RELACIÓN

 DE  LA  ABSORBANCIA  

CON  LA  CONCENTRACIÓN   Y  LA  
LONGITUD  DE  ONDA
Establecimiento  de  un  método
espectrofotométrico
Color  de  una  solución
 Color  de  una  solución

diagramas de Pourbaix
Referencias
Selección  de  la  longitud  de  onda

blanco
A  como  una  función  de  la  longitud  de  onda
Efecto  de  la  concentración  del  analito
Reacción

Analito Cromógeno Cromóforo

Efecto  de  la  concentración  del  cromóforo

• Los cromóforos son partes de una molécula que tienen bandas electrónicas
con diferencias energéticas comparables a las energías de la luz visible y UV
que es absorbida por ellas. Los cromóforos, por ejemplo, dienos, nitrilos,
carbonilo, o grupos carboxilo contienen a menudo enlaces pi.

• Otros tipos de cromóforos son complejos de metales de transición y sus

iones.

• Las moléculas sin cromóforos, tales como agua, alcanos o alcoholes, deben
ser los disolventes ideales para la espectroscopia UV-­‐visible, ya que apenas
muestran absorbancia.
 Cromóforos-­‐Estructuras

π–π* transitions
Cromóforos
Auxocromos
• Son grupos saturados que cuando se unen a un grupo cromóforo,
desplazan su banda de absorción hacia longitudes de onda mayores
y aumentan la intensidad del pico.

• Entre los grupos auxocromos se encuentras los grupos hidroxilo,

amino, sulfhidrilo (y sus derivados) y algunos halógenos.

• Todos tienen electrones no enlazantes y su efecto se atribuye a

transiciones n-­‐> pi*.
Auxocromos
 Efectos,  DESPLAZAMIENTOS

HIPSOCRÓMICO
 Efectos,  DESPLAZAMIENTOS

BATOCRÓMICO
 Efectos,  DESPLAZAMIENTOS

HIPERCRÓMICO

HIPOCRÓMICO
Selección  del  disolvente
• Región  UV
Efecto  de  la  polaridad  del  disolvente  y  la  
concentración

benzophenone
volatilidad
benzophenone
 Efecto  del  tiempo

Tiempo  de  
reacción

Tiempo  de  
estabilidad
 Efecto  del  tiempo

Tiempo  de  
reacción

Tiempo  de  
estabilidad
 Efecto  del  tiempo

Tiempo  de  
estabilidad

Tiempo  de  
reacción
Efecto  de  la  temperatura

•KCl
Efecto  de  la  temperatura
Efecto   d el  
Isosbestic points
p H  

H-Indicator ßà(H + + Indicator-)

Efecto  del  pH  
Color  de  una  solución

diagramas de Pourbaix
 Efecto  de  interferencias

Analito Cromógeno Cromóforo

Efecto  de  interferencias
Cumplimiento  de  la  ley  de  Beer
Errores  en  la  medición
punto   inflexión   de  la  curva.
Error  mínimo   =  intervalo  lineal
 LDD    =  límite  de  detección
Concentración mínima  de  analito  que  puede  
detectarse  con  cierto  NC  (conc.  del  analito que  genera  
una  señal  significativamente  diferente  de  la  señal  del  blanco)  

LOQ    =  límite   de  cuantificación

Conc.  mínima  de  analito  que  puede  cuantificarse  
con  precisión  (dado  un  NC)

Quino, et.al. (2007), James y Jane Miller (2002)

FUNDAMENTO  DE  LA  CALIBRACIÓN  INSTRUMENTAL
Verificación de  un  espectrofotómetro
• Para obtener resultados confiables empleando métodos
espectrofotométricos, se requiere verificar el espectrofotómetro.
 Verificación de  la  escala  de  la  longitud  de  onda
• Evita que se produzcan desviaciones en la exactitud fotométrica.

• Espectros de absorción
y transmisión con
picos y valles bien
definidos.
 Presencia  de  luz  dispersa
• Aquella luz que llega al detector, cuyas longitudes de onda no se
encuentran comprendidas en la banda de radiación seleccionada por el
monocromador.
 Exactitud  fotométrica
• Exactitud en la medida de la absorbancia o la transmitancia, en la escala de
un espectrofotómetro.
 Ancho  de  banda
• Se define como la diferencia entre la longitud de onda máxima y mínima de
las longitudes de onda que salen del monocromador, que alcanzan al
menos el 50% de la transmitancia máxima de la banda de radiación.
 Resolución espectral
• La resolución espectral es una medida de la capacidad de un
instrumento para diferenciar entre dos longitudes de onda adyacentes.
Dos λ se consideran resueltas, normalmente, si el mínimo entre los dos
picos de la señal de salida del detector es menor que el 80 % del
máximo.
 Proporcionalidad  fotométrica
• Relación entre la intensidad de radiación registrada en el detector y la
lectura, es deseable una relación lineal.
Intervalo  dinámico  lineal
Intervalo  dinámico lineal  de  concentración
Derivadas  del  espectro  de  absorción