UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SAN LUIS POTOSÍ

UNIDAD ACADÉMICA MULTIDISCIPLINARIA

ZONA HUASTECA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA II

CUARTO SEMESTRE

DEL PROGRAMA EDUCATIVO DE BIOQUÍMICA

Manual perteneciente a:

Docente:

BQ. Carolina Eugenia Gil Solís

1 LABORATORIO DE BIOQUÍMICA II
 PRESENTACIÓN

En el laboratorio de Bioquímica II realizarás prácticas correspondientes al tema que estés revisando en

tus sesiones de teoría con el fin de que refuerces el conocimiento teórico.

Es necesario que leas detenidamente tus prácticas antes de realizarlas para que puedas acudir a ella con
los materiales que se requieran.

Los resultados que obtengas de cada una de tus prácticas serán presentados mediante un formato de
reporte de investigación con el fin de que desarrolles la habilidad en la redacción de tipo científico.

2 LABORATORIO DE BIOQUÍMICA II
 DISPOSICIONES GENERALES

 La hora límite para entrar al laboratorio serán diez minutos posteriores a la entrada del
profesor.

 A las tres faltas injustificadas al laboratorio, el alumno será dado de baja.

 Es requisito obligatorio el uso de bata debidamente portada, guantes, zapato cerrado,

cabello recogido y lentes de seguridad durante el desarrollo de las prácticas.

 Al finalizar la práctica el material contaminado deberá tratarse de acuerdo a las

instrucciones del laboratorio.

 Los desechos químicos y biológicos que se generen deberán ser depositados en los
recipientes adecuados.

 Es necesario dejar la mesa de trabajo y tarjas completamente limpias al finalizar las

prácticas.

 En cuanto a los reportes, éstos deberán ser entregados de acuerdo al formato que se
presenta más adelante y al finalizar la parte experimental de cada una de las prácticas.

 Es necesario que cada equipo presente materiales de trabajo en común: cinta masking tape,
marcador sharpie, magitel para limpieza.

3 LABORATORIO DE BIOQUÍMICA II
METODOLOGÍA DE TRABAJO EN EL LABORATORIO

Antes de la práctica: alumno

- Será necesario que el alumno revise con anticipación los materiales que se necesitarán en cada
próxima sesión de laboratorio.
- El alumno elaborará en el reverso de las hojas de la práctica correspondiente, un diagrama de
bloques referente a la metodología que deberá seguir en esa práctica, la cual deberá presentarse
bajo la forma de “Prelaboratorio Práctica No. ___ y Nombre de la práctica” para su revisión.
- Será necesario nombrar en cada sesión a un integrante por equipo que fungirá como “monitor
de apoyo” durante esa práctica, y el cual entregará la mesa limpia y materiales ordenados al
profesor del curso de laboratorio.

Durante la práctica:
En todo momento se requerirá
- Trabajar con compromiso y responsabilidad.
- Mostrar buena actitud y desarrollar un espíritu participativo.
- Concentrarse en las labores propias del laboratorio, evitando hacer tareas, reportes, lecturas o
trabajos pendientes de otras materias, a menos que el profesor lo autorice según los tiempos y
actividades de la práctica en cuestión.
- Que el alumno ingrese al laboratorio con la vestimenta apropiada.

Al finalizar la práctica:
- El monitor de la sesión práctica entregará los materiales y mesa limpia al profesor, y solicitará la
salida del laboratorio de todos los integrantes del equipo. Es deber de los integrantes del equipo
apoyar y respetarse entre sí, cuando mutuamente se soliciten ayuda para llevar a cabo la
limpieza y actividades que les corresponde.

4 LABORATORIO DE BIOQUÍMICA II
 FORMA DE REPORTAR

El informe del reporte deberá seguir el siguiente formato:

Nombre de la Práctica.

Nombre de autores. Se refiere a los integrantes del equipo de trabajo. Se escriben primero los apellidos
y en seguida la letra inicial del nombre, si son dos nombres las letras se separan mediante un punto. Los
nombres de los autores que participan se separan mediante punto y coma.

