AKTIVITAS ENZIM AMILASE

PADA BIJI DAN KECAMBAH KACANG HIJAU

I.R.Kodarudin1, B.R. Alfi2,

Y.N.E. Sari3, M.Syahidah4

Pendidikan Biologi, Universitas Pasundan, Tamansari-Bandung

Corresponding author : bebiramalia28@gmail.com

ABSTRACT

The study about the activity of the enzyme amylase from amylolytic bacterial isolates from green beans
and its traditional provision environment had been done in Jayapura. The purposes of this study were to determine
the activity of amylase enzyme and to identify the bacteria isolated from green beans and its processing
environment in Jayapura district. The method used was an experimental laboratorium in which isolation of
amylolytic bacteria was performed by using nutrient agar medium with 1% soluble starch on spreed pour plate
method. The enzyme activity was detected with 0.2% iodine in 2% potassium iodide which were able to form a
clear zone. The protein content of the crude enzyme extract was determined by the Bradford method using bovine
serum albumin (BSA). Amylase enzyme activity was determined by the formula: DUN/ml = [(R0-R1)/R0] [dilution
factor] DUN/ml (dextrinizing units per ml). The results showed that there were 15 isolates amylolytic bacteria.
Four (4) bacterial isolates have amylolytic power of more than 30 mm. The amilase activity of amylolytic bacterial
of all isolates were quite high: which were 35 577, 18 903, 32 106 and 46 600 U/mg for SU4, SU13, SU23 and
SU40 respectively. The identification of isolates indicated that the three isolates are members of the Bacillus
cereus ATCC 14 579 types with a similarity value of 71.70% to 81.10%, and one isolate is Bacillus subtilis ATCC
6501 members with a similarity value of 94.30%.

