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Instruções de Uso MS 10009010071
Finalidade . Sistema enzimático para determinação do ácido úrico O reagente foi desenvolvido com um conjunto especial de surfactantes
por reação de ponto final em amostras de sangue, urina e líquidos que promovem a clarificação de turbidez ocasionada por lípides, o que
(amniótico e sinovial). reduz significativamente a interferência causada por hiperlipêmia na
determinação da concentração de ácido úrico.
Uso profissional.
O método proposto é facilmente aplicável à maioria dos analisadores
[Somente para diagnóstico in vitro] automáticos e semiautomáticos capazes de medir uma reação de ponto
final entre 490 e 540 nm.
Princípio . O ácido úrico é determinado de acordo com as seguintes
Metodologia . Enzimático - Trinder
(
reações:
Uricase Reagentes
Ácido úrico + O2 + H2O Alantoína + CO2 + H2O2
1. - Reagente 1 - Armazenar entre 2-8ºC
)
Peroxidase Contém tampão 155 mM; 4-aminoantipirina ³0,1 mM; peroxidase
2H2O2 + DHBS + 4-aminoantipirina Antipirilquinonimina + 4 H2O ³1000 U/L; azida sódica 0,02% e surfactantes.
O ácido úrico é oxidado pela uricase a alantoina e peróxido de hidrogênio. 2. - Reagente 2 - Armazenar entre 2-8ºC
<
O peróxido de hidrogênio, na presença da peroxidase, reage com o DHBS Contém tampão 155 mM; DHBS ³2,5 mM; uricase ³300 U/L; azida
e a 4-aminoantipirina, formando o cromogênio antipirilquinonimina. A sódica 0,02% e surfactantes.
intensidade da cor vermelha formada é diretamente proporcional à
concentração do ácido úrico na amostra.
3. - Padrão - Armazenar entre 2-8ºC
Contém ácido úrico 6,0 mg/dL. Armazenar bem vedado para evitar
Características do sistema . A dosagem de ácido úrico
evaporação.
utilizando a reação de Trinder caracteriza-se por ser um método direto, de
fácil aplicação em sistemas automáticos, que tem a especificidade da
Os reagentes não abertos, quando armazenados nas condições
uricase. Muitos produtos utilizam o fenol como reagente de acoplamento.
indicadas, são estáveis até a data de expiração impressa no rótulo.
Entretanto, a baixa sensibilidade do fenol e a incompatibilidade de pH
Durante o manuseio, os reagentes estão sujeitos à contaminação de
ótimo entre a uricase de origem animal e a peroxidase criam sérios
natureza química e microbiana que podem provocar redução da
obstáculos à confiabilidade do método.
estabilidade.
A Labtest, com o sistema Ácido Úrico Liquiform, supera estas
dificuldades substituindo o fenol pelo ácido 3,5-dicloro-2-hidroxibenzeno Preparo do reagente de trabalho . O conjunto de um frasco de
sulfonato (DHBS), que é 4 vezes mais sensível, permitindo uma relação Reagente 1 e um frasco de Reagente 2 permite preparar o Reagente de
adequada entre amostras e reagentes, possibilitando obter uma Trabalho. Transferir o conteúdo de um frasco de Reagente 2 para um
sensibilidade ótima em relação a baixa concentração do analito. frasco de Reagente 1 e homogeneizar suavemente. Identificar o frasco do
Reagente de Trabalho e anotar a data de expiração.
O reagente é disponibilizado sob a forma líquida e é distribuído em dois
reagentes permitindo a sua utilização em sistemas automáticos, O reagente de trabalho é estável por 14 dias desde que mantido entre
facilitando a eliminação da ação de interferentes. 2 e 8°C, em recipiente fechado e quando não houver contaminação
química ou microbiana. O desenvolvimento de coloração levemente
A metodologia monorreagente pode ser aplicada utilizando um Reagente rósea no Reagente de Trabalho é normal e não afeta o seu desempenho.
de Trabalho que é estável até a data de expiração dos reagentes que o
compõe, quando mantido entre 2 e 8ºC. O Reagente de Trabalho obtém Opcionalmente, pode-se preparar menor volume do Reagente de
desempenho adequado mesmo em situações de baixas demandas do Trabalho utilizando a proporção 4 volumes do Reagente 1 e 1 volume do
teste. O sistema permite ainda preparar o volume de Reagente de Reagente 2. Para preparar o volume de reagente necessário para realizar
Trabalho necessário para uma medição da concentração do ácido úrico. um teste, misturar 0,8 mL do Reagente 1 e 0,2 mL do Reagente 2.
Para preservar seu desempenho, o reagente deve permanecer fora da
A linearidade do método é de 20 mg/dL, o que diminui a necessidade de
geladeira somente o tempo necessário para se obter o volume a ser
efetuar diluições em um número significativo de amostras.
utilizado. Evitar exposição à luz solar direta.