Lugar de realización: Laboratorio de Ciencias Biomédicas.

Lugar y Fecha:

Ejemplo:
COMPARACIÓN DEL METABOLISMO DE LOS CARBOHIDRATOS EN EL HÍGADO Y MÚSCULO
Alonso Martínez A., Alvarado Sánchez B.G. y Rodríguez Gallegos V.
Laboratorio de Ciencias Biomédicas de la U.A.M.Z.H. – U.A.S.L.P.
Cd. Valles, S.L.P. a 20 de febrero del 2018

INTRODUCCIÓN Comentar los puntos indicados después de cada práctica mediante la realización de una
revisión bibliográfica.
Es importante tomar en cuenta que cuando se obtiene información de libros, revistas, artículos, etc.
debe darse el crédito al autor o autores correspondientes, mencionando entre paréntesis el primer
apellido del autor y el año de la publicación separados por una coma, por ejemplo: (Mathews, 2000);
cuando se trate de dos (Herrera y Harper, 1998); cuando son mas de dos (Lenninger et al; 1997) Los
autores citados deben aparecer en las Referencias Bibliográficas, mencionando los apellidos de todos sin
excepción. Se pueden consultar referencias de internet, debidamente citadas.

MATERIALES Y MÉTODOS Describir el procedimiento procurando usar un lenguaje científico en forma de

prosa en tiempo pasado y de modo impersonal, haciendo mención del material, reactivos y equipo
utilizados durante el procedimiento.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS Comentar los resultados haciendo referencia a tablas,

esquemas, gráficas, según sea el caso, en esta parte también se pueden incluir imágenes. Para la parte
de la discusión, es importante llevar a cabo el análisis y la reflexión de los resultados en equipo y llevar a
cabo la comparación a los resultados obtenidos por otros autores.

CONCLUSIONES: Comentar el cumplimiento o comprobación de los objetivos planteados haciendo

alusión a la teoría comentada en clase.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS (Presentarla en orden alfabético y con la siguiente estructura: primer

apellido del autor, iniciales de los normes separados por puntos; Otro apellido del autor, iniciales de los
nombres separadas por puntos y otro apellido del autor, iniciales de los nombres separadas por puntos.
Año. Titular del libro. No.ed. Nombre de la Editorial. País.

Ejemplo:
Laguna, P. 1990. Bioquímica. 4a Ed. Editorial Salvat. México.
Mathews C.K. y Van Holde K.E. 1999. Bioquímica. 2aed. Editorial McGraw-Hill. interamericana. España.

5 LABORATORIO DE BIOQUÍMICA II
 Favor de imprimir tantas listas sean necesarias como reportes se hagan, recortar y pegar al final del
reporte antes de su entrega, pues se necesitará para la evaluación.

LISTA DE COTEJO PARA LA EVALUACIÓN DEL REPORTE

Respeta el modelo dado como base, muestra dominio del tema Valor
Valor obtenido
asignado
 Datos de identificación ---

 Introducción 15

 Materiales y métodos 10

 Discusión de resultados 25

 Conclusiones 20

 Cuestionario 25

 Bibliografía 5

TOTAL
 La apariencia del reporte muestra orden y limpieza
30
 Presenta menos de 5 errores de ortografía (corregir
ortografía mediante repeticiones) 30
 La redacción es clara y concisa, utiliza correctamente los
signos de puntuación 30
 Presenta el pre laboratorio en diagrama
10

TOTAL

ACREDITACIÓN DEL CURSO

 De acuerdo con el Artículo 46 del Reglamento Interno de los laboratorios de la carrera de
Bioquímico, este curso de laboratorio será ACREDITADO cuando el número de prácticas
APROBADAS es no menor del 75% del total que se programó y se realizó en el laboratorio.
 Se exentará de examen práctico final a los alumnos que hayan obtenido como promedio en el
desempeño de sus prácticas y reportes cuando menos 8.0

6 LABORATORIO DE BIOQUÍMICA II
 PRÁCTICA 1

COMPARACIÓN DEL METABOLISMO DE LOS CARBOHIDRATOS EN EL HÍGADO Y

EN EL MÚSCULO.