Kata Kunci: Centrifuge, endosperm, dekstin, polisakarida

PENDAHULUAN apoenzim, kofaktor, gugus prostetik, koenzim, dan

substrat. Apoenzim adalah suatu enzim yang
Enzim adalah satu atau beberapa
seluruhnya terdiri dari protein, sedangkan
gugus polipeptida (protein) yang berfungsi
holoenzim adalah enzim yang mengandung gugus
sebagai katalis (senyawa yang mempercepat proses
protein dan gugus non protein. Gugus yang bukan
reaksi tanpa habis bereaksi) dalam suatu reaksi
protein tadi dikenal dengan istilah kofaktor. Pada
kimia. Enzim bekerja dengan cara menempel pada
kofaktor ada yang terikat kuat pada protein dan
permukaan molekul zat-zat yang bereaksi dan
sukar terurai dalam larutan yang disebut gugus
dengan demikian mempercepat proses reaksi.
prostetik dan adapula yang tidak terikat kuat pada
Percepatan terjadi karena enzim
protein sehingga mudah terurai yang disebut
menurunkan energi pengaktifan yang dengan
koenzim. Baik gugus prostetik maupun koenzim,
sendirinya akan mempermudah terjadinya reaksi.
keduanya merupakan bagian yang memungkinkan
Sebagian besar enzim bekerja secara khas, yang
enzim bekerja pada substrat. Substrat merupakan
artinya setiap jenis enzim hanya dapat bekerja pada
zat-zat yang diubah atau direaksikan oleh enzim
satu macam senyawa atau reaksi kimia. Hal ini
(Poedjadi, 2006).
disebabkan perbedaan struktur kimia tiap enzim
yang bersifat tetap. Sebagai contoh, enzim α-
Faktor-faktor yang dapat mempengaruhi fungsi
amilase hanya dapat digunakan pada proses
enzim diantaranya adalah (Dwidjoseputro, 1992) :
perombakan patimenjadi glukosa (Anonim, 2008).
Dalam mempelajari mengenai enzim, 1. Suhu
dikenal beberapa istilah diantaranya holoenzim,
 Oleh karena reaksi kimia itu dapat dipengaruhi
suhu maka reaksi menggunakan katalis enzim
dapat dipengaruhi oleh suhu. Di samping itu,
karena enzim adalah suatu protein maka
kenaikan suhu dapat menyebabkan denaturasi
dan bagian aktig enzim akan terganggu
sehingga konsentrasi dan kecepatan enzim
berkurang.
2. pH
Umumnya enzim efektifitas maksimum pada
pH optimum, yang lazimnya berkisar antara pH
4,5-8.0. Pada pH yang terlalu tinggi atau terlalu
rendah umumnya enzim menjadi non aktif
secara irreversibel karena menjadi denaturasi
protein.
3. konsentrasi enzim
Seperti pada katalis lain, kecepatan suatu reaksi
yang menggunakan enzim tergantung pada
konsentrasi enzim tersebut. Pada suatu
konsentrasi substrat tertentu, kecepatan
reaksibertambah dengan bertambahnya
konsentrasi enzim.
4. konsentrasi substrat
Hasil eksperimen menunjukkan bahwa dengan
konsentrasi substrat akan menaikkan kecepat
reaksi. Akan tetapi, pada batas tertentu tidak
terjadi kecepatan reaksi, walaupn konsenrasi
substrat diperbesar.
5. zat-zat penghambat
Hambatan atau inhibisi suatu reaksi akan
berpengaruh terhadap penggabungan substrat
pada bagian aktif yang mengalami hambatan.
Enzim digolongkan menurut reaksi yang
diikutinya, sedangkan masing-masing enzim diberi
nama menurut nama substratnya, misalnya urease,
arginase dan lain-lain. Di samping itu ada pula
beberapa enzim yang dikenal dengan nama lama
misalnya pepsin, tripsin dan lain-lain. Oleh
Commision on Enzymes of the International Union
of Biochemistry, enzim dibagi dalam enam
golongan besar. Penggolongan ini didasarkan atas
reaksi kimia di mana enzim memegang peranan.
Enam golongan tersebut ialah (Poedjiadi, 2006):
1. Oksidoreduktase.
2. Transferase
3. Hidrolase
4. Liase
5. Isomerase
6. Ligase
Enzim meningkatkan laju sehingga terbentuk
kesetimbangan kimia antara produk dan pereaksi.
Pada keadaaan kesetimbangan, istilah pereaksi dan
produk tidaklah pasti dan bergantung pada
pandangan kita. Dalam keadaan fisiologi yang
normal, suatu enzim tidak mempengaruhi jumlah
produk dan pereaksi yang sebenarnya dicapai tanpa
kehadiran enzim. Jadi, jika keadaan kesetimbangan
tidak menguntungkan bagi pembentukan senyawa,
enzim tidak dapat mengubahnya (Salisbury dan
Ross, 1995).
Secara singkat.