Influências pré-analíticas . O ácido úrico está aumentado nas 24 Amostras: Soro, plasma (EDTA, Heparina), urina e líquidos (amniótico e
horas que sucedem a ingestão de álcool. sinovial).
As concentrações séricas de ácido úrico apresentam grandes variações Urina . Homogeneizar a urina, separar 10 mL, acertar o pH entre 7,0 e 9,0
no dia a dia e sazonais num mesmo indivíduo. O ácido úrico se eleva com com NaOH 5% e aquecer 10 minutos a 56 ºC para dissolver os cristais de
o stress, estados de jejum prolongado e aumento de peso corporal. urato e ácido úrico. Diluir a urina 1:10 (0,1 mL de urina + 0,9 mL de água
destilada). Multiplicar o resultado obtido por 10.
O ácido ascórbico (vitamina C), por ser uma substância redutora,
consome o peróxido de hidrogênio, levando a obtenção de resultados Procedimentos para realização do ensaio
falsamente diminuídos. O paciente deve ser orientado a não ingerir
alimentos ou utilizar medicamentos contendo ácido ascórbico até 48 Tomar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir:
horas antes da realização do exame12.
Branco Teste Padrão
Amostra Amostra 0,02 mL
Padrão (N° 3) 0,02 mL
Usar soro, plasma (EDTA, Heparina), urina e líquidos (amniótico e Reagente de Trabalho 1,0 mL
1,0 mL 1,0 mL
sinovial). O analito é estável 3 dias entre 2 a 8ºC e 6 meses a 10ºC
negativos.
Misturar e incubar em banho-maria a 37ºC durante 5 minutos. O nível
Deve ser criado um Procedimento Operacional Padrão (POP) para coleta, água no banho deve ser superior ao nível do reagente nos tubos de
preparação e armazenamento da amostra. Enfatizamos que os erros ensaio. Determinar as absorbâncias do teste e padrão em 505 nm ou filtro
devidos à amostra podem ser muitos maiores que erros ocorridos verde (490-540 nm) acertando o zero com o branco. A cor é estável por
durante o procedimento analítico. 30 min.
Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue O procedimento sugerido para a medição é adequado para fotômetros
não transmitem infecções, todas elas devem ser consideradas como cujo volume mínimo de solução para leitura é igual ou menor que 1,0 mL.
potencialmente infectantes. Portanto, ao manuseá-las, devem-se seguir Deve ser feita uma verificação da necessidade de ajuste do volume para o
as normas estabelecidas para biossegurança. fotômetro utilizado.
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Intervalo de referência . Os intervalos devem ser usados apenas
como orientação. Recomenda-se que cada laboratório estabeleça seus
Fator de Calibração = = 36,8
próprios intervalos de referência na população atendida.
0,163
Soro (mg/dL)
Ácido Úrico (mg/dL) = 0,214 x 36,8 = 7,9
Homem 1,5 a 6,0
Crianças11
mg/dL x volume urinário (mL) Mulher 0,5 a 5,0
Urina (mg/24 horas) = Homem 2,5 a 7,0
Adultos
100 Mulher 1,5 a 6,0
Método Método
Significado clínico . Numerosas doenças, condições fisiológicas,
Comparativo Labtest alterações bioquímicas, fatores sociais e ambientais estão associados a
elevações na concentração do urato plasmático. Entre as etiologias da
Número de amostras 40 40
hiperuricemia estão: insuficiência renal, cetoacidose, excesso de lactato,
Intervalo de concentrações
1,92 - 15,79 1,99 - 16,27 uso de diuréticos e em todas as patologias em que a destruição de
(mg/dL)
nucleoproteínas está aumentada. O aumento de urato está positivamente
Método Labtest (mg/dL) = 1,0322 x
Equação da regressão relacionado a hiperlipidemia, obesidade, arterosclerose, diabetes
Comparativo - 0,0844
mellitus e hipertensão, embora os mecanismos destas alterações ainda
Coeficiente de correlação 0,9995
não sejam bem compreendidas.
O erro sistemático total verificado nos níveis de decisão 2,0; 8,0 e A gota, manifestação clínica da hiperuricemia, é classificada como
10,7 mg/dL foram iguais a 0,02; 0,17 e 0,26 ou 1,00; 2,17 e 2,43%, primária, secundária ou idiopática. A gota secundária é uma complicação
respectivamente. pouco comum quando relacionada à frequência de hiperuricemia.
O erro sistemático total obtido é menor que o erro sistemático total da É importante mencionar que a colchicina, utilizadas no caso da gota
especificação desejável baseada nos componentes da Variação aguda, não modifica valores de ácido úrico.
Biológica que é £ ± 4,9%.
