AZUL DE PRUSIA (PERLS)

PRINCIPIO:

Se aplica a todas las muestras de biopsia fijadas en formalina e incluidas en parafina en las
que se requiera la demostración de depósitos de hierro inorgánico.

FUNDAMENTO:

En el perl azul de Prusia tinción especial, el hierro férrico se libera de la hemosiderina por
la acción del ácido clorhídrico diluido, éste reacciona con el ferrocianuro de potasio diluido
para producir un ferrocianuro férrico compuesto azul insoluble (azul de Prusia). Esta
reacción es útil para identificar condiciones que conducen a exceso de hierro por ejemplo,
hemocromatosis

SOLUCIONES:

1. Ferrocianuro de Potasio 2% acuoso

2. Ácido Clorhídrico 2% acuoso
3. Solución de trabajo
Ferrocianuro de K 2%............................................................................................... 25ml
HCL 2%..................................................................................................................... 25ml

TÉCNICA DE TINCIÓN:

1. Cortes desparafinados e hidratados, hasta agua destilada.

2. Teñir los cortes con sol. de trabajo, por 30 min.
3. Lavar con agua destilada, 6 cambios.
4. Contrastar.
5. Deshidratar, aclarar y montar.

FONTANA MASSON

PRINCIPIO:

Aunque de escasa utilidad práctica, se realiza mediante el método del azul de Turnbull. Se
basa en la reacción que ocurre al poner en contacto el prusiato rojo o Ferricianuropotásico y
el acido clorhídrico en presencia del cloruro ferroso existente en el tejido, de forma que se
produce ferricianuro ferroso o Azul de Turnbull, también de color azul.

FUNDAMENTO:

Utiliza la propiedad reducción del pigmento melanina para reducir las sales de plata que se
encuentran en la solución de tinción. Esto se llama una reacción argentafines donde el
componente de tejido reduce la plata en oposición a la reacción argyrophilic donde se
requiere un agente reductor externo para reducir la plata. Esta es una mancha útil que se usa
para el diagnóstico de melanomas malignos.

SOLUCIONES:

20ml de AgNO3 al 10% agregar amoniaco concentrado gota a gota agitando

constantemente hasta que el precipitado que se ha formado en un comienzo sea
completamente redisuelto (quedan sólo unas finas granulaciones). Agregar 20ml de agua
destilada, dejar reposar 24 horas. Guardar en frasco oscuro. La solución dura
aproximadamente 1 mes. Filtrar antes de cada uso.

TÉNICA DE TINCIÓN:

1. Desparafinar los cortes hasta el agua destilada

2. Tratar cortes con solución de Gram por 10’
3. Lavar bien en agua destilada
4. Colocar en la solución de Fontana 1 hora a 57º C (1’ en microndas a potencia
media, dejar enfriar y repetir 3 veces)
5. Lavar en agua destilada
6. Virar en Cloruro de oro al 0,1% por 4’
7. Lavar en agua destilada
8. Hiposulfito de Na al 5% por 2’
9. Lavado en agua corriente
10. Contraste nuclear
11. Deshidratar, aclarar y montar.

WHARTIN STARRY
PRINCIPIO:

En el plateado según Warthin-Starry, el nitrato de plata es reducido a plata metálica por

medio de hidroquinona, la cual es oxidada a quinona durante este proceso. La formación de
la plata es detenida a través de un paso de enjuague con agua. Opcionalmente, la plata
formada podrá ser fijada y estabilizada adicionalmente mediante la aplicación de solución
de tiosulfato sódico en otro paso más. En aplicaciones con tiosulfato sódico se podrá
montar a continuación con cualquier medio de montaje que contenga xileno. Si se prescinde
de este baño de tinción adicional, los preparados deberán ser montados con DPX nuevo o
Neo-Mount® para evitar que los preparados se destiñan y para garantizar la estabilidad de
los colores.La solución de reacción está modificada de tal manera que la plata metálica es
fijada por adición en las estructuras de destino por medio de una reacción específica, en el
kit de plateado según Warthin-Starry modificado a utilizar es en la superficie de bacterias
del género Helicobacter y de familia de Spirochaetes. Por consiguiente, las bacterias
aparecen en la imagen microscópica en color pardo oscuro a negro. Las bacterias son
encontradas p. ej. en la mucosidad del epitelio superficial, en las glándulas gástricas
apicales y en las foveolas de la mucosa gástrica.