Sifat-sifat enzim tersebut antara lain
(Dwidjoseputro, 1994) :
1. Berfungsi sebagi biokatalisator
2. Merupakan suatu protein
3. Bersifat khusus atau spesifik
4. Merupakan suatu koloid
5. Jumlah yang dibutuhkan tidak terlalu banyak
6. Tidak tahan panas
Tubuh manusia menghasilkan berbagai
macam enzim yang tersebar di berbagai bagian dan
memiliki fungsi tertentu. Salah satu enzim yang
penting dalam sistem pencernaan manusia adalah
enzim amilase. Enzim ini terdapat dalam saliva atau
air liur manusia. Saliva yang disekresikan oleh
kelenjar liur selain mengandung enzim amilase
juga mengandung 99,5% air, glikoprotein, dan
musin yang bekerja sebagai pelumas pada waktu
mengunyah dan menelan makanan. Amilase yang
terdapat dalam saliva adalah α-amilase liur yang
mampu membuat polisakarida (pati) dan glikogen
dihidrolisis menjadi maltosa dan oligosakarida lain
dengan menyerang ikatan glikosodat α(1 4).
Amilase liur akan segera terinaktivasi pada pH 4,0
atau kurang sehingga kerja pencernaan makanan
dalam mulut akan terhenti apabila lingkungan
lambung yang asam menembus partikel makanan
(Anonim, 2007).
Amilase (alfa, beta dan glukoamilase) merupakan
enzim yang penting dalam bidang pangan dan
bioteknologi. Amilase dapat diperoleh dari
berbagai sumber seperti tanaman, binatang dan
mikroorganisme. saat ini sejumlah enzim amilae
telah diproduksi secara komersial. Penggunaan
mikrobia dianggap lebih prosepektif karena mudah
tumbuh, cepat menghasilkan dan kondisi
lingkungan dapat dikendalikan (Anonim, 2008).
Produksi enzim amilase dapat menggunakan
berbagai sumber karbon. Contoh-contoh sumber
karbon yang murah adalah sekam, molase, tepung
jagung, jagung, limbah tapioka dan sebagainya.
Jika digunakan limbah sebagai substrat, maka
limbah tadi dapat diperkaya nutrisinya untuk
mengoptimalkan produksi enzim. Sumber karbon
yang dapat digunakan sebagai suplemen antara
laian: pati, sukrosa, laktosa, maltosa, dekstyrosa,
fruktosa, dan glukosa. Sumber nitrogen sebagai
suplemen antara lain: pepton, tripton, ekstrak
daging, ekstrak khamir, amonium sulfat, tepung
kedelai, urea dan natrium nitrat (Anonim, 2008).
METODE PENELITIAN
Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada hari Selasa, 27
Februari 2018 Pukul 09.30 – 12.00 WIB. Tempat
penelitian di Laboratorium Biologi FKIP
Universitas Pasundan Bandung
Alat dan Bahan
Alat: Mortar, Alu, gelas ukur 10 ml, tabung reaksi,
pipet tetes, batang pengaduk, plat tetes, tabung
centrifuge plastik, mesin centrifuge, dan kertas
label.
Bahan: 20 butir biji kacang hijau yang tidak
berkecambah, 20 butir biji kacang hijau yang
berkecambah, larutan amilum, larutan iodine, dan
aquades.
Prosedur Penelitian
Penelitian ini di lakukan dengan cara 2 perlakukan.
Perlakuan pertama menggunakan biji kacang hijau
yang sudah berkecambah. Dan perlakuan ke dua
menggunakan biji kacang yang tidak berkecambah.
Pertama siapkan alat dan bahannya. Kemudian 20
biji kacang yang sudah berkecambah ke dalam
mortal, lalu di tumbuk atau digerus hingga halus
menggunakan alu. Setelah halus kemudian
tambahkan aquades sebanyak 20 ml dan di aduk.
Setelah dicampurkan dengan aquades, kemudian
dimasukan kedalam tabung centrifuge dan diberi
label. Kemudian tabung centrifuge yang berisi
sampel dimasukan kedalam mesin centrifuge untuk
di putar pada kecepatan tinggi. Sambil nunggu
putaran selesai, ambil larutan amilum sebanyak 2
ml dan masukan kedalam tabung reaksi. Setelah
putaran centrifuge berhenti angkat kembali tabung
centrifugenya. Kemudian ambil air exstrak yang
ada pada tabung centrifuge sebanyak 5 ml, lalu
masukan kedalam tabung reaksi yang berisi
amilum, kemudian aduk kedua zat tersebut sampai
tercampur, setelah diaduk diamkan dan tunggu
sekitar 2-3 menit. Sambil nunggu siapkan plat tetes
dan beri keterangan nomor pada setiap lubang plat
tetesnya. Kemudian exstrak yang telah tercampur
dengan amilum itu di teteskan kesetiap lubang plat