OBJETIVO:

Al finalizar la sesión práctica, el alumno podrá:

 Identificar diferentes rutas metabólicas que se efectúan en el hígado y en el músculo

tomando como base los resultados obtenidos, utilizando un conejo para la
experimentación.

CONSIDERACIONES PARA LA DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS:

Una de las funciones principales del hígado es la de proporcionar glucosa en la sangre durante el
ayuno. Esto se lleva a cabo mediante la conversión del glucógeno a glucosa, proceso al que se le
denomina glucogenólisis.

El músculo por otro lado, toma la glucosa sanguínea y durante el metabolismo anaerobio,
produce ácido láctico. Esta conversión de glucosa en ácido láctico recibe el nombre de glucólisis
muscular.

La degradación del glucógeno en el hígado, origina glucosa como producto final, y en el músculo
se continúa con la glucólisis hasta piruvato ó lactato.

Estas diferencias en el metabolismo de los carbohidratos, se pueden comprobar realizando

pruebas experimentales (ver el procedimiento) en donde se utilicen extractos enzimáticos,
preparados a partir del hígado y músculo de un conejo.

La glucosa es el carbohidrato más importante. La mayor cantidad del carbohidrato dietético

pasa al torrente sanguíneo en forma de glucosa o es convertida en el hígado y a partir de ella
puede tomarse los demás carbohidratos en el cuerpo. También es el combustible principal de
los fetos mamíferos. En el organismo es convertida a otros carbohidratos que tienen funciones
altamente específicas, por ejemplo; como parte de los ácidos nucleicos o como el caso de la
galactosa, la cual es un componente de la leche, o formando parte de ciertos lípidos complejos o
en combinación con proteínas formando glucoproteínas, las cuales entre otras funciones, tienen
la de actuar como enzima o moléculas de anticuerpos.

Los animales pueden sintetizar algunos carbohidratos, lípidos y proteínas, pero la mayor parte
de ellos procede de fuentes exógenas, tales como los vegetales, por ejemplo.

7 LABORATORIO DE BIOQUÍMICA II
 PROCEDIMIENTO

PARTE I

OBTENCIÓN DE TEJIDOS:

 Anestesie con éter un conejo y sacrifíquelo

 Separe el hígado y el músculo de las cuatro extremidades y manténgalos en hielo.

PREPARACIÓN DEL EXTRACTO DE MÚSCULO:

 Muela en la licuadora suficiente cantidad de músculo con aproximadamente 300 ml de agua

helada con el fin de obtener una consistencia líquida.
 Filtre a través de 2 capas de gasa, obteniendo de esta manera “extracto de músculo” que
contiene las enzimas y coenzimas que participan en la glucólisis aerobia y anaerobia, así
como en la glucogénesis.
 Mientras no utilice el filtrado, manténgalo en el congelador.

PREPARACIÓN DEL EXTRACTO DE HÍGADO:

 Muela el hígado extraído en la licuadora con aproximadamente 150 ml de agua filtrada.

 Filtre a través de 2 capas de gasa obteniendo de esta manera “extracto de hígado” que
contiene las enzimas y coenzimas que participan en la glucogenólisis y ciclo de Cori.
 Mientras no utilice el filtrado, manténgalo en el congelador.

PARTE II

a) Marque dos tubos grandes, uno como extracto de hígado y otro como extracto de músculo.
b) Coloque en ambos tubos 0.3 ml de MgCl2 al 10% y 7 ml de solución buffer de fosfatos a pH7.
c) Añada 12 ml de extracto de músculo y 12 ml de extracto de hígado al tubo correspondiente.
d) Manténgalos a 37°C, y tome muestras al tiempo cero, treinta y sesenta minutos para realizar
las pruebas que se indican a continuación.

1. Prueba para comprobar la degradación del glucógeno en el hígado y su formación en el

músculo: glucogenólisis y glucogénesis.