FUNDAMENTO:

Se aplica a todas las muestras de biopsia fijadas en formalina e incluidas en parafina en las
que se requiera la demostración del microorganismo Helicobacter pylori y espiroquetas.

SOLUCIONES:

1. Agua acidulada: llevar a pH 4.0 con ácido cítrico 1%

2. Nitrato de Plata 1% en agua acidulada
3. Nitrato de Plata 2% en agua acidulada
4. Gelatina al 5% en agua acidulada
5. Hidroquinona al 0.15% en agua acidulada

TÉCNICA DE TINCIÓN:

1. Desparafinar hasta agua bidestilada

2. Poner los cortes en un borrel con agua bidestilada en un baño de agua a Tª máxima
3. Calentar todas las soluciones dejándolas en un baño de agua a Tº máxima
4. Impregnar en solución caliente de AgNO3 al 1% por 30’. Mantener en el baño de agua
caliente.
5. Revelar en una solución recién preparada de:
Nitrato de Plata 2% 9ml
Gelatina al 5% 22.5ml
Hidroquinona al 0.15% 12ml. Hasta que los cortes tomen un color café amarillento
6. Lavar en abundante agua corriente caliente
7. Deshidratar, aclarar y montar.

ROJO CONGO:

PRINCIPIO:

El amiloide es una estructura compuesta de fibrillas proteicas (Ø 8 - 15 nm cada una),

homogénea y teñible de forma eosinófila que se deposita entre las células p. ej. en caso de
amiloidosis. Todos los depósitos de amiloide contienen fibrillas proteicas parecidas que son
resistentes a los mecanismos de defensa del organismo y que no pueden ser eliminadas. La
tinción de Rojo Congo se realiza sobre la base de enlaces por puente de hidrógeno con el
componente de carbohidrato del sustrato. El Rojo Congo es un colorante aniónico y puede
depositarse en fibrillas de amiloide, las cuales presentarán en este caso un destacado
dicroísmo bajo luz polarizada. Al trasluz, el tejido teñido con Rojo Congo aparece en color
naranja-rojo, mientras que si se mira bajo luz polarizada, los depósitos de amiloide se
presentan en forma de doble refracción de color verde intenso sobre fondo oscuro. Hay
otros materiales que también se tiñen con Rojo Congo, como p. ej. el colágeno, pero que,
sin embargo, no son visibles bajo luz polarizada. La tinción puede ser técnicamente difícil
si se utilizan cortes de parafina demasiado finos (<5 μm) o si el tejido ha sido sometido a
una sobretinción excesiva.

FUNDAMENTO:

La tinción de Rojo Congo cuenta con dos teorías aceptadas explicadas a continuación: La
molécula de Rojo Congo, dado a su tamaño de 21 amstrong, tiene un tamaño similar al de
la proteína amiloide, el cual es de 19 amstrong, el componente glúcido (asociado a la
sustancia P). Por lo tanto, ambas estructuras se unirán a través de puentes de hidrógeno,
entre los grupos Carboxilos (COOH) de la proteína amiloide y el grupo Amino (NH2) que
se encuentra en el colorante. La segunda teoría estudiada, nos dice que la molécula de Rojo
Congo se intercala entre proteínas adyacentes, las cuales normalmente estarían unidas por
puentes de hidrógeno. La molécula de colorante interrumpiría estas uniones, creando
nuevas uniones de puente de hidrógeno entre el colorante y la proteína, estabilizándose de
esta forma. La distancia aparente entre proteínas adyacentes sería de 4,8 amstrong

SOLUCIONES:

1. Solución madre Rojo Congo:

Rojo congo saturado en Alcohol de 80° saturado con NaCl
2. Solución de trabajo Rojo Congo
Sol. Madre 50 ml
KOH 1% 0.5 ml, Preparar en el momento de usar

TÉCNICA DE TINCIÓN:

3. Desparafinar hasta el agua destilada

4. Tinción nuclear con hematoxilina de Harris
5. Colocar los cortes en alcohol 80° saturado con NaCl por 20 minutos
6. Sin lavar poner los cortes en la solución de trabajo de rojo congo 20 minutos
7. Deshidratar partiendo del alcohol de 95º, aclarar y montar