São pouco frequentes as causas da hipouricemia ocorrendo na síndrome
de Fanconi, doença de Wilson, acromegalia, anemia perniciosa e
Estudos de precisão . Os estudos de precisão foram realizados
doenças malignas como linfoma de Hodgkin e carcinoma broncogênico.
utilizando 40 amostras com concentrações médias iguais a 2,1; 8,6 e
11,7 mg/dL.
Observações
Repetitividade - imprecisão intraensaio
1. A limpeza e secagem adequadas do material utilizado são fatores
N Média DP CV (%) fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obtenção de resultados
Amostra 1 40 2,3 0,02 0,97 corretos.
Amostra 2 40 9,5 0,07 0,85
Amostra 3 40 11,1 0,09 0,82 2. O laboratório clínico tem como objetivo fornecer resultados exatos e
precisos. A utilização de água de qualidade inadequada é uma causa
potencial de erros analíticos. A água utilizada no laboratório deve ter a
Reprodutibilidade - imprecisão total qualidade adequada a cada aplicação. Assim, para preparar reagentes,
N Média DP CV (%) usar nas medições e para uso no enxágue final da vidraria, a água deve ter
Amostra 1 40 2,3 0,03 1,48 resistividade ³1 megaohm.cm ou condutividade £1 microsiemens/cm e
Amostra 2 40 9,5 0,09 1,14 concentração de silicatos <0,1 mg/L. Quando a coluna deionizadora está
Amostra 3 40 11,1 0,09 1,14 com sua capacidade saturada ocorre liberação de vários íons, silicatos e
substâncias com grande poder de oxidação ou redução que deterioram
os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados
O erro total (erro aleatório + erro sistemático) estimado em de modo imprevisível. Assim, é fundamental estabelecer um programa de
concentrações iguais a 2,0; 8,0 e 10,7 mg/dL são iguais a 3,45%, 4,04% controle da qualidade da água.
e 4,32%, respectivamente.
Os resultados indicam que o método atende a especificação desejável
Referências
para o erro total (£ ± 12,4%) baseada nos componentes desejável da
Variação Biológica.
1. Duncan PH, Gochman N, CooperT, Smith E, sayze D. Clin Chem
1982;28:284-290.
Sensibilidade metodológica . Uma amostra não contendo ácido
úrico foi utilizada para calcular o limite de detecção do ensaio tendo sido 2. Elin RJ, Jonhson E, Chesler R. Clin Chem 1982;28:2089.
encontrado um valor igual a 0,02 mg/dL, equivalente a média de 10
ensaios mais três desvios padrão. 3. Inmetro - Boas Práticas de Laboratório Clínico e Listas de Verificação
para Avaliação, Qualitymark ed.,Rio de Janeiro, 1997.
Efeitos de diluição da matriz . Duas amostras com valores igual
a 24,9 e 23,2 mg/dL foram utilizadas para avaliar a resposta do sistema 4. Kabasakalian P, Kalliney S, Westcott A. Clin Chem 1973;19:522.
nas diluições da matriz com NaCl 150 mmol/L (0,85%). Usando fatores
de diluição que variaram de 2 a 16 foram encontradas recuperações 5. Kageyama N. Clin Chem Acta 1971;31:421.
médias de 101%.
9. Ricos C, Desirable Specifications for Total Error, Imprecision, and Bias, A Labtest Diagnóstica garante o desempenho deste produto dentro das
derived from intra- and inter-individual biologic variation. Disponível especificações até a data de expiração indicada nos rótulos, desde que os
em: http://westgard.com/biodatabase1.htm (acesso em 10/08/2012). cuidados de utilização e armazenamento indicados nos rótulos e nestas
instruções sejam seguidos corretamente.
10. Basques JC. Especificações da Qualidade Analítica. Labtest
Diagnóstica 2005.
11. Ferraz MHC, Delgado RB. Valores de Referência para Exames Labtest Diagnóstica S.A.
Laboratoriais. In: Leão E, Corrêa EJ, Viana MB, Mota JAC (Ed). CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Pediatria Ambulatorial. 3a. edição Belo Horizonte: Coopmed, 1988: Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
837-848. Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br
Serviço de Apoio ao Cliente 0800 031 34 11 (Ligação Gratuita)
12. Martinello F, Silva E.L. Interferência do ácido ascórbico nas e-mail: sac@labtest.com.br
determinações de parâmetros bioquímicos séricos: estudos in vivo e
in vitro. Jorn. Bras. Pat. Med. Lab, 2003;39:323-334.
Revisão: Novembro, 2014 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.
Ref.: 260117 Reprodução sob prévia autorização
13. Labtest: Dados de arquivo.
Apresentação
Produto Referência Conteúdo
1 1 x 80 mL
140-1/100 2 1 x 20 mL
1 x 5 mL
Ácido Úrico Liquiform
1 1 x 200 mL
140-1/250 2 1 x 50 mL
1 x 5 mL
1 4 x 51 mL
Ácido Úrico Liquiform
140-4/64 2 4 x 13 mL
Labmax 560/400
1 x 5 mL