 Deposite una gota del contenido de cada tubo en una placa de porcelana en diferente
tiempo, 0’, 30’ y 60’. Agregue una gota de lugol y observe en cuál de los extractos conforme
pasa el tiempo, disminuye o aumenta la intensidad del color (el glucógeno con el yodo
produce color rojo púrpura). Registrar los resultados en la tabla 1:

8 LABORATORIO DE BIOQUÍMICA II
Tabla 1.
TIEMPO INTENSIDAD DE COLOR
EXTRACTO DE HÍGADO EXTRACTO DE MÚSCULO
0 minutos
30 minutos
60 minutos

2. Comprobación del aumento de ácido láctico en el músculo y disminución del mismo en el

hígado: glucólisis anaerobia y gluconeogénesis.

 Tome 3 ml de contenido de cada tubo y colóquelo en matraces erlenmeyer etiquetados.

 Caliente el contenido a punto de ebullición.
 Añada 2 gotas de fenolftaleína a cada tubo.
 Titule con NaOH 0.5 N hasta coloración rosa (mediante un sistema de microtitulación con
una pipeta graduada de 1 ml)
 Anote el volumen de NaOH gastado para cada tubo.
 Calcule el % de ácido láctico en 3 ml de extracto.

Fórmula:

% de Ácido láctico = N NaOH x ml NaOH x m Peq ác. láctico x 100

m
N: Normalidad
mPE: milipeso equivalente = Peq .
1000
Peq ác. láctico = PM
1
m: muestra en g o en ml.

% de ácido láctico = g de ácido láctico en x ml de extracto.

Tabla 2.
TIEMPO CONCENTRACIÓN DE ÁCIDO LÁCTICO EN
EXTRACTO DE HÍGADO EXTRACTO DE MÚSCULO
0 minutos
30 minutos
60 minutos

9 LABORATORIO DE BIOQUÍMICA II
3. Aumento de la concentración de glucosa en el hígado y disminución de su concentración en
el músculo: glucogenólisis y glucólisis anaerobia

 En el tiempo correspondiente a la prueba, tome 2 ml de cada uno de los extractos,

colóquelos en tubos diferentes y etiquetados.
 Añada 3 ml de Ba(OH)2 0.12 M y 3 ml de ZnSO4 al 2 % a cada tubo.
 Este filtrado contiene glucosa libre.
 Realice la cuantificación de glucosa como se indica a continuación.

CUANTIFICACIÓN PARA GLUCOSA:

Tabla 3.
BLANCO ESTANDAR MUESTRA.
ESTÁNDAR ----- 20 L -----
MUESTRA ----- ----- 20 L
REACTIVO 2.0 mL 2.0 mL 2.0 mL

Mezclar e incubar 10 minutos a 37o C o 30 minutos a temperatura ambiente, hasta

conseguir una coloración estable por 30 minutos a temperatura ambiente. Leer las
concentraciones de glucosa en un espectrofotómetro a longitud de onda de 505 nm.

Tabla 4.
Tiempo en minutos mg/dl de glucosa en extracto de mg/dl de glucosa en extracto de
hígado músculo.
0
30
60

4. CUESTIONARIO

1. Analiza la NORMA Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones técnicas para

la producción, cuidado y uso de los animales de laboratorio y describe brevemente cinco
puntos de interés.
2. ¿Bajo qué condiciones fisiológicas del humano se produce la…?:
a. Glucólisis
b. Glucogenólisis
c. Gluconeogénesis
d. Glucogénesis
3. Investiga las reacciones químicas del glucógeno con lugol
4. ¿A qué se debe el dolor que produce el ácido láctico en las articulaciones/músculo
después de un ejercicio vigoroso?

TIP para el reporte: En la parte de introducción sería recomendable, incluir una breve
descripción de la glucólisis, glucogenólisis, gluconeogénesis y glucogénesis, dónde se llevan a
cabo y bajo qué condiciones, además de información adicional pertinente.

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