular.

A mayor diferenciación, menor capacidad de reparación.

2. Capacidad de cultivo, ya sea in vitro (medios artificiales) o mediante injertos (medios

biológicos). A mayor diferenciación, menor capacidad de cultivabilidad.

3. Especificidad, que corresponde a la mantención de la diferenciación o especialización dentro

del organismo normal. Esta especificidad puede perderse frente a condiciones de
anormalidad o experimentales.

C.- CRECIMIENTO TISULAR:

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Un tejido puede crecer mediante 2 mecanismos:

a) Hiperplasia: es decir, crecimiento por aumento en el número de células y

sus elementos intracelulares constituyentes.
b) Hipertrofia: es decir crecimiento por aumento en el tamaño de las células
y sus elementos intracelulares constituyentes.

También los tejidos pueden sufrir variaciones anormales a través de la vida del individuo:

· Hipoplasia: corresponde al menor tamaño de un tejido u órgano, como consecuencia de un

menor número de células presentes en él.

· Hipotrofia: corresponde al menor tamaño de tejidos u órganos, debido a la presencia de

células constituyentes más pequeñas que lo normal.

· Agenesia: ausencia de un órgano o tejido, por ausencia del esbozo embrionario originario.

· Metaplasia: transformación patológica de un tejido en otro diferente.

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