5.1.7.

CEMARAN MIKROBA

Pengertian

Menentukan (identifikasi) adanya mikroba yang patogen secara analisis Mikrobiologis

Tujuan

Memberikan jaminan bahwa ekstrak tidak boleh mengandung mikroba patogen melebihi batas
yang ditetapkan karena berpengaruh pada stabilitas ekstrak dan berbahaya bagi kesehatan

1. Uji Angka Lempeng Total

Pertumbuhan koloni bakteri aerob mesofil setelah cuplikan diinokulasikan pada media
lempeng agar denga cara tuang dan dinkubasi pada suhu yang sesuai

Media & Pereaksi

 Plat Count Agar (PCA)

 Pereaksi
 Pepton Dilution Fluid (PDF)
 Fluid casein digest soy lecithin polysorbate (FCDSLP)
 Minyak Mineral (Parafin Cair)
 Tween 80 dan 20

Pelaratan Khusus

 Stomacheratau Blender
 Alat Hitung Koloni

Prosedur
 Menyiapkan 5 Buah tabung atau lebih yang masing masing telah diisi dengan 9 ml
pengencer PDF

Dari Hasil homogenisasi pada penyiapan contoh dipipet pengenceran 10-1 sebanyak 1 ml
kedalam tabung yang berisi pengencer PDF pertama hingga diperoleh pengenceran 10-2
dan dikocok hingga homogen

Dibuat pengenceran selanjutnya hingga 10-6 atau sesuai dengan yang diperlukan

Dari setiap pengenceran dipipet 1 ml kedalam cawan petri dan dibuat duplo

Kedalam tiap cawan petri dituangkan 15-20 ml media PCA (45 +/- 10)

Segera cawan petri digoyang dan diputar sedemikian rupa hingga suspensi tersebar
merata

Untuk mengetahui sterilitas media dan pengencer dibuat uji kontrol (blanko)

Pada satu cawan hanya diisi 1 ml pengencer dan media agar

Pada cawan yang lain diisi pengencer dan media

Setelah media memadat, cawan petri diinkubasi pada suhu 35-37 0C selama 24-48 jam
dengan posisi terbalik

Jumlah koloni yang tumbuh diamati dan dihitung

2. Uji Nilai Duga Terdekat (MPN) Coliform

Pertumbuhan bakteri coliform setelah cuplikan diinokulasi pada media cair yang sesuai,
adanya reaksi fermentasi dan pembentukan gas didalam tabung Durham
Pereaksi khusus

 Pepton Dilution Fluid (PDF)

 Mac Conkey Broth (MCB)
 Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLB)
 Eosin Methylene Blue Agar (EMBA)
 Violet Red Voges Proskauer (MR-VP) Medium
 Trypton Broth
 Simmon’s Citrate Agar
 Nutrient Agar

Peralatan Khusus

 Stomacher atau Blender atau Cawan Mortir

 Pipet Ukur
 Tabung Durham

Prosedur

Menyiapkan 5 Tabung reaksi masing masing berisi 9 ml PDF

Dari hasil homogenisasi pada penyiapan contoh dipipet 1 ml pengenceran 10-1 kedalam
tabung PDF pertama hingga diperoleh suspensi dengan pengenceran 10-2

Dikocok sampai homogen

Dibuat pengenceran selanjutnya hingga 10-6

Uji Prakiraan

Untuk setiap pengenceran disiapkan 3 tabung berisi 9 ml MCB yang dilengkapi tabung
Durham
 Ke dalam tiap tabung dari masing masing seri dimasukkan 1 ml suspensi pengenceran

Di inkubasi pada suhu 370C selama 24-48 jam

Setelah 24 jam dicatat dan diamati adanya gas yang terbentuk didalam tiap tabung

Kemudian inkubasi dilanjutkan hingga 48 jam dan dicatat tabung tabung yang
menunjukkan gas posiitif

Uji Konfirmasi

Biakan dari tabung yang menunjukkan uji prakiraan positif dipindahkan 1 sengkelit
kedalam tabung berisi 10 ml BGLB yang telah dilengkapi tabung Durham

Seluruh tabung diinkubasi pada suhu 37 0C Selama 24-48 jam

Dilakukan pengamatan terhadap pembentukan gas

Jumlah tabung yang positif gas dicatat dan hasil pengamatan tersebut dirujuk ke tabel nilai
duga terdekat (NDT) / Minimal Presumtif Number (MPN)