tetes sebanyak 2 tetes menggunakan pipet. Setelah
lubang plat tetes terisi, lalu kesemua lubang juga di
tetesi iodine sebanyak 2 tetes dengan jarak 30 detik
antar lubang plat tetes 1 dengan yang lainnya.
Terakhir amati perubahan warna yang terjadi.
BAHAN DISKUSI
1. Pada kelompok supernatant biji manakah
yng memberi reaksi warna yang lebih
cepat?
2. Apakah cepat lambat reaksi warna
menggambarkan cepat lambatnya
aktivitas enzim amylase dalam
supernatant biji tersebut?
3. Bagaimana peran enzim amylase dalam
usaha mobilisasi nutrisi dan endosperm ?
HASIL DISKUSI
1. Pada biji kacang hijau yang belum
berkecambah membentuk reaksi warna
lebih cepat karena untuk praktikum ini
menggunakan iodin, sedangkan fungsi
dari iodin untuk menguji amilum, dan
disini amilum yang bertipe polisakarida ,
pada biji kacang hijau yang belum
berkecambah mengandung polisakarida.
2. Ya, karena pada biji kacang hijau yang
belum berkecambah ketika diberi iodin
maka akan berubah warna, karena terdapat
polisakarida pada biji kacang hijau yang
belum berkecambah ada enzim amylase
namun belum aktif karena cadangan
makanan hanya terdapat dikotiledon.
Sedangkan pada biji kacang hijau yang
sudah berkecambah ketika diberi iodin
tidak berubah atau lambat karena ezim
amylase aktif bekerja disebabkan
cadangan makanan sudah disebarkan ke
daun dan batang, disini enzim amylase
berfungsi untuk memecah pati menjadi
gula, maka disini polisakarida sudah
berubah menjadi monosakarida.
3. Biji yang memiliki endosperm organ yang
berasal dari perubhan ganda yang
menghasilkan embrio serta adanya
endosperm yang berfungsi sebagai nutrisi
 yang diperlukan oleh embrio selama masa Anonim.
pertumbuhan dan perkembangan. www.academia.edu/23868578/LAPORAN_FIST
Perkembangan endosperm sangat UM_ENZIM diakses pada tanggal 1 maret pukul
menentukan proses perkecambahan 17.00 wib
karena merupakan perkecambahan
dengan memecah amilum dengan Campbell, N.A, Reece, J.B., Urry, L.A., Cain,
endosperm yang akan menghasilkan M.L., Wesserman, S.A., Minorsky, P.V., dan
energi yang akan digunakan untuk Jackson, R.B. 2010. Biologi Edisi kedelapan Jilid
cadangan makanan yang disebarkan ke 1. Erlangga, Jakarta.
batang, daun dan akar.
Poedjiodi, A., dan Supriyanti, F.M.T. 2007. Dasar-
dasar Biokimia. UI-Press. Jakarta.
KESIMPULAN
Salisbury, dan Ross. 1992. Fisiologi Tumbuhan.
Dari praktikum yang telah kelompok kami ITB Press. Bandung.
lakukan dapat disimpulkan bahwa dari fungsi
Scriptsummer.
enzim amylase adalah untuk memecah pati yang
Scriptsummer.blogspot.co.id/2014/02/enzim-
menghasilkan gula sederhana seperti sukrose,
amilase-pada-kecambah-kacang-24.html?m=1
maltose, fruktose dan dekstin, kandungan enzim
diakses pada tanggal 28 februari pukul 20.15 wib
amylase pada biji kacang hijau yang tidak
berkecambah sudah berkecambah enzim amylase
aktif bekerja, namun pada biji kacang hijau yang
tidak berkecambah kandungan enzim amylase ada
namun tak aktif bekerja karena cadangan makanan
hanya terletak di kotilendon . dan peran enzim
amylase pada proses perkecambahan adalah
cadangan makanan dalam biji kacang hijau diubah
untuk membentuk struktur akar, batang dan daun
(tunas). Salah satu komponen cadangan makanan
adalah amilum yang harus mengalami hidrolisis
terlebih dahulu menjadi glukosa atau dekstin
sebelum diubah menjadi karbohidrat sendiri. Untuk
menghidrolisis amilum dibutuhkan enzim amylase
dalam jumlah relative banyak, kecambah
mempunyai kandungan enzim amylase yang lebih
tinggi dibandingkan dengan kacang hijau kondisi
utuh atau tumbuhan dewasa.

UCAPAN TERIMA KASIH

Penulis mengucapkan terima kasih kepada

Allah SWT, kedua orang tua, serta dosen fisiologi
tumbuhan yaitu ibu Ida Yayu Nurul Hizqiyah,
S.Pd., M.Si. Rifki Survani, S.Pd, M.Pd yang telah
memberi dukungan financial terhadap penelitian
ini.

DAFTAR PUSTAKA

Anonim.
www.generasibiologi.com/2012/08/peranan-
endosperm-terhadap-pertumbuhan.html?m=1
diakses pada tanggal 1 maret pukul 14.30 wib